预防兽医学

  • 急性感染期猪伪狂犬病病毒部分基因组染色质状态

    张玉娟;韩莎莎;时庆贺;石昂;杨利;常洪涛;赵军;王川庆;陈陆;

    为探究急性感染期猪伪狂犬病病毒(PRV)在宿主细胞内基因组染色质的状态,首先建立PRV实时荧光定量PCR(qPCR)方法并测定0.1 MOI PRV感染Neuro-2a细胞后病毒基因组的复制动态,然后收集PRV感染Neuro-2a细胞的样品进行染色质免疫共沉淀试验(CHIP),并通过qPCR测定病毒部分DNA与组蛋白H3结合形成的染色质状态。结果显示,PRV急性感染Neuro-2a细胞后,部分基因组以染色质结构存在,并与病毒复制有一定相关性。本研究成功建立用于研究PRV基因组染色质状态的CHIP试验方法,为PRV急性感染期表观遗传学研究提供依据。

    2017年04期 v.37;No.244 585-591页 [查看摘要][在线阅读][下载 1490K]
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  • 闽西地区新流行猪伪狂犬病病毒gB基因分子特征分析

    戴爱玲;范克伟;杨小燕;杨守深;闫娜娜;林青青;林建伟;费世港;

    为了解2013-2015年闽西地区猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株的现状、分子生物学特征和遗传演化规律,收集闽西不同地区的24株PRV分离株,并对其gB基因进行遗传变异分析。结果表明:24株PRV分离株与2012年国内不同省份分离的7株PRV变异株核苷酸及氨基酸的同源性较高,分别为99.7%~100.0%和99.3%~100.0%;而与4株国外PRV经典株的核苷酸及氨基酸同源性相对较低,分别为98.3%~98.7%和96.6%~97.7%。氨基酸多序列比对结果发现,24株PRV分离株与7株2012年国内不同省份分离的PRV变异株gB基因氨基酸序列同源性较高,在几个部位均发生了一致性的变化,有很多相同的特征性氨基酸缺失与替换。遗传进化树分析结果表明,24株PRV分离株与7株PRV变异株处于一个相对独立的亚遗传分支,亲缘关系较近。而与Bartha疫苗株等4株国外经典毒株位于不同的大分支中,亲缘关系较远。预测的抗原表位表明PRV闽西分离株与Bartha疫苗株相比发生了抗原漂移,该差异是否预示闽西地区流行株正在向远离疫苗株的方向变异尚需待进一步研究。

    2017年04期 v.37;No.244 592-596+600页 [查看摘要][在线阅读][下载 3483K]
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  • 云南省部分地区72家规模化猪场猪伪狂犬病净化效果分析

    王钊哲;舒相华;杨亮宇;李永能;李文贵;尹革芬;李箐;杨赛伟;吴永新;宋春莲;

    为了解2012-2015年云南地区72家规模化猪场执行猪伪狂犬病净化防控的效果,4年共净化种猪8 696头,检测样品16 854份,其中8 236份抗凝血及8 696份血清。用PCR、ELISA方法分别检测感染抗原和免疫抗体,结果显示:2012-2015年猪伪狂犬病免疫抗体阳性率分别为69.03%,81.86%,85.99%,86.40%;野毒感染率分别是24.42%,5.47%,2.78%,2.69%,其中种公猪感染率分别为18.25%,12.36%,8.33%,3.15%,种母猪的感染率分别为24.73%,4.80%,2.48%,2.65%。结果表明,经过4年净化,猪场猪伪狂犬的野毒感染率呈逐年降低趋势,其中14家野毒感染率0.00%,免疫抗体阳性率逐年升高,说明这72家规模化猪场执行的猪伪狂犬病净化方法具有实用性,猪场的猪伪狂犬净化取得了一定成效。

    2017年04期 v.37;No.244 597-600页 [查看摘要][在线阅读][下载 270K]
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  • 猪血凝性脑脊髓炎病毒抑制神经细胞干扰素的产生

    岳慧青;杨雅雯;姜丹;张竞;石俊超;潘伟;贺文琦;高丰;宋德光;

    猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)属于β属冠状病毒成员,其具有典型的嗜神经性。多种冠状病毒可逃避宿主先天性免疫的识别而表现出明显的致病性,但宿主的先天性免疫在PHEV感染过程中发挥的作用还不是很清楚。为了明确神经细胞在PHEV感染过程中细胞自身的免疫应答状况,本研究对参与先天性免疫的重要炎性细胞因子和相关的通路变化情况进行了检测分析。用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对PHEV感染小鼠脑神经瘤母细胞(N2a)不同时间点的样品进行检测,结果证明没有IFN-β的表达,说明PHEV不能引起神经细胞产生Ⅰ型IFN。收集感染N2a细胞24h的上清,ELISA方法检测TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-γ的分泌情况,仅有IL-6呈现高水平表达,说明PHEV感染N2a细胞诱发了IL-6的先天性免疫反应。免疫荧光方法检测PHEV感染N2a细胞24h后重要核转录因子IRF-3和NF-κB的核定位情况,发现NF-κB移位到了胞核,IRF-3仍然存在于胞浆,说明PHEV仅激活了NF-κB信号通路。以上试验结果表明,PHEV进入中枢神经系统时可逃避神经细胞以IFN-β为主的免疫识别,该结果可为深入开展PHEV抑制机体干扰素产生的机制研究奠定基础。

    2017年04期 v.37;No.244 601-606页 [查看摘要][在线阅读][下载 1245K]
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  • 脑心肌炎病毒BD2株VP1基因的原核表达及生物信息学分析

    戚妍;李佳暖;陈萍;袁万哲;孙继国;

    应用RT-PCR技术扩增脑心肌炎病毒(EMCV)BD2株VP1基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),利用在线分析软件对该基因所编码的蛋白序列进行生物信息学分析。将重组质粒pET-32a-VP1转化到E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,在不同浓度的IPTG和不同温度条件下对目的蛋白进行诱导表达。结果显示,EMCV VP1基因全长831bp,编码277个氨基酸,VP1蛋白为酸性、亲水性蛋白质,蛋白空间结构以α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲为主。经SDS-PAGE分析可知,VP1蛋白在37℃,1.0mmol/L IPTG的诱导条件下以包涵体形式获得了高效表达,重组蛋白的相对分子质量约为49 300。Western blot结果表明其具有良好的反应原性。综上所述,EMCV VP1蛋白是一种抗原性较高的亲水性蛋白,在原核系统中能高效表达,该研究为进一步建立相应的抗体检测方法和DNA疫苗的研制提供理论基础。

    2017年04期 v.37;No.244 607-612页 [查看摘要][在线阅读][下载 1239K]
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  • SHP1在PRRSV诱导的抗病毒免疫反应中的作用

    王冬梅;郭嘉;张莹莹;冯亚琼;崔春晓;杜东颖;夏平安;

    为了探究SHP1在猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)诱导的抗病毒免疫中的作用,本研究采用200个TCID50的PRRSV感染猪肺巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM),分别培养12,24,36,48h后收集细胞及上清,分别设正常细胞对照组,聚肌胞(polyinosinic-polycytidylic acid,polyI:C)刺激对照组,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激对照组。采用ELISA方法检测PRRSV感染的PAM培养上清中SHP1的蛋白表达情况。用实验室已经建立的实时荧光定量PCR方法对PRRSV感染组和各个对照组PAM细胞中IRF3、IRF7、TRAF6、NF-κB、SHP1和IFN-β的mRNA转录水平变化进行定量分析。结果显示:激活的SHP1对PRRSV感染后PAM中IRF7、NF-kB和IFN-β的转录有促进作用,对IRF3和TRAF6的转录有抑制作用。LPS及Poly(I:C)刺激PRRSV感染的PAM细胞均促进了IRF3、IRF7、TRAF6、NF-κB、SHP1和IFN-β的转录。结果表明,激活的SHP1会通过TLR介导的信号通路或未知通路来调节PRRSV诱导的抗病毒免疫反应水平。LPS和Poly(I:C)刺激PRRSV感染的PAM细胞能够增强抗病毒细胞因子的转录水平。

    2017年04期 v.37;No.244 613-619页 [查看摘要][在线阅读][下载 2212K]
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  • 运用高通量蛋白质组学方法鉴定与PRRSV NSP7结合的宿主细胞蛋白

    董珊;陈红英;

    猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)虽已被国内外科研工作者广泛研究,但其中一些非结构蛋白例如NSP7的结构和功能依然所知甚少,据推测此蛋白对病毒的RNA合成和蛋白翻译过程十分重要。本试验运用蛋白质组学技术偶联免疫共沉淀法,并结合生物信息学方法分析,鉴定出12种与PRRSV NSP7产生直接或间接相互作用的宿主细胞蛋白,NSP7与这些蛋白之间的互作关系能够为NSP7的深入研究提供新的途径和思路。

    2017年04期 v.37;No.244 620-625页 [查看摘要][在线阅读][下载 667K]
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  • 猪肺炎支原体168弱毒株P46-P65融合蛋白的免疫原性

    彭丽萍;刘思远;朱晓萍;陈珍;姚昌茹;赵宝华;

    根据猪肺炎支原体168(Mycoplasma hyopneumoniae 168,Mhp168)弱毒株p46和p65基因序列设计特异性引物,进行PCR扩增并构建表达载体pET-28a-p46,pET-28a-p65以及pET-28a-p46-p65。以表达载体pET-28a-p46和pET-28a-p46-p65为模板,将其中p46基因3个TGA密码子突变为TGG。原核表达并纯化的蛋白与佐剂以体积比1∶1乳化后免疫小鼠,通过酶联免疫吸附反应(ELISA)测定小鼠血清的抗体效价。分别选取抗体效价较高的小鼠进行攻毒试验。经间接ELISA试验证明单蛋白P46、P65以及融合蛋白P46-P65的血清效价分别为:1∶1 280000,1∶128 000和1∶2 560 000;攻毒试验证明,P46、P65单蛋白和P46-P65融合蛋白疫苗的保护率分别可达82%,78%和98%。融合蛋白P46-P65具有良好的免疫原性,并且要优于单蛋白P46和P65的免疫原性。

    2017年04期 v.37;No.244 626-631页 [查看摘要][在线阅读][下载 977K]
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  • 猪肺泡巨噬细胞酵母双杂交cDNA文库的构建与鉴定

    杨达汉;邓守全;王哲;王丰;薛江东;刘锴;霍晓伟;马德慧;

    为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)与猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)蛋白质间相互的作用,本研究使用SMART技术成功构建了猪肺泡巨噬细胞酵母双杂交cDNA文库。首先提取PAM总RNA,使用SMART RACE法经LD PCR合成双链cDNA,运用SMART技术,通过同源重组的方法将双链cDNA与pGADT7-Rec质粒共转化进酵母Y187感受态,再利用营养缺陷的方法在SD/-Leu平板上筛选阳性克隆,最终构建的文库滴度达到了6.96×10~7 CFU/mL,重组率初步计算达到95%,插入片段范围在200~2 000bp。本研究为PRRSV致病蛋白的筛选以及相关疾病的研究奠定了基础。

    2017年04期 v.37;No.244 632-636+642页 [查看摘要][在线阅读][下载 751K]
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  • 不同类型鸡泄殖腔棉拭子禽白血病病毒p27抗原检测与病毒分离的相关性分析

    陈俊霞;范建华;许书珍;孙鹏;王一新;李思菲;韩妮;张言坤;徐步;赵鹏;崔治中;

    为探讨泄殖腔棉拭子或种蛋中禽白血病病毒(ALV)-p27抗原检测与病毒分离检测之间的相关性,对不同类型鸡编号后分别对应采集泄殖腔棉拭子或蛋清后以ALV-p27抗原检测试剂盒检测,同时无菌采集抗凝血接种DF-1细胞进行ALV的分离鉴定。结果显示,人工感染A亚群ALV的SPF鸡群泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原检测与病毒分离有很高的吻合率,相对于病毒分离法,119次泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原检测中出现有1例假阳性和3例假阴性;从美国进口的200只祖代肉鸡3次采血DF1细胞分离病毒结果均为阴性,而泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原阳性率依次为4.00%(8/200),2.97%(5/168)和2.61%(4/153),假阳性率为3.30%。相对于病毒分离法,正在实施ALV净化的不同遗传背景地方品系鸡泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原检测的假阳性率高达93.20%~100.00%,还有一定比例假阴性(1/9,1/4,1/3)。本研究大量对应比较的数据表明,相对于血浆病毒分离法,不同类型鸡的泄殖腔棉拭子ALVp27抗原检测法不仅有很高的假阳性率,还有一定比例的漏检率。在种鸡场的ALV净化过程中考虑到成本,不建议以泄殖腔棉拭子作为检测材料。本试验为我国鸡群禽白血病净化检测和临床鉴别诊断提供参考依据。

    2017年04期 v.37;No.244 637-642页 [查看摘要][在线阅读][下载 137K]
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  • 脂筏在牛呼吸道合胞体病毒感染MDBK细胞中的作用

    李丽阳;刘洋;王磊;李艳婷;侯喜林;

    为探讨脂筏在牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)感染MDBK细胞中的作用,采用胆固醇去除药物MβCD处理MDBK细胞。结果显示,细胞膜胆固醇含量明显降低,同时也降低BRSV感染水平,补充外源胆固醇后,病毒感染力可部分恢复;表明细胞膜胆固醇的去除可以抑制BRSV的感染,BRSV的感染与细胞膜脂筏相关。进一步研究发现,胆固醇去除不会影响BRSV结合在靶细胞表面,但会抑制病毒进入靶细胞。在病毒感染后采用胆固醇去除药物MβCD处理MDBK细胞,对于病毒感染力的影响是轻微的。这些发现可有助于理解BRSV的感染机制,为研制安全、高效的疫苗和有效的治疗药物提供理论依据。

    2017年04期 v.37;No.244 643-647页 [查看摘要][在线阅读][下载 603K]
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  • 山羊痘病毒疫苗株和野毒株ORF121基因比较分析

    赵俊皓;张克山;卢炳州;王文芳;郑海学;刘湘涛;胡永浩;

    山羊痘(goat pox,GP)是由山羊痘病毒(goat poxvirus,GPV)感染引起山羊的一种烈性传染病,弱毒疫苗接种是预防和控制GP的重要手段之一。ORF121是GPV编码和GPV转录、复制及细胞内包装相关的基因之一,在GPV突破宿主细胞免疫系统过程中扮演重要角色。为比较分析GPV疫苗弱毒株和野毒株编码的ORF121基因特征,本研究扩增并测定了GPV疫苗株和野毒株的ORF121基因序列,比较分析了二者核酸水平和氨基酸水平的变异及其蛋白质二、三级结构差异。结果表明,GPV疫苗弱毒株和野毒株编码的ORF121基因核苷酸序列相似性为97.9%,氨基酸序列相似性为98.2%。本研究结果为揭示GPV异原宿主致弱的机制积累了资料。

    2017年04期 v.37;No.244 648-652页 [查看摘要][在线阅读][下载 1211K]
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  • 双抗体夹心ELISA检测羊肠道病毒抗原方法的建立及病原流行病学调查

    鲁海冰;胡俊英;张群;王浴光;郭昌明;朱利塞;涂长春;王新平;

    应用本实验室分离的国内首株羊肠道病毒(CEV)-JL14VP1重组蛋白制备的兔源多克隆抗体和抗CEV-JL14病毒的单克隆抗体,建立了检测CEV抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省和内蒙古地区羊群感染CEV进行了病原流行病学调查。方阵试验确定了CEV VP1鼠源IgG捕获抗体的最佳包被量为0.2μg/孔,酶标抗体的最佳稀释倍数为1∶1 000。对大量CEV阴性粪便样品进行检测与统计学处理,确定了双抗体夹心ELISA检测CEV的判定标准为样品D490值≥0.216判定为阳性。特异性、敏感性和重复性试验结果表明,所建立的检测CEV抗原方法具有特异、敏感、快速和重复性好等特点。以建立的双抗体夹心ELISA方法,对吉林省和内蒙古不同地区的羊群粪便样品进行了检测,发现不同地区的羊群都存在着严重的CEV感染,感染率高达12%~100%。本研究为今后CEV感染的诊断、检疫及防制提供了有效的手段和流行病学理论依据。

    2017年04期 v.37;No.244 653-657页 [查看摘要][在线阅读][下载 273K]
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  • 抗犬细小病毒IgY的制备及其特性

    甘军纪;刘秀梵;

    用犬细小病毒(CPV)灭活抗原4次免疫SPF产蛋鸡,PEG沉淀法制备蛋黄抗体(IgY),IgY产量达到56mg/枚鸡蛋,纯度达到88%。Western blot分析表明,IgY抗体与CPV主要蛋白均发生反应。首次免疫后7周,IgY的ELISA抗体滴度达到1∶512 000,中和效价达到1∶6 400,稳定的抗体水平可持续到43周。本研究为IgY应用于犬细小病毒病的免疫治疗和诊断奠定了基础。

    2017年04期 v.37;No.244 658-661+681页 [查看摘要][在线阅读][下载 692K]
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  • 鸭疫里默菌环介导等温扩增检测方法的建立

    吴彤;李旭妮;闫新博;黄书林;吴文学;

    采用对应于鸭疫里默菌16SrRNA基因442~461bp序列的5条特异引物,建立了环介导等温扩增(LAMP)反应体系,加入试剂盒提取的鸭疫里默菌DNA后,置63℃反应60min,通过监测反应液浊度判断结果。在此基础上,用煮沸10min的方法代替试剂盒提取DNA方法,并用显色方法代替浊度检测和琼脂糖凝胶电泳方法判断结果,通过敏感性、特异性、病原消长规律试验验证方法的准确性。另外,对临床采集的135只患病鸭的心血、脑组织、肝脏和心脏共540份样品提取DNA后,用LAMP和PCR进行检测,同时进行细菌分离和鉴定,比较各种方法检测结果的符合率。结果显示,菌液提取DNA后,LAMP和PCR方法最低分别可检测到2和10个CFU的鸭疫里默菌。菌液煮沸代替试剂盒提取DNA方法,使LAMP的敏感性降低5倍。显色法、浊度检测和琼脂糖凝胶电泳方法判断结果的敏感性和特异性相同。细菌分离法共获得201株鸭疫里默菌,且经LAMP与PCR法检测均呈阳性,LAMP与PCR法检出阳性样本总数分别为271和254份,LAMP方法阳性检出率高于PCR方法。建立的鸭疫里默菌LAMP检测方法具有较高的敏感性,进一步用菌液煮沸方法代替DNA提取法虽然使敏感性降低5倍,但节省了DNA提取步骤,再结合显色技术使反应结果直观可见,使其临床应用更加便捷。

    2017年04期 v.37;No.244 662-667页 [查看摘要][在线阅读][下载 619K]
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  • 犬吉氏巴贝斯虫人工感染试验方法的建立

    杨伦;闫可可;钱萌希;许家荣;杨德吉;姚大伟;

    选用健康本地杂种犬,分为2组,一组手术切除脾脏,另一组未经任何处理,然后2组犬人工静脉接种含犬吉氏巴贝斯虫的病犬血液,接种后观察临床症状、进行实验室检查(血涂片、血常规、病原的PCR检测),检测2组犬人工感染犬吉氏巴贝斯虫后的发病情况。结果显示,人工感染后2组犬均表现出自然感染犬吉氏巴贝斯虫后的临床症状,实验室检查血涂片中检测到犬吉氏巴贝斯虫虫体,血常规表现出严重的贫血,PCR能扩增出犬吉氏巴贝斯虫的基因片段。2组犬比较显示,切脾组的红细胞感染率和贫血程度均高于未切脾犬。本试验成功建立了犬吉氏巴贝斯虫人工感染方法,且脾切除后感染效果优于直接静脉感染。

    2017年04期 v.37;No.244 668-670页 [查看摘要][在线阅读][下载 241K]
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  • 骆驼斯氏副柔线虫转录组的高通量测序及分析

    冯陈晨;王文龙;呼和巴特尔;

    为了系统了解斯氏副柔线虫的转录组特征并构建其转录组图谱,以不同发育阶段的斯氏副柔线虫为研究对象,应用Illumina Nextseq 500高通量测序技术平台对其进行转录组测序及生物信息学分析,结果每个样本均得到3GB的原始数据,经质量控制和拼接组装后,共获得128 454个Unigene,序列片段的平均长度与N50值分别为634和1 037bp;将Unigenes与COG,Nr,Trembl等数据库进行比对,结果表明有35 324个Unigene比对到COG数据库,根据蛋白种类大致分为25类;通过GO功能分类,5 227个Unigene映射到GO不同的功能节点上;通过KEGG pathways分析,共有13 424个Unigene参与了8 155个代谢通路。该研究结果为斯氏副柔线虫病的基础理论、诊断方法及防治研究奠定基础。

    2017年04期 v.37;No.244 671-675页 [查看摘要][在线阅读][下载 417K]
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人兽共患病

  • 1株HA蛋白S145变异H9N2亚型禽流感病毒的分离鉴定与HA基因序列分析

    彭特;许利娜;张思远;胡秀美;苏子由;叶贺佳;

    从山东某发病养殖场采集疑似病料,经RT-PCR检测为H9N2亚型禽流感阳性,采用鸡胚尿囊腔接种法分离病毒(SD089),并进行HA、HI试验和HA基因扩增、测序以及序列的同源性和遗传进化分析。结果显示,分离的SD089株具有血凝特性但不能被H9亚型禽流感标准阳性血清所抑制,其HA基因推导的氨基酸序列与参考毒株相比,第145位由S漂变为N,导致增加糖基化位点NGT,表明S145是血凝抑制抗体结合位点。SD089株属于BJ94分支,与2010―2014年大部分山东流行毒株的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为88.9%~97.5%和89.9%~99.6%,而与疫苗株SD696分别降至88.0%和89.1%。试验表明,分离的SD089株HA基因在分子水平上发生了变异,S145位点的突变提示低致病性禽流感的防制面临新的挑战。

    2017年04期 v.37;No.244 676-681页 [查看摘要][在线阅读][下载 467K]
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  • 基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌小鼠感染模型治疗效果

    张洋;冯新;韩东;铁鲲源;张楸杨;于曦;韩文瑜;

    基因工程鲎素体外抑菌活性良好,为进一步评价其在体内抑菌活性和治疗效果,本研究建立了金黄色葡萄球菌小鼠肺部和腹腔感染模型,探讨了基因工程鲎素对2种感染模型小鼠的治疗效果。比较基因工程鲎素治疗前后,不同模型小鼠的存活率、血液以及组织中的细菌载量变化;比较治疗前后小鼠肺部感染动物模型的病理学变化。结果表明,与对照组相比,基因工程鲎素治疗后肺部感染模型小鼠存活率升高40%,腹腔感染模型小鼠存活率升高60%,治疗后腹腔感染小鼠血液中的细菌载量下降10~4倍;病理学分析结果表明,基因工程鲎素治疗后小鼠肺脏的炎症反应较轻,肺部组织结构被破坏程度较轻。综上所述基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌感染小鼠的体内治疗效果明显,显著提高了小鼠存活率,抑制了细菌的扩散,减轻了病理炎症变化,初步表明基因工程鲎素具有良好的抗感染药物研发前景。

    2017年04期 v.37;No.244 682-685+691页 [查看摘要][在线阅读][下载 942K]
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  • 陕北黑山羊隐孢子虫种类鉴定及遗传进化分析

    宋军科;赵光辉;彭先启;王雪婷;胡雄峰;于三科;林青;张彦明;

    为了阐明陕北黑山羊隐孢子虫(Cryptosporidium)的感染情况、种类及其遗传进化关系,本研究利用形态学和分子生物学方法,分析了107份不同年龄段黑山羊粪便样品中的隐孢子虫的感染状况、种类以及遗传进化关系。结果发现,黑山羊存在隐孢子虫感染,感染率为14%(15/107)。序列比对分析表明,7份阳性样品为牛隐孢子虫(C.bovis)感染,6份为肖氏隐孢子虫(C.xiaoi)感染,2份为C.bovis和C.xiaoi混合感染。系统进化树显示9个分离株与C.bovis位于同一分支,而与C.xiao位于同1个分支的有8个分离株。结果为陕北黑山羊乃至其他山羊的隐孢子虫病分子流行病学研究及防控提供了理论基础。

    2017年04期 v.37;No.244 686-691页 [查看摘要][在线阅读][下载 392K]
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  • 旋毛虫抗原基因T668的定点突变及原核表达

    王兆国;徐静;刘晓雷;白雪;王楠;唐斌;刘明远;

    旋毛虫抗原基因T668是本实验室发现的1条高反应原性的特异性抗原基因,该基因编码旋毛虫丝氨酸蛋白酶。本试验利用重叠PCR的方法对旋毛虫抗原基因T668成功实现酶活性中心重要位点定点突变改造,将酶活性中心的结合位点259位亲水性丝氨酸和催化三联体中240位的丝氨酸分别突变为疏水性丙氨酸,并构建、纯化了可溶性表达的双位点突变的重组蛋白,后经Western blot分析表明所表达的重组蛋白能够与旋毛虫感染26d阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。本试验为后续开展对该丝氨酸蛋白酶的研究及应用奠定了坚实的基础。

    2017年04期 v.37;No.244 692-696页 [查看摘要][在线阅读][下载 825K]
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基础兽医学

  • 人参多糖体外抗猪生殖与呼吸综合征病毒活性

    孙加节;蒋勇;习欠云;陈婷;张永亮;

    猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是严重危害养猪业的传染病之一,也是重点防控的疾病之一。人参多糖(ginseng polysaccharides complex,GPS)具有抗病毒及增强免疫的作用。为了寻找有效预防和治疗PPRS的药物,本试验以Marc-145细胞为模型,采用细胞病变抑制试验和MTT法测定细胞活力,观察GPS在体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的作用,并通过改变药物作用方式初步探讨GPS的抗病毒机制。试验分为6组,分别为50,100,200和400 mg/L GPS组、病毒对照组及正常细胞对照组。在GPS对PRRSV感染Marc-145细胞的阻断和抑制作用中,各质量浓度GPS均显著提高感染PRRSV后Marc-145细胞的存活率(P<0.05),GPS处理组Marc-145细胞中的PRRSV量均显著低于病毒对照组(P<0.05)。而且,GPS可以促进Marc-145细胞中IL-6和IFN-γ的mRNA表达,也能增强细胞上清中IL-6和IFN-γ的活性。本试验研究表明GPS在体外可有效阻断或抑制PRRSV对Marc-145细胞的感染,提示GPS可作为预防和治疗PRRS的候选药物。

    2017年04期 v.37;No.244 697-703+716页 [查看摘要][在线阅读][下载 2091K]
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  • 苜蓿和红车轴草黄酮提取物对绵羊生长性能和血液相关指标的影响

    王凯;王洋;孙娟娟;刘振阳;姜义宝;王美静;李敏;

    为研究苜蓿和红车轴草黄酮提取物对绵羊生长性能、血液生化指标、激素和抗氧化性的影响,选取36只1.5月龄杜湖杂交公羔羊,随机分成3组,每组12只,对照组饲喂基础日粮,苜蓿组饲喂添加苜蓿黄酮提取物20mg/kg,红车轴草组添加红车轴草黄酮提取物15mg/kg。预饲期10d,正试期60d,分别对各组绵羊生长性能、血液生化指标、激素和抗氧化性指标进行测量。结果表明,添加苜蓿和红车轴草黄酮提取物提高了血清中生长激素(GH)、胰岛素生长因子1(IGF-1)和三碘甲腺原氨酸(T3)含量;显著提高肉羊的日增质量(P<0.05),降低料重比;显著降低血清中甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量(P<0.05);提高了谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性,降低丙二醛(MDA)的含量,增强肉羊的抗氧化性能。综上所述,试验中苜蓿和红车轴草黄酮提取物添加量可以调节绵羊血液抗氧化性能、激素和部分生化指标,提高肉羊的日增质量。

    2017年04期 v.37;No.244 704-709页 [查看摘要][在线阅读][下载 140K]
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  • 貉IgG克隆及Fc活性多肽功能分析

    赵翠;刘玲红;王开斌;王晓艺;付石军;宋道祯;常维山;

    为获得貉IgG抗体序列,分析其活性多肽功能,从而为貉源疾病治疗研究奠定免疫学基础。本研究通过RTPCR成功克隆貉IgG保守区基因,借助3′RACE以及overlap-PCR技术成功获得其IgG全长。运用在线软件分析其Fc区功能位点,人工合成IgG-Fc区多肽NTVSITCLVK(N10K),PSVYVLPPSQ(P10Q)及阴性对照多肽MSTAVSKCAT(NC)。多肽在不同浓度下与小鼠外周血淋巴细胞共培养18h检测上清液中细胞因子含量(TNF-α,IL-1β,IL-6),发现在质量浓度为10mg/L时,多肽N10K可以刺激淋巴细胞分泌更多的TNF-α(271.95ng/L),IL-1β(27.42ng/L),而多肽P10Q可以促进淋巴细胞产生较多的IL-6(35.51ng/L)。本研究成功克隆貉IgG重链核酸序列,初步确定貉IgG-Fc区多肽P10Q及N10K对外周血淋巴细胞的体外免疫诱导活性,同时为今后貉源疾病预防及治疗奠定基础,为研究DNA疫苗、Fc生物佐剂、多肽疫苗及单克隆抗体制备提供了试验依据。

    2017年04期 v.37;No.244 710-716页 [查看摘要][在线阅读][下载 1269K]
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  • 关于新耐药蛋白OptrA的2个关键活性位点

    钟晓波;王琳;王铁东;钟灵;王大成;

    通过ATP水解酶活性试验分析2个突变位点对OptrA活性的影响,并通过最低抑菌浓度试验分析不同突变位点对金黄色葡萄球菌耐药性的影响。将OptrA蛋白作抗原免疫日本大耳白兔,提取血清抗体,用Western bolt分析突变前后蛋白表达量的变化。结果显示,当把全长氨基酸序列208和488位的谷氨酸(E)突变后,OptrA在金黄色葡萄球菌中的表达量不变,但其ATP水解活性分别降低30%和70%,并且都导致金黄色葡萄球菌失去了对氟苯尼考的耐药性。说明OptrA需要水解ATP才能介导细菌耐药性,为以后研究新耐药蛋白OptrA的抑制剂和肠球菌感染的防制奠定基础。

    2017年04期 v.37;No.244 717-720页 [查看摘要][在线阅读][下载 225K]
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临床兽医学

  • 日粮不同蛋白水平对塞北乌骨鸡血液生化指标、血清免疫指标及屠宰性能的影响

    官丽辉;刘海斌;吴占福;王志伟;苏体军;

    试验采用单因子方差设计,选用450只40日龄塞北乌骨鸡,随机分成5组,每组3个重复,各试验组日粮蛋白分别为低蛋白Ⅰ组(15.5%),低蛋白Ⅱ组(16.0%),中蛋白Ⅲ组(16.5%),高蛋白Ⅳ组(17.0%)和高蛋白Ⅴ组(20.7%)。结果表明,不同蛋白水平日粮对塞北乌骨鸡的产蛋率和料蛋比有显著性影响(P<0.05)。其中,产蛋率:中蛋白组显著高于低蛋白组(P<0.05);料蛋比:中蛋白组显著低于其他组(P<0.05)。总蛋白、白蛋白和葡萄糖随着日粮蛋白水平的提高而呈现先上升后下降,但总体含量有增加的趋势。不同蛋白水平日粮对血清中T_4含量没有显著影响(P>0.05),而对T_3,IGF-Ⅰ和GH有显著影响(P<0.05)。IgG:中蛋白组最高,与高蛋白Ⅳ组差异不显著(P>0.05),分别比低蛋白组两组和高蛋白Ⅴ组高22.63%,12.41%,10.95%(P<0.05)。IgA:中蛋白组最高,显著高于低蛋白Ⅰ组、高蛋白组,分别为16.32%,12.93%,17.01%(P<0.05);IgM:中蛋白组最高,分别比低蛋白Ⅰ组,高蛋白Ⅳ组,Ⅴ组显著高5.32%,2.37%,3.55%(P<0.05),其他组间差异不显著(P>0.05);屠宰性能:中蛋白组的胸肌率显著高于其他组(P<0.05),屠宰率、全净膛率、胸肌质量、腿肌质量、胸肌率和腿肌率没有规律性变化。由此可知:中蛋白日粮对塞北乌骨鸡产蛋性能、血液常规指标、血清免疫指标及屠宰性能的影响为最佳添加剂量。

    2017年04期 v.37;No.244 721-727页 [查看摘要][在线阅读][下载 150K]
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动物科学

  • 猪卵母细胞体外受精条件的优化

    曹筠青;汪正铸;王华;张胜;唐博;张学明;李子义;

    猪卵母细胞体外受精(in vitro fertilization,IVF)技术为受精和胚胎早期发育机理等基础理论的研究及生产实践提供了重要的研究手段。虽然猪IVF的研究已经取得了一些进展,但其囊胚发育率仍然较低,亟需建立更为稳定、高效的体外受精方法。本试验通过比较精子浓度,精子获能处理,不同精卵共孵育培养体系以及在卵母细胞成熟过程中添加不同激素等影响猪卵母细胞体外受精胚胎发育能力的因素,以求找到最佳的猪卵母细胞体外受精体系。结果显示:在精子浓度为1×10~5~1×10~7/mL,5×10~6/mL的精子浓度显著提高体外受精效率(P<0.05);以茶碱、咖啡及咖啡因联合使用肝素作为获能物质处理精子,发现2.5 mmol/L茶碱处理组体外受精效率显著提高(P<0.05);通过比较不同的受精体系,发现使用40个卵/500μL体系显著提高体外受精效率(P<0.05);在卵母细胞成熟液中添加不同激素组合,发现添加10IU/mL PMSG,10IU/mL HCG和2.5IU/mL FSH激素组合,体外受精效率显著提高(P<0.05)。本试验结果表明,在M199中添加10IU/mL PMSG,10IU/mL HCG和2.5IU/mL FSH体外成熟培养卵母细胞,以5×10~6/mL精子浓度,2.5mmol/L茶碱作为获能物质处理精子,40个卵/500μL共孵育的IVF体系效果最佳,其卵裂率为(61.33±0.77)%,囊胚率为(28.33±1.08)%。本试验将为深入研究猪IVF提供理论参考。

    2017年04期 v.37;No.244 728-734页 [查看摘要][在线阅读][下载 504K]
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  • 猪NLRP3基因克隆及其在DF-1细胞的表达

    陶攀;张凯照;刘健新;王晴楠;于梦;宁章勇;

    NLRP3蛋白作为NLRP3炎性小体的主要组成蛋白之一,在机体对抗病原微生物和炎症反应中起着重要作用。为了深入研究猪的NLRP3蛋白在炎性疾病发生过程中的作用机制,采用PCR的方法扩增了长白猪NLRP3基因,并对其序列和编码蛋白的结构进行了分析。构建了pIRES2-EGFP-NLRP3真核表达载体,并转染至DF-1细胞中进行表达。结果显示,该基因表现出种属内保守性和种属间差异性,编码蛋白由1 036个氨基酸构成,存在4个潜在跨膜区,分别是第401~419,第721~739,第775~795和第889~910位氨基酸,不含信号肽。单层细胞免疫化学检测结果显示,重组质粒pIRES2-EGFP-NLRP3成功转染并在细胞中表达。本研究为深入探讨炎症小体在猪炎症性疾病的作用机制提供了基础数据。

    2017年04期 v.37;No.244 735-740页 [查看摘要][在线阅读][下载 1755K]
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  • ELOVL5基因遗传变异与中国荷斯坦奶牛乳质性状的关联分析及功能验证

    郭鹏程;戴珊珊;杨浩然;赵志辉;闫守庆;

    采用测序的方法鉴定136头中国荷斯坦奶牛ELOVL5基因启动子区域的遗传多态性位点,通过统计学分析遗传多态性位点与乳质性状的关联性,并根据差异显著性多态性位点构建ELOVL5基因启动子双荧光素酶报告载体,检测不同基因型的启动子活性。结果表明:在奶牛ELOVL5基因启动子区域中发现了7个SNPs及1个单碱基缺失突变,其中SNP7g.-385C>G与尿素氮、校正奶量显著相关(P<0.05),单碱基缺失突变与牛奶中的体细胞数极显著相关(P<0.01)。双荧光素酶报告载体检测结果显示,缺失纯合基因型的启动子活性极显著高于野生型(P<0.01)。

    2017年04期 v.37;No.244 741-745页 [查看摘要][在线阅读][下载 1731K]
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  • 青海高原牦牛PRDM1基因克隆及生物信息学与差异表达分析

    赵生军;张勇;佘平昌;阎萍;张利君;郭宪;

    以青海高原牦牛淋巴结,90日龄胎儿头部皮肤,牦牛精子以及西门塔尔牛精子为材料,通过RT-PCR克隆了包含PRDM1基因编码区的cDNA序列。将克隆获得的青海高原牦牛PRDM1基因的cDNA与黄牛相应序列进行比对,对青海高原牦牛PRDM1蛋白与其他物种PRDM1蛋白进行序列比对和进化树分析,对青海高原牦牛PRDM1蛋白的特性和结构进行预测。荧光定量检测青海高原牦牛淋巴结,90日龄胎儿头部皮肤,牦牛精子以及西门塔尔牛精子中PRDM1基因mRNA表达量。结果显示,克隆获得青海高原牦牛PRDM1基因该部分cDNA片段长度为761bp,其中PRDM1基因编码区长741bp,编码246个氨基酸;序列分析显示,克隆获得的牦牛cDNA序列与黄牛该序列存在3个碱基的变异;青海高原牦牛PRDM1蛋白与黄牛、野牦牛、绵羊、马相应序列同源性分别是99.0%,99.0%,97.0%,92.0%;各物种PRDM1蛋白进化树符合物种进化规律。包含卷曲螺旋等典型结构域,人甲基转移酶蛋白结构域PR蛋白1具有94%的相似性,人甲基转移酶蛋白结构域PR蛋白10具有36%的相似性,具有SET结构域活性。青海高原牦牛PRDM1基因在西门塔尔、牦牛精子中表达量极显著高于青海高原牦牛淋巴结(P<0.05),90日龄胎儿头部皮肤中表达量极显著低于青海高原牦牛淋巴结(P<0.01)。从青海高原牦牛克隆获得PRDM1基因编码区揭示了其分子特征,为青海高原牦牛PRDM1蛋白质功能的研究奠定基础。

    2017年04期 v.37;No.244 746-751页 [查看摘要][在线阅读][下载 2350K]
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  • 犏牛雄性不育的DNA甲基化

    赵彦玲;任子利;李瑜鑫;王建洲;商鹏;强巴央宗;

    采用Western blot法检测犏牛、牦牛睾丸组织中DNA甲基转移酶3a(Dnmt3a)蛋白的相对表达量,用甲基化定量试剂盒(荧光法,Epigentek公司)检测其全基因组DNA甲基化的水平,分析犏牛与牦牛在这2个表达量上的差异。结果显示:犏牛、牦牛睾丸组织中Dnmt3a蛋白的相对表达量分别为(0.853±0.015)和(0.651±0.016),犏牛的显著高于牦牛(P<0.05);犏牛、牦牛睾丸组织的全基因组DNA甲基化水平分别为(0.950±0.013)%和(0.808±0.016)%,犏牛的显著高于牦牛(P<0.05)。可见,犏牛睾丸组织中Dnmt3a蛋白表达水平与其全基因组DNA甲基化水平均显著高于牦牛,这可能是犏牛雄性不育的DNA甲基化机制之一,也将为犏牛雄性不育的表观遗传学研究奠定基础。

    2017年04期 v.37;No.244 752-756页 [查看摘要][在线阅读][下载 461K]
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综述

  • 系统兽医学方法的代谢组学技术在围产期奶牛疾病中的应用概况

    范子玲;夏成;肖鑫焕;舒适;许楚楚;王刚;

    系统兽医学方法是继简化法之后又出现的一种用来解决动物健康问题的新方法。由于简化法未能解决围产期奶牛的很多疾病,最终建立起了系统兽医学方法,其包括基因组学、蛋白组学、转录组学、代谢组学在内的4个不同层面的组学技术,现主要概述代谢组学技术在围产期奶牛疾病中的应用。

    2017年04期 v.37;No.244 757-761页 [查看摘要][在线阅读][下载 118K]
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  • 传染性法氏囊病病毒与microRNA(miRNA)

    赵冬雪;穆卫涛;王立砺;满朝来;

    传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病病毒引起禽类的一种高度传染性疾病。该病多见于雏鸡,感染雏鸡常见免疫器官萎缩,法氏囊损伤并诱导机体严重的免疫抑制,致使被感染鸡易受2次感染或免疫失败,给禽业生产带来严重的经济损失。现首先简要分析了传染性法氏囊病不同毒株基因组序列间的同源性与进化性关系,并对传染性法氏囊病病毒编码序列的microRNA靶位点进行了预测,其次探讨了microRNA与传染性法氏囊病病毒之间的调控关系,最后对microRNA在传染性法氏囊病防制中的可能应用进行展望,以期为深入研究传染性法氏囊病病毒的分子调控机制和防制提供理论参考。

    2017年04期 v.37;No.244 762-767页 [查看摘要][在线阅读][下载 326K]
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简讯