预防兽医学

  • 猪线粒体抗病毒信号蛋白MAVS对口蹄疫病毒感染宿主的影响

    崔晓蕊;李守湖;秦晓东;常兴妮;孙鹏;孙继国;李志勇;

    采用构建猪源MAVS重组质粒pEGFP-MAVS,将其转染PK-15细胞24h后,再感染口蹄疫病毒(MOI=0.1),通过Western blot和real-time PCR检测MAVS融合蛋白表达及对口蹄疫病毒感染宿主细胞的复制和病毒感染滴度。结果显示:重组质粒pEGFP-MAVS能在PK-15细胞中获得表达,并且上调MAVS基因对口蹄疫病毒在宿主细胞中的早期复制有显著抑制作用,病毒的感染滴度也有一定的降低。结果表明:MAVS具有一定的抗病毒作用,此为进一步研究口蹄疫病毒逃逸宿主天然免疫的机制奠定了基础。

    2017年03期 v.37;No.243 393-397页 [查看摘要][在线阅读][下载 794K]
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  • 母源抗体对感染PCV2仔猪体内病毒变化和免疫反应的影响

    江戈龙;高文超;刘德武;蔡更元;吴珍芳;李紫聪;

    将16头断奶仔猪随机分成两大组即直接感染组和间接感染组,再将每大组用ELISA测抗体水平并排序分成两小组,即高抗体水平的4头为高起始抗体组,低抗体4头为低起始抗体组。直接感染组注射PCV2攻毒后再注射钥匙孔血蓝蛋白(KLH)刺激,间接感染组不注射与直接感染组混养。Q-PCR检测血清中病毒拷贝数,血常规检测全血中淋巴细胞数,定时称量体质量,屠宰后采样制作HE染色病理切片。结果,HE染色病理切片和临床分析显示感染猪只表现断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)症状;直接感染组和间接感染组攻毒后抗体水平持续降低,且分别在攻毒后20、30d降到相对最低值。直接感染组在攻毒后4d检测到抗原,攻毒后7d低起始抗体组病毒拷贝数显著高于高起始抗体组,间接感染组分别在攻毒后4、7d检测出抗原,攻毒后24、29d低起始抗体组抗原显著高于高起始抗体组;两组中外周血淋巴细胞数量在攻毒后减少,攻毒期间两大组中低起始抗体组和高起始抗体组体质量无差异。结果表明,PCV2+KLH能够复制出PMWS症状;PCV2母源抗体的半衰期为15d左右;低起始抗体组更容易感染病毒;攻毒后起始母源抗体的高低对断奶仔猪增重差异不明显。

    2017年03期 v.37;No.243 398-403页 [查看摘要][在线阅读][下载 1332K]
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  • PRV变异株的分离及抗原差异性分析

    周春陵;谭鑫;许拓;刘洋;库旭钢;何启盖;

    2011年以来,我国多个省份免疫过伪狂犬病疫苗的规模化猪场发生新生仔猪出现神经症状和死亡的现象,并已确定为猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)变异株感染所引起。为探究现PRV流行株特性,2014年下半年以来,我们从免疫过伪狂犬疫苗却暴发伪狂犬病的猪场分离到3株伪狂犬病病毒(分别为XP,QJ,LY株),并对其gE、gB、gC全基因进行测序和序列分析,序列比对结果显示,3株PRV分离株与2012年后分离毒株有较高的同源性;进化树分析显示,3株PRV分离株的gE基因与2012年后分离毒株处在同一进化树分支上,而gB、gC则分别形成了独立的小分支,但仍处在同一较大分支上。我们对当地广泛使用的疫苗株HB-98和Bartha-K61活疫苗免疫血清与Ea,HNX株以及3株PRV分离株进行中和试验,结果显示,HB-98和Bartha-K61活疫苗免疫血清对早期分离株Ea株的中和能力高于HNX、XP、QJ、LY株,但在NX、XP、QJ、LY株之间无明显差异,表明3株PRV分离株的抗原性与2012年后分离毒株无明显差异,而与传统毒株Ea株的抗原性存在一定差异。

    2017年03期 v.37;No.243 404-409页 [查看摘要][在线阅读][下载 1209K]
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  • 利用荧光定量RT-PCR法与间接免疫荧光法比较测定猪瘟兔化弱毒病毒含量

    王遵宝;李俊辉;张先锋;豆志华;郑侃;贺笋;

    利用荧光定量RT-PCR技术与间接免疫荧光技术(IFA)对12份猪瘟兔化弱毒(ST细胞毒)病毒含量与毒价进行了测定,并与兔体反应热法测定结果进行了比较分析。结果显示:12份猪瘟兔化弱毒(ST细胞毒)可根据兔体感染量分为4组,各组间荧光定量RT-PCR法与IFA法测得的病毒含量间差异极显著(P<0.01);3种方法的检测结果间呈显著正相关性(γ>0.9)。研究结果提示:可用荧光定量RT-PCR技术结合IFA替代传统的兔体反应热法,高通量、快速、准确地测定猪瘟兔化弱毒病毒含量,其有助于简化疫苗检验工作并提高准确度。

    2017年03期 v.37;No.243 410-414页 [查看摘要][在线阅读][下载 837K]
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  • 猪血凝性脑脊髓炎病毒感染降低ZO-1表达致小鼠血脑屏障通透性升高

    石俊超;张竞;徐梦实;潘伟;兰云刚;赵魁;高丰;贺文琦;

    为明确猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)感染后对机体血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性的影响,本试验以PHEV易感的BALB/c小鼠为实验动物模型,将PHEV接种小鼠后静脉注射伊文氏蓝(Evans blue,EB),运用形态学和化学定量方法检测EB通过BBB进入脑组织的状况。结果显示,接种病毒后3d的小鼠脑组织即出现肉眼可见的蓝色,定量检测结果证实其含量随着感染时间的延长而增加。同时利用荧光定量PCR和Western blot方法分别对病毒感染后不同时间点紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5进行核酸定量检测,证明感染组小鼠脑组织中ZO-1的基因转录水平随感染时间延长下调明显,而Occludin和Claudin-5的变化不明显。进而对脑组织中ZO-1蛋白表达水平进行检测,证实ZO-1的蛋白表达水平也发生下调,表明内皮细胞紧密连接完整性在病毒感染后期遭到了破坏。上述试验结果证实PHEV感染机体后可使BBB的通透性升高,而且这一变化与ZO-1的降低相关,为后期深入开展PHEV所致神经系统炎性损伤的机制奠定基础。

    2017年03期 v.37;No.243 415-419+432页 [查看摘要][在线阅读][下载 571K]
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  • 绵羊肺腺瘤病毒缺失型SU蛋白真核表达载体的构建

    张月梅;马学恩;么宏强;赵世华;

    试验证明绵羊透明质酸酶2(hyaluronidase 2,Hyal-2)可以作为绵羊肺腺瘤病毒的受体与绵羊表面蛋白(surface protein,SU)亚基结合。为了进一步研究绵羊Hyal-2与SU蛋白可能结合的区域,运用生物信息学软件预测了SU蛋白的膜外区部分,然后分别构建了一系列缺失型真核表达载体,将缺失型SU蛋白真核表达载体pEGFP-C1-(su1~su5)转染293T细胞,激光共聚焦显微镜观察结果显示:SU1-SU5融合蛋白定位于细胞质,Western blot结果显示在66 000处出现阳性条带,表明成功构建了SU蛋白缺失型真核表达载体。

    2017年03期 v.37;No.243 420-425页 [查看摘要][在线阅读][下载 2000K]
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  • 鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

    苗立中;祖立闯;王艳;马秀丽;亓丽红;宋敏训;沈志强;韩文瑜;

    参照IBV S1基因序列,RT-PCR扩增长约867bp的S1基因主要抗原区域,将目的片段定向克隆到pET30α原核表达载体,转化Rossetta表达菌,经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组S1蛋白。重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明具有良好的免疫活性。以该蛋白作为包被抗原,经间接ELISA反应条件的优化,建立了检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)抗体的间接ELISA检测方法。该方法与其他6种常见禽病病毒(H5亚型禽流感病毒(H5-AIV)、H9亚型禽流感病毒(H9-AIV)、新城疫病毒(NDV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、鸡法氏囊病毒(IBDV))阳性血清不发生交叉反应;批内和批间重复性试验的变异系数分别小于5%和10%;相对于HI试验的符合率、敏感性、特异性分别为91.58%、91.24%和92.31%;相对于IDEXX ELISA的符合率、敏感性、特异性分别为94.55%、95.42%和92.96%;应用该方法检测山东及周边地区2 685份免疫鸡和168份未免疫鸡血清样品,免疫合格率和阳性感染率分别为85.25%和17.26%。本试验截短表达的S1蛋白具有良好的免疫活性,建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的敏感性、特异性、重复性和临床适用性,将为IBV的免疫抗体监测、临床野毒感染快速诊断和流行病学调查提供了一种新的血清学诊断技术,具有良好的推广应用前景。

    2017年03期 v.37;No.243 426-432页 [查看摘要][在线阅读][下载 618K]
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  • 禽呼肠孤病毒感染后SPF鸡关节中Toll样受体的mRNA转录水平变化

    黄莉;谢芝勋;蓝元喜;谢丽基;邓显文;范晴;罗思思;谢志勤;黄娇玲;张艳芳;王盛;曾婷婷;

    禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)感染主要引起鸡的病毒性关节炎和免疫抑制等,造成养禽业巨大经济损失。近年来Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)在病原体感染中的作用受到广泛关注。在本试验中,将ARV S1133毒株经足垫注射,接种7日龄SPF鸡,感染后1、3、5、7、14、21、28和35d采集鸡关节样品,利用荧光定量PCR方法检测TLR3、TLR5、TLR7、TLR15和TLR21在关节组织中的mRNA表达水平变化,探讨ARV感染对鸡关节中上述TLRs mRNA表达量的影响。结果表明,ARV可引起,尤其感染早期鸡只出现足垫肿胀的症状,并且关节中这些TLRs在感染后3d显著上调并达到峰值(P<0.05或P<0.01),随后表达量开始下调,在感染后14d表达量显著下调到最低值(P<0.05或P<0.01),然后直至试验结束,恢复至与对照组基本持平。以上结果提示TLR3、TLR5、TLR7、TLR15和TLR21可能参与了ARV感染对鸡关节的炎症过程,本试验结果为进一步阐明禽呼肠孤病毒的致病机理提供了依据。

    2017年03期 v.37;No.243 433-437页 [查看摘要][在线阅读][下载 396K]
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  • 牛源大肠杆菌耐药表型与Ⅰ型整合子-基因盒的关系

    李晓娜;杨慧君;余婷;王桂琴;

    为了了解宁夏地区牛源大肠杆菌中Ⅰ型整合子-基因盒携带情况及其对细菌耐药性的影响。在获得245株大肠杆菌对16种抗菌药耐药情况的基础上,采用PCR技术对菌株的Ⅰ型整合子-基因盒进行扩增,PCR产物进行测序分析。结果显示Ⅰ型整合子检出率为14.29%;35株Ⅰ型整合子阳性菌株中32株菌扩增出7种类型的基因盒插入区片段,以介导甲氧苄啶和氨基糖苷类耐药的dfrA和aadA为主,基因盒排列dfrA17-aadA5和dfrA7较为流行,并且dfrA7为国内首次从牛源性大肠杆菌中发现。分析表明宁夏地区牛源大肠杆菌中Ⅰ型整合子目前还不是很流行,菌株的多重耐药表型与Ⅰ型整合子高度正相关。

    2017年03期 v.37;No.243 438-442页 [查看摘要][在线阅读][下载 385K]
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  • 检测鼻气管鸟疫杆菌SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立

    提金凤;李志杰;李秀丽;王丽荣;张敏敏;刁有祥;

    利用DNAStar对GenBank上发布的鼻气管鸟杆菌(ORT)16S rRNA基因进行序列分析,根据分析结果选择其保守区域设计1对特异性的引物。扩增16SRNA部分保守基因序列并将其克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒,经鉴定、纯化后作为阳性标准品,用于SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR标准曲线的建立。反应条件反复优化后,成功建立了检测ORT的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。该方法对ORT的最低检测量约为100拷贝数/μL,比普通PCR高100倍;与引起禽类呼吸系统疾病的其他病原体之间无交叉反应;批内和批间试验的变异系数均小于0.63%,充分显示该方法具有良好的重复性和稳定性。对46份临床样本进行ORT检测,该方法检测的阳性样本为38份,检出率为82.26%。在38份阳性样品中,普通PCR只检出30份阳性样品,常规细菌培养只检出23份阳性样品。结果表明:本试验建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法比其他方法更敏感,为临床上快速准确的检测、诊断禽类ORT的感染提供了敏感可靠的检测方法。

    2017年03期 v.37;No.243 443-448页 [查看摘要][在线阅读][下载 623K]
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  • 2株温和气单胞菌SNP位点比较分析

    焦雪;张培军;冷东泽;王建超;巴翠玉;李月红;

    通过Illumina HiSeq 2500测序仪对2株温和气单胞菌A1、B2进行全基因组重测序,并与参考基因组(Aeromonas veronii B565,complete genome)序列进行比较,A1、B2与参考基因组之间共获得约100 018个SNP位点,与参考基因组平均比对率为74.46%。根据编码区SNPs分布与参考基因组间进行检测;通过COG和GO的功能注释,寻找A1、B2Diff基因的SNPs位点对2株温和气单胞菌进行注释分析,了解温和气单胞菌致病机制与基因组成,为今后温和气单胞菌的研究提供科学数据。

    2017年03期 v.37;No.243 449-455页 [查看摘要][在线阅读][下载 1554K]
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  • 重组质粒pcDNA3-IL-2对鸡球虫疫苗的免疫增效作用

    李蕴玉;张香斋;贾青辉;耿田田;张召兴;丁咚;李佩国;张艳英;

    为了确定重组质粒pcDNA3-IL-2对鸡球虫疫苗的免疫增效作用,将60只14日龄雏鸡随机分成5组,分别为对照组、球虫活疫苗免疫组、球虫活疫苗免疫加50、100、150μg/只重组质粒组。分组当天进行鸡球虫病四价活疫苗免疫,1,7d分别肌肉注射重组质粒pcDNA3-IL-2。至21d时,除第1组(对照组)外,每只鸡经口灌服E.tenella卵囊8×104个。对免疫后鸡的生长性能,外周血淋巴细胞转化率,血清IFN-γ、IL-2、IgG含量以及攻虫后的抗球虫指数进行测定。结果表明,pcDNA3-IL-2重组质粒对鸡球虫疫苗免疫增效的适宜剂量为100μg/只,与第2组比较,14、21、28d的外周血淋巴细胞转化率显著提高了26.54%、27.15%和24.19%(P<0.05);血清IFN-γ含量显著提高了8.87%、14.56%和15.18%(P<0.05);血清IL-2和IgG含量分别提高了3.40%、4.09%、3.95%和12.75%、9.73%、9.87%,胸腺、法氏囊与脾脏指数分别提高了4.91%、9.27%和2.46%(P>0.05),ACI指数达180.71,提高了9.24%。

    2017年03期 v.37;No.243 456-460页 [查看摘要][在线阅读][下载 135K]
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  • 兔斯氏艾美耳球虫感染模型的建立及病理学初步研究

    景瑾;宋鸿雁;蒋荧梅;邵义祥;

    建立兔斯氏艾美耳球虫感染模型,为研究斯氏艾美耳球虫感染兔的有效防治方法提供适合的动物模型。2月龄普通级新西兰兔16只,分组单笼饲养。从自然感染的肝脏中收集斯氏艾美耳球虫卵囊,培养孢子化,孢子化的卵囊1.0×105个/mL,3mL孢子化卵囊口服感染新西兰兔,建立兔斯氏艾美耳球虫感染模型,并对感染1个月后的新西兰兔的肝脏、十二指肠进行病理学观察比较。结果显示:斯氏艾美耳球虫对新西兰兔部分致病性观察发现,新西兰兔在感染后出现明显的临床症状,严重制约了其生长发育。形态学观察发现肝脏感染严重,表面布满白色结节,胆囊中胆汁浓稠,颜色呈金黄色,而十二指肠虽未感染球虫,却也有较显著的病变。病理学观察发现肝脏中存在大量斯氏艾美耳球虫,十二指肠中不存在球虫,但组织结构亦被破坏,十二指肠绒毛遭到严重破坏。结果表明:本试验成功建立了兔斯氏艾美耳球虫感染模型。

    2017年03期 v.37;No.243 461-465页 [查看摘要][在线阅读][下载 1837K]
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人兽共患病

  • 吉林省1起炭疽突发事件的病原菌分离和鉴定

    祝令伟;刘军;周伟;纪雪;孙洋;王楠;王晓峰;周博;郭学军;冯书章;

    从采集的羊肉和土壤样品中分离、鉴定炭疽芽孢杆菌,样品制备悬液,热处理杀死非芽孢的细菌,然后涂布PLET琼脂平板进行选择性增菌培养。疑似菌落首先使用炭疽特异性的引物进行PCR鉴定,然后进行噬菌体裂解和青霉素抑制试验的鉴定;鉴定非炭疽的菌落进行16SrDNA的测序分析。从可疑羊肉样品中成功分离、鉴定出炭疽芽孢杆菌,确定了本次突发事件的传染源。从屠宰地点采集的土壤样品中未检出炭疽芽孢杆菌,土壤中分离的疑似炭疽样菌落经16SrDNA测序和比对鉴定为蜡样芽孢杆菌等其他需氧芽孢杆菌属的细菌。

    2017年03期 v.37;No.243 466-470页 [查看摘要][在线阅读][下载 584K]
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  • 猪流行性乙型脑炎病毒纳米PCR检测方法的建立

    柴瑞影;华荣虹;袁万哲;孙继国;

    根据猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)E基因的保守区域设计1对扩增270bp片段的特异性检测引物,将纳米金颗粒添加到PCR反应体系中,同时优化反应条件,建立了高效、灵敏的纳米PCR检测方法。采用该方法灵敏度可达3.26×10~2拷贝/μL,普通PCR方法仅为3.26×10~4拷贝/μL,且与其他病毒没有交叉感染。试验结果表明,该纳米PCR检测方法不仅特异性好,而且其敏感性是普通PCR检测方法的100倍。采用纳米PCR方法和普通PCR方法对临床送检的32份样品进行检测,检测结果纳米PCR检出2份阳性样品,普通PCR检测均为阴性。

    2017年03期 v.37;No.243 471-474页 [查看摘要][在线阅读][下载 360K]
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  • 猪源科氏葡萄球菌的分离与鉴定

    董文龙;王琦;王巍;耿昕颖;王羽;孙健;马红霞;高云航;

    从病死猪肺脏内分离到的1株优势菌并命名为SCI-1。根据细菌的形态特征、生化特性、并结合分离菌株的16SrDNA基因核苷酸序列测定以及系统进化树分析,确定分离菌株为科氏葡萄球菌。动物致病性试验表明,该分离株对小鼠具有较强致病性。药敏结果显示,该菌对庆大霉素、阿米卡星及磺胺间甲氧嘧啶敏感;对阿奇霉素、氯霉素、红霉素、氟苯尼考、阿莫西林及强力霉素耐药。

    2017年03期 v.37;No.243 475-478页 [查看摘要][在线阅读][下载 1152K]
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  • 肉鸡屠宰加工生产链中沙门菌耐药基因检测与耐药性分析

    孙璐;王娟;黄秀梅;王君玮;杨瑞梅;郑增忍;

    利用聚合酶链式反应(PCR)扩增整合酶基因intⅠ检测沙门菌中Ⅰ类整合子携带率及可变区耐药基因盒并从β-内酰胺类、磺胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类和酰胺醇类等5类抗生素的15种耐药基因进行检测,微量肉汤稀释法(MIC法)测定菌株对8类13种抗菌药的敏感程度。结果显示:肉鸡屠宰加工生产链中分离的沙门菌共检测12种耐药基因,未检测到β-内酰胺类的blaoxA-1group、blapse-1、四环素类的tetB和tet X基因。其中,以耐药基因catⅠ的检出率最高,87%(59/68);其次是tet G,检测率是85%(58/68);blatem耐药基因69%(47/68)。69%(47/68)的沙门菌检测出第Ⅰ类整合子。PCR扩增Ⅰ类整合子耐药基因盒,检测率为73%(35/47),扩增产物大小为1 009,1 664bp,携带aadA5、dfrl7和aadA2耐药基因,可分别介导对氨基糖苷类抗生素壮观霉素、链霉素和磺胺类药物甲氧苄氨嘧啶的耐药。68株菌中对AM的耐药率最高,多重耐药(≥2)菌株高达85%。结果表明:肉鸡屠宰加工生产链中沙门菌检测到较高的耐药基因及整合子携带率,对常见抗生素具有不同程度的耐药性,且耐药基因在耐药药敏试验结果与耐药基因的检测结果具有一致性。

    2017年03期 v.37;No.243 479-484页 [查看摘要][在线阅读][下载 503K]
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  • 裂解酶LysGH15的CHAP片段与底物互作的关键位点

    胡丽媛;程梦珺;张玉凤;张蕾;蔡若鹏;孙长江;冯新;雷连成;顾敬敏;王烨;韩文瑜;

    金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysGH15对金葡菌表现出广谱高效的抗菌活性,本课题组已深入研究其三维结构,其中CHAP片段是LysGH15起催化作用的关键活性片段。本试验进一步通过分子模拟和对接的方法预测出CHAP与底物多肽DGlnNH2-LLys-DAla-5Gly结合的"口袋"结构,该结构由D33、S35、F36、Y50、R71、T72及N75这些氨基酸位点组成。由于脂肪族非极性氨基酸丙氨酸侧链最短且不带电荷,因此将这些位点均突变为丙氨酸,逐一研究它们对CHAP片段催化活性的影响:圆二色谱试验结果说明突变体二级结构并未发生变化;酶谱试验结果定性的说明F36突变为丙氨酸后突变体蛋白F36A的活性完全丧失,而其他位点的氨基酸突变后蛋白活性并未发生明显改变;细菌浊度测定和菌落计数试验进一步证明突变体F36A活性完全丧失,而其他突变体活性不变;鉴于F36位于"口袋"结构的"口"的部位,36位氨基酸很可能参与到CHAP与底物多肽的结合。本试验鉴定了LysGH15的CHAP与底物多肽互作过程中起关键作用的氨基酸位点。

    2017年03期 v.37;No.243 485-490页 [查看摘要][在线阅读][下载 1039K]
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基础兽医学

  • 口服黄芪多糖增强肠道黏膜免疫及其对口蹄疫疫苗免疫的影响

    李任军;马艳粉;卢一松;迟晓庆;胡松华;

    将40只小鼠随机分为2组,一组小鼠灌服黄芪多糖水溶液,另一组灌服生理盐水为对照组,给药后每周从各组随机取5只小鼠,分离脾淋巴细胞进行淋巴细胞增殖试验,并观察十二指肠黏膜上皮内淋巴细胞(IELs)以及上皮固有层的IgA+细胞数;将24只小鼠随机分为4组,各小鼠分2次,间隔2周注射口蹄疫(FMD)疫苗,其中1~3组的小鼠在疫苗免疫前灌服不同剂量的黄芪多糖,第4组小鼠灌服生理盐水作为对照。二免后1~5周,每周采血,检测血清IgG及其亚类。结果表明,小鼠口服黄芪多糖能显著促进小鼠淋巴细胞对刀豆蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)的刺激反应,并增加十二指肠IELs和固有层IgA+细胞数量;口服黄芪多糖后接种FMD疫苗,能够显著增强血清FMD特异性IgG及其亚类水平。

    2017年03期 v.37;No.243 491-496页 [查看摘要][在线阅读][下载 2460K]
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  • 大通牦牛心肌低氧适应的组织学特点

    张勤文;俞红贤;李莉;荆海霞;魏青;王志强;张晶晶;

    选取两个海拔高度大通牦牛作为研究对象,以乐都地区牦牛为对照,利用光镜技术和计算机图像分析系统测定心肌肌纤维直径、表面积密度;利用透射电镜技术比较心肌线粒体的平均体积(V)、体积密度(VV)和面数密度(NA)等结构参数;利用免疫组织化学技术对心肌细胞血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)进行检测,并对以上数据进行相关性分析。结果显示:(1)大通牦牛心肌肌纤维直径均细于乐都地区牦牛心肌肌纤维直径,肌纤维表面积密度均高于乐都地区牦牛,且三者两两比较差异显著(P<0.05);(2)大通牦牛的VEGF和MVD均高于乐都地区牦牛,差异显著(P<0.05);(3)大通牦牛心肌线粒体的V和VV均大于乐都地区牦牛,差异显著(P<0.05);海拔3 700m的大通牦牛心肌线粒体面数密度大于海拔3 200m的乐都地区牦牛,差异显著(P<0.05)。结果表明,大通牦牛心肌组织主要表现为心肌纤维直径细、表面积密度大、心肌组织血管内皮生长因子和微血管密度大的遗传学特点。而心肌线粒体的低氧适应表现为,随着海拔高度的增加,心肌线粒体平均体积增大,面数密度和体密度增加的特点。

    2017年03期 v.37;No.243 497-500+513页 [查看摘要][在线阅读][下载 1585K]
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  • 穴位埋线对运动性疲劳模型大鼠肝肾功能的影响

    朱浩;姜梦如;马晓宇;毕凯璇;丁菲;王雪飞;刘艳成;杨英;

    采用递增跑台训练的方法构建运动性疲劳大鼠模型,将大鼠随机分为埋线Ⅰ组、埋线Ⅱ组、空白组、跑台组、埋线跑台Ⅰ组、埋线跑台Ⅱ组,并对各组大鼠肝脏、肾脏进行采集及相关生化指标的测定。结果显示:对于运动性疲劳大鼠,穴位埋线可抑制肾脏指数升高(P<0.05),并能显著降低谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平(P<0.01),降低肌酐(CREA)、UREA水平及皮质醇(CORT)浓度(P<0.05)。结果表明:穴位埋线可在不同程度上保护疲劳大鼠肝肾功能免受损害,从而改善机体耐力,使失衡的功能关系趋向正常化和表达最大化。

    2017年03期 v.37;No.243 501-504页 [查看摘要][在线阅读][下载 122K]
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  • RNA结合蛋白QKI抑制ST细胞凋亡的研究

    刘鑫;郭佳;梁梦迪;赵尧璐;杨雨薇;孙博兴;

    QKI是信号转导与RNA激活家族(STAR)成员之一,是进化保守的调控蛋白。其KH结构域能与RNA上的quaking反应元件(QRE)结合,参与调控RNA的运输、翻译、剪切、稳定等过程,从而影响细胞增殖、分化、凋亡等。本试验探究QKI是否对猪睾丸成纤维细胞(ST细胞)凋亡存在影响。构建pEF1α-QKI过表达载体,采用qRTPCR、Western blot方法检测QKI及目的基因BCLAF1的mRNA和蛋白的表达量,用流式细胞术检测过表达QKI对ST细胞凋亡的影响。结果显示:转染pEF1α-QKI质粒在ST细胞中可显著提高QKI mRNA的表达量(P<0.01),并且与对照组相比能显著降低BCLAF1mRNA和蛋白的表达量(P<0.05);流式细胞术检测细胞凋亡率证明过表达QKI具有抑制ST细胞凋亡的作用(P<0.05)。结果表明:在ST细胞中过表达QKI能够抑制BCLAF1基因的表达,并且降低ST细胞凋亡率。

    2017年03期 v.37;No.243 505-508页 [查看摘要][在线阅读][下载 687K]
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临床兽医学

  • MCT1在犊牛消化道的分布以及SCFA对MCT1表达的影响

    王亚洲;孙国权;赵晨旭;魏园;崔媛旭;苑学;王哲;李心慰;刘国文;

    短链脂肪酸(SCFAs)是由纤维素性饮食在瘤胃内发酵产生的乙酸、丙酸、丁酸以及戊酸等组成的混合物。SCFA对维持反刍动物的能量平衡至关重要,目前对SCFA的吸收机制和影响因素至今尚不清楚,本试验主要研究一元羧酸转运蛋白(monocarboxylate/proton cotransporter isoform 1,MCT1)在犊牛消化道内的分布及SCFA对MCT1表达的影响。运用免疫印迹Western blot和实时荧光定量PCR检测MCT1在犊牛消化道内的分布和表达;在体外试验中,体外添加一定比例的SCFA(乙酸、丙酸和丁酸的混合物)处理犊牛原代瘤胃上皮细胞,检测SCFA对MCT1表达水平的影响。结果显示:MCT1在整个消化道内均有分布,并且在瘤胃内的表达水平显著高于其他部位(P<0.01);体外处理的瘤胃上皮细胞,正常组MCT1的表达水平显著高于(P<0.05)SARA组。结果表明:正常水平的SCFA能够促进MCT1的表达和转运能力,而过量的SCFA抑制MCT1的表达和转运能力。

    2017年03期 v.37;No.243 509-513页 [查看摘要][在线阅读][下载 440K]
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  • 氨基酸螯合锌对长白猪肉质性状、脂肪酸及矿物质元素含量的影响

    胡雄贵;陈晨;彭英林;罗璇;朱吉;任慧波;

    选用初始体质量(61.4±1.4)kg相近的长白阉公猪28头,随机分为4个处理组,每个处理组7个重复,每个重复1头猪,饲养期45d。对照组饲喂基础日粮,试验1、2、3组分别在日粮中添加40、80、120mg/kg的氨基酸螯合锌。结果表明:与对照组相比,3个试验组均可显著提高瘦肉率、胴体斜长、45min肉色(P<0.05);试验2、3组的24hpH值显著提高(P<0.05)。试验3组棕榈酸和硬脂酸含量均显著高于其他组(P<0.05);试验3组花生酸含量显著高于对照组和试验1组(P<0.05);各试验组花生-烯酸含量显著低于对照组(P<0.05);试验2、3组二十四碳-烯酸含量显著高于对照组和试验1组(P<0.05)。添加氨基酸螯合锌可提高钠钾泵运转能力(P<0.05);肌肉中Mg、Ca和Cu含量随着氨基酸螯合锌添加量的提高呈峰值规律,分别在添加量为40、80、40mg/kg时达到峰值(P<0.05);锌含量随氨基酸螯合锌添加量的提高而升高,各组之间无显著性差异。结果表明,日粮中添加氨基酸螯合锌可提高长白肥育猪的屠宰性能,改善肌肉饱和脂肪酸含量,且对不饱和脂肪酸组成具有一定的影响,提高机体钠钾转运机能,加强Mg、Ca和Cu在肌肉中的沉积效率。

    2017年03期 v.37;No.243 514-518页 [查看摘要][在线阅读][下载 127K]
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  • 健康奶牛阴道乳酸菌分离筛选及益生特性

    田丰松;王军;杨雨江;刘畅;李长久;吕文发;

    对产后健康奶牛阴道的乳酸菌进行分离筛选并对乳酸菌功能特性进行研究。采用传统方法对健康奶牛阴道内乳酸菌进行分离,通过抑菌试验对乳酸菌分离株进行筛选,并研究其产酸性能、抗生素敏感性,通过16SrDNA序列分析方法对分离株进行鉴定。最后获得4株乳酸菌分离株,经鉴定分别为唾液乳杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌和巴黎链球菌。4株菌株均可作为防治奶牛子宫内膜炎潜在的益生菌使用。

    2017年03期 v.37;No.243 519-522页 [查看摘要][在线阅读][下载 249K]
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  • EGCG抑制饮食性高脂血症大鼠Angptl3-LPL信号通路的研究

    蔡杰;王宇;伍勇;孙志良;李元义;陈小军;

    本研究旨在探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的降脂作用与Angptl3-LPL信号通路之间的关系。通过高脂饲料喂养建立高脂血症大鼠动物模型,将正常大鼠按体质量和体脂水平随机分为正常对照组、高脂模型组、EGCG高剂量组(EGCG-H,30 mg·kg~(-1)·d~(-1))、EGCG低剂量组(EGCG-L、15 mg·kg~(-1)·d~(-1))、T0901317组、EGCG-T0901317组(EGCG,30mg·kg~(-1)·d~(-1))。连续灌胃8周后,用生化法检测血清中TG、TC、LDL-C含量,qPCR法检测脂肪组织中脂蛋白脂肪酶(LPL)mRNA和肝组织中Angptl3 mRNA相对表达量,Western blot检测蛋白表达水平。给大鼠口服选择性的LXRs激动剂T0901317后测定肝脏Angptl3 mRNA和蛋白表达水平,评价EGCG对T0901317抑制剂的作用。结果表明,与高脂模型组相比,EGCG(30、15 mg·kg~(-1)·d~(-1))能有效降低大鼠的血脂水平,明显抑制肝脏Angptl3 mRNA和蛋白表达、上调脂肪组织LPL mRNA和蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01),且EGCG(30mg·kg~(-1)·d~(-1))可有效抑制由T0901317引起的Angptl3 mRNA和蛋白的表达。本研究从一个新的角度揭示了EGCG通过抑制Angptl3-LPL信号通路来防治与高脂相关性疾病的可能机制,所以以Angptl3-LPL信号通路为调节靶标,可能成为治疗血脂紊乱的一条新途径。

    2017年03期 v.37;No.243 523-529页 [查看摘要][在线阅读][下载 955K]
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  • 暴露纳米氧化锌对雄性小鼠糖、脂代谢及组织学的影响

    李慧民;孔涛;杨自军;张纪亮;张才;

    根据小鼠的体质量,以不同剂量经口连续染毒纳米氧化锌,90d后摘眼球取血,对血脂、血糖、肝脏抗氧化指标进行检测。结果显示:对照组、80mg/kg剂量组小鼠血糖显著高于160mg/kg剂量组(P<0.05)。对照组、80mg/kg剂量组小鼠血糖极显著高于40mg/kg剂量组(P<0.01);40,80 mg/kg剂量组小鼠血脂含量显著高于对照组(P<0.05),160mg/kg剂量组小鼠血脂含量极显著高于对照组(P<0.01);40,160 mg/kg剂量组小鼠血清总胆固醇含量显著高于对照组(P<0.05);40mg/kg剂量组小鼠血清低密度脂蛋白含量显著高于对照组、80mg/kg剂量组(P<0.05),各组间血清高密度脂蛋白含量无显著差异;80,160mg/kg剂量组小鼠肝脏过氧化氢酶活性显著高于对照组、40mg/kg剂量组(P<0.05),80mg/kg剂量组小鼠肝脏过氧化氢酶活性极显著高于40 mg/kg剂量组(P<0.01);40,80mg/kg剂量组小鼠肝脏Cu-Zn SOD活性显著高于对照组(P<0.05);160 mg/kg剂量组小鼠肝脏抑制羟自由基能力显著低于对照组、40mg/kg剂量组及80mg/kg剂量组(P<0.05);随染毒剂量增加,小鼠肝脏MDA含量增加,但各组间含量差异不显著;随染毒剂量增加,小鼠肝脏谷胱甘肽过氧化物酶活性提高;但各组间活性差异不显著。各组间肝脏H2O2含量、总SOD活性无显著性差异。病理学检查发现,大脑细胞存在噬神经现象,脾脏红髓与白髓的界限不清晰;肺泡壁增厚,局部炎性细胞浸润,曲精小管间的间隙增大,生精细胞排列紊乱、脱落。结果表明:经口连续染毒纳米氧化锌90d能影响雄性小鼠肝脏抗氧化系统,导致小鼠糖、脂代谢紊乱,引起高脂血症,纳米氧化锌对雄性小鼠具有神经毒性及生殖毒性。

    2017年03期 v.37;No.243 530-534+576页 [查看摘要][在线阅读][下载 697K]
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  • 钼镉联合诱导对鸭组织器官中微量元素含量的影响

    曹华斌;徐雄卫;张彩英;胡国良;张萌萌;夏冰;郭小权;刘平;

    旨在探讨钼镉联合诱导对鸭组织器官中微量元素含量的影响。选取120羽11日龄"江南2号"麻鸭随机分成对照组、低钼组、高钼组、镉组、低钼镉组和高钼镉组,每组20羽,以(NH_4)_6Mo_7O_(24)·4H_2O和3CdSO_4·8H_2O作为钼源和镉源,对照组饲喂基础日粮,其余各组分别在每千克基础日粮中添加Mo 15 mg、Mo 100 mg、Cd 4 mg、Mo15mg+Cd 4mg和Mo 100mg+Cd 4mg,试验期120d。于试验60、120d每组随机选10羽鸭剖杀,采集相应组织器官,用原子吸收分光光度法测定心脏、肺脏、大脑、气管、肌肉中Mo、Cd、Cu、Fe、Zn、Se含量。结果表明:钼镉及其联合诱导使各组织器官中Mo、Cd含量升高(P<0.01),Cu、Fe、Zn、Se含量降低(P<0.05或P<0.01),且钼镉联合组比单独组下降更明显,钼镉呈协同作用。

    2017年03期 v.37;No.243 535-540页 [查看摘要][在线阅读][下载 157K]
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动物科学

  • Ghrelin基因在藏母猪生殖轴中mRNA的表达

    任子利;高卓然;王建洲;李瑜鑫;赵彦玲;

    采用RT-PCR及荧光定量PCR方法,检测并分析藏猪与长白猪在卵泡期及黄体期下丘脑-垂体-卵巢轴中ghrelin基因mRNA的相对表达量。结果显示:在卵泡期,下丘脑、卵巢中ghrelin基因的mRNA表达量均藏猪显著高于长白猪(P<0.05),而垂体中藏猪虽高于长白猪,但两者之间差异不显著(P>0.05);在黄体期,垂体、卵巢中ghrelin基因的mRNA表达量藏猪分别显著高于长白猪(P<0.05),而下丘脑中藏猪虽高于长白猪,但两者之间差异不显著(P>0.05);无论在卵泡期还是黄体期,也无论是藏猪还是长白猪,自身相比,其ghrelin基因在下丘脑-垂体-卵巢轴的mRNA表达都有一致的变化规律,即卵巢显著高于下丘脑(P<0.05),下丘脑显著高于垂体(P<0.05)。结果表明:藏猪ghrelin基因在生殖轴中的mRNA表达量普遍高于长白猪,这将为从分子水平上分析藏猪产仔率低的原因及提高其产仔率的进一步研究奠定基础。

    2017年03期 v.37;No.243 541-545页 [查看摘要][在线阅读][下载 690K]
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  • 牛Novel长链非编码lncRNA_(TCONS-585)组织表达谱分析及对其邻近基因MCHR1表达量的影响

    肖航;房希碧;姜平;郭鹏程;高明;赵志辉;杨润军;

    长链非编码RNA为长度大于200nt的非编码RNA,具有组织表达特异性,且表达丰度较mRNA低。在前期肉牛肌肉和脂肪组织的lncRNA组学测序分析中筛查并获得一个长度为755nt的差异表达长链非编码RNA,将其命名为lncRNA_(TCONS-585)。经基因组序列比对,该novel lncRNA_(TCONS-585)序列位于牛第5号染色体MCHR1和PMP34两个基因之间,由两个外显子构成。对lncRNA_(TCONS-585)结构分析后通过RT-PCR验证了lncRNA_(TCONS-585)在靶向组织中的表达水平以及在不同组织中的表达谱。结果表明,lncRNA_(TCONS-585)在牛的不同组织中表达量具有较大差异,其在肌肉组织中表达水平最高,同时在白色脂肪和棕色脂肪组织当中也有表达,且表达量显著高于肝、肺和肾。同时,我们发现干扰lncRNA_(TCONS-585)可降低其邻近基因MCHR1的表达量。因此lncRNA_(TCONS-585)可能作为调控因子通过介导靶基因参与肉牛生长发育和能量代谢过程。

    2017年03期 v.37;No.243 546-550页 [查看摘要][在线阅读][下载 895K]
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  • ACTB基因第4外显子遗传变异分析及其与种公牛精液品质的关系

    岳续朋;贺洪涛;张志刚;戴立胜;赵锐锋;张嘉保;

    采用PCR-SSCP技术对45头种公牛的ACTB(β肌动蛋白)基因的第4外显子的单核甘酸多态性进行了检测。结果显示:在ACTB基因第4外显子上存在2种基因型,即AA型和AB型。对该多肽片段克隆测序,结果在ACTB基因第4外显子上存在G378C突变。用最小二乘法分析ACTB基因的第4外显子不同基因型与精液品质的相关性,发现ACTB基因第4外显子AA型精子浓度、鲜精畸形率以及冻精畸形率显著高于AB型(P<0.05),AA型鲜精活力、鲜精活精子比率极显著高于AB型(P<0.01),AA型冻精活精子比率显著低于AB型(P<0.05)。

    2017年03期 v.37;No.243 551-553页 [查看摘要][在线阅读][下载 396K]
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  • ε-聚赖氨酸在牛胚胎玻璃化冷冻中的保护作用

    钟原;高伟;姜昊;张明军;张嘉保;俞先峰;

    通过研究ε-聚赖氨酸(ε-PL)对牛胚胎玻璃化冷冻的影响,探讨ε-PL在牛胚胎玻璃化冷冻中的保护作用,为优化牛胚胎玻璃化冷冻技术提供依据。单独以ε-PL作为冷冻保护剂,其质量浓度为20、35、50g/L,分别进行胚胎冷冻,结果均不能取得成活胚胎,说明ε-PL不能单独作为冷冻保护剂使用。在传统玻璃化冷冻剂中分别添加质量浓度为10、20、30g/L的ε-PL进行胚胎冷冻,结果发现添加ε-PL之后的冷冻保护液具有更好的保护效果,且ε-PL质量浓度为20g/L时效果最好,囊胚解冻孵化率可达42.37%。进一步探索了用该冷冻保护剂,缓冲时间分别为5、7.5、10min进行胚胎冷冻的效果,结果发现缓冲时间为7.5 min取得最高孵化率,孵化率为46.58%。结果表明,ε-PL对牛胚胎玻璃化冷冻具有一定的保护作用,且适当延长缓冲时间可取得更好的冷冻效果。

    2017年03期 v.37;No.243 554-558页 [查看摘要][在线阅读][下载 1153K]
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  • 延后着床对小鼠妊娠的影响

    许美花;刘瑶;孙宏亮;王海滨;鲁文赓;付世新;

    哺乳动物的胚胎植入都存在着一个短暂的植入窗口期,这个窗口期阻碍了辅助生殖技术的应用。通过以小鼠为研究对象,利用胚胎移植技术研究了延后着床对妊娠的影响。结果显示,小鼠的胚胎在延后1d(即第5天)也能着床并能诱导蜕膜化的发生,而延后2d则不能移植。与正常组(第4天移植)相比,延后着床组的胚胎吸收率明显增加、窝产仔数明显减少及妊娠期延长。试验结果表明,小鼠胚胎超出子宫植入窗口期亦可着床,但会导致植入间隙和胎盘发育异常进而影响妊娠结果。

    2017年03期 v.37;No.243 559-563页 [查看摘要][在线阅读][下载 1289K]
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  • 日粮不同蛋白水平对塞北乌骨鸡肠道内环境、抗氧化能力和免疫功能的影响

    官丽辉;郭颖;刘海斌;吴占福;王志伟;苏体军;

    选取40日龄塞北乌骨鸡450只,分为5组,每组90只。每组设置3个重复,每个重复30只。各试验组日粮蛋白分别为低蛋白Ⅰ组(15.5%)、低蛋白Ⅱ组(16.0%)、中蛋白Ⅲ组(16.5%)、高蛋白Ⅳ组(17.0%)和高蛋白Ⅴ组(20.7%)。结果显示:中蛋白组的腺胃、肌胃和十二指肠重显著高于其他组(P<0.05),空肠重显著高于低蛋白组和高蛋白组(P<0.05),回肠重显著低于低蛋白组(P<0.05)。中蛋白组的大肠杆菌(回肠)的数量显著低于其他各组(P<0.05),高蛋白组显著高于低蛋白组(P<0.05),而乳酸杆菌的数量为中蛋白组最多,显著高于其他各组(P<0.05)。日粮蛋白水平对消化道pH值的影响为中蛋白组的效果最好;Ⅲ组的腺胃pH值最低,显著低于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ组,分别为29.21%、23.60%、23.37%和26.52%(P<0.05)。日粮蛋白水平对塞北乌骨鸡的抗氧化功能具有显著的增强趋势,Ⅴ组的血清T-SOD含量显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05);Ⅲ组比Ⅰ、Ⅱ组显著高35.33%和32.47%(P<0.05)。胸腺指数:中蛋白组最高,分别比低蛋白组和高蛋白Ⅴ组显著高1.65%、11.42%、27.2%(P<0.05),与高蛋白Ⅳ组差异不显著(P>0.05);法氏囊指数:Ⅲ组分别比其他各组显著高5.14%、3.02%、8.16%、9.67%(P<0.05),低蛋白组和高蛋白Ⅳ组差异不显著(P>0.05);脾脏指数:高蛋白Ⅳ组最高,与中蛋白组差异不显著(P>0.05),分别比Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ组高14.04%、10.17%、8.33%(P<0.05),低蛋白Ⅱ组和高蛋白V组差异不显著(P>0.05)。新城疫抗体滴度:中蛋白组最高,分别比低蛋白组和高蛋白组高10.52%、7.93%、2.90%、3.66%(P<0.05),高蛋白Ⅳ组和Ⅴ组差异不显著(P>0.05)。由此可知,中蛋白日粮在塞北乌骨鸡的肠道内环境、抗氧化能力和免疫功能方面为较理想的添加剂量。

    2017年03期 v.37;No.243 564-570页 [查看摘要][在线阅读][下载 165K]
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综述

  • 鹿流行性出血热病毒研究进展

    曹颖颖;钟华;吴健敏;

    鹿流行性出血热病(EHD)是一种在全世界野生及驯养的有蹄动物中广泛存在的虫媒病毒病。以白尾鹿、糜鹿、大角羚羊等多种驯养和野生反刍动物体温升高、呼吸困难、黏膜和浆膜面出血、常处于昏迷状态下死亡为特征的严重致死性传染病,牛和羊也可以感染发病,导致怀孕牛流产、死产。我国虽然尚无鹿流行性出血热暴发的报道,但从全球范围看其对养殖业的危害不容小觑。本文从流行与分布情况,病原学,流行病学,临床症状和病理变化等进行综述,为牛羊鹿流行性出血热病毒病的诊断与控制提供参考。

    2017年03期 v.37;No.243 571-576页 [查看摘要][在线阅读][下载 152K]
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  • 羊球虫病的研究进展

    郝桂英;

    羊球虫病是由艾美耳属球虫引起的一种呈世界性分布的肠道原虫病,能引起羊腹泻、渐进性消瘦、贫血、发育不良,甚至发生死亡,羔羊发病率和死亡率较高,给山羊生产业和绵羊生产业造成巨大的经济损失。本文就羊球虫病的病原种类、流行病学特点、临床症状和病理变化、诊断、防治等方面的研究进展进行了综述。

    2017年03期 v.37;No.243 577-584页 [查看摘要][在线阅读][下载 1094K]
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简讯