预防兽医学

  • 表达1型和3型鸭甲型肝炎病毒VP1基因重组新城疫病毒的构建及其免疫原性

    郑文卿;宋敏训;李建亮;黄兵;李玉峰;于可响;刘存霞;马秀丽;崔言顺;

    为进一步研发安全有效的鸭甲型肝炎病毒(DHAV)多价疫苗,本研究以新城疫病毒(NDV)LaSota弱毒疫苗株为载体,构建出共表达DHAV-1和-3型VP1基因的重组病毒rLS-1VP1-2A-3VP1,并对其毒力、生物学特性进行鉴定。通过间接免疫荧光试验(IFA)验证DHAV-1和-3型VP1蛋白在细胞内能够有效表达。利用Western blot进一步验证重组病毒产生的中和抗体能和DHAV-1和DHAV-3VP1表达蛋白发生较强的反应。重组病毒rLS-1VP1-2A-3VP1保持了原重组疫苗株rLS-RFP对鸡胚的高滴度生长适应和低致病的特性。将重组病毒rLS-1VP1-2A-3VP1免疫种鸭1次,通过中和试验检测该重组病毒能够在鸭体内产生针对DHAV-1和DHAV-3的中和抗体,平均效价分别为1∶18.17和1∶16.60。本研究结果表明重组病毒rLS-1VP1-2A-3VP1具有作为鸭肝炎重组病毒活载体疫苗用于种鸭的潜力。

    2017年09期 v.37;No.249 1641-1647页 [查看摘要][在线阅读][下载 1466K]
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  • 针对nsp9基因的siRNA在Marc-145细胞上对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响

    赵孟孟;李华玮;何健;冯松林;张雅;张二芹;张桂红;

    为了验证猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)nsp9基因对PRRSV的复制影响,化学合成针对nsp9基因的siRNA,转染到Marc-145细胞中,接种PRRSV之后分别通过荧光定量和Western blot方法来测定病毒的滴度变化和表达情况。结果发现,转染siRNA的Marc-145细胞中病毒的滴度低于未转染特定siRNA的对照组,同时N蛋白的mRNA和蛋白水平均低于未转染特定siRNA的对照组。初步得出结论nsp9基因为病毒复制关键基因,针对nsp9基因的siRNA会在Marc-145细胞中抑制PRRSV的复制。

    2017年09期 v.37;No.249 1648-1652+1669页 [查看摘要][在线阅读][下载 334K]
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  • 猪圆环病毒2型orf2基因在奶山羊胎儿成纤维细胞中的表达与生物活性鉴定

    高珊;申培磊;侯书宝;徐洪龙;卢清侠;张勇;张改平;

    为获得稳定表达猪圆环病毒2型(PCV-2)orf2基因的奶山羊胎儿成纤维细胞,将PCV-2 orf2基因与筛选基因neo表达框串联插入到pBC1质粒,得到重组的真核表达载体pBC1-orf2-neo。然后采用脂质体介导法将重组质粒转染至奶山羊胎儿成纤维细胞(gFFs),经G418筛选获得具有稳定抗性的阳性gFFs细胞株。RT-PCR分析显示,在获得的阳性gFFs细胞株中能够扩增出689bp的orf2基因和1 953bp的neo表达框,与预期结果相符。Western blot分析显示,获得了约37 000的表达产物,且能够与兔抗PCV-2Cap蛋白抗体发生反应。结果表明,orf2基因成功整合到山羊胎儿成纤维细胞染色体上并能够正确表达,表达产物具有良好的反应原性,这为构建分泌Cap蛋白的奶山羊乳腺生物反应器奠定了理论和物质基础。

    2017年09期 v.37;No.249 1653-1658页 [查看摘要][在线阅读][下载 1188K]
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  • 猪病毒性腹泻(PED)疫苗免疫后母猪乳汁中PEDV IgA消长动态

    胡兴义;张双翔;冯旭芳;岳筠;王开功;文明;周碧君;程振涛;王伟;秦文学;王逊之;曲朝杰;

    为了解猪病毒性腹泻(PED)疫苗免疫后母猪乳汁中IgA抗体消长规律,筛选100头妊娠母猪,平均分为5组(4个试验组和1个对照组),采用"猪流行性腹泻病毒(PEDV)-猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)-猪轮状病毒(PoRV)三联弱毒疫苗"(PTR)和"PEDV-TGEV二联灭活疫苗"(PT)进行不同的免疫。其中,试验Ⅰ组产前40d和产前20d免疫PTR,试验Ⅱ组产前40d和产前20d免疫PT,试验Ⅲ组产前40d免疫PTR和产前20d免疫PT,试验Ⅳ组产前40d免疫PT和产前20d免疫PTR,对照组产前40d和产前20d注射生理盐水。通过PEDV IgA抗体检测试剂盒分别检测母猪分娩后0,1,2,3,5,7,10,14d各组乳汁中特异性PEDV IgA抗体水平。结果显示,试验组IgA水平明显高于对照组,其中试验Ⅰ、Ⅱ组与试验Ⅲ、Ⅳ组间差异极显著(P<0.01),而试验Ⅰ、Ⅱ组间以及试验Ⅲ、Ⅳ组间差异不显著(P<0.05)。结果表明,产前40d和产前20d交替使用PTR和PT的抗体滴度明显优于单一接种PTR或PT的抗体滴度。其中只注射PTR母猪分娩后10d乳汁对仔猪没有保护力,注射PT母猪分娩后7d乳汁对仔猪没有保护力。通过本试验基本上了解了PEDV母源抗体消长规律,为今后规模化猪场制定免疫程序提供理论支持。

    2017年09期 v.37;No.249 1659-1663页 [查看摘要][在线阅读][下载 216K]
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  • 浒苔多糖对犬冠状病毒灭活苗的免疫增强作用

    孙秋艳;沈美艳;李舫;李汝春;

    采用水煮醇沉法提取浒苔多糖,用PMP柱前衍生高效液相色谱串联质谱仪测浒苔多糖组成成分和含量,在犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)灭活苗中添加不同剂量的浒苔多糖,制备犬冠状病毒多糖灭活疫苗。选取30只40日龄的健康土狗随机分成6组,每组5只,Ⅰ~Ⅳ组为浒苔多糖疫苗组(浒苔多糖含量为10,20,30,40g/L),Ⅴ组为浒苔多糖对照组(浒苔多糖含量为30g/L),Ⅵ组为不含浒苔多糖组,各组分别于免疫后7,14,21,35,42,49,56d采血,进行犬冠状病毒抗体效价、淋巴细胞比率、淋巴细胞转化率、IL-2和IFN-γ各指标检测。结果表明,分离纯化后浒苔多糖含量为69.2%,浒苔多糖有6种成分,主要是鼠李糖和木糖;Ⅰ~Ⅴ组各指标均显著高于Ⅵ组(P<0.05),Ⅳ组各指标显著高于其他各组(P<0.05)。由此表明浒苔多糖可以显著提高犬对犬冠状病毒灭活疫苗的免疫作用,浒苔多糖用量对疫苗免疫作用有影响,这为浒苔多糖作为免疫增强剂的开发奠定基础。

    2017年09期 v.37;No.249 1664-1669页 [查看摘要][在线阅读][下载 426K]
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  • 西藏林芝地区仔猪白痢血清型及毒力基因检测

    刘鑫宇;张辉;李坤;兰彦芳;王蕾;李家奎;

    为探究西藏林芝地区仔猪白痢大肠杆菌优势血清型和毒力基因间的相关性,采用玻片凝集试验测定与仔猪白痢有关的血清型,PCR方法调查11种毒力基因。结果显示,在分离的81株藏猪源大肠杆菌里有72株检测到毒力基因,其中黏附素K88和CS31A分别检测到1(1.39%)和34(47.22%)株;肠毒素STa、STb和EAST1分别检测到10(13.89%),16(22.22%)和38(52.78%)株;毒力岛eaeA、irp2和ETT2分别检测到12(16.57%),44(61.11%)和56(77.78%)株。72株中有59株鉴定出9种血清型,其中有15株定型为O8(20.99%),11株定型为O64(16.05%),10株定型为O138(13.58%)。研究表明:O8、O64、O138为优势血清型,且O8与STa+STb相关,O107与肠毒素STa相关,O64与毒力岛eaeA+ETT2有关,毒力基因以EAST1+CS31A+irp2+ETT2组合检出率最高为18(25%)株。

    2017年09期 v.37;No.249 1670-1675页 [查看摘要][在线阅读][下载 302K]
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  • 山东省鸡源致病性大肠杆菌O-抗原混合血清型分析

    冯敏燕;林树乾;房玉波;李桂明;杨世发;赵增成;黄中利;傅剑;商晶;宋敏训;

    采用抗原抗体凝集反应,用常见的18种O因子血清测定从临床上分离鉴定的182株大肠杆菌的O抗原血清型。结果显示,山东地区鸡源大肠杆菌的优势血清型为O24,O15,O2,O127,O1,O18,O78,占检测菌株的41.21%,同时出现大量混合血清型,占检测菌株的24.18%。这是国内首次报道检测到大量的大肠杆菌O因子混合血清型,印证了国外研究人员对O-AGC核苷酸序列研究的结果,有助于最终对O抗原血清型进行更加准确的分类以及大肠杆菌疫苗的研制。

    2017年09期 v.37;No.249 1676-1679页 [查看摘要][在线阅读][下载 117K]
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  • 利用MLST技术探讨不同地区致病性耐药鸡源大肠杆菌的遗传进化关系

    王龙光;姜雯;逄春华;胡学远;赵思俊;王娟;黄秀梅;盖文燕;刘焕奇;曲志娜;

    选取来自山东等10省698株鸡源大肠杆菌为研究对象,分别利用PCR、微量肉汤稀释法、MLST技术方法进行系统进化群分群、耐药表型检测、分子分型,并采用Bio Numerics v4.0软件和SPSS20.0软件进行数据处理分析。结果显示,低致病群B_1群为48.85%(341/698)和非致病群A群24.64%(172/698)分布较多,高致病群D群20.20%(141/698)和B_2群为6.31%(44/698)。鸡源大肠杆菌耐药严重,12种药物的耐药率约在50%以上。B_2和D群菌株对8种抗菌药的耐药率高于A和B_1群菌株,其中对庆大霉素、大观霉素、头孢噻呋、氨苄西林和奥格门丁5种药物极显著性差异(P<0.01),对氟苯尼考和复方新诺明显著性差异(P<0.05)。135株高致病菌株经MLST分型得到48个ST型,ST117(12株)和ST354(12株)最多,其次是ST115(8株),ST2309(8株),ST10型(7株),ST69(6株),ST1011(5株),ST1158(5株)。有29个ST型各1株,18株菌株未分出序列型。不同地区大肠杆菌ST型分布存在差异,ST69和ST354型分布最为广泛(4个省),其次是ST115、ST117和ST2309型(3个省),ST10、ST48、ST57、ST362、ST371、ST1011和ST1158(2个省),其余36个ST型菌株仅在1个省市有检出。135株菌株分为35个聚类簇,其中23个聚类簇的遗传相似性在40%以下,但有6个聚类簇菌株间的遗传相似性均在80%以上。48个ST型菌株共获得了76种耐药谱。我国各地健康鸡群隐性携带相对较高比例的高致病菌株,且耐药程度相对严重,耐药谱较广。鸡源大肠杆菌菌株分布具有多态性和地域性,ST型与耐药谱之间无相关性。

    2017年09期 v.37;No.249 1680-1686+1692页 [查看摘要][在线阅读][下载 3058K]
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  • 肠炎沙门菌非编码小RNA RyhB-1和IsrE对清远麻鸡的致病性

    倪杰;孟宪臣;李芙蓉;谢静;陆广富;朱春红;陈凯;孟霞;朱国强;

    RyhB是一种大小为90bp左右的细菌非编码小RNA,已有研究表明存在于鼠伤寒沙门菌和霍乱弧菌中的2种RyhB同源物RyhB-1和IsrE可调控细菌生物膜形成、趋化性和耐酸性。为研究RyhB在肠炎沙门菌致病性上的作用,以及2种同源物能否对毒力调控发挥协同作用,本试验利用λ-Red同源重组系统构建了ryhB-1和isrE单、双缺失株,利用表达载体pBR322和pACYC184分别构建了回补质粒并导入缺失株50336△ryhB-1,50336△isrE,50336△ryhB-1/△isrE中,获得各突变株相应的回补菌株,检测了野生株和各突变株对1日龄雏鸡半数致死量(LD50)、致死率、体内分布等致病性差异。结果发现,ryhB-1和isrE基因缺失后导致肠炎沙门菌毒力减弱,双基因缺失株毒力下降更为明显,表明2种小RNA均对肠炎沙门菌致病性具有增强作用,且二者对毒力的调控具有协同作用。

    2017年09期 v.37;No.249 1687-1692页 [查看摘要][在线阅读][下载 288K]
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  • 不同日龄家兔肠道微生物群落结构

    杨睿;黎春秀;付利芝;王孝友;

    采用Miseq2×300测序平台对29,45,60日龄3个阶段的断奶幼兔,共30个粪便样品中的菌群16S rDNA V3和V4可变区进行了高通量测序和分析。结果显示:在不同的日龄间ACE指数和Chao1指数差异显著(P<0.05),Shannon指数和Simpson指数差异不显著(P>0.05),说明随着日龄的增大断奶兔肠道中的微生物群落丰度大量增加,但是菌群多样性并没有显著增加,表明在幼兔断奶时肠道微生物已经完成了定植。在门水平上,肠道微生物群落主要由厚壁菌门、变形菌门、拟杆菌门、疣微菌门和放线菌门组成,其中变形菌门、拟杆菌门和疣微菌门在幼兔的生长过程中丰度有显著性变化。聚类热图的结果显示断奶幼兔肠道微生物群落结构的变化是随着日龄的变化而逐渐变化。

    2017年09期 v.37;No.249 1693-1698页 [查看摘要][在线阅读][下载 1461K]
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  • NF-κB信号通路在金黄色葡萄球菌诱导奶牛乳腺成纤维细胞转分化中的作用

    杨彬;徐丹丹;孙志鹏;王建发;单旭菲;张安;武瑞;

    用热灭活金黄色葡萄球菌(0,104,105,106,107和108 CFU/mL)刺激奶牛乳腺成纤维细胞,24h后采用Real time-PCR方法检测TNF-α、IL-1β、IL-6和TGF-β1mRNA的表达量,Western blot方法检测α-SMA、collagen-I及pNF-κB p65蛋白的表达量。使用NF-κB通路抑制剂PDTC预处理细胞,再用105 CFU/mL热灭活金黄色葡萄球菌刺激细胞,24h后采用Real time-PCR方法检测TNF-α、IL-1β、IL-6和TGF-β1 mRNA的表达量,Western blot方法检测α-SMA、collagen-I及p-NF-κB p65蛋白的表达量,免疫荧光法检测α-SMA及collagen-I蛋白的表达量。结果显示,不同浓度热灭活金黄色葡萄球菌处理细胞的TGF-β1mRNA的表达量显著升高(P<0.05),其中以105 CFU/mL刺激组的TGF-β1mRNA的表达量最高。随着热灭活金黄色葡萄球菌浓度的升高,p-NF-κB p65蛋白的表达量逐渐升高(P<0.01),TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA的表达量也逐渐升高(P<0.01)。不同浓度灭活的金黄色葡萄球菌处理细胞的α-SMA及collagen-I蛋白的表达量均能显著升高(P<0.05),其中以105 CFU/mL刺激组的α-SMA及collagen-I蛋白的表达量最高。抑制剂PDTC能够显著抑制TNF-α、IL-1β、IL-6和TGF-β1 mRNA的表达量(P<0.05),PDTC能够显著抑制α-SMA、collagen-I及p-NF-κB p65蛋白的表达量(P<0.05)。结果提示,NF-κB信号通路在金黄色葡萄球菌诱导奶牛乳腺成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞过程中发挥重要作用,本研究为揭示金黄色葡萄球菌性乳腺炎发生硬化的机制奠定基础。

    2017年09期 v.37;No.249 1699-1704页 [查看摘要][在线阅读][下载 1392K]
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  • 迟缓爱德华菌菌毛蛋白原核表达及多抗血清制备

    张志强;杨楠;李永慧;潘晓艺;单晓枫;康元环;焦贺静;韩红升;吴同垒;高桂生;

    为研究迟缓爱德华菌菌毛蛋白PILI的功能和免疫原性,本研究利用PCR方法从迟缓爱德华菌基因组中克隆出pili基因,并将其构建到pET-32a原核表达载体上,重组载体转化BL21大肠杆菌诱导重组蛋白表达,通过SDSPAGE和Western blot方法验证重组蛋白表达。用亲和层析方法纯化蛋白,纯化的蛋白免疫小鼠,所得的多抗血清能够特异性识别迟缓爱德华菌PILI蛋白,为研究PILI蛋白奠定基础。

    2017年09期 v.37;No.249 1705-1709页 [查看摘要][在线阅读][下载 1048K]
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  • 一种新的豆状囊尾蚴——无钩豆状囊尾蚴的超微结构观察

    潘耀谦;唐海蓉;冯春花;王选年;岳峰;刘兴友;

    无钩豆状囊尾蚴是一种新形态的豆状囊尾蚴,为了解其在相对静止和运动状态时的形态变化,本研究通过从囊泡内取出头节和经培养后让头节自行从囊泡中翻出的方法,用扫描电镜对头节进行了详细观察。结果发现,在相对静止状态时,无钩豆状囊尾蚴的顶突如同数层圆饼叠放在一起,表面较平,中央有1个较大的结节,周边有放射状花纹;4个吸盘收缩成结节状。在相对运动状态时,顶突收缩,中央的结节内陷,变成环状物,如同一个救生圈。继之,环状顶突的皮层向外开张,形成轮胎状结构,表面有粗大的横纹;顶突的瓣状结节打开,扩张呈喇叭口状,并有粗细不一的放射状皱襞与皮层相连;顶突变成一个车轮样结构;4个吸盘有明显的环状收缩,表面有环形波纹,吸盘口变小。总之,无钩豆状囊尾蚴形态的变化与其功能改变是一致的,有利于其对宿主组织的侵袭。

    2017年09期 v.37;No.249 1710-1714页 [查看摘要][在线阅读][下载 1344K]
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  • 应用PCR技术快速鉴定熊蜂微孢子虫Nosema bombi

    张体银;刘蓓;田国宁;白泉阳;郑腾;王武军;张志灯;于师宇;

    基于熊蜂微孢子虫16SrRNA基因序列设计了1对引物,并对引物退火温度和引物浓度等反应条件进行了优化。对所建立方法的敏感性、特异性和稳定性进行了验证后,使用该方法对40份样品进行检测。结果显示,本研究建立了一种能够特异、敏感鉴定熊蜂微孢子虫的PCR方法,对熊蜂微孢子虫总DNA的敏感性达到2.86×10-5 mg/L,可以将熊蜂微孢子虫从西方蜜蜂微孢子虫和东方蜜蜂微孢子等其他可以感染熊蜂的寄生虫中区分出来,具有良好的特异性和稳定性。通过对40份熊蜂样品进行检测结果表明,整个检测过程可以在4h内完成并具有良好的适用性。本研究建立的熊蜂微孢子虫检测方法可用于进境熊蜂的检验检疫。

    2017年09期 v.37;No.249 1715-1719+1730页 [查看摘要][在线阅读][下载 711K]
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人兽共患病

  • CRISPR/Cas9技术在构建弓形虫微线体蛋白MIC3敲除株上的应用

    王一凡;张伟超;吴颢;李龙娇;周艳琴;方瑞;申邦;赵俊龙;

    刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种可以感染几乎所有温血动物的专性细胞内寄生原虫。该寄生虫入侵和感染宿主细胞需要其分泌细胞器所分泌的蛋白,其中包括微线体蛋白。近年来,CRISPR/Cas9技术已经成为分子生物学和功能基因组学研究的重要工具,本研究利用CRISPR/Cas9技术对弓形虫Ⅰ型虫株RH和Ⅱ型虫株PRU的微线体蛋白mic3基因进行敲除。通过单克隆的筛选和鉴定,成功获得了2种虫株的mic3敲除株。之后对RH敲除株进行研究,发现mic3缺失可以轻微提高虫体在体外培养时的生长速度以及对小鼠的毒力。本研究不仅说明了CRISPR/Cas9技术可以应用到弓形虫的基因敲除和改造上,并且不受弓形虫虫株的限制,同时也为进一步研究mic3在虫体中的功能奠定基础。

    2017年09期 v.37;No.249 1720-1725页 [查看摘要][在线阅读][下载 1041K]
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  • 散养鸡新孢子虫、弓形虫血清与分子流行病学调查及风险因素分析

    冯永杰;陆瑶瑶;党冰怡;王英华;杨玉荣;

    通过调查河南省散养鸡新孢子虫病和弓形虫病的血清与分子流行病学情况,评估该地区土壤受新孢子虫和弓形虫污染的程度。分别采用IFAT和MAT方法检测散养鸡血清中的新孢子虫和弓形虫的抗体,PCR方法检测部分血清阳性样品消化液的弓形虫抗原。结果发现,新孢子虫病的阳性率为23.26%(150/642;滴度1∶25;CI 95%=20.25~26.79),弓形虫的感染率为18.86%(132/700;滴度1∶25;CI 95%=16.13~21.93)。PCR检测弓形虫的结果为16%(4/25)。弓形虫感染与散养鸡的性别有关,公鸡感染率显著高于母鸡感染率(P<0.05)。结果表明,散养鸡的新孢子虫病和弓形虫病的感染率均较高,该地区人畜面临着较高的新孢子虫和弓形虫卵囊污染的风险,公共卫生安全形势严峻。散养鸡的新孢子虫病流行情况在国内首次报道。

    2017年09期 v.37;No.249 1726-1730页 [查看摘要][在线阅读][下载 143K]
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基础兽医学

  • 梅花鹿CYP26B1基因过表达载体的构建及进化树分析

    王泽宇;张虹亮;耿爽;郭斌;杨占清;岳占碰;

    CYP26B1是调节体内视黄酸(retinoic acid,RA)水平的一个关键酶,广泛存在于哺乳动物器官和组织中,对软骨细胞的分化具有重要的调节作用。本试验参照NCBI GenBank中已发表的牛CYP26B1基因序列,设计特异性引物。利用PCR方法扩增CYP26B1基因的编码区,并与pGEM-T载体连接,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后与pcDNA3.1载体融合得到CYP26B1过表达重组质粒。经测序鉴定后,转染鹿茸软骨细胞,利用实时荧光定量PCR方法检测CYP26B1mRNA表达变化。应用MEGA软件的Test Neighbor-Joining Tree法绘制CYP26B1基因系统进化树并进行比对分析。结果显示,重组质粒pcDNA3.1-CYP26B1转染鹿茸软骨细胞后,CYP26B1的表达量显著升高(P<0.05)。进化树分析结果表明,梅花鹿CYP26B1基因与牛的基因同源性最高。本研究成功构建了梅花鹿CYP26B1过表达载体,为进一步研究CYP26B1在鹿茸生长及再生中的作用奠定基础。

    2017年09期 v.37;No.249 1731-1735页 [查看摘要][在线阅读][下载 827K]
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  • PYY~(3-36)对LPS诱导的BV-2细胞中促炎酶类及促炎细胞因子的影响

    曾亚龙;阚兴池;吴艳成;孙建华;冯文倩;王玮;付守鹏;柳巨雄;

    为明确酪酪肽(peptide YY,PYY~(3-36))对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2细胞中促炎细胞因子及促炎蛋白酶类的影响,本试验用不同浓度的PYY~(3-36)预处理后,再用LPS刺激BV-2细胞,利用MTT法检测PYY~(3-36)的细胞毒作用;分别用荧光定量RT-PCR和Western blot方法检测促炎细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)及促炎蛋白酶类(iNOS和COX-2)基因水平和蛋白水平表达变化;分别利用NO检测试剂盒和ELISA试剂盒检测iNOS和COX-2的主要产物NO和PGE2;利用PCR方法检测PYY~(3-36)受体表达情况。结果显示,PYY~(3-36)(10-9~10-11 mol/L)呈浓度依赖性抑制LPS在BV-2细胞中诱导的促炎细胞因子和促炎蛋白酶类的基因和蛋白水平,并能浓度依赖性抑制NO和PGE2。PCR结果表明BV-2细胞中PYY~(3-36)受体Y1、Y2、Y5和Y6表达明显,并且LPS刺激后Y2R受体表达增加。表明PYY~(3-36)在BV-2细胞中能抑制LPS诱导的促炎细胞因子和促炎蛋白酶类的表达以及促炎酶类产物的生成,这个过程可能涉及到其受体Y2。

    2017年09期 v.37;No.249 1736-1742页 [查看摘要][在线阅读][下载 1672K]
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  • LPS诱导牦牛成纤维细胞TLR4及其信号通路基因表达变化分析

    段荟芹;王利;李键;钟金城;字向东;江明锋;熊显荣;

    采用PCR方法从牦牛成纤维细胞中扩增TLR4基因,并用5mg/L质量浓度的LPS诱导牦牛成纤维细胞,分别在0,12,24,36h用实时荧光定量PCR检测TLR4及其信号通路基因(IL-1β、IL-8)mRNA水平的相对表达量。结果显示,克隆得到TLR4基因序列长2 067bp(GenBank号:KU743904),与GenBank中野牦牛TLR4的相似性达99%。5mg/L质量浓度的LPS诱导处理后的各基因与0h相比,在12和24h均有上调,在36h均下调。诱导后24h,TLR4、IL-1β和IL-8基因的表达量均达到最大值,且都显著高于0和36h(P<0.05)。由此得出TLR4、IL-1β和IL-8均可在牦牛皮肤成纤维细胞中表达,并参与了对LPS的应答反应。

    2017年09期 v.37;No.249 1743-1747页 [查看摘要][在线阅读][下载 790K]
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  • 阿替美唑对舒泰/噻啦嗪诱导大鼠丘脑和大脑皮质c-fos基因表达的影响

    尹柏双;高利;石星星;付莹;沙万里;王洪斌;

    24只SD大鼠被随机分成对照组、麻醉组和催醒组,对照组注射二甲基亚砜,麻醉组注射舒泰(13.81mg/kg)和噻啦嗪(5.21mg/kg),催醒组在给予麻醉剂10min后注射阿替美唑(0.522mg/kg),试验组大鼠分别于给药1h(即麻醉期)即刻,断头处死,冰面上分离丘脑和大脑皮质,利用免疫印记技术测定Fos蛋白表达量。结果显示,舒泰联合噻啦嗪注射后引起麻醉期大鼠丘脑和大脑皮质脑区Fos蛋白表达量显著高于对照组(P<0.01),阿替美唑注射后显著地抑制了舒泰联合噻啦嗪诱导大鼠丘脑和大脑皮质脑区Fos蛋白表达(P<0.01)。结果表明,阿替美唑可抑制舒泰联合噻啦嗪麻醉引起大鼠中枢脑区Fos蛋白的表达,对神经损伤起到一定的保护作用。

    2017年09期 v.37;No.249 1748-1752页 [查看摘要][在线阅读][下载 574K]
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  • 禽腺病毒4型感染病理组织学观察

    陈萍;朱佳佳;马晓勇;张姗;经美;崔元;董世山;陈立功;刘聚祥;孙继国;袁万哲;

    将30只1日龄SPF鸡随机分为2组,其中攻毒组20只,对照组10只。攻毒组按每只0.2mL腹腔注射禽腺病毒4型(FAV-4)病毒液,对照组不做处理,隔离饲养,临床观察2周。攻毒后第3天攻毒组开始出现死亡,将死亡鸡解剖观察各器官大体病变,经聚合酶链式反应(PCR)检测为FAV-4后,采集心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏制作石蜡切片,观察病理组织学变化。结果显示,攻毒组死亡鸡只无明显临床症状而突然倒地死亡;主要剖检病变为心包积液、肝脏肿大,个别可出现脾脏肿大、肺脏淤血、肾脏肿大;病理组织学变化为肝脏、肺脏、肾脏淤血,细胞变性坏死;而对照组无任何异常症状和病理组织学变化。

    2017年09期 v.37;No.249 1753-1755页 [查看摘要][在线阅读][下载 812K]
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临床兽医学

  • 奶牛亚临床低血钙症的蛋白质组学分析

    舒适;肖鑫焕;王刚;白云龙;范子玲;夏成;吴凌;张洪友;杨威;

    根据奶牛血浆钙浓度将奶牛分为试验组和对照组,并设置2个平行试验组。应用iTRAQ/LC-MS/MS技术对2组奶牛样品进行差异表达蛋白的筛选和鉴定,并结合生物信息学软件对试验结果进行分析。试验共得到398个差异表达蛋白,其中2个平行试验组重叠的蛋白为265个,经过筛选共得到14种具有统计学差异的表达蛋白。结合生物信息学分析中的基因功能分析,结果得到74个注释结果,细胞组成、分子功能和生物过程分别为6,12,55个。根据结果分析可知,奶牛亚临床低血钙症生理和病理现象能够从3个方面解释其生理和病理现象,分别是血钙调节、免疫与炎症反应和血液凝固与补体途径。本试验首次应用iTRAQ结合LC-MS/MS技术对亚临床低血钙症奶牛进行蛋白质组学分析,填补该技术对亚临床低血钙症的空白,并提供科学依据。

    2017年09期 v.37;No.249 1756-1762页 [查看摘要][在线阅读][下载 991K]
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  • 氢化可的松诱导大鼠肾阳虚模型评价

    马晓宇;姜梦如;张涛;杨英;

    从不同角度评价氢化可的松诱导的SD大鼠肾阳虚模型,以验证此造模方法的可行性。雄性SD大鼠16只,随机分为对照组和模型组,每组8只。氢化可的松后肢肌肉注射造模15d,期间观察大鼠体征变化并测体质量、体温。15d后,心脏采血,脱颈处死大鼠,取相应脏器测质量并计算胸腺、脾脏脏器指数;ELISA方法检测大鼠血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP),血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、雌二醇(E2)、睾酮(T)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)、生长激素(GH)含量。结果显示:与对照组相比,模型组大鼠体质量显著减轻(P<0.01),体温显著下降(P<0.01),脏器指数显著降低(P<0.05),血浆cAMP含量显著降低(P<0.01)、cGMP含量显著升高(P<0.01),血清T3、T4、E_2、T、ACTH、CORT、GH含量显著降低(P<0.05)。结果表明:氢化可的松诱导大鼠肾阳虚模型的方法是可行的。

    2017年09期 v.37;No.249 1763-1765页 [查看摘要][在线阅读][下载 101K]
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  • 2种肠管吻合手术的术后愈合及黏连情况比较

    罗欣然;宋曼玉;高培源;李金玉;张帅;张靓玉;邱子豪;谢万江;范宏刚;

    课题组前期研制出一种新型携带多种药物成分的内支撑物,并将其应用于试验犬的肠管吻合术中,此研究表明采用内支撑物应用于犬肠管吻合术,与传统吻合术比较,可降低手术操作的难度,缩短吻合时间,且术后无明显并发症,愈合良好。为了进一步探讨这种新吻合技术的可行性及相关机制,课题组从腹腔黏连评分、吻合口爆破压和羟脯氨酸含量等方面对2组犬的术后愈合情况进行比较研究。以健康本地犬为试验动物,分为内置支撑物组(NZ组,12只)和传统手术组(CS组,12只),分别在术后3,7,14,28d,剖腹探查,观察吻合部位愈合情况,进行腹腔黏连评分,并对吻合口爆破压、吻合口组织中羟脯氨酸含量等项目进行检测。腹腔黏连结果表明术后7,14,28d,CS组的腹腔黏连评分显著高于NZ组,结果具有统计学意义(P<0.05),术后3d,CS组的腹腔黏连评分与NZ组相比无显著性差异(P>0.05);术后7,14d,CS组的吻合口爆破压显著低于NZ组(P<0.05),而在术后3,28d,2组吻合口爆破压相比无显著性差异(P>0.05);2组的羟脯氨酸含量均随时间的增长而增加,而在各个时间点上2组相比无显著性差异(P>0.05)。最终试验结果表明,相对传统小动物肠管吻合术而言,使用内支撑物进行该手术能减少术后黏连,吻合部位的愈合情况更为良好。

    2017年09期 v.37;No.249 1766-1770页 [查看摘要][在线阅读][下载 267K]
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  • 脱氧雪腐镰刀菌烯醇提取、纯化及含量检测

    姜云晶;许伟;陈晓芳;朱电峰;耿芳芳;范梦雪;宫佳杰;李玉;冯士彬;吴金节;王希春;

    本试验通过提取和纯化方法的优化,旨在获得高纯度的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)。首先将禾谷镰刀菌孢子液接种于玉米培养基,于27℃30%湿度的条件下培养25d,收集产毒培养基,制成毒素粗提液。经过层析柱2次洗脱,分段收集洗脱液,用薄层色谱法(TLC)确定含DON的洗脱液,合并洗脱液,运用多重结晶法进行纯化,获得DON的纯品,高效液相色谱法(HPLC)进行分析确认。采用该培养方法,每千克玉米培养基可产生DON 56.65 mg,纯化后可得到DON 29.5mg,纯度达到98.1%;HPLC检测条件为:Waters C18柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为乙腈-水(16∶84),流速0.8mL/min,紫外波长218nm,色谱柱柱温30℃;本方法加标回收率为86.9%~100.6%,日内相对标准偏差≤9.42%,日间相对标准偏差≤5.79%。本试验建立的DON提取与纯化方法简单,不需要任何特殊的试剂与设备,且该检测方法回收率高,准确度和精密度均能满足试验要求,为DON纯品的定量提供了技术支撑。

    2017年09期 v.37;No.249 1771-1777页 [查看摘要][在线阅读][下载 1211K]
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动物科学

  • 不同胚期分离的鸡原始生殖细胞(PGCs)遗传与培养特性比较

    陈志胜;张晓芳;李东升;王丙云;陈胜锋;陈金顶;

    根据家禽原始生殖细胞(PGCs)的迁移路径,分别从孵化24h的鸡胚生殖新月(gcPGC)、2.5d的胚血(cPGC)和5.5d的生殖腺(gPGC)中分离PGCs,置于完全培养基中培养,表达干细胞标志物SSEA-1和生殖细胞特异标志物DAZL免疫荧光染色鉴定结果,表明纯化的细胞为PGCs。CCK-8法细胞增殖检测显示,BRL-3A饲养层细胞能明显促进PGCs的体外增殖,与无饲养层条件培养的PGCs间有显著性差异(P<0.05),但不同来源PGCs间无增殖速度的差异。检测这3种不同来源PGCs的集落形成能力,结果显示cPGCs的集落形成率最高,集落体积最大。real time-PCR结果显示多能性相关基因nanogv和pouV在gcPGCs中的表达量最高,而生殖相关基因dazl和cvh在cPGCs中的表达量最高。结果表明,体外培养的PGCs保持其体内遗传状况,即gcPGC的多能性最好,cPGC开始进入生殖系分化,而gPGC可能已部分进入减数分裂。而从培养特性上来看,gcPGC由于数量过少难以扩大培养,而gPGC混合的分化细胞过多,cPGC是体外培养和增殖分化研究的最佳细胞来源。

    2017年09期 v.37;No.249 1778-1784页 [查看摘要][在线阅读][下载 2364K]
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  • 微生态制剂对雏鸡生长性能、免疫功能及肠道黏膜的影响

    王媚;张建民;聂荷敏;万红;黄玉梅;张宗尧;罗开健;

    本试验旨在研究微生态制剂对雏鸡生长性能、免疫功能及肠道黏膜的影响。试验选用200只1日龄雏鸡随机分为2组,分别为试验组和对照组,每组2个重复。试验组于基础日粮中添加1.0%微生态制剂,对照组不作处理,试验期间检测各组试验鸡的生长性能、肠道黏膜和免疫性能。结果表明:试验组平均体质量比对照组提高了9%(P<0.05);25日龄,试验组法氏囊指数、胸腺指数较对照组分别提高了10.44%,36.56%(P<0.05),35日龄,试验组法氏囊指数和脾脏指数分别提高了40.12%(P<0.05)和19.30%(P<0.05),胸腺指数略低,但差异不显著(P>0.05);试验组的小肠肠壁与肠黏膜较厚,肠绒毛较长较粗,排列较整齐。以上结果表明微生态制剂对雏鸡具有增加体质量、提高免疫力和促进肠道生长发育的作用。

    2017年09期 v.37;No.249 1785-1789页 [查看摘要][在线阅读][下载 1541K]
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  • 硒化低聚氨基多糖对小鼠急性毒性试验

    王晓波;闻正顺;张鹏;曲有乐;许梓荣;

    研究硒化低聚氨基多糖(LSA)的安全性,采用寇氏法和食品安全国家标准(GB 15193.3-2014)进行了急性毒性评价,计算了LSA对ICR小鼠的半数致死量(LD50)和95%置信区间,并通过小鼠给药后体质量、死亡情况、器官指数、病理变化评价LSA对小鼠的急性毒性。结果显示:LSA对小鼠灌胃给药的LD50为2 884 mg/kg,其95%可信限为2 378~3 497mg/kg。与空白对照组相比,各组小鼠心脏、肝脏、脾脏、肾脏指数差异不显著(P>0.05),最大剂量(10 000mg/kg)组肺脏和胸腺指数差异显著(P<0.05)。LSA急性中毒死亡小鼠各组织均有出血状况,其中肺部淤血较为严重,小肠内容物暗红色,个别出现肠臌胀。结果表明,LSA属于低毒物质,毒性作用小,可以对其药效进行进一步研究。

    2017年09期 v.37;No.249 1790-1796页 [查看摘要][在线阅读][下载 3750K]
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综述

  • 破骨细胞功能研究进展

    顾建红;孔琦;王东;袁燕;卞建春;刘学忠;刘宗平;

    破骨细胞一直被认为是一种仅在骨重建中发挥骨吸收作用的细胞,然而,近几年这一观点已彻底改变。这种多核细胞在体内具有复杂的生物学功能。除了能够吸收钙化的骨基质以外,破骨细胞在骨形成、骨组织血管形成、关节软骨生理病理过程、免疫和代谢调节中均发挥着重要作用。

    2017年09期 v.37;No.249 1797-1801页 [查看摘要][在线阅读][下载 376K]
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  • 自噬在疯草中毒中的作用及其机制

    王帅;权海云;任祯慧;宋润杰;杨琳;赵宝玉;路浩;

    疯草已成为危害我国西部草原畜牧业发展的主要毒草,其主要有毒成分苦马豆素,能特异性地抑制α-甘露糖苷酶活性造成细胞内异常糖蛋白的形成,异常蛋白的清除主要在溶酶体进行,而溶酶体α-甘露糖苷酶活性被抑制使蛋白质清除受阻,最终出现与α-甘露糖苷贮积症相似的病理变化即广泛的空泡变性。自噬可以将自身受损、变性大分子物质运送到溶酶体进行自我消化,有资料显示,自噬降解受阻会导致自噬体蓄积形成空泡样病变。根据自噬的形成和作用机制,我们推测疯草中毒造成的空泡变性可能与自噬有关。现就从疯草中毒机制、自噬分子机制及疯草中毒与自噬的关系等方面进行综述,以期为苦马豆素毒性及作用机制研究提供理论依据。

    2017年09期 v.37;No.249 1802-1806页 [查看摘要][在线阅读][下载 369K]
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  • 广藿香药理作用研究概述

    杨洪早;王东升;张世栋;董书伟;闫宝琪;那立冬;桑梦琪;严作廷;

    广藿香是我国著名的十大南药之一,是消化系统疾病及暑湿时常用中药。为了更好的利用广藿香,充分发挥其药用价值。现对广藿香的调节胃肠运动功能、促进消化液分泌、抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗炎镇痛、解热等药理活性进行总结,揭示了其发挥临床作用和临床疗效的机理,为其临床应用提供了新的思路,对该药的制剂开发研究奠定基础。

    2017年09期 v.37;No.249 1807-1810页 [查看摘要][在线阅读][下载 122K]
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  • 结核分枝杆菌感染与巨噬细胞凋亡的免疫机制研究进展

    师清博;赵明明;王春凤;钱爱东;

    结核分枝杆菌感染后,巨噬细胞凋亡被认为是抵抗其进一步入侵的重要机制之一,巨噬细胞发生凋亡后可以杀死胞内的结核分枝杆菌,进一步地加工、递呈抗原,激活邻近尚未感染的巨噬细胞,增强机体的免疫应答能力。结核分枝杆菌也会通过一系列机制来抑制巨噬细胞的凋亡,以逃避巨噬细胞的杀伤。结核分枝杆菌对宿主巨噬细胞凋亡的调控呈现出复杂性和多面性,进一步研究其具体调控机制有助于人们更好地预防和控制结核病。

    2017年09期 v.37;No.249 1811-1816页 [查看摘要][在线阅读][下载 173K]
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