- 王珂;袁乾亮;尹仁福;薛聪;钱晶;穆昱;张平仄;杨明曦;张晟;韩丽;丁壮;
通过比对新城疫病毒强、弱毒株F基因序列,根据其在F0裂解位点的差异以及F基因保守序列设计合成NDV-V-probe和NDV-L-probe探针组和NDV-F、NDV-R引物组,以基因Ⅶ型NA-1株和基因Ⅱ型LaSota疫苗株病毒RNA作为定量检测的标准品,建立检测方法。对所建立的标准曲线进行分析,相关系数R2均为0.997,线性关系良好。通过计算变异系数CV/%分别为0.034%和0.027%,均小于1%,说明稳定性良好。对禽类常见病毒IBV、H9亚型AIV检测未发现有交叉反应,特异性好、重复性佳。结果表明:成功建立了新城疫病毒强、弱毒双重荧光定量RT-PCR的检测方法,实现了从分子水平上快速鉴别强、弱毒力的新城疫病毒,也可快速区分野毒感染动物和疫苗接种动物,减少不必要的经济损失。
2017年01期 v.37;No.241 1-6+17页 [查看摘要][在线阅读][下载 689K] [下载次数：326 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：0 ] - 刘芳宁;徐鹏;孔惟博;孙宏伟;任少敏;梁志选;张玉珠;舒馨;赵建增;高英杰;孟凡生;
试验从猪骨髓中分离T淋巴细胞,待细胞培养达到相应时间点时,分别用PRRSV GP5类特异性肽进行刺激,继而检测细胞因子IL-10、IL-12以及IFN-γ分泌量的变化情况。结果显示:在PRRSV GP5类特异性肽刺激后,骨髓中IL-10分泌量减少,表明G1、G2肽具有减弱免疫抑制,促进抗炎性细胞因子产生的作用;此外,IL-12的分泌量也减少,提示猪的免疫保护作用减弱,表明PRRSV GP5类特异性肽可能具有双面性;而IFN-γ的分泌量变化不稳定,有待于进一步研究。
2017年01期 v.37;No.241 7-10+77页 [查看摘要][在线阅读][下载 130K] [下载次数：94 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 付朋飞;乔涵;张宇;杨兴武;徐朋丽;陈红英;
探索重组PPV VP2基因的猪伪狂犬病病毒rPRV-VP2株作为弱毒疫苗候选株的潜在价值,对其在多种细胞上的增殖特性、病毒滴度、最适培养细胞中的遗传稳定性、一步生长曲线、转录和翻译水平等生物学特性进行研究,并初步探索对小鼠安全性。结果显示:重组病毒rPRV-VP2株在VERO、ST、PK-15和IPEC细胞上的TCID50分别为104.375/0.1mL、106.5/0.1mL、103.75/0.1mL、105.625/0.1mL。重组毒与亲本毒PRV HB-98株在ST细胞中的毒力(106.125 TCID50/0.1mL)和细胞病变相当,重组病毒保持了PRV病毒的通性。连续传毒20代后的绿色荧光观察、RTPCR、Western blot试验结果均表明重组病毒中的VP2基因得到了有效表达,且遗传稳定性良好。安全性试验结果显示:重组毒对小鼠安全。本试验为后期对PPV VP2基因重组猪伪狂犬病毒rPRV-VP2株的开发利用奠定了基础。
2017年01期 v.37;No.241 11-17页 [查看摘要][在线阅读][下载 627K] [下载次数：170 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 马霞;郭振环;刘永录;雷连成;沈志强;
采用体内外试验研究纳米蜂胶黄酮抗猪细小病毒(PPV)作用。体外试验是以普通蜂胶黄酮为对照,分3种加药方式(先加蜂胶、后加蜂胶、蜂胶和病毒同时加入)加至PK-15细胞中,用MTT法检测细胞活性,实时荧光PCR检测PK-15中PPV含量,观察蜂胶黄酮对PK-15抗PPV及清除PPV能力的影响。体内试验是给豚鼠注射PPV后灌胃纳米蜂胶黄酮和普通蜂胶黄酮,检测肺脏、肾脏、肝脏、性腺及血液中PPV含量、血清中HI含量。结果显示:(1)与普通蜂胶黄酮相比,纳米蜂胶黄酮可显著抑制PPV在PK-15上生长,高浓度效果优于低浓度,3种加药方式中先加药物的效果最好;(2)高中剂量的纳米蜂胶黄酮可以显著抑制PPV在血液中复制、减轻PPV对豚鼠体重的影响、提高血清HI效价。结果表明:蜂胶黄酮经纳米化处理后,可以显著提高其抗PPV活性。
2017年01期 v.37;No.241 18-22+46页 [查看摘要][在线阅读][下载 1550K] [下载次数：245 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 王晓亮;王静静;李知新;张玉玲;王玉梅;胡永浩;
对宁夏地区2011年分离到的5株H1N1亚型猪流感病毒进行了基因组测定和遗传进化分析。结果显示:宁夏地区H1N1亚型猪流感病毒具有多样性,5株分离株可分为3类,其中1株为类人H1N1猪流感病毒,2株为经典猪流感病毒,另外2株为重组猪流感病毒,其PB2、PB1、PA、NP、NS基因来源于北美三元重组猪流感病毒,HA、NA、M基因来源于经典猪流感病毒;HA蛋白裂解位点附近氨基酸分析显示5株H1N1亚型猪流感分离株均为低致病性毒株;序列分析结果显示5株病毒在HA蛋白受体结合位点、抗原位点,以及NA蛋白潜在糖基化位点处氨基酸存在差异,这些差异具有分支特异性。5株病毒在NA和M2蛋白上均未出现与神经氨酸酶抑制剂和金刚烷胺耐药性相关的氨基酸变异,但其中3株病毒的PB2蛋白基因具有哺乳动物适应性变异E627K。
2017年01期 v.37;No.241 23-28+39页 [查看摘要][在线阅读][下载 815K] [下载次数：162 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 张新珩;蔺文成;周振海;陈峰;毕英佐;谢青梅;
从广东某鸭场发病鸭体内分离到1株鸭Ⅲ型腺病毒(DA-1株),该病毒能在鸭成纤维细胞上繁殖,并呈现典型的细胞病变。通过高通量测序,获得了鸭Ⅲ型腺病毒(DA-1株)的全基因组序列。同源性分析表明,DA-1分离株hexon和DBP基因氨基酸序列与2014年法国分离的鸭Ⅲ型DA GR株的同源性最高,分别为86.2%和87.9%。遗传进化分析表明,DA-1株的hexon和DBP基因与GenBank上参考毒株相比,与鸭Ⅲ型DA GR株亲缘关系最近。鸭Ⅲ型DA是一种新出现的病毒,对养鸭业造成了一定的经济损失,研发高效疫苗和快速诊断方法对防控该病的流行具有重要的意义。
2017年01期 v.37;No.241 29-32页 [查看摘要][在线阅读][下载 382K] [下载次数：257 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 李知新;吴润;张成莲;周海宁;艾文;杨佳冰;吴亚文;王晓亮;张和平;
用660份牛血清比较牛口蹄疫病毒O型、A型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒检测结果的一致性,并用u检验排除抽样误差的影响。结果表明:待检血清最终稀释度数为1∶64时O型试剂盒联合检出523份口蹄疫抗体阳性和102份阴性,符合率为94.70%,结果一致性为极强(Kappa值=0.82);待检血清最终稀释度数为1∶128时O型试剂盒联合检出476份口蹄疫抗体阳性和125份阴性,符合率91.06%,结果为高度一致(Kappa值=0.75);血清最终稀释度数为164时A型试剂盒联合检出498份口蹄疫抗体阳性和120份阴性,符合率为93.64%,结果一致性为极强(Kappa值=0.81),血清最终稀释度数为1∶28时A型试剂盒联合检出354份口蹄疫抗体阳性和233份阴性,符合率为88.94%,结果为高度一致(Kappa值=0.77)。在不同包被方式下,LBE试剂盒检测待检血清牛口蹄疫病毒抗体结果一致性较好。兽医实验室可应用一致性检验,结合本单位人力、财力和物力等条件,选择适宜的牛口蹄疫病毒抗体检测试剂盒。
2017年01期 v.37;No.241 33-35+53页 [查看摘要][在线阅读][下载 130K] [下载次数：145 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 孙娜;刘杏;陈强;刘莹;温永俊;程世鹏;
为建立一种用于检测胞内劳森菌的检测方法,本试验根据GenBank中公布的胞内劳森菌16SrRNA设计引物建立PCR诊断方法。结果显示:获得了大小为481bp的PCR产物,核苷酸序列同源性分析结果均为99%以上;特异性试验表明该方法对大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、猪流行性腹泻病毒和金黄色葡萄球菌均为扩增阴性;敏感性试验表明该方法的最低检出量为32.8μg/L;对20份临床样品阳性检出率为15%。结果表明:该方法具有较好的特异性和敏感性,适用于临床检测胞内劳森菌。
2017年01期 v.37;No.241 36-39页 [查看摘要][在线阅读][下载 292K] [下载次数：388 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：0 ] - 彭忠;涂志勤;梁婉;胡睿铭;王豪男;寿琎;董超;李宗华;陈焕春;吴斌;
为了掌握胞内劳森菌在湖北省5个疑似猪增生性肠炎暴发规模化猪场中的流行情况,我们建立了一种从粪便中检测胞内劳森菌的巢式PCR方法,并利用该方法对采集于这5个规模化猪场不同生产阶段不同临床表现猪群的1 003份粪便样品进行监测。结果显示:5个猪场的胞内劳森菌检出率在11.5%~19.4%之间,平均阳性率为15.5%;就临床表现而言,腹泻猪粪便样品中胞内劳森菌的检出率高于非腹泻猪;就生产阶段而言,保育及育肥猪中胞内劳森菌的检出率高于断奶仔猪、母猪和公猪。我们还利用粪便检测胞内劳森菌呈阳性、疑似临床症状明显的猪的肠道制备的感染溶液进行了病例复制,试验猪在灌服感染溶液后出现了与胞内劳森菌感染相似的临床症状及病理变化,并且从感染猪的肠道组织和粪便中检测到了胞内劳森菌的存在。本试验对于进一步了解胞内劳森菌在我国猪群中的流行情况及致病性具有一定的意义。
2017年01期 v.37;No.241 40-46页 [查看摘要][在线阅读][下载 629K] [下载次数：361 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：15 ] |[阅读次数：1 ] - 敬文宪;彭志锋;王新卫;常洪涛;刘红英;王川庆;卢彩景;杨霞;
参考GenBank中鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis,G.anatis)UMN179的外膜蛋白W(outer membrane protein W,OmpW)基因序列设计1对引物,对鸭源鸡杆菌PDS-RZ-1-SLG株的OmpW基因进行克隆、测序,并通过生物信息学软件对该蛋白结构与功能进行分析及预测。结果显示:OmpW基因大小为705bp,编码234个氨基酸;与鸭源鸡杆菌UMN179株、F149株及12656/12株的OmpW氨基酸同源性分别为88.9%、78.7%和79.6%;OmpW相对分子质量为25 300,等电点为7.88,是能够稳定存在的蛋白,N端有1个疏水性的α螺旋信号肽,C端有1个疏水性的β折叠区域,并且在外膜表面存在1个保守性的B细胞线性表位。本试验成功克隆了鸭源鸡杆菌PDS-RZ-1-SLG株的OmpW基因,并对其结构与功能进行初步分析和预测,为进一步研究其生物学功能及其应用奠定基础。
2017年01期 v.37;No.241 47-53页 [查看摘要][在线阅读][下载 722K] [下载次数：137 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]
- 朱光泽;李一权;范园园;兰添;张诺娜;胡宁宁;邢彬;尹秀英;李霄;金宁一;
为了了解吉林地区HEV分子背景和流行特征,对2013年采自吉林地区养殖场的毒株编号为Ch-S-1的Ⅳ型戊型肝炎病毒(HEV)的全基因序列进行了分析。通过提取病毒RNA,采用RT-PCR方法分段扩增HEV全长基因,两端采用RACE法扩增,经过序列测定和拼接,利用ClusterX1.81、MEGA3.0、Phylop win 3.0软件分析基因序列。最终得到了HEV Ch-S-1全长基因组(GenBank登录号EF077630,7 261bp),其中ORF1、ORF2和ORF3分别编码1 706,674,114个氨基酸。与人源及猪源各基因型HEV相比,Ch-S-1与基因Ⅰ~Ⅲ型的ORF1片段同源性在78.8%~86.9%之间,而与基因Ⅳ型的ORF1片段同源性在93.7%~97.6%。Ch-S-1与基因Ⅰ~Ⅲ型的ORF2片段同源性在87.5%~92.4%之间,而与基因Ⅳ型的ORF2片段同源性在95.9~98.2%。Ch-S-1与基因Ⅰ~Ⅲ型的ORF3片段同源性在75.2%~84.0%之间,而与基因Ⅳ型的ORF3片段同源性在97.5%~99.2%。结果表明:HEV Ch-S-1全序列的基因结构特征与HEVⅣ型基本一致。
2017年01期 v.37;No.241 54-59页 [查看摘要][在线阅读][下载 730K] [下载次数：117 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 纪方晓;陈济铛;梁焕斌;朱婉君;古洪浪;王衡;王林川;张桂红;
构建了ORF2蛋白原核表达体系Rosetta-pMAL-c5X-ORF2,经IPTG诱导表达后,对重组蛋白进行SDSPAGE和Western blot分析,并采用镍柱亲和层析法进行纯化,以该蛋白为抗原建立液相蛋白芯片检测方法。结果显示:本试验成功表达了可溶性ORF2蛋白,具有良好的抗原性。液相蛋白芯片检测方法对猪常见的其他疾病阳性血清无交叉反应,其批内、批间变异系数分别为5%和6.6%。对102份临床血清样本检测结果显示,该方法与商品化ELISA试剂盒符合率为93.1%,关联性卡方检验显示2个方法具有一致性(P<0.01)。本试验为临床HEV血清抗体的检测提供了一种特异、灵敏的新型快速检测技术,为建立猪病多重检测方法提供了基础。
2017年01期 v.37;No.241 60-65页 [查看摘要][在线阅读][下载 394K] [下载次数：161 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：0 ] - 刘慧敏;常洪涛;杨霞;贺秀媛;陈陆;王新卫;李永涛;赵军;王川庆;
研制了猪脑心肌炎(EMCV)与猪圆环病毒(PCV-2)二联灭活疫苗EMCV/PCV-2,并选择小鼠和猪进行疫苗的安全性与免疫效力试验。结果显示:EMCV/PCV-2二联灭活疫苗对小鼠、仔猪、后备母猪和不同妊娠阶段母猪均安全。免疫小鼠时的最佳接种剂量为0.1mL,首免和二免的保护率分别高达80%和100%,免疫效果均高于相应单苗,并可产生各自的高水平抗体;免疫仔猪时的最佳接种剂量为2mL,免疫效果略高于相应单苗和PCV-2商品苗,且平均日增重最高,料肉比最低,攻毒保护试验结果表明可完全有效抵抗EMCV和PCV-2强毒株的攻击。该疫苗为2种疾病的联合免疫提供了可能,达到"一针防两病"的效果,满足了EMCV免疫的潜在需求。
2017年01期 v.37;No.241 66-72+77页 [查看摘要][在线阅读][下载 394K] [下载次数：297 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 陈小丽;唐耀;程龙飞;王宇翔;傅秋玲;林建生;
为鉴定死亡白颊长臂猿肝脏中分离的细菌,本试验采用16SrRNA比对的方法对该细菌菌种的鉴定。荚膜群的鉴定方法采用PCR法,药敏试验采用纸片法,毒力试验采用皮下注射小鼠和SD大鼠的方法。结果显示:细菌为荚膜F群多杀性巴氏杆菌,敏感的药物有多黏菌素B、恩诺沙星、氟苯尼考、氟哌酸、复方新诺明、环丙沙星、甲砜霉素、利福平、强力霉素、头孢唑啉、氧氟沙星、壮观霉素、左氧氟沙星和四环素等。该菌能致死小鼠和SD大鼠。结果表明:从死亡白颊长臂猿肝脏中分离到的细菌是有毒力的荚膜F群多杀性巴氏杆菌。
2017年01期 v.37;No.241 73-77页 [查看摘要][在线阅读][下载 520K] [下载次数：79 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 张慧蓉;秦桂平;李蓉;于观留;刘纪园;韦良孟;柴同杰;
针对H7N9亚型欧亚谱系AIV的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因的序列保守区分别设计特异性引物和TaqMan探针。通过优化反应条件,建立了H7N9亚型禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法。利用该方法对泰安市活禽市场11个月的空气状况进行监测。结果显示:H7和N9基因的最低检测限度分别为100copies/μL和101 copies/μL,检测H7和N9基因的R2值均为0.999。批内和批间试验的变异系数均小于3%。采用该技术,活禽市场空气样品3/114份检测出H7N9阳性。结果表明:本试验建立的H7N9亚型AIV实时荧光定量RT-PCR方法与其他方法相比具有快速、特异和敏感的优点,可为H7N9亚型AIV的监测及早期诊断提供理论依据。
2017年01期 v.37;No.241 78-82+96页 [查看摘要][在线阅读][下载 404K] [下载次数：235 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 赵国洪;姚俊;赵文华;杨仕标;高华峰;
建立山羊流产嗜性衣原体与Q热立克次氏体基因组DNA特异扩增检测方法,对云南省河谷地区可疑流产病料时行病原检测并最终证实病原的存在,在此基础上了解病原的进化。获得特异基因产物完成测序验证后递交GenBank,能过BLAST初步分析后调取相关基因,应用DNAstar5.0计算序列间的相似性,计算遗传距离,应用MEGA5.2软件进行比对并构建系统发育树,进行聚类分析。云南流产嗜性衣原体KR778870与有参考序列的衣原体毒株比较其核苷酸同源性均为100%,属同一基因型,与鹦鹉热衣原体同源率最高为94.9%;Q热立克次氏体云南毒株KR697576与纳米比亚毒株CP007555同源性为100%,其次美国毒株为CP00102同源率99.7%,台湾株EU000273为99.4%,同源率最低的毒株EU009657仅为42.6%。通过基因特异性PCR确定流产山羊中检测到流产嗜性衣原体及Q热立克次氏体,流产嗜性衣原体PMP基因无变异,Q热立克次氏体TransⅢ基因则有一定的变异。
2017年01期 v.37;No.241 83-86页 [查看摘要][在线阅读][下载 283K] [下载次数：199 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：0 ] - 王安琪;丁静;王楠;王兆国;胡晓祥;吴秀萍;刘明远;廖成水;
利用RT-PCR技术从旋毛虫成虫得到T3223-7基因,并进行扩增克隆到原核克隆载体pMD18-T中,将重组质粒转入克隆菌DH5α,提取质粒进行酶切和测序鉴定,连接至pET-28a表达载体,最后转入表达菌Rosetta(DE3)。用1mmol/L IPTG诱导培养重组表达菌,对菌体裂解物进行SDS-PAGE分析,发现重组蛋白以包涵体的形式表达,约为40 000,与理论值相符。将纯化后的重组蛋白免疫家兔,制备兔抗T3223-7蛋白多克隆抗体,间接ELISA测定多抗效价达1∶320 000,Western blot检测表明制备的多克隆抗体能与T3223-7抗原发生特异性反应,并能识别和结合旋毛虫成虫排泄分泌物(ES)。
2017年01期 v.37;No.241 87-91页 [查看摘要][在线阅读][下载 355K] [下载次数：126 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ]
- 鲍光明;刘宝生;王小莺;罗军荣;邹欣;袁厚群;张路捷;胡弯弯;陈书鹏;
为了屏蔽药物的不良味道,本试验以聚丙烯酸树脂IV为囊材,采用液中干燥法制备了氧氟沙星掩味微囊。试验以包封率及载药量为指标,通过考察溶剂、囊材、乳化剂、抗黏剂的用量对微囊的影响来筛选处方工艺。应用最佳工艺制备的氧氟沙星掩味微囊,载药量为57.4%,包封率为48.6%。该微囊在模拟口腔环境(pH值为7.0)介质中释放极其缓慢,60min仅释放总药量的2.1%;随着释放介质的酸度提高,药物的释放速率显著加快;除此之外,在胃酸酸度(pH值为1.0~3.0)范围内,氧氟沙星的释放还呈现缓释特征,可持续近10h。体外试验显示,采用液中干燥法制备得的氧氟沙星微囊,既可掩味又能实现持续释药,而且制备工艺简便,具有很好的应用前景。
2017年01期 v.37;No.241 92-96页 [查看摘要][在线阅读][下载 259K] [下载次数：250 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 王惠;卢曾奎;马友记;张全伟;赵兴绪;
为探讨促乳素释放激素受体(prolactin releasing peptide receptor,PrRP-R)基因在不同发育时期绵羊睾丸和不同组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、股二头肌、下丘脑、垂体、松果腺)中表达的差异,以0,2,5,12,24月龄的小尾寒羊为研究对象,应用荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR)和免疫组化(immunohistochemistry)技术分别分析了PrRP-R基因在组织中的差异表达与定位。结果显示:PrRP-R基因在睾丸与心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、股二头肌、下丘脑、垂体、松果腺之间的表达差异极显著(P<0.01),股二头肌、垂体、松果腺之间表达差异不显著(P>0.05),但背最长肌、下丘脑、垂体之间表达差异显著(P<0.05);0,2,5,12,24月龄的睾丸组织中均有一定量的表达,24月龄时表达最高(P<0.01);PrRP-R在0~24月龄绵羊睾丸组织中呈阶段性表达,0,2,5月龄时,可观察到PrRP-R在精原细胞中到阳性表达;12,24月龄时,在初级精母细胞和次级精母细胞中检测到强阳性表达。结果表明:PrRP-R在不同的组织和睾丸中表达并存在一定的差异,可能对绵羊的繁殖性能具有重要的调控作用。
2017年01期 v.37;No.241 97-101+117页 [查看摘要][在线阅读][下载 596K] [下载次数：149 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 齐志敏;冯嘉轩;慈鑫鑫;邓旭明;
构建核转录相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)敲除HepG2细胞系及Nrf2过表达载体。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,将Nrf2-sgRNA表达载体转入HepG2细胞,嘌呤霉素筛选基因敲除细胞,构建敲除Nrf2基因HepG2细胞系。Nrf2过表达载体的构建,从HepG2细胞提取总RNA,反转录为总cDNA,并以此为模板设计Nrf2引物扩增目的基因,连接,转化,挑取阳性克隆,PCR验证,测序进一步鉴定。结果表明,获得了稳定敲除Nrf2的HepG2细胞及在HepG2细胞中稳定表达的Nrf2过表达载体,为研究Nrf2基因在动物肝损伤中的作用提供了理论依据。
2017年01期 v.37;No.241 102-106页 [查看摘要][在线阅读][下载 282K] [下载次数：1754 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 袁燕;张雅静;杨金龙;胡飞飞;顾建红;刘学忠;卞建春;刘宗平;
为研究雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路在镉诱导神经细胞凋亡和相关蛋白Bcl-2、Bax表达中的作用,用醋酸镉和/或雷帕霉素(rapamycin,Rap)染毒PC12细胞24h,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡形态学变化,Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果显示:与对照组相比,染毒组细胞凋亡和Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,Bcl-2/Bax极显著降低(P<0.01);与镉染毒组相比,镉与Rap联合作用组细胞凋亡和Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高,Bcl-2/Bax显著升高(P<0.05)。结果表明:镉可能通过激活mTOR信号通路调节Bcl-2和Bax的表达,从而诱导神经细胞凋亡。
2017年01期 v.37;No.241 107-111页 [查看摘要][在线阅读][下载 308K] [下载次数：321 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 潘琪琪;杨雨薇;高岩;韩云胜;袁雪;刘鑫;赵志辉;沈冰蕾;曲永利;
利用生物信息学方法预测出miR-224可能的靶基因为ACADM、ACAT1、ALDH2和LPL,然后用实时荧光定量法检测了miR-224与其靶基因在奶牛乳腺上皮细胞中的表达量。结果显示:(1)miR-224的相对表达量。转染shNc组表达量低于转染mimics组而高于inhibitor组。(2)靶基因荧光定量结果表明,ACADM、ALDH2和LPL基因转染shNc组表达量低于转染inhibitor组而高于mimics组。(3)经SPSS22.0相关性分析表明:在乳腺上皮细胞中,ACADM、ALDH2和LPL基因的表达量与miR-224的表达量呈显著负相关,ACAT1基因与miR-224没有显著联系。初步验证说明,ACADM、ALDH2和LPL基因可能是miR-224的靶基因,为进一步探索miR-224在奶牛乳牛乳腺上皮细胞发挥的作用提供了一定的理论依据和研究基础。
2017年01期 v.37;No.241 112-117页 [查看摘要][在线阅读][下载 464K] [下载次数：197 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 耿爽;杨占清;张虹亮;成文革;于海帆;郭斌;岳占碰;
以梅花鹿茸角为研究对象,通过原位杂交方法检测吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)和吲哚胺2,3-双加氧酶2(IDO2)在茸角中的表达。在培养的鹿茸软骨细胞中分别添加IDO1抑制剂1-甲基-L-色氨酸(1-L-MT)和IDO2抑制剂1-甲基-D-色氨酸(1-D-MT),作用24h后,通过荧光定量PCR方法检测软骨细胞分化标志分子Ⅹ型胶原(ColⅩ)表达的变化,进一步研究IDO1和IDO2对鹿茸软骨细胞分化的影响。结果显示:IDO1和IDO2主要在鹿茸真皮层成纤维细胞、间充质细胞和软骨细胞中表达。用浓度分别为200μmol/L和100μmol/L的1-L-MT和1-DMT处理鹿茸软骨细胞24h后,荧光定量PCR结果显示,ColⅩmRNA在鹿茸软骨细胞中的表达量均显著下降。结果表明:当IDO的活性受到抑制时,鹿茸软骨细胞的分化过程也受到明显抑制,IDO可能在梅花鹿鹿茸软骨细胞分化过程中起重要的作用。
2017年01期 v.37;No.241 118-122页 [查看摘要][在线阅读][下载 609K] [下载次数：150 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 王嘉玮;徐明强;陈洪艳;刘畅;姜昊;高妍;张嘉保;陈承祯;
采用高通量测序技术构建经骨形态发生蛋白-2(BMP2)处理前后的猪前体脂肪细胞差异miRNA表达谱,以明确BMP2影响的功能性miRNA。结果显示:BMP2刺激猪前体脂肪细胞前后共有55个miRNAs存在较大的表达差异,包括30个上调表达的miRNAs和25个下调表达的miRNAs;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测表明,高通量测序数据结果正确可靠;经miRnada和RNAhybrid这2个软件对差异表达的miRNAs进行靶基因预测及靶基因进行GO和KEGG Pathway分析,发现靶基因主要富集在Notch信号通路、胰岛素信号通路、甘油磷酯代谢、MAPK信号通路、半乳糖代谢、类固醇激素的生物合成等通路。结果表明:BMP2作为前体脂肪细胞分化重要调控因子,可能通过介导miRNA及其调控的某些关键基因的表达,从而影响前体脂肪细胞外基质与受体的结合、胰岛素利用、脂类和糖的合成与代谢等生物学过程,最终作用于前体脂肪细胞的分化和脂质沉积。
2017年01期 v.37;No.241 123-128+189页 [查看摘要][在线阅读][下载 475K] [下载次数：164 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]
- 崔一喆;王秋菊;苏景;张宇辰;李悦;周亚强;张爱忠;
选用离乳约10d、胎次相近、体质量相近、遗传组成基本相似、健康状况良好的梅花鹿12头,分为2组,每组6头。Ⅰ组为对照组,采食基础饲粮;Ⅱ组为试验组,基础饲粮中添加0.2%的复合益生菌制剂。每组自由采食,自由饮水,试验期60d。结果显示:试验后期,试验组梅花鹿平均日增质量显著高于对照组(P<0.05);试验组粪便大肠杆菌和乳酸杆菌数分别显著下降和增加(P<0.05);试验中期和结束,试验组血清中免疫球蛋白较对照组有增加趋势。结果表明:复合益生菌制剂有促进离乳梅花鹿生长、优化肠道微生物区系及提高幼鹿免疫功能的作用。
2017年01期 v.37;No.241 129-133+143页 [查看摘要][在线阅读][下载 478K] [下载次数：275 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：23 ] |[阅读次数：0 ] - 刘增援;吴永继;孙燕杰;宋剑武;黄凯;司红彬;
为了探讨透骨草含药血清与抗菌药联合对产ESBLs大肠杆菌的抑菌作用,采用棋盘法测定透骨草含药血清与抗菌药联合的FIC指数。透骨草含药血清与头孢曲松钠、头孢他啶、头孢噻肟钠、头孢噻呋钠、阿莫西林、阿米卡星、黏杆菌素、磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、环丙沙星、诺氟沙星、左旋氧氟沙星、乙酰甲喹、克林沙星、加替沙星、林可霉素、强力霉素、氟苯尼考、阿奇霉素、磷霉素联合作用后的FIC分别为:0.75、1.00、0.28、0.75、>2.00、0.75、>2.00、>2.00、0.26、0.26、0.26、0.50、0.50、1.00、0.50、>3.00、0.26、0.38、1.25。结果显示:透骨草含药血清与环丙沙星、诺氟沙星、左旋氧氟沙星、乙酰甲喹、克林沙星、林可霉素、氟苯尼考、阿奇霉素、头孢噻肟钠体外联合作用为协同作用;与头孢曲松钠、加替沙星、阿米卡星、头孢他啶、头孢噻呋钠体外联合作用为相加作用;与阿莫西林、强力霉素、黏杆菌素、磺胺间甲氧嘧啶体外联合作用为拮抗作用;与磷霉素体外联合作用为无关作用。
2017年01期 v.37;No.241 134-138页 [查看摘要][在线阅读][下载 185K] [下载次数：203 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 赵志波;彭志成;张玉明;崔媛旭;张强;张昆坡;李心慰;李小兵;刘国文;王哲;
通过模拟向高BHBA的中性粒细胞培养液中添加不同质量浓度的脂联素(ADPN),运用荧光定量PCR技术,分别检测中性粒细胞自噬相关基因mRNA的表达水平。结果显示:添加高BHBA(4.8mol/L)的中性粒细胞培养6h后,与对照组相比,自噬相关基因LC3B、Beclin、ULK1的mRNA表达水平显著升高(P<0.01),SQSTM1(p62)、mTOR的mRNA表达水平显著下降(P<0.01);添加不同质量浓度的ADPN(25,50,100μg/L)后,相对于高BHBA组,中性粒细胞自噬相关基因LC3B、Beclin、ULK1的mRNA表达水平显著下调,且在ADPN 50μg/L时,具有极显著差异性(P<0.01);此外SQSTM1、mTOR的mRNA表达水平显著升高。结果表明:BHBA可增加中性粒细胞自噬相关基因的表达,ADPN可抑制高BHBA引起的中性粒细胞细胞程序性死亡,进一步说明ADPN对调控酮病奶牛中性粒细胞免疫抑制具有重要的价值意义。
2017年01期 v.37;No.241 139-143页 [查看摘要][在线阅读][下载 301K] [下载次数：199 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 陈俊全;王剑;唐兆新;
选用浓度为30,60,120,180,240μmol/L的氯化铜(CuCl_2)作用于原代大鼠脑微血管内皮细胞(BMEC)12h,测定细胞活力、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性的变化。结果显示:与对照组相比,细胞活力明显降低,30μmol/L浓度组SOD的活性变化不明显,60μmol/L和120μmol/L浓度组SOD的活性升高,而180μmol/L和240μmol/L浓度组SOD的活性降低,CAT的活性均明显降低,iNOS的活性均明显升高。结果表明:铜过量可致BMEC损伤,而氧化应激是其中一个重要因素。
2017年01期 v.37;No.241 144-147+189页 [查看摘要][在线阅读][下载 287K] [下载次数：151 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 王帅;贾琦珍;矫继峰;陈根元;
将24只家兔随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,试验组饲粮分别按照Ⅰ组15%(苦马豆素含量30mg/kg)、Ⅱ组30%(苦马豆素含量60mg/kg)、Ⅲ组45%(苦马豆素含量90mg/kg)的比例添加小花棘豆,对照组仅饲喂青干草,试验期70d;分别于攻毒后第14,35,70天每次每组随机采集2只家兔的睾丸,通过TUNEL法检测细胞凋亡,real-time PCR检测Bcl-2、Bax mRNA的表达,免疫组化检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果显示:从第35天开始,试验Ⅱ组和Ⅲ组家兔睾丸细胞凋亡指数、Bcl-2和Bax mRNA的表达均与对照差异极显著(P<0.01),试验Ⅰ组家兔睾丸细胞凋亡指数、Bcl-2和Bax mRNA的表达均与对照差异显著(P<0.05);试验组家兔睾丸组织Bcl-2蛋白表达均明显低于对照,Bax蛋白表达均明显高于对照,其差异性随中毒时间的延长而变化。结果表明:小花棘豆中毒可导致家兔睾丸组织生精细胞凋亡,且与小花棘豆中毒呈现一定的时间-剂量效应,这种作用可能与Bcl-2和Bax基因表达有关。
2017年01期 v.37;No.241 148-153页 [查看摘要][在线阅读][下载 447K] [下载次数：122 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 陈洪艳;徐明强;王嘉玮;刘畅;付瑶;高妍;姜昊;戴立胜;张嘉保;
使用NIH3T3细胞进行试验,利用RNAi方法抑制TDRKH的mRNA的表达水平。通过流式细胞术、RTqPCR等方法分别检测细胞凋亡情况及凋亡相关基因Bcl-2、Bax等的表达变化。结果显示:敲减TDRKH表达并不会明显导致NIH3T3细胞的凋亡,凋亡相关基因Bax、P53mRNA表达量无显著性变化,但Bcl-2、Survivin mRNA表达量显著下降,Bcl-2/Bax值显著降低。结果表明:TDRKH虽然不能直接诱导细胞凋亡,但可通过其他潜在基因调控通路影响细胞功能。
2017年01期 v.37;No.241 154-158页 [查看摘要][在线阅读][下载 387K] [下载次数：111 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 汪飞;习欠云;蒋勇;赵帅;董涛;朱晓彤;束刚;江青艳;张永亮;
采用pcDNA3.0-GHRH(1-32)质粒,对妊娠后期母猪单次肌注后电穿孔法处理,观察母猪及后代仔猪生产性能。用碱变性法提取pcDNA3.0-GHRH质粒并定量。选取胎次一致的妊娠85d的母猪30头,分别注射0.9%NaCl 0,2.0,4.0mg,然后用电穿孔仪电击处理,统计母猪及仔猪的生产性能。结果显示:与对照组相比,2.0,4.0mg试验组断奶个体质量分别显著增加0.65kg(P<0.05)和0.75kg(P<0.01),初生窝质量分别显著增加1.92kg(P<0.05)和3.01kg(P<0.01),断奶窝质量分别显著增加9.33kg(P<0.05)和13.66kg(P<0.01)等,4.0mg组作用更明显;2个剂量组仔猪167日龄平均体质量分别增加5.3%(P>0.05)和7.5%(P<0.05),32-167日龄平均日增质量分别为30g(P>0.05)和46g(P<0.05),平均日采食量分别提高约70g(P>0.05)和100g(P>0.05),平均料肉比降低0.02(P>0.05)和0.05(P>0.05);2个剂量组仔猪断奶前淘汰率分别降低9.48%和10.02%,断奶后淘汰率分别降低29.18%和41.64%,达到100kg天数分别提前7d(P>0.05)和9d(P<0.05);母猪血清GHRH浓度分别提高29.76%(P<0.05)和41.89%(P<0.01),血清中激素(IGF-I、T3、T4、IL-2、IL-6)和IgG浓度均呈上升趋势等。结果表明:GHRH(1-32)表达质粒注射妊娠后期母猪可以明显的提高母猪及仔猪生产性能。
2017年01期 v.37;No.241 159-167+195页 [查看摘要][在线阅读][下载 1185K] [下载次数：152 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 李秀鹏;李兴爽;史文姝;盛宇;金一;
来自3头公猪的混合精液(n=5)用于本次试验。试验用β-环糊精胆固醇包合物(CLC)作为冷冻保护剂,分对照组和0.75,1.5,3.0g/L CLC等3个试验组,检测冷休克及冻融精子的活力及线粒体膜电位。结果显示:用CASA分析,添加1.5g/L CLC的试验组精子活力显著好于其他试验组(P<0.05);利用JC-1对精子进行荧光染色分析,在4,17,-196℃下添加1.5g/L CLC的试验组精子线粒体膜电位显著高于对照组(P<0.05)。结果表明:在稀释液中添加CLC能提高冻融后精子的活力和减少线粒体的损伤。
2017年01期 v.37;No.241 168-171页 [查看摘要][在线阅读][下载 205K] [下载次数：169 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 彭巍;张君;徐尚荣;雷萌桐;
选用体质量(1 030±90)kg的健康大通牦牛种公牛24头,采用单因子试验设计,随机区组法分为4组,分别为对照组(基础日粮)、Ⅰ组(基础日粮+200mg/kg维生素C),Ⅱ组(基础日粮+400mg/kg维生素C)、Ⅲ组(基础日粮+600mg/kg维生素C),试验周期120d。结果显示:饲粮中维生素C的添加显著提高牦牛精清中维生素C的含量,与对照组相比显著升高(P<0.01);与对照组相比,日粮中维生素C的添加,显著提高了牦牛射精总量、精子密度、鲜精和冻精活力以及精子顶体完整率,降低精子的畸形率;但600mg/kg组牦牛精液品质与400mg/kg组相比有不同程度的降低。与对照组相比,饲粮中不同水平维生素C的添加显著提高牦牛精清中总抗氧化能力(TAOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性(P<0.01),降低精液中活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量(P<0.01)。结果表明:大通牦牛种公牛日粮中合理的维生素C添加剂量为400mg/kg。
2017年01期 v.37;No.241 172-176页 [查看摘要][在线阅读][下载 127K] [下载次数：201 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：1 ] - 张立永;张富梅;
选择体质量基本一致、性欲旺盛的健康公兔25只,设常温对照组、热应激对照组(饲喂配合日粮)和热应激试验1~3组(分别在配合日粮中添加地衣芽孢杆菌500,1 000,1 500mg/kg),热应激温度控制在33~35℃。测定采食量和体质量;采用动物精子测定仪检测精液品质;放射免疫法测定血浆FSH、LH、TSH、T、T_3、T_4含量。结果显示:日粮中添加1 000mg地衣芽孢杆菌采食量除第10,15天显著高于热应激对照组外,其他日期差异不显著;体质量略高于热应激对照组,较常温对照组低;对采精量无明显影响,10d后精子密度和精子活力极显著低于常温对照组,极显著高于热应激对照组,精子畸形率明显降低;对血浆FSH影响不明显,能提高热应激公兔前20d血浆LH和TSH浓度,提高血浆睾酮(T)和T_3、T_4含量。结果表明:在公兔日粮中添加1 000mg/kg地衣芽孢杆菌能够短期缓解热应激,提高精液品质,有升高血浆LH、TSH、T、T_3、T_4浓度的作用,并对地衣芽孢杆菌的添加量有剂量依赖性。
2017年01期 v.37;No.241 177-182页 [查看摘要][在线阅读][下载 225K] [下载次数：191 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 祁明普;汪乾坤;陈颖钰;郭爱珍;
<正>非人灵长类动物是一类以猕猴为主的灵长类动物,包括猕猴、恒河猴、长尾黑颚猴、普通绒猴、绵头绢猴、大猩猩等,其在遗传物质、组织结构、生理代谢和生活习性等方面与人类高度相似,是医学领域中最具研究和应用价值的实验动物。但其在研究过程中常由于感染病毒而导致腹泻,进一步发展为消瘦、营养不良,甚至死亡,不仅造成较大的经济损失,还阻碍了试验的顺利进展,同时,一些致泻性病原为人兽共患性病原,对人类具有潜在的危害,具有公共卫
2017年01期 v.37;No.241 183-189页 [查看摘要][在线阅读][下载 160K] [下载次数：235 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ]