- 刘芳宁;张昊龙;徐鹏;孔惟博;张玉珠;孙宏伟;任少敏;赵建增;梁志选;高英杰;
通过猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)特异性肽PRRSV-GP5(GP5aa96-104)、PRRSV-N(Naa49-57)刺激PRRS免疫后的仔猪骨髓、脾脏、胸腺、肺门淋巴结,用流式细胞仪检测T淋巴细胞表型的变化。结果显示:(1)骨髓和脾脏T细胞受到刺激时,首先转化为以CD4~+ T细胞为主,而胸腺和肺门淋巴结主要转化为以CD8~+ T细胞为主,并产生CD4~+ CD8~+ T细胞。其中,胸腺和肺门淋巴结中CD4的降低为一过性降低。(2)N特异性肽对骨髓CD3~+ 和CD4~+ CD8~+ T细胞有抑制作用,对脾脏和肺门淋巴结中的CD3~+ T细胞有促进作用,该抑制作用在48h后得以改善。(3)胸腺中T淋巴细胞转化能力最持久。(4)骨髓中T淋巴细胞开始以CD4~+ T细胞为主,后转为以CD8~+ T细胞为主。这为进一步研究有效防制PRRS的途径提供理论数据。
2017年07期 v.37;No.247 1201-1205+1233页 [查看摘要][在线阅读][下载 1877K] [下载次数：126 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 冀艳华;徐乔璐;刘军;葛恒涛;张涌;郑月茂;
验证整合于山羊β-乳球蛋白基因座的猪瘟病毒E0(CSFV E0)基因是否能够利用内源性启动子调控该基因表达,为制备转CSFV E0基因山羊做好准备。利用脂质体转染的方法将实验室已构好的针对山羊β-乳球蛋白基因第一外显子的TALENs表达载体和包含CSFV E0基因的打靶载体共转染山羊乳腺上皮细胞,用药物(G418)进行筛选获得单克隆,并对获得的克隆进行5′端和3′端鉴定,鉴定都为阳性的克隆进行激素诱导24h后,收集培养液和细胞。通过RT-PCR和Western blot技术检测证明,转基因阳性细胞能够表达并分泌出CSFV E0蛋白。本试验为以转CSFV E0基因细胞为供核体进行核移植制作转基因动物奠定了基础。
2017年07期 v.37;No.247 1206-1211页 [查看摘要][在线阅读][下载 1389K] [下载次数：127 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 李栋梁;王新港;郭天准;常洪涛;崔丹丹;赵军;杨霞;李永涛;陈陆;王川庆;
为了解河南省猪瘟病毒近2年的分子特征及变异情况,本试验使RT-PCR方法从猪瘟病料中获得了5株猪瘟病毒的E2基因全序列和其中10株E0基因全序列,并对猪瘟病毒阳性样品的E2和E0基因进行测序及变异分析。结果显示:扩增的河南省5株猪瘟病毒的E2基因,其中4株猪瘟病毒E2基因与石门株E2基因相比存在14个氨基酸的变化,1株和石门株E2基因存在4个氨基酸变化。与Shimen株相比,河南省猪瘟病毒的E2基因有1个糖基化位点的突变。扩增的10株猪瘟病毒的E0基因,发现河南省的猪瘟病毒之间E0基因同源性高,且其E0基因从密码子程度上一直在向远离经典毒株Shimen株和疫苗株HCLV的方向发展。对E2基因和E0基因进行进化分析发现河南省猪瘟病毒承受净化选择压力。以E2基因为基础进行分型,发现河南省共同存在猪瘟病毒1.1型和2.1b型;提示河南省猪瘟病毒变异种类更加多样化。
2017年07期 v.37;No.247 1212-1219页 [查看摘要][在线阅读][下载 1600K] [下载次数：198 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ] - 王伟;张双翔;金志强;周碧君;文明;程振涛;冯旭芳;张海;唐宇;王开功;
针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M基因设计LAMP引物,对反应体系的条件优化并进行特异性及敏感性等试验。结果显示:该方法在60℃下恒温扩增60min,使PEDV的M基因得到了高效率特异性扩增。本试验方法特异性好,与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRSSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪细小病毒(PPV)及猪伪狂犬病病毒(PRV)等无交叉反应,同时也具有较好的灵敏性,最低检测分子拷贝数为1.0×102 copies/μL。反应结束后加入SYBR GreenⅠ在紫外灯下观察颜色变化,结果显示阳性扩增产物呈现绿色荧光。结果表明:该LAMP检测方法特异性强,灵敏度高,操作便捷,适于临床检测PEDV。
2017年07期 v.37;No.247 1220-1224页 [查看摘要][在线阅读][下载 783K] [下载次数：258 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：15 ] |[阅读次数：0 ] - 闫飞虎;赵梓淇;王化磊;赵永坤;邱泊宁;王建忠;王铁成;黄耕;高玉伟;冯娜;杨松涛;夏咸柱;
为了构建具有天然构象的小反刍兽疫病毒Nigeria 75/1株病毒样颗粒,本试验扩增了Nigeria 75/1株M、F和H基因,并分别克隆至双启动子载体pFastBac~(TM) Dual中,构建含有双目的基因的重组供体质粒pFastBac~(TM) Dual-2M、pFastBac~(TM) Dual-2F和pFastBac~(TM) Dual-2H;测序正确后转化至DH10Bac~(TM) 感受态细胞,同源重组获得穿梭质粒rBacmid-2M、rBacmid-2F和rBacmid-2H;将其分别转染昆虫细胞Sf9获得重组杆状病毒rpFB-2M、rpFB-2F和rpFB-2H。以鼠抗M、H蛋白的主要抗原表位区多克隆抗体与绵羊抗PPRV阳性血清对重组杆状病毒感染细胞进行间接免疫荧光(IFA)鉴定,可见特异性荧光;以3种重组杆状病毒共感染昆虫细胞Sf9的方式组装病毒样颗粒,放大培养后进行病毒样颗粒纯化。Western blot检测纯化后样品可见相对分子质量为38 000,59 000,68 000左右的条带,表明基质膜蛋白与2种囊膜糖蛋白成功组装出病毒样颗粒,且免疫小鼠可诱导产生保护性中和抗体。本试验为后续小反刍兽疫病毒(PPRV)病毒样颗粒疫苗的进一步研发奠定了基础。
2017年07期 v.37;No.247 1225-1233页 [查看摘要][在线阅读][下载 1565K] [下载次数：221 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 何世成;王昌建;刘文泽;刘秋;徐玉;唐小明;林源;王卫国;鲁杏华;邱立新;宋跃君;
为分析小反刍兽疫母源抗体的产生与消长规律,对3个养殖场内14只怀孕母羊产前1个月进行小反刍兽疫疫苗免疫,采样检测分娩前母羊和所产羔羊7日龄、14日龄、21日龄的血清抗体。结果显示:小反刍兽疫抗体阴性母羊所产小羊抗体持续阴性,而抗体阳性母羊所产羔羊母源抗体有84.6%的窝产阳性率,母源抗体的半衰期在21d以上。
2017年07期 v.37;No.247 1234-1236页 [查看摘要][在线阅读][下载 119K] [下载次数：182 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：0 ] - 秦岭松;钱晶;徐小洪;丁佳欣;李金斗;尹仁福;丁壮;
新城疫和禽流感是严重危害养禽业的两大动物疫病,其中基因Ⅶ型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)仍是当前的主要优势流行株。病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是由病毒结构蛋白装配而成的空心颗粒,不携带核酸,具有良好的安全性和免疫原性。本试验将AIV HA胞外域与NDV F基因胞内、跨膜域融合构建FcH9融合序列;进一步通过利用昆虫杆状病毒表达系统构建含有FcH9序列的重组杆状病毒rBV-FcH9,与实验室已构建rBV-M和rBV-HN共感染Sf9细胞,收集感染细胞上清,经蔗糖密度梯度离心法纯化嵌合VLPs。血凝血抑试验结果显示嵌合VLPs中HN和HA效价均为28;Western blot分析表明该VLPs可以与特异性阳性血清发生反应;透射电镜观察该VLPs具有典型的病毒粒子结构正,形态大小与野生型NDV相似。结果表明:本试验成功制备了包含有HN和HA蛋白的嵌合VLPs,为研制新型NDV-AIV二联疫苗候选株奠定基础,并为当前新城疫与H9N2亚型禽流感的防控提供策略。
2017年07期 v.37;No.247 1237-1242页 [查看摘要][在线阅读][下载 1164K] [下载次数：201 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 唐雨博;徐文章;孙艺学;王杨;邓颖琦;王伟利;丛彦龙;
利用重叠PCR技术对H9N2亚型流感病毒Y280亚系毒株A/Chicken/Jilin/DH102/2012(H9N2)的血凝素受体结合区220-loop中相对保守的226位和227位进行了氨基酸置换,并通过反向遗传技术拯救了定点突变病毒。固相酶联试验结果显示:226位为L时,病毒偏嗜结合人型受体;226位为Q时,病毒偏嗜结合禽型受体;226位为M时,病毒同时具有与2种类型受体结合的能力,但偏嗜结合人型受体;227位为Q或M时,病毒均偏嗜结合人型受体。因此,相比于227位,Q226L突变足以改变病毒的受体偏嗜性。由于近年来90%以上的H9N2病毒分离株HA226位氨基酸都是L,推测226L是H9N2病毒感染哺乳动物的重要位点。
2017年07期 v.37;No.247 1243-1248页 [查看摘要][在线阅读][下载 1660K] [下载次数：204 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 李志军;范莉莉;张惠文;杨增岐;萧飒;王兴龙;党如意;张淑霞;
采集患病雏鸡脑组织样品制成组织悬液进行SPF鸡胚传代,通过免疫组化试验、动物试验、RT-PCR扩增VP1基因片段对病原进行鉴定,并对基因序列进行遗传进化分析,结果分离了1株禽脑脊髓炎病毒(AEV),命名为XY13株。免疫组化结果显示脑组织切片中存在大量的深棕黄色着色区域;动物试验中雏鸡出现了震颤、共济失调等禽脑脊髓炎(AE)临床症状,剖检发现脑组织软化、有散在出血点;RT-PCR扩增出的目的片段长度为288bp,编码96个氨基酸;序列分析表明AEV XY13株分离株与参考毒株的核苷酸同源性为74.6%~99.7%,氨基酸同源性为76.0%~97.9%;进化树分析表明AEV XY13与SX株的处于相同的分支,与1143、YL、L2Z株同处于一个较大的分支上,而与VanReokel、NH-937和204C株则处于不同的分支上,表明亲缘关系较远;进化距离预测结果表明AEV XY13株与1143、L2Z、SX和YL株的进化距离均小于0.011,而与NH-937、Van Reokel和204C株的进化距离则大于0.060。结果表明:本分离株为AEV,与目前已知的AEV毒株在进化关系上存在一定的差异。
2017年07期 v.37;No.247 1249-1254页 [查看摘要][在线阅读][下载 707K] [下载次数：198 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 张志强;吴同垒;李永慧;张召兴;李佩国;李蕴玉;贾青辉;史秋梅;
利用PCR方法从银狐大肠杆菌基因组中克隆出htra基因,测序无误后将其构建到pET32a原核表达载体上,重组载体转化BL21大肠杆菌诱导重组蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western blot方法验证重组蛋白得到很好表达;用亲和层析方法纯化蛋白,纯化的蛋白免疫小鼠,所得的多抗血清能够特异性识别大肠杆菌HtrA蛋白,为研究HtrA蛋白的作用机制奠定基础。
2017年07期 v.37;No.247 1255-1260页 [查看摘要][在线阅读][下载 1537K] [下载次数：254 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：18 ] |[阅读次数：0 ]
- 王琪;盖微微;闫飞虎;冯娜;吴芳芳;赵梓淇;曹增国;李岭;迟航;金宏丽;邱泊宁;崔健男;赵永坤;王铁成;高玉伟;王化磊;杨松涛;夏咸柱;
原核表达并纯化马尔堡病毒(Marburg virus,MARV)糖蛋白(glycoprotein,GP)受体结合域(receptor binding domain,RBD)蛋白,并以此为抗原免疫家兔制备抗MARV-GP-RBD多克隆抗体。参照GenBank提供的MARV GP全基因序列,找到主要抗原表位区域,设计特异性引物,采用PCR方法扩增RBD基因,扩增产物经双酶切(EcoRⅠ/XhoⅠ)后定向克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pET-30a(+)-GP-RBD,转化BL21(DE3)感受态表达宿主菌,在不同条件下(时间、IPTG浓度、温度)诱导表达目的蛋白,并用His-Band N+柱进行亲和层析纯化;以纯化的重组pET-30a(+)-GP-RBD蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。通过SDS-PAGE、Western blot和IFA鉴定重组蛋白的反应原性及免疫原性。结果显示:PCR扩增到长度为453bp的RBD基因片段;构建的重组质粒pET-30a(+)-GP-RBD经双酶切后得到与目的片段长度相同的特异性条带,测序结果显示没有突变;转化产物在培养7h、终浓度为0.4mmol/L IPTG和37℃条件下能够充分诱导目的蛋白表达,得到相对分子质量为25 000的重组蛋白,主要以包涵体形式存在,BCA试剂盒产量测定,每升诱导的重组菌可纯化约20mg纯度较高的目的蛋白;Western blot检测证实重组pET-30a(+)-GP-RBD蛋白能同时被抗His标签的单抗和兔源多抗识别并发生特异性反应,证明重组蛋白有良好的反应原性;IFA鉴定证实所制备的兔源多抗能够特异性识别表达MARV GP蛋白的重组杆状病毒rBacmid-GP-VP40,证明重组蛋白具有良好的免疫原性。结果表明:成功表达、纯化了MARV GP RBD蛋白,并完成了兔源多抗的制备,为MARV亚单位疫苗的制备和抗原、抗体检测方法的建立奠定基础。
2017年07期 v.37;No.247 1261-1267页 [查看摘要][在线阅读][下载 896K] [下载次数：256 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 纪方晓;王衡;付新亮;王丽芳;白小磊;陈耀;郑运;何淑仪;张桂红;
为了解广东地区猪戊型肝炎的感染情况,本试验于2015年在广东不同猪场收集了2月龄内猪胆汁73份,RTnPCR检测、全基因组测序、同源性及进化分析结果显示:猪感染戊型肝炎的阳性率为6.8%(5/73),5个ORF2部分核苷酸序列同源性为87.2%~99.4%,属于基因4型,4b、4h亚型。对4b亚型中的1个阳性样品(GZHD)株进行全基因测序,其核苷酸序列与swGX40(EU676172)同源性最高为96.5%,与广东株SS19(JX855794)同源性为93.9%,与人源戊型肝炎病毒(HEV)株CVS-Sie10(LC042232)同源性为94.8%。结果表明:广东地区猪群间HEV流行毒株仍以基因4型为主,且为揭示戊型肝炎的跨种传播提供了新的分子生物学依据。
2017年07期 v.37;No.247 1268-1273页 [查看摘要][在线阅读][下载 1251K] [下载次数：162 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：1 ] - 周建波;胡丽萍;马宁宁;董雯雯;邵明旭;朱丽君;魏凯;朱瑞良;
2015年春,山东滕州某规模化羊场新生羔羊出现严重的腹泻,并且部分羔羊死亡。对该羊场病死羔羊进行剖检后,共分离到4株细菌(分别命名为PM1、PM2、PM3、PM4)。对所分离的细菌进行形态特征、生化试验以及16S rDNA遗传分析,判定该4株菌均为奇异变形杆菌。16SrDNA系统发育及同源性分析显示:4株分离菌与其他11株奇异变形杆菌的同源性为99%以上,其中与中国Hu株、马来西亚PPB3株以及印度BAB-199株位于同一个分支上,且与中国的Hu株的进化关系最近;4株分离菌之间的同源性为100%,判断为同1株菌。细菌生长曲线、药敏试验、毒力试验、毒素测定试验以及游散行为分析结果表明,该分离菌于14h左右达到生长稳定期,且对环丙沙星、左氟沙星最为敏感;对小鼠有强致病性,分离菌培养液的无菌滤液对小鼠无毒性作用;在含0.5%琼脂的LB平板上迁徙速度最快,且在含琼脂1.5%和2.0%的LB平板上呈圆环样周期运动。该研究结果为羊奇异变形杆菌病的防控提供了基础。
2017年07期 v.37;No.247 1274-1282页 [查看摘要][在线阅读][下载 2125K] [下载次数：217 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ] - 朱顺;彭忠;王帅;王豪男;张洪峰;常宇慧;郭龙;陈焕春;吴斌;
以2014-2015年从我国部分省市规模化养殖场中分离的55株沙门菌为对象,选取临床常用的12种抗菌药,用微量肉汤稀释法检测所分离的沙门菌的耐药性。结果显示:测试的12种药物中沙门菌对甲氧苄啶最敏感,耐药率只有1.82%,除此之外对其他11种药物的耐药率均在50%以上,而且对其中的氨苄西林、氟苯尼考、多西环素和四环素等4大类共计7种药物的耐药率在80%以上;在多重耐药性分析方面,1株沙门菌对所有药物完全敏感,另外54株菌的药物耐受数量在5种到11种之间,其中耐受10种药物是所有沙门菌中最大的一类菌株,占总数的30.91%。根据菌株的耐药特点,设计了23对包含各类药物主要耐药基因的引物,用PCR法检测相应耐药菌株对该耐药基因的携带情况,一共检测出了15种耐药基因,其中检出率最高的几种基因分别是sul2基因(检出率78.43%)、sul1基因(检出率60.78%)和tet A基因(检出率72.55%)等。此外,对于耐受喹诺酮类药物的菌株还检测了其耐药决定区域基因gyrA和parC所编码氨基酸的突变情况。测序结果表明,gyrA基因所编码氨基酸序列的第83个位点和第87个位点发生了突变,分别由酪氨酸变成了丝氨酸或亮氨酸、苯丙氨酸,由天冬氨酸变成了天冬酰胺或酪氨酸,parC基因所编码氨基酸序列没有发现突变的情况。
2017年07期 v.37;No.247 1283-1287页 [查看摘要][在线阅读][下载 222K] [下载次数：181 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 马树薇;杨贵燕;朱要宏;刘光男;
本试验收集了全国范围内23个猪场125份21~70日龄临床腹泻仔猪肠内容物样品,用以分离和鉴定沙门菌和奇异变形杆菌。结果显示:共分离得到23株沙门菌分离株及31株奇异变形杆菌分离株,其中较为流行的沙门菌为鼠伤寒沙门菌。同时,对SS琼脂和XLD琼脂上的沙门菌和奇异变形杆菌进行对比鉴定,提高了沙门菌和奇异变形杆菌分离鉴定的准确率。
2017年07期 v.37;No.247 1288-1291+1308页 [查看摘要][在线阅读][下载 768K] [下载次数：275 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：0 ] - 吴金花;布日额;王金良;陈金龙;锡林高娃;孙立杰;王华;杜长智;白文丽;
为获得具有无乳链球菌膜表面相关蛋白sip和磷酸甘油激酶pgk及纤连蛋白FbsA三重活性的多亚单位融合蛋白,研究其作为无乳链球菌亚单位疫苗候选抗原的可行性,根据GenBank中已发表的无乳链球菌sip、pgk及FbsA基因的核苷酸序列,利用DNAStar软件对蛋白的抗原表位序列进行分析并设计合成包括重叠PCR引物共4对引物,通过重叠PCR技术将前2个基因主要抗原区域进行拼接后插入pET30a(+)载体,再将第3个基因插入。为减少三重基因串联表达过程中3个蛋白之间空间构象的干扰,在3个基因连接处各引入1段45bp的柔性linker,结果重组基因在BL21感受态中实现了可溶性表达,表达的蛋白约62 000;Western blot试验表明多亚单位融合蛋白可被无乳链球菌多抗识别,且由此融合蛋白制备小鼠多抗能够识别sip、pgk及FbsA等3个蛋白;这表明构建的多亚单位融合蛋白可能具备sip、pgk及FbsA蛋白的三重活性,而且在小鼠的攻毒保护性试验中,重组多亚单位融合抗原对攻毒小鼠的保护优于单个蛋白。本试验为牛无乳链球菌性乳腺炎新型疫苗的研究提供了一定的参考数据。
2017年07期 v.37;No.247 1292-1299页 [查看摘要][在线阅读][下载 2117K] [下载次数：154 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：0 ]
- 袁学军;冯强;宁淑杰;范晓杰;姜淑贞;黄丽波;
为研究交感神经对妊娠早期子宫内DKK-1和Wnt-1的调控作用,选取180~200日龄健康的性成熟Wistar雌性大鼠,随机分为对照组和处理组,处理组采用静脉注射6-OHDA损毁交感神经,用免疫组化法和qRT-PCR法,观察和分析交感神经对妊娠早期大鼠子宫内膜的DKK-1和Wnt-1蛋白及mRNA相对表达量的影响。结果显示:6-OHDA损毁交感神经后,对卵巢排卵数无显著性影响,但子宫囊胚数量显著下降、囊胚发育延迟,导致子宫腔上皮和腺上皮细胞自分泌DKK-1和Wnt-1紊乱,呈现与正常状态相反的变化趋势。结果表明:在着床窗口期,交感神经通过影响DKK-1对Wnt-1信号分子的调控作用而影响囊胚着床、发育。
2017年07期 v.37;No.247 1300-1308页 [查看摘要][在线阅读][下载 5765K] [下载次数：86 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 张永红;霍珊珊;张建楼;徐建;左玉柱;王利月;崔丹;李秀锦;仲飞;
为探讨猪肺泡表面活性蛋白A(SP-A)的抗菌和抗病毒活性,需要从猪肺泡液和羊水中分离纯化SP-A。首先通过化学交联法将麦芽糖共价交联在Sepharose胶粒上,制成能够与SP-A结合的胶粒,即麦芽糖-Sepharose(MS)。采集肺泡灌洗液(BLAF)和羊水(AF),以11 000r/min转速离心40 min获得富含SP-A的沉淀;将沉淀溶解于含8mol/L尿素的缓冲液I中使SP-A变性,再以无尿素的缓冲液I透析使其复性。然后在含Ca2+的结合缓冲液中用MS吸附SP-A,用含EDTA的洗脱液洗脱,洗脱的SP-A过Sephadex G-75凝胶柱得到纯化的SP-A。SDS-PAGE和Western blot鉴定结果显示:在相对分子质量为35 000和70 000处出现特异的SP-A蛋白带(或杂交带)。菌体凝集试验显示:SP-A具有凝集E.coli的作用,表明制备的SP-A具有生物活性。抑菌试验证实SP-A对致病性E.coli、肠沙门杆菌、肺炎链球菌和金黄色葡萄球菌的增殖均有不同程度的抑制作用,特别是对E.coli和肠沙门杆菌抑制作用更为明显。抗病毒检测结果显示:SP-A可明显抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在MARC-145细胞中的增殖,同时对猪细小病毒(PPV)在PK-15细胞中的增殖也有一定的抑制作用。结果表明:制备的猪SP-A在体外具有明显的抗菌和抗病毒活性,这为以后进一步研究猪SP-A的生物学特性及抗菌、抗病毒活性提供了必要的条件。
2017年07期 v.37;No.247 1309-1315页 [查看摘要][在线阅读][下载 1193K] [下载次数：109 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 郭虎;章栩铖;胡媛绣珠;尚美奇;安铁洙;王春生;
通过比对人、鼠、兔和牛的Nanog启动子保守区设计引物,PCR扩增绵羊Nanog基因启动子序列并分析其调控位点。将其连接到去掉自身CMV启动子的pAcGFP1-N1载体上,构建一个由Nanog启动子带动的真核表达载体(SNanog-pAcGFP1-N1),即构建一个能由该启动子序列带动并产生绿色荧光蛋白(GFP)的真核表达载体,并用脂质体法转染入终末分化细胞(小鼠成纤维细胞和绵羊成纤维细胞)、胚胎干细胞和小鼠胚胎,检测其表达活性。结果显示:成功克隆出1 836bp Nanog启动子序列,通过分析发现该序列含有SP1结合位点、CAAT框、TATA框等功能区;当转染SNanog-pAcGFP1-N1重组质粒后,小鼠胚胎和小鼠胚胎干细胞中能检测到绿色荧光,且在转染72h后达到最大荧光强度,而在小鼠成纤维细胞和绵羊成纤维细胞中不能观察到GFP。结果表明:本试验成功克隆获得绵羊Nanog启动子,所构建的真核表达载体具有在多能干细胞中特异性表达活性。
2017年07期 v.37;No.247 1316-1321页 [查看摘要][在线阅读][下载 903K] [下载次数：134 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 马玉芳;李萍;潘晓丽;陈赛红;秦韬;李健;黄一帆;
50只雄性昆明小鼠适应性饲养1周后随机分为5组,分别为空白对照组、模型组及金线莲多糖(ARP)低、中、高剂量组,每组10只;第1~3天,除空白对照组注射生理盐水外,其他各组腹腔注射环磷酰胺(CTX)80mg/kg,连续3d;第4~10天,空白组和模型组灌服蒸馏水,其他组分别灌服100,200,400mg/kg的ARP。末次给药24h后,采集脾脏,qRT-PCR检测试验小鼠脾脏细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6)及转录因子(T-bet、GATA-3)mRNA表达。结果显示:与空白对照组相比,模型组IL-2、GATA-3 mRNA表达量降低,IL-4、IL-6、IFN-γ、T-bet mRNA表达量升高;与模型组相比,ARP高剂量组小鼠IL-4mRNA相对表达量降低(P<0.05),中、高剂量组IL-6、IFN-γmRNA相对表达量降低(P<0.05),ARP组T-bet的相对表达量降低(P<0.05),高剂量组GATA-3的相对表达量升高(P<0.05)。结果表明:ARP通过上调或下调小鼠脾脏细胞因子与转录因子的表达,调节免疫抑制小鼠的免疫功能。
2017年07期 v.37;No.247 1322-1326页 [查看摘要][在线阅读][下载 920K] [下载次数：358 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：0 ] - 王冰洁;郑王龙;司梦雪;刘青;邹辉;顾建红;袁燕;刘学忠;刘宗平;卞建春;
为探讨玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)雄性生殖毒性的机理,本试验展开了ZEA对睾丸支持细胞细胞周期的影响以及自噬在ZEA对睾丸支持细胞细胞周期影响中的作用研究。试验以原代睾丸支持细胞为材料,分别以浓度为0(对照组),0.1,1,10,20,30μmol/L ZEA进行染毒,24h后利用CCK-8法、流式细胞术、免疫荧光技术和Western blot等进行ZEA对睾丸支持细胞的活率、细胞周期分布、LC3聚点、自噬及细胞周期相关蛋白等影响的检测。流式细胞术检测结果显示:与对照组比较,当ZEA浓度高于10μmol/L时,G0/G1期比例显著下降(P<0.05),G2/M期的比例极显著升高(P<0.01);与20μmol/L ZEA组相比,自噬抑制剂(CQ)+20μmol/L ZEA组细胞周期的G2/M期的比例显著降低(P<0.05),自噬促进剂(RAP)+20μmol/L ZEA组细胞周期的G2/M期的比例显著升高(P<0.05)。免疫荧光检测结果显示,当ZEA浓度高于10μmol/L时,产生LC3荧光信号的细胞数目较对照组呈极显著性升高(P<0.01)。Western blot检测结果显示:与对照组比较,当ZEA浓度高于10μmol/L时,LC3蛋白的表达量呈极显著性升高(P<0.01),CDK4、CyclinD1等细胞周期蛋白的表达显著降低(P<0.05);与20μmol/L ZEA组相比,CQ+20μmol/L ZEA组CyclinD1、CDK4等蛋白的表达量上升(P<0.05),RAP+20μmol/LZEA组CyclinD1、CDK4等的表达量下降(P<0.05)。结果表明:ZEA能诱导睾丸支持细胞发生自噬,并使睾丸支持细胞发生G2/M期阻滞,且存在剂量依赖性;促进自噬可导致细胞周期阻滞在G2/M期,造成M期延长,而自噬的缺陷可以部分逆转ZEA诱导睾丸支持细胞周期G2/M期的阻滞。在一定浓度范围内,ZEA能显著抑制睾丸支持细胞的增殖,细胞自噬在这一过程中起促进作用。
2017年07期 v.37;No.247 1327-1333页 [查看摘要][在线阅读][下载 1334K] [下载次数：262 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ]
- 王玲;郭志廷;林春全;张晓松;罗小琴;杨珍;郭爱民;
通过评价常山口服液的安全性,为临床安全用药提供试验依据。在小鼠急性毒性试验基础上,进行常山口服液对大鼠的亚急性毒性试验研究,通过病理组织学观察其毒性损伤的主要靶器官。取100只Wister大鼠随机分成4个给药组和1个空白对照组,给药组按照1.20,0.60,0.30,0.15g/kg剂量,连续灌胃给药30d,所有大鼠于给药后分3次(10,20,30d)扑杀,观察测定其临床症状、体质量、采食量、脏器系数、血常规、血液生化、病理及组织学等指标。结果显示:常山口服液可显著降低特高、高及中剂量组的平均日采食量和饲料利用率,降低特高剂量组平均日增重(P<0.01),但对大鼠体质量的增加及生长发育无抵制作用;随着药物剂量的增加和给药时间的延长,常山口服液会对各剂量组的凝血系统指标造成一定影响,与给药剂量无显著相关性,推测无明显毒性反应;常山口服液对大鼠主要脏器的总体损伤程度为特高剂量组>高剂量组>中剂量组>低剂量组>空白组,高剂量组常山口服液的脏器质量及相对质量与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01);组织病理学检查发现,特高、高剂量组大鼠脏器出现不同程度的肿大、淤血、变性和坏死,中、低剂量组的病变程度在给药10,20d时较对照组差异不大,至30d时毒性损伤以肝、肾、脾的组织病理变化较为明显。结果表明:常山口服液高剂量、长期给药,其毒性损伤的靶器官主要为肝脏、肾脏和脾脏,呈现"时-毒"和"量-毒"关系。在临床合理剂量及合理用药的条件下,其毒性总体较低,用药安全性较高。
2017年07期 v.37;No.247 1334-1342页 [查看摘要][在线阅读][下载 2018K] [下载次数：313 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：0 ] - 姜建强;刘图雅;戴钦;安希文;图雅;包花尔;王瑞;王秀珍;李盈;额尔敦木图;
试验选取6峰12岁健康双峰母驼,试验组与对照组各3峰。周期14d,分为一期(感染前,1~3d)、二期(发病期间,4~12d)、三期(蝇蛆落地后,12~14d),每天采集血液获得血清保存,于第4天对试验组进行人工感染蝇蛆。结果显示:对照组一期与试验组一期3种细胞因子含量均无显著性差异(P>0.05);对照组二期与试验组二期IL-10、IFN-γ含量差异显著(P<0.05),试验组含量较高,IL-4含量差异不显著(P>0.05);在三期中,试验组IL-4含量较低,IFN-γ含量较高且与对照组比较均差异显著(P<0.05)。对照组一、二、三期之间3种细胞因子含量差异均不显著(P>0.05);试验组IL-4含量一、二、三期间无显著性差异(P>0.05),IL-10二期含量高于一期且差异显著(P<0.05),IFN-γ二、三期含量均高于一期且差异显著(P<0.05)。结果表明:阴道蝇蛆病对双峰驼外周血清中IL-4含量基本没影响,但会使IL-10、IFN-γ含量升高,在蝇蛆落地后IL-10含量会降低,IFN-γ仍维持在较高水平。
2017年07期 v.37;No.247 1343-1347页 [查看摘要][在线阅读][下载 1583K] [下载次数：76 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 袁丽花;刘付国树;刘娟;闫志强;杨婷婷;
采用LPS人工复制仔猪发热模型,攻毒5h后按要求给于清开灵。监测各时间段的体温以及在0,5,30,72h各时段采血用ELISA法检测PGE2、cAMP、α-MSH和AVP的含量。结果显示:在注射LPS时,各组PGE2、cAMP、AVP、α-MSH的含量无显著性差异(P>0.05);在注射LPS 5h后,与空白组相比,模型组PGE2、cAMP、AVP和α-MSH的含量升高;在30h时,与模型组相比,清开灵各组PGE2、cAMP含量降低,AVP含量升高,且差异显著(P<0.05);在72h时,清开灵各组PGE2、cAMP、AVP和α-MSH的含量与空白组比较差异不显著(P>0.05)。体温与上述相关因子存在显著相关性。结果表明:清开灵有明显的解热作用,其机制可能是通过诸多调节因子共同调节的作用。
2017年07期 v.37;No.247 1348-1352+1371页 [查看摘要][在线阅读][下载 1190K] [下载次数：144 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 杨云乔;郑建高;姜军华;黄旭伟;汤里平;尚秋辰;谢鑫峰;张友敏;金文杰;许小琴;
采用复方中药和西药抗生素对流行性腹泻病毒感染猪进行临床治疗,选取12~20日龄感染流行性腹泻病毒腹泻猪,通过观察所需治愈时间、体质量变化、治愈率和复发率以确定治疗效果;通过对比中药治疗组、西药对照组治愈猪与治疗失败猪的胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠的石蜡切片,对比治疗前后血清中TGF-α、TGF-β、IgM、IgA、IgG、IL-1和IL-4的变化,进一步确定治疗效果并探究其机理。结果显示:临床治疗方面,中药治疗组平均4.42d治愈,治愈率86.67%,复发率0.00%,体质量最大下降0.59%,11d增重22.44%;西药对照组平均4.91d治愈,治愈率84.61%,复发率7.69%,体质量最大下降5.08%,与中药组相比差异性极显著,11d增重20.94%。石蜡切片方面,治疗后中药治疗组基本恢复正常;西药对照组局部炎症反应明显,黏膜修复进度较慢。血清指标方面,中药治疗组和西药组对照组IgM含量均比治疗前显著升高,中药治疗组和西药对照组IL-1均比治疗前显著降低,西药对照组IL-4比治疗前显著升高。结果表明:采用复方中药治疗猪流行性腹泻有较好的疗效,且治疗效果优于抗生素疗法,这可能与复方中药可以加速组织修复、减轻炎症反和调节免疫有关。
2017年07期 v.37;No.247 1353-1358页 [查看摘要][在线阅读][下载 2005K] [下载次数：612 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：26 ] |[阅读次数：0 ] - 刘锁珠;李龙;付冠华;王利红;强巴央宗;李家奎;
试验选用藏猪(n=5)新鲜粪样作为发酵接种物,以小麦、豌豆、燕麦和油菜秸秆为纤维底物分别进行体外发酵,测定产气量、发酵液中挥发性脂肪酸(volatile fatty acid,VFA)和铵态氮(NH3-N)的含量以及各纤维底物中纤维素和半纤维素降解率。结果显示:经发酵,各底物中纤维素和半纤维素的含量显著降低,豌豆秸秆中半纤维素降解率显著高于其他3种底物;豌豆秸秆产气量最高,且理论最大产气量显著高于其他3种底物,油菜秸秆的产气延滞时间显著低于其他3种底物;各底物发酵液中,乙酸和丙酸含量最多,且豌豆秸秆乙酸含量显著高于其他3种底物,而燕麦秸秆丙酸含量显著高于其他3种底物。各底物发酵液中铵态氮质量浓度为7.09~11.53g/L。结果表明:藏猪肠道微生物能够分解粗纤维,并且对豌豆秸秆的利用率较高,为藏猪非常规饲料资源的开发和利用提供理论依据。
2017年07期 v.37;No.247 1359-1364页 [查看摘要][在线阅读][下载 561K] [下载次数：335 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 李娜;姚大伟;许家荣;杨芸;杨德吉;
用凹凸棒黏土和硝酸铜溶液采用离子交换的方法制备成载铜凹凸棒黏土,将载铜凹凸棒黏土添加于饲料中研究其对鸡白痢的预防和治疗效果。预防试验:将100只1日龄AA蛋鸡随机分成5组,空白组,感染组,预防1组,预防2组,氯霉素预防组。空白组不做任何处理,饲喂正常饲料;感染组于1~15日龄饲喂正常饲料,7日龄灌胃鸡白痢沙门菌菌液;预防组1~15日龄饲喂不同含量的载铜凹凸棒黏土和氯霉素作为预防性给药,7日龄灌胃鸡白痢沙门菌菌液。治疗试验:将100只1日龄鸡随机分成5组,空白组,感染组,治疗1组,治疗2组,氯霉素治疗组。空白组不做任何处理,饲喂正常饲料;感染组于7日龄灌胃鸡白痢沙门菌菌液,饲喂正常饲料;治疗组7日龄灌胃鸡白痢沙门菌菌液,饲喂不同含量的载铜凹凸棒粘土和氯霉素作为治疗性给药。试验过程中监测记录发病率、死亡率、保护率等,平板法测定盲肠和肝脏带菌情况,称重法测定生产性能,常规切片观察空肠组织形态。预防试验结果显示:添加1%的载铜凹凸棒黏土组鸡白痢的发病率(20%)、死亡率(10%)降低,肝脏和盲肠沙门菌的检出率降低,鸡的生产性能提高,肠道黏膜完整,且效果好于添加0.05%氯霉素组和添加0.5%凹凸棒黏土组。治疗试验结果显示:添加1.5%的载铜凹凸棒黏土组鸡白痢的治愈率(75%)增加,死亡率(10%)降低,肝脏和盲肠沙门菌的检出率降低,鸡的生产性能提高,效果好于添加0.1%氯霉素组和添加1%凹凸棒黏土组。结果表明:载铜凹凸棒黏土具有抗菌和肠道黏膜保护作用,能够预防和治疗鸡白痢,降低鸡白痢沙门菌对机体的损伤,提高鸡的生产性能。
2017年07期 v.37;No.247 1365-1371页 [查看摘要][在线阅读][下载 412K] [下载次数：141 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ]
- 魏静元;刘成雁;王志嘉;李红;王歆睿;孙晶;
为评估hApoCⅢ转基因小型猪的环境生物安全性,采用PCR技术,通过检测其粪便、接触的土壤、肠道菌、代孕母猪的血液DNA以及与之接触的普通猪DNA是否发生了水平基因转移。同时通过大鼠90d经口毒性试验,检测大鼠的血液、生理生化指标和脏器系数是否发生了显著性变化。结果显示:与对照组相比,hApoCⅢ转基因小型猪的肠道内微生物菌群、普通猪的血液和代孕母猪的血液、周围环境土壤都没有发生基因水平转移现象。与对照组相比,试验组大鼠各项观察指标及病理检测均正常,血液、生化指标均在正常范围;初步显示hApoCⅢ转基因小型猪对生物环境是安全的,没有对环境造成不利影响。
2017年07期 v.37;No.247 1372-1378页 [查看摘要][在线阅读][下载 527K] [下载次数：67 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 杜泓明;汪晓东;王晓磊;杨平平;秦贵信;甄玉国;
通过在饲粮中添加不同的益生菌培养物,探讨其对断奶仔猪生长性能、免疫功能及血液生化指标的影响。选用30头体况良好、胎次接近、体质量一致的军牧一号断奶仔猪,公母各半,随机分为5组,每组6个重复,每个重复1头猪。对照组饲喂基础日粮,酵母组、乳酸组和复合组分别在基础日粮基础上添加1.8‰酵母培养物、1.6‰乳酸菌培养物和1.8‰酵母培养物+0.8‰乳酸菌培养物。预饲期7d,正试期28d。结果显示:饲粮中添加酵母培养物和乳酸菌培养物可极显著提高断奶仔猪生长性能(P<0.01),而复合组对断奶仔猪生长性能的影响不显著(P>0.05)。同时,所有的益生菌产物添加组均能提高断奶仔猪血清IgG、IL-6和IFN-γ的含量;其中,IgG含量显著高于抗生素组(P<0.05),IFN-γ含量显著高于对照组与抗生素组(P<0.05)。结果表明:饲粮中添加酵母培养物对断奶仔猪生长性能、免疫功能及血液生化指标的促进效果最佳。
2017年07期 v.37;No.247 1379-1384+1400页 [查看摘要][在线阅读][下载 154K] [下载次数：403 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：31 ] |[阅读次数：0 ] - 任子利;宋天增;张健;彭文超;贺昭昭;赵彦玲;
在藏猪精液的冷冻液中添加不同质量浓度的红景天多糖(0,2,4,6,8,10mg/L),制成高密度细管冻精,以冷冻解冻后精子活率、精子畸形率、精子顶体完整率和质膜完整率为精液品质的评价指标,筛选最适红景天多糖添加质量浓度;用甲基化荧光定量法检测3组(鲜精组、未添加组、最适添加组)精子基因组DNA甲基化的水平。结果显示:添加红景天多糖质量浓度为6mg/L组的精子活率显著高于其他组(P<0.05),该组精子畸形率、精子顶体完整率、精子质膜完整率也显著好于未添加组(P<0.05);这3组精子基因组的DNA甲基化水平(0.610 5±0.080 0,0.945 7±0.043 7,0.680 2±0.051 0)中,最适添加组虽显著高于鲜精组(P<0.05),但却显著低于未添加组(P<0.05)。结果表明:在藏猪精液冷冻液中添加质量浓度6mg/L的红景天多糖不仅可以明显改善藏猪精液冻后品质,而且可以明显减少冷冻对藏猪精子基因组DNA甲基化水平的影响,这将为提高藏猪精液冷冻保存效果的进一步研究提供参考。
2017年07期 v.37;No.247 1385-1388+1393页 [查看摘要][在线阅读][下载 273K] [下载次数：339 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：17 ] |[阅读次数：0 ] - 王思珍;郭闯;郭猛;贺宽军;曹颖霞;杜小燕;陈振文;
巴马小型猪(Bama,BM)和贵州小型猪(Guizhou,GZ)是我国自行培育的2个重要的小型猪封闭群,但长期以来对其群体遗传结构状况并不十分清楚。本试验应用本实验室筛选的32个微卫星位点组合对这2个小型猪封闭群进行了遗传结构分析。结果显示:BM封闭群的平均观察等位基因数和有效等位基因数分别是5.750 0和2.572 7,GZ封闭群的相应参数为6.187 5和3.783 7;2个猪群的平均杂合度分别是0.542 8(BM)和0.697 8(GZ),多态信息含量分别是0.546 9(BM)和0.729 6(GZ)。结果表明:GZ猪群的遗传变异程度略高于BM猪群,但它们都是比较好的封闭群群体,符合封闭群小型猪的遗传要求。
2017年07期 v.37;No.247 1389-1393页 [查看摘要][在线阅读][下载 130K] [下载次数：137 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 张楠;张莹;曹金山;
采用免疫荧光法,使用角蛋白鉴定奶牛输卵管上皮细胞;采用荧光定量PCR法检测奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白mRNA的表达;采用Wsetern blot法检测了奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的表达。结果显示:加入butaprost(EP2受体激动剂,10~(-6) mol/L)能促进输卵管蛋白的表达,加入fluprostenol(FP受体激动剂,10~(-6) mol/L)能抑制输卵管蛋白的表达。结果表明:PGE2在奶牛输卵管上通过激活EP2受体上调输卵管蛋白的表达,PGF2α通过激活FP受体下调输卵管蛋白的表达。
2017年07期 v.37;No.247 1394-1400页 [查看摘要][在线阅读][下载 1125K] [下载次数：96 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 赵晓娥;刘玉太;惠琦辉;葛均邦;魏强;马保华;
利用周期依赖性蛋白激酶抑制剂(roscovitine,ROS)诱导体外培养山羊的卵母细胞核质同步成熟。用40μmol/L的ROS预处理山羊卵母细胞8h后转入常规成熟培养8,12,16h,记为(8+8,8+12和8+16),统计0,8,8+8,8+12,8+16h卵母细胞核成熟情况;用彗星试验检测8+16h时卵母细胞的老化程度;在激光共聚焦显微镜(Olympus,Tokyo,Japan)下观察8+16h时卵母细胞的皮质颗粒迁移情况;对体外培养8+16h卵母细胞进行孤雌激活和体外培养,统计孤雌激活胚的体外发育情况;以上试验都以常规培养相同时间为对照。结果显示:山羊卵母细胞在体外核成熟抑制培养8h时,处于GV期的卵母细胞为59.16%,与对照组(25.75%)差异显著(P<0.05);8+8h和8+12h时,到达MⅡ期的卵母细胞的比率为19.75%和28.93%,与对照组(40.78%,53.10%)差异显著;8+16h时,到达MⅡ期的卵母细胞比率(73.20%)与对照组(74.36%)无显著性差异(P>0.05);(8+16h)组有老化倾向的卵母细胞的比率(21.67%)显著低于对照组(35.67%);(8+16h)组卵母细胞的皮质颗粒完全迁移率(81.84%)与对照组(78.89%)差异不显著;(8+16h)组卵母细胞孤雌胚的囊胚发育率(38.60%)高于对照组(32.80%)(P>0.05)。结果表明:成熟液中添加40μmol/L ROS对山羊卵母细胞短时间(8h)核成熟抑制培养,然后转入常规成熟培养16h,即不改变山羊卵母细胞体外成熟的时间(24h),可有效延迟部分卵母细胞生发泡破裂(GVBD)的发生,不影响山羊卵母细胞核质的成熟,不降低MⅡ期的卵母细胞比率,可以降低有老化倾向卵母细胞的比率,提高山羊卵母细胞的后续发育能力。
2017年07期 v.37;No.247 1401-1407+1422页 [查看摘要][在线阅读][下载 1663K] [下载次数：212 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 史秀芬;王苏瑶;张雅飞;刘月琴;张英杰;
妊娠相关糖蛋白(pregnancy-associated glycoprotein,PAG)是一类动物妊娠后胎盘产生的特异性蛋白质,是判断妊娠的重要信号物质。为了获得绵羊妊娠相关糖蛋白PAG3的制备方法,以期通过检测绵羊体内的妊娠相关糖蛋白的含量来进行早期妊娠诊断。本试验通过原核表达生物工程合成的方法,将绵羊妊娠相关糖蛋白编码基因序列插入到表达载体pET20b中,利用原核表达转化大肠杆菌获得了融合His标签的目的蛋白PAG3。经过超声波裂解、His标签亲和层析的方法纯化获得了妊娠相关糖蛋白PAG3。
2017年07期 v.37;No.247 1408-1413页 [查看摘要][在线阅读][下载 2849K] [下载次数：137 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ]