预防兽医学

  • 国内新出现的基因7型Ⅰ类新城疫病毒的分离与鉴定

    刘华雷;吕艳;王静静;郑东霞;赵云玲;王志亮;

    在主动监测中从广西活禽市场的家鸭中分离到1株Ⅰ类新城疫病毒,遗传进化分析证实该分离株属于基因7型(按照Diel DG的分类方法则属于基因1c亚型)。该分离株在裂解位点的氨基酸组成为112 ERQERL117,具有典型低致病性新城疫病毒的分子特征。这是我国首次检出基因7型Ⅰ类新城疫病毒,对于其来源和分布需要进一步加强监测和研究。

    2016年12期 v.36;No.240 1997-2000页 [查看摘要][在线阅读][下载 1022K]
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  • 鸭细小病毒地高辛标记探针的制备与应用

    郑肖强;陈浩;窦砚国;杨晶;牛晓宇;于相龙;刁有祥;

    根据GenBank发表的1株鸭细小病毒全基因组序列设计1对特异性引物,利用PCR扩增得到大小为301bp的片段,回收纯化后用地高辛进行标记,制备鸭细小病毒地高辛标记探针。特异性试验表明,该探针仅与鸭细小病毒发生特异性杂交反应,与GPV、MDPV、DcuV、DEV、DHAV-I、H9N2亚型AIV、N-DRV、NDV、TMUV杂交反应均为阴性。敏感性试验表明,该探针对鸭细小病毒核酸的最低检测量为25pg。应用制备的探针对山东、江苏和安徽等地采集的61份患病鸭和30份健康鸭组织进行检测,阳性率分别为97%和0%,与病毒分离结果符合率为98%。上述结果显示,本研究制备的探针特异性强、敏感性高,为该病的诊断和流行病学调查提供可靠的方法。

    2016年12期 v.36;No.240 2001-2004页 [查看摘要][在线阅读][下载 216K]
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  • 鹅细小病毒VP1蛋白氨基酸点突变在鹅胚化疫苗株毒力减弱中的关键作用

    王建业;黄钰;段进坤;朱礼倩;朱国强;

    为了进一步明确各编码蛋白基因在鹅细小病毒(goose parvovirus)鹅胚化疫苗株毒力减弱中的作用,以先前构建的弱毒疫苗株感染性质粒pSYG61v和强毒株感染性质粒pLH为基础,通过重叠PCR方法,在pSYG61v和pLH质粒之间互换Rep1和VP1基因片段,获得了6个嵌合质粒pSYG-vRep1、pSYG-vVP1、pSYG-vRC、pLH-aRep1、pLH-aVP1和pLH-aRC。将质粒以绒毛尿囊膜途径转染11日龄鹅胚分别拯救出嵌合病毒。嵌合病毒的雏鹅攻毒试验表明,携带强毒株VP1基因的pSYG-vRC、pSYG-vVP1和pLH-aRep1这3个嵌合病毒对雏鹅表现出明显致病性,死亡率在75.0%~87.5%。完全携带弱毒株rep-cap编码框的pLH-aRC嵌合病毒攻毒组雏鹅无一死亡。携带强毒株Rep1基因的pLH-aVP1和pSYG-vRep1嵌合病毒攻毒组雏鹅也无一死亡,但在试验期内部分雏鹅明显生长迟缓。嵌合病毒攻毒试验结果表明,结构蛋白VP1基因的氨基酸点突变对GPV鹅胚化疫苗株的毒力减弱起着关键作用。

    2016年12期 v.36;No.240 2005-2008+2013页 [查看摘要][在线阅读][下载 318K]
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  • 福建地区猪瘟病毒流行株基因分型及E2基因遗传变异分析

    魏春华;刘建奎;戴爱玲;曾宇坤;李晓华;杨小燕;

    为了解福建地区2013—2014年猪瘟病毒(CSFV)流行毒株的分子生物学特性与变异规律,采集了福建地区多个猪场的40份疑似猪瘟样品,应用RT-PCR技术对E2基因的主要抗原编码区进行扩增及序列分析,其中31份为猪瘟阳性。序列分析结果表明,31株CSFV流行毒株之间核苷酸与氨基酸的同源性分别为78.5%~100.0%和82.2%~100.0%,与国内外分离株的核苷酸同源性为81.1%~98.9%,氨基酸同源性为79.8%~95.6%;遗传进化树分析表明,31株CSFV属于1.1和2.1亚群,其中23株为1.1亚型,8株为2.1b和2.1c亚群,没有发现2.2和2.3亚群毒株。氨基酸序列分析表明,流行株在免疫逃逸相关位点705,713,729和734位氨基酸发生变异,FJ02毒株B细胞表位关键位点771位氨基酸发生变异,表明福建地区CSFV流行毒株呈现遗传变异多样性。

    2016年12期 v.36;No.240 2009-2013页 [查看摘要][在线阅读][下载 367K]
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  • 猪瘟无明胶无蛋白耐热活疫苗的研制及冻干工艺

    吕芳;赵艳红;张小飞;王丽丽;彭苗苗;郝政林;张金秋;邓碧华;卢宇;侯继波;

    为提高猪瘟(CSF)活疫苗的耐热性能,同时避免明胶和蛋白对猪只产生的免疫副反应,用葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、乳糖、氨基酸等成分设计无明胶无蛋白耐热保护剂,根据配方的共晶点、塌陷温度科学设计冻干程序,并比较了不同预冻方式对猪瘟活疫苗效价的影响。结果表明,猪瘟病毒采用无明胶无蛋白耐热保护剂配方A冻干后具有较好的耐热性能,37℃保存10,15d,病毒的耐热损失分别为0.6lg和0.9lg;对快冻、慢冻以及退火3种不同的冻干方式进行比较,发现对猪瘟病毒冻干损失由大到小依次为:退火>慢冻>快冻,而耐热损失则相反;与传统的含明胶含蛋白耐热疫苗相比,猪瘟无明胶无蛋白耐热疫苗耐热效果更好,可在2~8℃长期保存30个月,动物试验表明该疫苗对猪只安全、无副反应。

    2016年12期 v.36;No.240 2014-2018页 [查看摘要][在线阅读][下载 210K]
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  • 不同猪繁殖与呼吸综合征减毒活疫苗在猪体内的动态学及临床免疫效果比较

    周绪斌;李黎;鲁立柱;柏庆;汪萍;张海雷;黎作华;万春燕;

    为了比较国内不同猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)弱毒疫苗的安全性和有效性,本研究将17头PRRSV抗原和抗体双阴性的28日龄仔猪随机分为4组,TJM-F92株弱毒疫苗组,JXA1-R株弱毒疫苗组,经典株弱毒疫苗(VR2332来源)组和注射生理盐水对照组。免疫后7,14,21,28d分别采血,ELISA抗体检测试剂盒检测PRRSV抗体,结果从免疫后14d起PRRSV抗体开始转阳,但各试验组的抗体水平无明显差异。对免疫后14d所采血样进行病毒分离,TJM-F92株免疫组未分离到PRRSV疫苗毒,JXA1-R株免疫组2头猪分离到PRRSV疫苗毒,经典株免疫组只1头猪分离到PRRSV疫苗毒。免疫后28d,所有猪接种PRRSV强毒株TJ株进行攻毒试验,观察各组猪的体温、临床症状;攻毒后21d,所有猪安乐死,剖检观察肺部病理变化。结果显示,TJM-F92株和JXA1-R株免疫组均未出现临床发病猪,经典株免疫组2头猪出现临床发病,对照组全部临床发病,死亡1头。经典株免疫组临床发病猪出现典型PRRSV感染肺部病理变化,而TJM-F92株和JXA1-R株免疫组均未发现典型PRRSV感染肺部病理变化。本研究证实TJM-F92株和JXA1-R株对高致病性PRRSV的免疫效果优于经典株弱毒疫苗,TJM-F92疫苗株与JXA1-R疫苗株相比,疫苗毒在体内带毒时间更短,安全性更高。

    2016年12期 v.36;No.240 2019-2023+2029页 [查看摘要][在线阅读][下载 2588K]
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  • 内含猪繁殖与呼吸综合征病毒保守基因序列假病毒粒子的构建及应用

    乔彩霞;张鹤晓;高志强;尹羿;蒲静;汪琳;刘环;张伟;

    为构建内含猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守基因序列的假病毒粒子,将MS2噬菌体基因组中5′非编码区、成熟酶蛋白基因、衣壳蛋白基因、包装位点和复制酶基因部分起始位点的cDNA序列克隆于原核表达载体pET32a,在其下游插入PRRSV ORF7和3′非编码区保守序列,获得重组表达载体pET-MS2-PRRSV。将重组质粒pET-MS2-PRRSV转化表达菌株BL21(DE3),经诱导表达、纯化,获得高纯度的病毒样颗粒。病毒样颗粒经RT-PCR和PCR鉴定含有PRRSV ORF7和3′非编码区RNA且没有质粒DNA残留,并能耐受RNase降解。采用荧光定量RT-PCR对病毒样颗粒定值后,制备了用于PRRSV核酸检测的标准品,该标准品模拟了真实病毒粒子的结构,无生物传染性,经检测均匀性和稳定性良好,可作为PRRSV核酸检测的阳性标准质控品,实现对核酸检测的全程监控。

    2016年12期 v.36;No.240 2024-2029页 [查看摘要][在线阅读][下载 871K]
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  • 牛Mx1基因重组慢病毒载体的构建及沉默Mx1细胞的获得

    王洪梅;刘文浩;夏咸柱;胡桂学;何洪彬;

    采用RT-PCR技术从牛肾细胞中扩增出Mx1基因,构建牛Mx1基因过表达重组载体;针对牛Mx1mRNA序列设计shRNA引物对,构建针对牛Mx1的RNAi载体。将牛Mx1的过表达载体和RNAi载体共转染293T细胞,利用Western blot方法检测牛Mx1蛋白的表达情况,筛选有效沉默牛Mx1的shRNA;将有效沉默Mx1的RNAi载体转染牛胎儿气管原代上皮细胞,经流式细胞分选,Western blot检测,获得沉默牛Mx1的稳定细胞系。结果表明,成功构建了牛Mx1过表达重组载体pcDNA3.1-Mx1和RNAi载体RNAi-Mx1A、RNAi-Mx1B、RNAi-Mx1C,筛选到RNAi-Mx1A沉默牛Mx1效果最好;经流式细胞分选和Western blot检测,获得有效沉默牛Mx1的牛胎儿气管原代上皮细胞,为进一步探讨牛Mx1抗病毒作用及机制的研究奠定试验基础。

    2016年12期 v.36;No.240 2030-2034页 [查看摘要][在线阅读][下载 550K]
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  • 牛干扰素诱导跨膜蛋白3对口蹄疫病毒感染的抑制作用

    赵飞;杜寿文;谭鹏;曹婷婷;许汪;邢彬;王茂鹏;朱羿龙;刘立明;赵翠青;李昌;金宁一;

    为了研究牛干扰素诱导跨膜蛋白3(bIFITM3)对O型口蹄疫病毒(FMDV)的抑制作用,本试验将表达bIFITM3的重组质粒pLV-bIFITM3和表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的对照质粒pLV-EGFP分别转染BHK-21细胞,通过嘌呤霉素抗性筛选获得能够稳定表达外源基因的细胞系。用O型FMDV感染稳定细胞系,通过观察细胞病变、噬斑分析和实时荧光定量PCR方法评价bIFITM3对O型FMDV感染的抑制作用。结果表明,成功筛选获得稳定表达bIFITM3与EGFP的BHK-21细胞系,bIFITM3表达后显著抑制FMDV感染BHK-21细胞,且抑制作用在病毒感染循环的早期阶段就已显现。本试验证明bIFITM3在FMDV感染中具有抗病毒作用,为口蹄疫的防控研究提供新的思路和理论依据。

    2016年12期 v.36;No.240 2035-2041页 [查看摘要][在线阅读][下载 1284K]
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  • 重组山羊痘病毒通用转移载体的构建

    李继东;才学鹏;

    为了便于山羊痘病毒(goat pox virus,GPV)活载体疫苗的研究,本试验拟构建能够用于GPV重组的通用转移载体。用DNA合成和PCR方法构建含有启动子p7.5和p11的质粒pTKpp,以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)为报告基因,构建含有p7.5/p11-GFP表达盒的重组质粒pTKpp-GFP和通用转移质粒pTKpgigp,转染已感染GPV的羔羊睾丸(lamb testis,LT)细胞,观察GFP的表达情况;同时在pTKpgigp中插入外源基因FMDVVP1,构建重组转移质粒pTKpgigp-VP1,与GPV共转染LT细胞,产生并筛选重组GPV,验证外源基因的表达情况。结果显示,重组质粒中的启动子p7.5和p11能够启动GFP的表达;以重组转移质粒pTKpgigp-VP1进行的GPV重组成功获得了rGPV。最终证明通用转移载体pTKpgigp构建成功,能够用于重组GPV的相关研究。

    2016年12期 v.36;No.240 2042-2048页 [查看摘要][在线阅读][下载 1674K]
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  • 梅花鹿α干扰素基因在MDBK细胞中表达及抗BVDV活性检测

    李哲;李俊峰;刘千辉;曾范利;王全凯;苏凤艳;

    采用基因工程技术克隆出梅花鹿α干扰素(IFN-α)成熟肽基因序列,并将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.0(+),经酶切、PCR及测序鉴定,成功构建了pcDNA3.0-IFN-α真核重组表达质粒。将鉴定正确的阳性重组质粒经非脂质体法转染至MDBK细胞,间接免疫荧光试验检测其具有较高转染效率;Western blot法检测IFN-α蛋白在MDBK细胞中得到有效表达;病变抑制试验检测转染后的MDBK细胞具有明显抗BVDV活性;抗BVDV活性的定量试验表明转染pcDNA3.0-IFN-α质粒的MDBK细胞与感染未转染的MDBK细胞相比抗BVDV活力提高了66192倍。本试验在MDBK细胞中成功表达了梅花鹿IFN-α,并检测出其具有明显抗BVDV作用,这为梅花鹿IFN-α活性机理研究以及开发更高效的抗梅花鹿病毒性疾病干扰素制剂提供物质和理论基础。

    2016年12期 v.36;No.240 2049-2053页 [查看摘要][在线阅读][下载 1414K]
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  • 具有益生特性的小尾寒羊肠道正常菌群的分离、鉴定及筛选

    邵明旭;刘丽萍;于翠莲;马宁宁;周建波;姜晓东;魏凯;朱瑞良;

    为了获得适合生产的羊源益生菌株,本试验从健康成年小尾寒羊肠道内分离出5株菌落形态各异、生长良好的菌株。通过革兰染色、生理生化鉴定及16SrDNA分析,5株菌分别为M1(干酪乳杆菌)、M2(植物乳杆菌)、E1(粪肠球菌)、E2(屎肠球菌)、L1(枯草芽孢杆菌)。细菌生长曲线、耐酸、耐胆盐、抑菌试验等益生特性分析结果表明,M1、M2和L1具有生长速度快,耐酸、耐胆盐,明显抑制大肠杆菌、鸡白痢沙门菌和金黄色葡萄球菌等肠道常见致病菌的益生特性,可以作为研制羊用微生态制剂的候选菌株。

    2016年12期 v.36;No.240 2054-2060页 [查看摘要][在线阅读][下载 959K]
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  • 鸡源志贺菌IpaC蛋白单抗制备及其受体的初步鉴定

    蒋大伟;张彬;马金玉;韩志霞;王亚宾;许兰菊;苗银萍;

    为制备特异性的鸡源志贺菌IpaC蛋白单克隆抗体和鉴定其受体,以纯化的重组鸡源志贺菌IpaC蛋白制备多克隆抗体,Western blot和间接ELISA分析表明重组IpaC蛋白具有很好的免疫反应原性。将纯化的IpaC蛋白免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。经过杂交瘤细胞阳性孔的筛选、单克隆抗体效价测定、单克隆抗体亚型鉴定、单克隆抗体Western blot鉴定后,获得1株杂交瘤阳性细胞5A12B5。同时,通过鸡胚肠组织提取总蛋白,利用铺覆蛋白印迹技术,初步测定IpaC蛋白受体相对分子质量约为55 000。试验为IpaC蛋白检测和该蛋白与鸡肠上皮细胞之间的相互作用研究奠定基础,同时也为评估鸡源志贺菌在公共卫生等方面的重要性提供参考依据。

    2016年12期 v.36;No.240 2061-2066页 [查看摘要][在线阅读][下载 1471K]
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  • 不同信号通路抑制剂对酿酒酵母菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1表达的影响

    金鑫;张曼;范燕茹;王佩;刘骄;杨银凤;

    为了探索核因子-kB(nuclear factor-k-gene binding,NF-kB)和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)通路是否介导益生性酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae,SC)诱导绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)基因表达的调控机制。首先建立绵羊瘤胃上皮细胞培养体系作为体外试验模型,将传代细胞分为4个试验组(SC+PDTC、SC+PD98059、SC+SB202190、SC+SP600125)、4个阴性对照组(PDTC、PD98059、SB202190、SP600125)、1个阳性对照组(SC)和1个空白对照组。向试验组和阴性对照组内分别加入NFkB通路特异性抑制剂PDTC(50μmol/L)、MAPKs通路ERK 1/2特异性抑制剂PD98059(20μmol/L)、p38特异性抑制剂SB202190(20μmol/L)和JNK特异性抑制剂SP600125(20μmol/L)4种抑制剂,作用1h后,用PBS将各组细胞清洗3次,然后向试验组和阳性对照组中分别添加浓度为5.2×107 CFU/mL的酿酒酵母菌液100μL,并向阴性对照组和空白对照组中分别添加等量的DMEM/F12培养液。将以上10组细胞置于37℃、5%CO2培养箱中培养12h后提取各组细胞总RNA,利用实时荧光定量PCR技术检测各组SBD-1 mRNA表达水平的变化。结果显示:与阳性对照组相比,4种抑制剂对酿酒酵母菌促进瘤胃上皮细胞SBD-1的诱导表达都具有抑制作用,且存在极显著性差异(P<0.01),而各阴性对照组与空白对照组相比差异均不显著(P>0.05);4种抑制剂的抑制效果依次表现为SB202190>PDTC>SP600125>PD98059,且SB202190抑制效果极显著高于PDTC(P<0.01),而PDTC抑制效果与SP600125、PD98059相比差异均不显著(P>0.05)。结果表明,NF-kB和MAPKs通路可能均介导酿酒酵母菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1的表达,但可能以MAPKs途径为主要信号通路。

    2016年12期 v.36;No.240 2067-2073页 [查看摘要][在线阅读][下载 1147K]
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  • E.tenella感染早期雏鸡盲肠扁桃体ChIL-17A和ChIL-17F表达水平的相反变化

    陈露;周晏丞;曹立亭;董世起;廖春玉;郭玉洁;黎春秀;马跃;

    为探讨ChIL-17及其受体在抗柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)感染中的作用,本研究用E.tenella RC株孢子化卵囊口服感染14日龄非免疫蛋公鸡,于感染后0,2,4,6,12,24,3,5,7d共9个不同时间点同时提取对照组和试验组雏鸡盲肠扁桃体RNA,采用实时荧光定量PCR方法检测ChIL-17A、ChIL-17F和ChIL-17RA基因的表达动态。结果显示,ChIL-17A表达水平在感染后持续下调,感染后4h为感染前(0h)的0.13倍(P<0.01),感染后3d达最低表达水平,仅为感染前(0h)的0.009 7倍。而ChIL-17F的表达水平则呈现相反的变化,在感染早期明显上调,感染后2h上调3.07倍(P<0.05),感染后4h上调6.49倍(P<0.01),其后时间点与感染前相比表达水平则无显著性差异。ChIL-17RA与感染前相比表达上调,于感染后24h和7d分别上调1.73倍和2.21倍(P<0.01)。结果表明,ChIL-17及其受体基因的表达水平在感染后均呈现显著变化,说明它们在E.tenella感染中具有重要的宿主-寄生虫免疫生物学意义。特别是ChIL-17A和ChIL-17F在感染早期(感染后2~4h)表现出显著的相反表达动态说明两者在宿主防御E.tenella感染的早期具有不同的免疫调节功能,而这一具体调节机制还有待于进一步的研究加以阐明。

    2016年12期 v.36;No.240 2074-2080+2085页 [查看摘要][在线阅读][下载 2118K]
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  • 柔嫩艾美尔球虫与肠炎沙门菌混合感染对雏鸡盲肠菌群的影响

    王琪;崔宁;王方昆;李红梅;赵孝民;

    为探讨柔嫩艾美尔球虫与肠炎沙门菌单独感染及混合感染对盲肠肠道菌群的影响,12日龄莱航鸡口服单独或混合感染柔嫩艾美尔球虫或肠炎沙门菌,18日龄通过16SrRNA Miseq高通量测序检测鸡盲肠菌群组成。结果表明,18日龄莱航鸡盲肠内主要菌群为厚壁菌门和拟杆菌门。与柔嫩艾美尔球虫或肠炎沙门菌单独感染相比,混合感染导致肠杆菌科明显增加,毛螺菌科明显减少;因此,柔嫩艾美尔球虫与肠炎沙门菌混合感染对盲肠肠道菌群的影响与两者单独感染明显不同。

    2016年12期 v.36;No.240 2081-2085页 [查看摘要][在线阅读][下载 1038K]
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简讯

  • 《高级动物免疫学》征订启事

    <正>由吉林大学动物医学学院韩文瑜、雷连成教授主编的《高级动物免疫学》2016年6月由科学出版社正式出版,全书共91.7万字。该书以专题的方式编写,共35章,分为两部分。第一部分为基础免疫学专题,为1~19章,主要内容有免疫器官、免疫分子、免疫应答、免疫调节、免疫的动力学、细胞凋亡与免疫、细胞自噬、

    2016年12期 v.36;No.240 2018页 [查看摘要][在线阅读][下载 53K]
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  • 中国畜牧兽医核心期刊表

    <正>~~

    2016年12期 v.36;No.240 2198页 [查看摘要][在线阅读][下载 307K]
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人兽共患病

  • 羊种布鲁菌分离株bp26及omp10基因的分子进化与变异分析

    凤英;高娃;赵世华;刘秀丽;张月梅;陈伟;

    为了解羊种布鲁菌内蒙古分离株和疫苗株的遗传变异情况,对羊种布鲁菌分离株B1、B2、B3、B4以及疫苗株M5、S2、A19的bp26及omp10基因进行了扩增、克隆和序列分析,并与国内外的代表性毒株进行了序列比对。结果显示:4株分离株的bp26序列长度均为900bp,开放阅读框为753bp,与疫苗株M5同源性为100%,疫苗株S2和A19的同源性为99.99%;分析发现所有序列中共有4处变异,A19 bp26基因的CDS区第304位A→G和第405位C→T突变,S2 bp26基因的第498位C→T和727位G→A突变;其中304位的A→G的变异导致其编码的氨基酸发生了从天冬酰胺(N)到天冬氨酸(D),727位G→A的变异导致氨基酸发生了缬氨酸(V)到异亮氨酸(I)的变化;而分离株和疫苗株M5未发生变异。4株分离株的omp10序列长度均为513bp,开放阅读框为396bp,同源性为99.99%,与疫苗株S2和A19同源性为100%;分析发现疫苗株M5的omp10基因序列发生了1处变异,第144位C→T,但没有引起氨基酸改变,其他菌株没有发生变异。

    2016年12期 v.36;No.240 2086-2089页 [查看摘要][在线阅读][下载 535K]
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  • 天鹅源丙型副伤寒沙门菌对小鼠的致病性

    冉丹丹;陈冬平;罗薇;孔雪英;刘群;

    为了解天鹅源丙型副伤寒沙门菌的公共卫生学意义,并建立天鹅源丙型副伤寒沙门菌感染小鼠的实验动物模型。采用腹腔注射和人工灌服途径感染小鼠,了解感染鼠的LD50,观察灌服鼠于灌服后不同时段的临床症状、病理变化、血清生化指标、粪便排菌情况。结果表明,腹腔注射感染鼠的LD50为4.55×107 CFU/mL,人工灌服途径感染鼠的LD50为1.8×109 CFU/mL;用菌液浓度>2×106 CFU/mL灌服感染鼠6h开始发病,6~96h精神沉郁、嗜睡、食欲减退,有腹泻、死亡;病、死鼠(12h)呈现肠黏膜坏死脱落、肠壁变薄,肠腔有多量黄色黏液状的内容物,肺脏有出血性病变,24h肝脏表面见有点状坏死;感染后36h的尿酸、72h的谷丙转氨酶、谷草转氨酶显著升高直至120h,尿素氮在72~96h明显升高,碱性磷酸酶活性在48~96h显著降低,血糖、蛋白在72~120h明显下降;2种途径感染8h后小鼠的粪便皆可检出感染菌,且粪便排菌的持续时间与感染剂量呈正相关,0.5mL/只(2×1010 CFU/mL)感染鼠直至感染后23d粪便仍有排菌,表明天鹅源丙型副伤寒沙门菌对试验小鼠有致病性,感染后经粪便长期排菌。

    2016年12期 v.36;No.240 2090-2096+2100页 [查看摘要][在线阅读][下载 2300K]
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  • H1、H3、H9亚型禽流感病毒多联RT-PCR检测方法的建立

    李红丽;王红宝;郭雪丽;王毅;

    根据GenBank中登录的H1、H3、H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因序列,通过多序列对比,在保守区域内设计了3对特异性引物,对PCR反应体系的各组分进行试验调整,建立了一种H1、H3、H9亚型AIV多联RT-PCR检测方法,在2h内即可判断待检样品中是否有这3种亚型AIV的存在。经灵敏性及特异性试验以及临床样品检测结果证明,该方法灵敏度高、特异性好、结果准确,能够作为H1、H3、H9亚型AIV的快速检测方法。

    2016年12期 v.36;No.240 2097-2100页 [查看摘要][在线阅读][下载 339K]
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  • 山羊副流感病毒3型人工感染山羊的致病性

    郝飞;李文良;毛立;杨蕾蕾;张纹纹;江杰元;

    为了明确新分离的山羊副流感病毒3型(CPIV3)JS2013株的致病性,本试验采用动物感染试验的方式研究该病毒在本属动物体内的复制、排毒以及组织病理损伤等情况。通过病毒血症、临床症状、病理组织学检测、HI抗体及中和抗体检测综合分析病毒对山羊的致病性。结果表明,攻毒后的山羊出现以喷嚏、咳嗽、流鼻涕、眼分泌物增多以及呼吸困难为主的临床症状;攻毒后1d即可检出病毒血症,持续到攻毒后7d,且从攻毒后1~7d可以从鼻拭子中检测到排毒。剖检观察攻毒组山羊肺组织出现增生实变、肿大,组织病理学检测发现肺组织出现肺泡间隔增宽、肺泡结构消失、炎性细胞浸润等变化。HI和中和试验表明,山羊感染后7d开始出现血凝抑制抗体,14d出现中和抗体,并持续升高至28d。以上结果证实CPIV3JS2013株对山羊具有较强的致病性,为后续研究奠定基础。

    2016年12期 v.36;No.240 2101-2105页 [查看摘要][在线阅读][下载 1034K]
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  • 重组欧洲禽源H1N1亚型猪流感病毒疫苗株的构建及免疫保护效力

    阮宝阳;宫晓倩;刘晓敏;汪琪;张鹏;汪秀会;王振勇;李泽君;王林;童光志;于海;

    以国内欧洲禽源H1N1亚型猪流感病毒流行株A/swine/Shanghai/1/2014(H1N1)(SH1)为材料,RT-PCR扩增HA和NA基因并将其克隆至PBD载体中,构建HA和NA基因的重组质粒。将HA和NA基因重组质粒及来源于流感病毒高产株PR8的6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M和NS)重组质粒共转染293T细胞,从而成功构建了重组欧洲禽源H1N1亚型猪流感病毒疫苗株SH/PR8。以相同病毒剂量接种MDCK细胞,检测不同时间点的血凝效价,绘制病毒生长曲线,结果表明,重组病毒SH/PR8相对于原始野生株SH1在MDCK细胞上具有更高的病毒滴度。重组病毒SH/PR8制备的灭活疫苗经过一免和二免小鼠后,检测血清中血凝抑制抗体、中和抗体和IgG抗体,结果显示首免后抗体效价持续升高,4周后抗体效价达到峰值。小鼠攻毒试验结果表明,免疫组体质量下降不明显且未出现死亡,而非免疫组小鼠体质量持续下降并且于攻毒后6d小鼠出现100%死亡。肺脏组织病毒含量滴定以及组织病理学观察结果显示,免疫组能够有效抑制SH1病毒在肺脏中的复制,减轻肺脏病理变化。总之,本研究表明重组SH/PR8疫苗候选株相对于原始毒株SH1在MDCK细胞上具有更高的复制能力,制备的重组灭活疫苗能够诱导机体产生高水平的抗体,能够针对欧洲禽源H1N1亚型猪流感病毒的攻击提供很好的免疫保护。

    2016年12期 v.36;No.240 2106-2112+2118页 [查看摘要][在线阅读][下载 1621K]
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基础兽医学

  • 不同剂量6-羟多巴胺对大鼠子宫交感神经损毁情况及其对肥大细胞分布的影响

    袁学军;范晓杰;张秀霞;戴美玲;王树迎;侯衍猛;黄丽波;

    为研究6-羟多巴胺(6-OHDA)损毁大鼠子宫交感神经的剂量及其对子宫肥大细胞分布的影响,选取180~200日龄健康的性成熟Wistar雌性大鼠24只,随机分为对照组和处理组,处理组尾静脉注射25,50,100 mg/kg的6-OHDA。结果显示:按照一次性注射100mg/kg 6-OHDA的方法可以损毁支配子宫的交感神经,而50 mg/kg未能损毁子宫内膜固有层的神经。肥大细胞观察结果显示,其主要分布在内环、外纵肌之间的血管周围,随着6-OHDA剂量的不断加大,肥大细胞数量呈减少趋势,3个处理组对比差别显著,对照组略高于25 mg/kg组。血清中组织胺含量呈相反的变化趋势。结果表明,可采取一次性注射100mg/kg的6-OHDA来建立交感神经损毁模型,交感神经影响子宫内肥大细胞的分布,对于机体组织胺释放的调控不同于子宫。

    2016年12期 v.36;No.240 2113-2118页 [查看摘要][在线阅读][下载 1995K]
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  • 雄性马可·波罗盘羊与家绵羊头骨形态特征比较

    王玉涛;张旭;戴志刚;罗玉柱;

    盘羊是中国境内唯一的野生绵羊,在中国境内有6个亚种,马可·波罗盘羊是盘羊体型最大的亚种,主要分布在中国、塔吉克斯坦、巴基斯坦、阿富汗和吉尔吉斯坦5国边境。本试验搜集雄性马可·波罗盘羊头骨18例(年龄为5~10岁)进行形态解剖,并与家绵羊进行比较。结果表明:(1)盘羊的头骨形态特征与家绵羊十分相似,但盘羊头骨大,尤其角大螺旋呈"S"型,头骨狭长,吻部长而扁平,鼻孔较大,前颌骨平坦且与鼻骨相连处稍凹陷,眼窝面积大而深,牙齿两侧的上颌骨与颚骨连接处以及枕骨与基蝶骨完全愈合;而家绵羊头骨较短,鼻骨隆起,吻部短小,眼窝不明显,牙齿两侧的上颌骨与颚骨连接处以及枕骨与基蝶骨未愈合且有明显的凸起。(2)盘羊5岁后,头骨的上颊齿列基长、眼窝长、乳突间距、眶间距、颧宽、枕颅高、枕髁宽、脑颅最大宽、角基最窄、最小角尖距和最大角尖距等11项指标已稳定,头骨形态基本固定;但头骨眶下孔距、角基周长、角基长径、角基短径和角外侧长等随着年龄的增长而显著增大(P<0.05),上颌臼齿外宽和角尖距与年龄存在极显著正相关(P<0.01)。(3)对盘羊23项测量指标间的相关性进行分析,发现盘羊头骨不是趋同生长。与家绵羊相比,除听泡长外,其余21项测量指标间存在极显著性差异(P<0.01),因此两者容易辨别。

    2016年12期 v.36;No.240 2119-2125+2129页 [查看摘要][在线阅读][下载 702K]
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  • 比格犬野生型ERβ稳定细胞系及其配体结合区(LBD)真核表达载体的构建

    沈欢欢;赵彦斌;曾林;孙兆増;胡仲明;杨焕民;

    通过构建比格犬ERβ稳定细胞系及其配体结合区(LBD)的真核表达载体,为探讨ERβ的功能奠定基础。以重组质粒pEGFG-N1-ERβ为模板,扩增出全长ERβ以及ERβ-LBD基因片段,经胶回收纯化后连接到pMD18-T载体,经测序鉴定后再连接至Lenti-OE-Flag以及pFLAG-CMV4载体。使用HEK-293T包装细胞系,包装Lenti-OEFlag-ERβ产生慢病毒,并将所得病毒悬液感染HEK293细胞,利用Puromycin加以筛选,获得稳定表达细胞系。同时将pFLAG-CMV4-ERβ-LBD质粒瞬时转染293T细胞,采用Western blot方法验证ERβ以及ERβ-LBD蛋白的表达情况。结果表明,试验成功获得ERβ稳定表达细胞系和重组质粒pFLAG-CMV4-ERβ-LBD;Western blot方法证实,稳定表达细胞系可以成功表达ERβ蛋白,ERβ-LBD也可以瞬时成功表达。

    2016年12期 v.36;No.240 2126-2129页 [查看摘要][在线阅读][下载 770K]
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  • 牛畸胎瘤衍化生长因子TDGF1基因过表达对成肌细胞增殖的影响

    杨雪;王军;刘畅;杨雨江;吕文发;

    为明确牛畸胎瘤衍化生长因子(TDGF1)对成肌细胞(C2C12)增殖的影响,利用定向克隆和细胞转染技术获得可稳定过表达牛TDGF1基因的C2C12细胞系,Western blot(WB)和荧光定量PCR技术检测TDGF1在C2C12细胞系中的表达量,MTT法检测C2C12细胞的增殖。结果表明,成功构建了pIRES2-EGFP-TDGF1真核表达载体,牛TDGF1基因在C2C12细胞中的表达量显著上调,并成功表达出TDGF1蛋白,且过表达牛TDGF1基因可抑制C2C12细胞增殖,在转染30h时抑制作用最显著。

    2016年12期 v.36;No.240 2130-2134页 [查看摘要][在线阅读][下载 839K]
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  • 使用phiC31整合酶构建奶牛INSIG1基因乳腺恒定表达细胞系

    韩立强;王林枫;王月影;朱河水;王江;褚贝贝;郑悦亭;张超;杨国宇;

    为了使用phiC31整合酶建立奶牛胰岛素诱导基因1(INSIG1)的稳定表达乳腺细胞系,首先从奶牛乳腺组织中克隆得到INSIG1基因的编码区,然后将克隆片段与phiC31载体进行BamHⅠ和KpnⅠ双酶切构建INSIG1-C31真核表达质粒;将其与phiC31整合酶质粒共同转染到小鼠乳腺细胞中,采用嘌呤霉素筛选细胞,荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白的表达,PCR鉴定细胞基因组中INSIG1基因的表达,荧光定量PCR检测细胞中INSIG1基因的表达。结果表明,试验成功构建INSIG1-C31真核载体,与phiC31整合酶共转染小鼠乳腺细胞,经过8mg/L嘌呤霉素筛选后获得完全表达绿色荧光蛋白的乳腺细胞系;对细胞系鉴定表明INSIG1基因已经整合到细胞基因组中,与对照组相比,INSIG1基因的mRNA表达丰度增加了597.98倍(P<0.001)。本研究获得了稳定表达奶牛INSIG1基因的乳腺细胞系,为深入研究INSIG1基因功能打下基础。

    2016年12期 v.36;No.240 2135-2139页 [查看摘要][在线阅读][下载 1491K]
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临床兽医学

  • 抗猪嗜血支原体中药单体的体外筛选

    陈建闪;张晋强;孙耀贵;王文魁;李宏全;马海利;

    为体外筛选具有杀灭猪嗜血支原体(M.suis)作用的中药单体,应用血液直接PCR扩增中药单体作用不同时间后培养体系中的M.suis,通过比较电泳条带灰度值筛选出具有抗M.suis作用的中药单体;应用qPCR测定所筛选中药单体作用后培养体系中M.suis的拷贝数,通过杀灭率来评估中药单体对M.suis的杀灭效果。结果筛选出丹参酮ⅡA磺酸钠、甘草酸二钾、秦皮甲素、黄芩苷和肉桂酸5种具有体外抗M.suis作用的中药单体,其中在药物作用18h,丹参酮ⅡA磺酸钠、甘草酸二钾和秦皮甲素对M.suis杀灭率分别为76.9%,90.6%和79.2%。体外试验表明,丹参酮ⅡA磺酸钠、甘草酸二钾和秦皮甲素对M.suis的杀灭效果较好,是理想的抗M.suis目标药物,具有潜在的临床应用与研究价值。

    2016年12期 v.36;No.240 2140-2144页 [查看摘要][在线阅读][下载 612K]
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  • 红三叶异黄酮对肉鸡肺血管重构和平滑肌细胞凋亡的影响

    王凯;刘振阳;王洋;姜义宝;崔国文;王成章;

    为观察在低温环境下红三叶异黄酮对肉鸡肺血管重构和平滑肌细胞凋亡的影响,选取270只10日龄肉鸡,随机分为常温对照组(Ⅰ)、低温组(Ⅱ)和低温黄酮组(Ⅲ),每组6个重复,每个重复15只,Ⅰ组和Ⅱ组饲喂基础饲粮,Ⅲ组饲喂添加红三叶异黄酮20mg/kg的试验饲粮,分别于14,21,28,35,42日龄从各组随机抽取6只肉鸡,观察各组肉鸡肺血管病理形态学变化,检测Caspase-3和Bcl-2蛋白表达情况。结果表明,Ⅱ组肉鸡肺小动脉结构在28,35,42日龄比Ⅰ组肺小动脉管壁有不同程度增厚、管腔变窄,发生了明显的重构现象(P<0.05或0.01)。Ⅲ组与Ⅱ组相比,在28,35,42日龄肺血管重构现象减轻(P<0.05或0.01),肉鸡肺动脉高压综合征(PHS)发病率降低,血管平滑肌细胞Caspase-3蛋白阳性率增高,Bcl-2蛋白表达下降;表明红三叶异黄酮能有效减轻肉鸡肺血管重构,其机制可能与调节平滑肌细胞凋亡有关。

    2016年12期 v.36;No.240 2145-2149页 [查看摘要][在线阅读][下载 142K]
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  • 黄芩素对镉中毒大鼠体质量、器官系数和血液生理指标的影响

    汪纪仓;朱华丽;张才;王宏伟;杨自军;刘宗平;

    将24只SD大鼠随机均分为4组,分别为对照组、镉组、黄芩素组和黄芩素+镉组,每组6只。对照组每天用生理盐水灌喂;镉处理组按2mg/kg的Cd2+每天腹腔注射氯化镉溶液;黄芩素组每天灌服黄芩素溶液(100mg/kg);黄芩素+镉组大鼠每天腹腔注射含2 mg/kg Cd2+的氯化镉溶液,再灌服黄芩素(100 mg/kg)溶液。每周测大鼠体质量,4周后,采集大鼠血液,用血细胞分析仪测定大鼠血液生理指标,并处死大鼠,收集肝脏、肾脏、睾丸和心脏,计算器官系数。结果显示,与对照组相比,镉处理组大鼠体质量极显著下降(P<0.01),肝脏器官系数显著升高(P<0.05),睾丸器官系数极显著降低(P<0.01);白细胞(WBC)数目极显著升高(P<0.01),红细胞数目(RBC)和平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)显著降低(P<0.05),血红蛋白(HGB)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)和红细胞压积(HCT)极显著降低(P<0.01),其他指标差异不显著(P>0.05)。与对照组相比,黄芩素组大鼠体质量、器官系数及血液生理指标无显著性差异。与镉组相比,黄芩素+镉组大鼠第3周和第4周体质量显著增加(P<0.05),WBC数目显著降低(P<0.05),HGB、RBC、MCHC、MCH和HCT显著升高(P<0.05),而MCV、PLT、MPV、PDW差异不显著(P>0.05)。结果表明,镉对大鼠的体质量、肝脏和睾丸器官系数、血液指标有影响,黄芩素对镉致大鼠损伤有一定的保护作用。

    2016年12期 v.36;No.240 2150-2153页 [查看摘要][在线阅读][下载 124K]
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动物科学

  • PEG11基因在体细胞核移植牛中印迹和DNA甲基化状态分析

    张明月;杨文志;石运娇;张萃;陈玮娜;崔亚丽;张巍巍;李宁;李世杰;

    为了分析PEG11基因在体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)牛中的印记以及重编程状态,本研究应用RT-PCR产物直接测序法对PEG11基因在自然繁殖牛和新生死亡SCNT牛7个组织(心、肝、脾、肺、肾、肌肉和脂肪)中的表达进行了分析。结果发现PEG11基因在自然繁殖牛的7个组织中均为单等位基因表达,表明PEG11基因在牛中是印记的;在SCNT牛肺脏中PEG11基因为双等位基因表达,而在其余6个组织中为单等位基因表达。进而用亚硫酸氢盐测序法分析自然繁殖牛和SCNT牛肺脏PEG11基因中54CpGs位点的甲基化状态,发现PEG11基因在SCNT牛肺脏中呈现与自然繁殖牛相似的高甲基化状态(97.26%),推测PEG11基因在新生死亡SCNT牛肺脏中印记紊乱可能是导致SCNT牛肺脏发育缺陷的原因之一,PEG11基因内部CGIs的甲基化不参与调控PEG11基因的基因组印记。

    2016年12期 v.36;No.240 2154-2159页 [查看摘要][在线阅读][下载 1659K]
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  • 转pGH基因猪繁殖性能及外源基因的传代

    姚延珠;刘国生;吴明明;蒋亚军;戚顺民;马康;孙金海;

    为探讨外源pGH基因对转基因猪繁殖性能的影响及其在F1代中的遗传情况,对转pGH基因长白猪与普通长白猪繁殖性能的各项指标进行了测定和比较,并对转基因猪F1代仔猪进行了外源基因的检测。结果显示,除转基因母猪F1代仔猪断奶个体质量差异显著(P<0.05)外,转pGH基因猪与非转基因猪繁殖性能其他指标均差异不显著;转基因公猪和转基因母猪F1代仔猪转基因阳性率分别为50.00%和47.83%,外源pGH基因对转基因猪的繁殖性能未产生显著影响,并可遗传给下一代。本研究为规范合理选育转pGH基因猪提供了理论依据,为进一步研究节粮型高瘦肉率转基因猪及其在实际生产中的应用奠定基础。

    2016年12期 v.36;No.240 2160-2165页 [查看摘要][在线阅读][下载 338K]
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  • 发酵饲料桑粉对育肥猪生长性能和猪肉品质的影响

    张娜娜;曹洪战;李同洲;杨静;芦春莲;

    为研究育肥期间补饲发酵饲料桑粉对猪的生长性能与猪肉品质的影响,54头胎次、初始体质量(65.80±1.20)kg、日龄基本一致的健康"杜×大×长"三元杂交育肥猪随机分为对照组与试验Ⅰ、Ⅱ组。对照组饲喂基础饲粮,试验Ⅰ组在基础饲粮的基础上添加15%饲料桑粉,试验Ⅱ组在基础饲粮的基础上添加15%发酵饲料桑粉。育肥猪在饲喂66d后,测定平均日增重、饲料增重比、屠宰率、平均背膘厚度、眼肌面积、肌肉pH值、肌内脂肪含量、肌肉剪切力,脂肪含量和脂肪酸含量等。结果显示,与对照组相比,试验Ⅱ组的猪平均日增重提高了2.51%,差异显著(P<0.05);屠宰率有所提高,但差异不显著(P>0.05);平均背膘厚度,试验Ⅰ组降低了6.60%,差异显著(P<0.05),试验Ⅱ组差异不显著(P>0.05);肌内脂肪,试验Ⅰ组、试验Ⅱ分别提高了9.97%,17.82%,差异均显著(P<0.05);试验Ⅱ组的猪肌肉剪切力降低了9.86%,差异显著(P<0.05);试验Ⅱ组的猪肉内饱和脂肪酸的含量显著降低(P<0.05),而不饱和脂肪酸的含量有所提高(P<0.05)。

    2016年12期 v.36;No.240 2166-2170页 [查看摘要][在线阅读][下载 128K]
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  • 不同抗氧化剂对鸡胚盘细胞冷冻效果的影响

    王坤;张佰忠;易康乐;蒋隽;王庆桥;燕海峰;

    为探究不同抗氧化剂对鸡胚盘细胞(blastodermal cells,BCs)冷冻保存效果,试验在冷冻液中分别添加不同浓度的N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和番茄红素(lycopene,LP)3种抗氧化剂,用胚胎程序冷冻仪冻存BCs,解冻后测定细胞活率(简称"活率"),并于培养24h后测定细胞贴壁率(简称"贴壁率")。结果表明:在活率上,除了0.05mol/L NAC组(76.7%)与800U/mL CAT组(77.3%)极显著低于对照组外(P<0.01),其余各组与对照组差异均不显著(P>0.05);在贴壁率上,除了800U/mL CAT组(34.2%)极显著低于对照组(P<0.01)外,其余试验组均极显著高于对照组(P<0.01),其中NAC、CAT与LP的最佳浓度,分别为0.01mol/L(48.3%)、200U/mL(45.4%)与0.05g/L(39.8%)。因此,在冷冻液中添加适量的NAC、CAT或LP,可以提高BCs冷冻保存活率(差异不显著),极显著提高解冻BCs培养24h后的贴壁率。

    2016年12期 v.36;No.240 2171-2175页 [查看摘要][在线阅读][下载 155K]
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综述

  • 沙门菌分泌系统研究进展

    安树敏;郭荣显;耿士忠;薛颖;潘志明;焦新安;

    目前已知革兰阴性菌的分泌系统共有6种类型,然而在沙门菌中只发现其中5种,即Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型和Ⅵ型分泌系统,对Ⅱ型分泌系统却未见报道。沙门菌的许多生物学特性是依赖于其分泌系统实现的,通过这些分泌系统,分泌性蛋白质或毒素被转运到细菌胞外,与宿主细胞发生相互作用而发挥其致病性。

    2016年12期 v.36;No.240 2176-2182页 [查看摘要][在线阅读][下载 330K]
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  • 牛呼吸道感染细菌病原的致病机理与防控研究进展

    谢倩茹;童胜涛;邵咏旋;姜鹏;陈颖钰;胡长敏;郭爱珍;

    牛呼吸道疾病综合征(BRDC)是一种急性呼吸道疾病,其主要细菌性病原有多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、化脓隐秘杆菌和昏睡嗜血杆菌,常见于断奶、运输等应激后牛群。该病呈世界性分布,可经呼吸道感染,严重影响肉牛及泌乳牛的品质,给养牛业造成巨大的经济损失。国内关于BRDC的研究仍比较匮乏,且尚无可预防BRDC细菌性病原的疫苗,为更好地防控BRDC,现就国内外BRDC细菌性病原的致病机理和防控研究进展做一综述。

    2016年12期 v.36;No.240 2183-2188页 [查看摘要][在线阅读][下载 170K]
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