预防兽医学

  • 猪流行性腹泻病毒病S蛋白单抗制备及夹心ELISA检测PEDV方法的建立与应用

    王明月;鲁海冰;刘亚静;郭昌明;朱利塞;邢泽黎;邓颖瑞;欧阳红生;王新平;

    应用PCR扩增出PEDV毒株的纤突糖蛋白S基因序列,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建出pGEX-4T-1-S表达载体。应用IPTG诱导表达重组S蛋白,并将重组蛋白以弗氏完全/不完全佐剂乳化后免疫小鼠,制备抗PEDV S蛋白的单克隆抗体,并以此建立了检测PEDV抗原的双抗体夹心ELISA方法,确定、优化了所建立的ELISA反应条件。以建立的双抗体夹心ELISA和RT-PCR方法对PEDV样品进行了比较检测,两者的符合率为100%。应用ELISA检测了吉林省疑似PED流行猪场的粪便样品,发现PEDV阳性检出率为68%。该研究为PED诊断及流行病学调查提供了一种特异、敏感、快速和易于在基层应用的技术方法及本病的防治提供了流行病学理论依据。

    2017年11期 v.37;No.251 2033-2037+2042页 [查看摘要][在线阅读][下载 646K]
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  • PCV2对小鼠肠道SIgA及相关细胞因子含量的影响

    毛玉;刘沅;蔡杰;庞培;李进军;邓治邦;

    用PCV2感染5周龄昆明系小鼠,分别在感染后7,14,21,28,35,42d处死小鼠,取脾脏、腹股沟淋巴结、Peyers结做PCR鉴定PCV2感染情况,提取肠道中蛋白检测SIgA及肠道相关细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ含量的变化。结果显示:随着感染时间的延长,试验组小鼠肠道SIgA、IL-2和IFN-γ水平均呈先升高后降低的趋势,IL-4和IL-10呈持续升高的趋势。结果表明:小鼠肠道SIgA及相关细胞因子的含量在PCV2的刺激下发生了不同程度的改变。

    2017年11期 v.37;No.251 2038-2042页 [查看摘要][在线阅读][下载 361K]
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  • 猪圆环病毒1型微滴数字PCR定量检测方法的建立

    原霖;訾占超;亢文华;李晓霞;汪葆玥;王静;韩焘;陈亚娜;倪建强;翟新验;

    以猪圆环病毒1型ORF1基因为靶基因,建立了可对其准确定量的微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)方法。对ddPCR反应中的探针浓度进行了优化。结果显示:ddPCR反应中的最佳探针浓度为250nmol/L;ddPCR方法线性相关系数(R2)为0.999,呈良好的线性关系;检测限为7.8copies/20μL;变异系数为2.7%;与其他病毒无交叉反应。通过对临床样品的检测,检测结果与实时荧光PCR结果一致。结果表明:新建立的ddPCR方法敏感性高、特异性强,可用于猪圆环病毒1型的定量检测。

    2017年11期 v.37;No.251 2043-2047页 [查看摘要][在线阅读][下载 922K]
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  • 猪伪狂犬病病毒山东分离株gE和gD基因的克隆及序列分析

    张玲玲;时建立;彭喆;徐胜男;郑书轩;吴晓燕;徐绍建;王金宝;李俊;

    近年来,我国猪场内很多规模化猪场的伪狂犬病病毒野毒呈阳性,大部分中小规模猪场和小养殖场感染情况更为糟糕,使得伪狂犬病病毒的变异率增加,给该病的防控带来了更大的压力。为了深入了解本病的流行情况及研制新型疫苗用于该病的防治,本研究在流行病学调查的基础上从发生疑似伪狂犬病的2个猪场仔猪组织内各分离到1株PRV野毒株,分别命名为LY株和YSH株。参照已发表的PRV gE和gD基因序列,设计合成2对分别扩其全长的引物,使用高保真酶进行PCR扩增,将扩增得到的全长序列克隆到pEASY-Blunt载体中,并转化Trans1-T1感受态细胞,挑取阳性菌落的质粒进行酶切、测序鉴定,并与国内外其他毒株进行比较分析,构建遗传进化关系图。结果表明,2毒株与国内外其他毒株比较,gE、gD基因核苷酸序列的同源性分别为97.7%~100.0%和99.0%~100.0%;氨基酸序列的同源性分别为95.5%~100.0%和98.9%~100.0%,以gE、gD基因氨基酸序列建立的进化树分析结果显示,近3~5年分离的PRVs形成一个相对独立的新分支。经过同源性及进化分析,可知新分离的2株伪狂犬病病毒株与欧美株的亲缘关系远,与亚洲株内中国株的亲缘关系近,初步判定属于国内流行株,并可能存在一定的抗原变异,这为进一步研究山东省猪群伪狂犬病病毒分子流行病学奠定了基础。

    2017年11期 v.37;No.251 2048-2055页 [查看摘要][在线阅读][下载 1655K]
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  • 伪狂犬病病毒疫苗株SA738侵染BHK-21细胞诱导其凋亡及Caspase3表达情况分析

    郭广君;吕素芳;魏凤;肖跃强;李峰;林初文;沈志强;

    旨在深入了解猪伪狂犬病病毒疫苗株PRV SA738侵染BHK-21细胞后,诱导细胞凋亡,细胞凋亡的时间及相关细胞凋亡因子表达情况。通过测定传统疫苗毒株Bartha-K61株和实验室人工筛选的gI-/gE-/PRV SA738病毒株滴度,分别利用2株疫苗毒株侵染BHK-21,采用原位双荧光染色法检测细胞凋亡,用分光光度法测定细胞凋亡因子Caspase-3表达情况。结果表明,低剂量gI-/gE-/PRV SA738疫苗毒株和Bartha-K61疫苗毒株均延迟侵染细胞的凋亡。缺失疫苗毒株gI-/gE-/PRV SA738延迟侵染细胞的凋亡时间比Bartha-K61疫苗毒株时间长,但侵染细胞增殖速度下降。细胞凋亡后期最终细胞死亡,正常细胞细胞死亡后无凋亡小体。gI-/gE-/PRV SA738疫苗毒株和Bartha-K61疫苗毒株侵染细胞凋亡后期凋亡小体形成,并检测到膜结构。在病毒侵染早期细胞内关键凋亡细胞因子Caspase3表现为上调。Caspase-3参与了病毒侵染过程中细胞凋亡的调控。

    2017年11期 v.37;No.251 2056-2060页 [查看摘要][在线阅读][下载 913K]
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  • IBDV VP2与Gallus Akirin2真核双表达载体的构建及应用

    刘传高;钟楚红;任广彩;朱娇娇;赵大伟;陈瑞爱;

    为提高传染性法氏囊病(IBD)VP2DNA疫苗的免疫效力,将优化合成的IBDV VP2与Gallus Akirin2串联基因定向克隆至真核表达载体pTriEx-4,获得重组质粒pVP2-Akirin2。体外转染293T细胞,提取表达产物进行SDSPAGE和Western blot分析,结果显示:在58 000和35 000附近各有一蛋白条带,分别能与鸡IBD阳性血清和兔Akirin2多克隆抗体发生特异性反应。将pVP2-Akirin2与同期构建的pVP2对照质粒分别免疫SPF鸡,加强免疫2周后,攻IBDV BC6-85强毒,4d后统计保护率,并监测免疫过程中血清IBD抗体滴度和IBDV中和抗体滴度的动态变化,结果显示:SPF鸡二免后14d,pVP2-Akirin2组血清IBD抗体滴度和IBDV中和抗体滴度均极显著高于pVP2组(P<0.01),且对IBDV强毒株BC6-85攻击的保护率为75%,高于pVP2对照组(55%)。结果表明:Gallus Akirin2基因对IBD VP2DNA疫苗具有明显的免疫增强作用。

    2017年11期 v.37;No.251 2061-2067页 [查看摘要][在线阅读][下载 1781K]
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  • ALV-J不同接种途径诱导SPF鸡免疫抑制状况的比较分析

    朱丽君;董雯雯;马宁宁;周建波;袁艳梅;卢亚平;李宗瑞;魏凯;王海荣;朱瑞良;

    将1日龄SPF鸡分别通过口服、点眼、腹腔注射、肌肉注射的方式感染J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leucosis virus,ALV-J),监测各感染组鸡的生长性能、带毒和排毒规律,并对其病毒血症、相关免疫学指标及抗体反应进行动态检测。结果显示:各感染组鸡的生长性能和免疫应答水平存在明显差异。从感染后第2周开始腹腔注射和肌肉注射组可检出泄殖腔排毒和病毒血症,此后持续带毒、排毒;体质量、免疫器官指数以及淋巴细胞转化率、CD4+和CD8+T淋巴细胞数、细胞因子(IL-2、IL-4和IFN-γ)的分泌量显著低于对照组;抗体转阳不明显。而口服、点眼感染组与对照组相比引起的免疫抑制程度并不显著。结果表明:1日龄雏鸡感染ALV-J容易造成免疫抑制,其中腹腔注射和肌肉注射感染造成鸡体带毒、排毒和免疫抑制的能力最强。本试验明确了鸡群ALV-J水平传播的不同途径与鸡的感染力、免疫抑制力之间的关系,为研究ALV-J的感染机制、种群净化以及防控提供了理论依据。

    2017年11期 v.37;No.251 2068-2075页 [查看摘要][在线阅读][下载 2014K]
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  • 重组大肠杆菌DH5α-pCAGGoptiHA5培养基优化及高密度培养

    任培森;胡春磊;唐荣宏;吕文静;张秀媛;陈红秀;付旭彬;丁壮;刘欣欣;

    为提高重组质粒的生产效率,利用响应面分析中的Plackett-Burman试验设计、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验,对影响该工程菌质粒表达的培养基组分进行筛选和优化,以确定该工程菌的最佳培养基组分。结果显示:蔗糖、硫酸铵分别为最佳碳源、无机氮源;酵母浸粉、蔗糖和(NH4)2SO4最佳质量浓度分别为7.50,17.50,7.50g/L。在相同培养条件下,优化后培养基质粒产量是LB培养基质粒产量2倍。使用100L反应器高密度培养时利用优化的培养基发酵培养重组大肠杆菌,质粒质量浓度达到115.25mg/L,比优化前提高88.52%,质粒各项指标稳定,免疫原性优良。此试验数据为规模化生产提供参考数据。

    2017年11期 v.37;No.251 2076-2082页 [查看摘要][在线阅读][下载 1430K]
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  • 禽波氏杆菌鸡胚强毒株对雏鸡的致病性

    杨萍萍;朱瑞良;魏凯;赵雪;胡莉萍;刘静静;

    以从孵化场将出壳鸡胚中分离到的鸡胚强毒株禽波氏杆菌LL09作为试验菌株,分别经鼻腔、眼睛和腹腔3种感染方式和1,7,14,21d不同日龄感染海蓝褐蛋雏鸡,检测其致病过程、病理变化,以及LL09在不同感染方式和不同感染日龄对雏鸡的生长抑制和NDV灭活苗免疫后HI抗体水平的影响差异。结果发现:LL09能引起雏鸡眼睛分泌物增多,咳嗽等呼吸道症状,且能入侵内脏组织,导致气管黏膜纤毛细胞脱落,肺出血,心肌细胞、肝细胞、脾细胞、肾小管上皮细胞等变性坏死等病理变化。3种感染方式中以腹腔感染危害最为严重,入侵内脏组织的比例最高,对雏鸡的生长抑制作用最强,对NDV免疫后HI抗体水平的影响最大,其次是经鼻腔感染组和经眼睛感染组。LL09分别于不同日龄感染雏鸡结果发现,感染日龄与LL09对雏鸡的危害直接相关,越早期感染,对雏鸡的体质量抑制越严重,对NDV免疫后的HI抗体水平的影响越大,内脏组织的感染几率越高。尤其是1d和7d感染组危害比较严重,而21d感染雏鸡症状不明显,且未在除气管和肺脏以外的内脏组织中检测到LL09的感染。对禽波氏杆菌LL09鸡胚强毒株的致病性检测结果表明,LL09作为鸡胚分离株,同样可以导致禽类的呼吸道感染,且能入侵内脏组织,以腹腔感染和1周内感染的危害最为严重。

    2017年11期 v.37;No.251 2083-2089页 [查看摘要][在线阅读][下载 2288K]
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  • 捕食性真菌Duddingtonia flagrans基因组DNA的提取及基因组survey分析

    张伟;王瑞;杨晓野;祝晓蕊;王新芳;梁萌;杨莲茹;李军燕;罗晓平;

    采用透析膜培养法结合DNA柱式提取法进行基因组DNA提取,同时利用第2代高通量测序技术,分析了捕食性真菌Duddingtonia flagrans基因组概况。结果显示:透析膜培养结合DNA柱式提取法所提取的基因组DNA质量及浓度均能达到测序标准;捕食性真菌Duddingtonia flagrans基因组约为37.6 Mb,GC含量为44.95%,基因组杂合度较低。结果表明:透析膜培养法结合柱式法提取其基因组DNA的方法简便可行,为丝状真菌DNA提取,提供了新的思路;基因组survey分析为捕食性真菌Duddingtonia flagrans全基因组精细图谱的绘制奠定了基础。

    2017年11期 v.37;No.251 2090-2094页 [查看摘要][在线阅读][下载 359K]
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  • 鸡舍气溶胶真菌的种类及浓度动态

    刘彦威;张欣;白福娟;石玉祥;王斌;刘娜;史瑞雅;沈洁;黄小龙;

    为评估鸡舍空气的卫生质量,用Andersen-6级采样器采集鸡舍空气样本,计算各级培养基的菌落总数,分析真菌气溶胶颗粒大小和浓度,用ITS基因序列分析结合形态学的方法对分离菌株进行鉴定。结果显示:鸡舍气溶胶真菌浓度与季节、养殖模式、日龄和品种有关,其气溶胶真菌浓度在夏季、秋季、冬季和春季由高到低依次为(1.78±0.26)×103,(1.43±0.2 2)×103,(1.31±0.31)×103,(1.06±0.22)×103 CFU/m3。在不同的养殖模式中,地下最高,为(1.50±0.36)×103 CFU/m3;半封闭最低,为(0.98±0.25)×103 CFU/m3;封闭介于两者之间,为(1.04±0.14)×103 CFU/m3。肉鸡舍(3.12±0.48)×103 CFU/m3明显高于蛋鸡舍(0.98±0.11)×103 CFU/m3,并随日龄的增加而提高。在真菌气溶胶颗粒中,C-F级(0.65~4.70μm)颗粒占88%。获得26 703菌落,分离出153个菌株,鉴定出13个属,25种真菌;优势菌属为曲霉菌属(37株)和青霉菌属(44株),占菌落总数的52.93%(81/153);优势菌种为芽枝状枝孢菌(16株)、黑曲霉(15株)、草酸青霉(12株)、黄曲霉(10株)和链格孢(10株)。分离烟曲霉和热带念珠菌2种常见致病菌。这对鸡舍气溶胶真菌浓度、种类和颗粒大小有了一个全面的认识,为评估环境质量奠定基础,对环境卫生控制有指导意义。

    2017年11期 v.37;No.251 2095-2100页 [查看摘要][在线阅读][下载 952K]
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  • 猪肺炎支原体对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原递呈加工功能相关因子mRNA表达量的影响

    王贵平;李君佩;罗广;李晓云;贾杏林;

    将从健康仔猪分离到的猪肺泡巨噬细胞(PAM)分别按1∶10、1∶3和1∶1的比例与猪肺炎支原体(Mhp)232株共同孵育。在孵育12h后收获PAM,用qPCR检测PAM中MHCⅡ分子mRNA表达量,确定PAM和Mhp的最佳孵育比(ROI)。将PAM和Mhp按ROI比例混合孵育(试验组),用等体积的10%RPMI-1640液代替Mhp与PAM孵育作为对照组。分别在孵育后12,24,36,48h收获试验组和对照组的PAM。用实时荧光定量PCR(qPCR)检测PAM中与外源性抗原加工递呈功能相关分子MHCⅡ、SLA-DM、Li和CD86、TLR2和TLR6 mRNA表达量,分析Mhp感染对PAM外源性杭原递呈功能的影响。结果显示:相关因子MHCⅡ、SLA-D、Li、CD86和TLR6在Mhp感染PAM 12h后,mRNA表达量升高(17~380倍);感染24h后降至对照组表达水平的0.043~0.391倍;感染36h后极大地降低;感染后48h全部检测不出。TLR2因子mRNA表达量在Mhp感染12h后降至对照组的0.767倍,感染24h后全部全部检测不出。从检测结果可以看出,Mhp感染早期(12h)可以引起PAM抗原递呈功能相关因子mRNA表达量增加;感染晚期(24h以后)会抑制PAM的外源性抗原递呈加工功能相关因子mRNA表达量。结果表明:Mhp感染早期,动物机体可以通过PAM导致免疫增强,后期会引起免疫抑制。本试验探索了Mhp对PAM外源性抗原加工递呈功能相关因子mRNA表达量影响,为进一步研究Mhp致病机理提供了有益的参考。

    2017年11期 v.37;No.251 2101-2107页 [查看摘要][在线阅读][下载 1828K]
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  • 内蒙古呼伦贝尔地区优势蜱种的鉴定及其基因多态性分析

    黄天鹏;张金宝;陆继爽;吴咪;贺海燕;格日勒图;

    为掌握内蒙古呼伦贝尔地区硬蜱的优势蜱种类,对该地区15个调查点的蜱进行考查和采集蜱虫1 349只样本,在形态学鉴定方法初步进行分类的基础上,设计1对简并引物,从蜱虫基因组DNA样品中,采用PCR扩增得到蜱虫16SrRNA基因序列,测序后进行基因序列同源性分析。用Mega 6.06软件绘出系统进化树,与GenBank数据库中已知蜱虫16SrRNA进行聚类。结果显示:15个考察点蜱虫种类均为草原革蜱,属于呼伦贝尔地区常见优势蜱虫之一。但是,不同地区的蜱虫之间也存在基因序列的差异性。

    2017年11期 v.37;No.251 2108-2113页 [查看摘要][在线阅读][下载 4608K]
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人兽共患病

  • 委内瑞拉马脑炎病毒E2蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

    焦翠翠;金宏丽;蒋天琪;曹增国;李岭;吴芳芳;王琪;邱泊宁;迟航;黄培;侯朋飞;赵永坤;冯娜;王铁成;高玉伟;王化磊;杨松涛;夏咸柱;

    原核表达并纯化委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus,VEEV)E2蛋白胞外区,并以此为抗原免疫动物制备多克隆抗体。利用PCR扩增VEEV E2蛋白胞外区基因并将其插入到原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-VEEV-E2,转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达。优化诱导条件并对目的蛋白进行亲和纯化,用纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接免疫荧光方法检测抗体的结合能力。通过PCR扩增出约为1 023bp的VEEV E2基因胞外区,成功构建重组表达质粒pET-30a(+)-VEEV-E2,在37℃,0.6mmol/L IPTG诱导3h条件下目的蛋白表达量最高且主要以包涵体形式存在;将纯化的目的蛋白免疫BALB/C小鼠成功制备了抗VEEV E2蛋白胞外区鼠源多克隆抗体,经间接免疫荧光鉴定制备的抗体能够特异性识别真核表达的VEEV E2蛋白。VEEV E2基因胞外区在大肠杆菌中获得稳定表达,且表达的目的蛋白具有良好的免疫原性,为VEEV快速诊断方法及新型疫苗的研究奠定了基础。

    2017年11期 v.37;No.251 2114-2120页 [查看摘要][在线阅读][下载 1217K]
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  • 第2.3.4.4分支H5亚型高致病性禽流感病毒主要抗原位点分析

    蒋文明;李金平;彭程;侯广宇;王素春;于建敏;陈继明;

    为了解第2.3.4.4分支H5亚型高致病性禽流感病毒主要抗原位点,本试验对A/chicken/Yunnan/1/2014与Re-5的HA1蛋白进行比较,对Re-5母本病毒的差异氨基酸位点进行突变,利用反向遗传技术构建重组病毒。用Re-5阳性标准血清进行HI试验,比较重组病毒与Re-5母本病毒的HI滴度,发现D61N、R69K、S145L、S149A、N171D、R178M、Q185R、K234Q、N256H、A279T、V281M、N289H等12个位点改变后导致HI滴度发生改变,是第2.3.4.4分支病毒的主要抗原位点。对2010-2012年第2.3.4.4分支的H5亚型高致病性禽流感病毒的HA序列进行分析,与Re5疫苗株HA1序列进行比对,进行点突变构建重组病毒,HI试验表明,Re5-2010、Re5-2011、Re5-2012、yn2014-Re5与Re5HI滴度分别相差了2,3,4,5个滴度,说明随着时间的推移,病毒变异越来越大。互相替换Re-5和yn2014的HA1或HA2,发现Re5-yn2014与Re5、yn2014-Re5与yn2014的HI滴度一致,说明其抗原位点主要在HA1蛋白区域。这些数据为深入了解该分支病毒的变异和对该病毒的防控提供了技术支持。

    2017年11期 v.37;No.251 2121-2125页 [查看摘要][在线阅读][下载 173K]
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  • 圈养白虎H5N1亚型禽流感病毒的分离鉴定及其HA和NA基因的生物信息分析

    王海军;王开;李元果;李胜楠;国娇;胡桂学;高玉伟;夏咸柱;

    采集某动物园病死白虎(Panthera tigers)的组织样本,置于灭菌的PBS中充分研磨,离心后取上清液并加入双抗后,接种于9~10日龄鸡胚,分离到1株具有血凝性的病毒。HA和HI试验表明该病毒为H5亚型禽流感病毒;HA和NA基因序列分析表明该病毒为H5N1亚型禽流感病毒,其HA基因属于Clade 2.3.2.1分支。结果表明:该虎感染了H5N1亚型禽流感病毒,本试验对我国圈养野生虎流感疾病的防控具有重要作用。

    2017年11期 v.37;No.251 2126-2130页 [查看摘要][在线阅读][下载 1235K]
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  • 维氏气单胞菌JLL-1株外膜蛋白的原核表达及其免疫原性检测

    张冬星;康元环;陈亨利;张海月;田佳鑫;单晓枫;钱爱东;

    为研究维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)的免疫原性,本试验对A.veronii的OmpAⅠ基因进行克隆,构建了原核表达质粒pET-30a(+)-OmpAⅠ,并转入大肠杆菌BL21(DE3),将其表达后纯化重组蛋白,利用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定。将灭活苗、弗氏佐剂(OmpAⅠ)、纯化蛋白及PBS缓冲液分别免疫鲤鱼后,检测每周各试验组鱼体血清非特异性免疫指标(酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶活力)及特异性IgM抗体水平变化情况,并于加强免疫2周后对鲤鱼进行攻毒保护性试验。结果显示:重组蛋白免疫鲤鱼后能产生明显的免疫反应,保护率在77%以上;受免鲤鱼血清中IgM抗体水平、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶及超氧化物歧化酶活力活力较对照组有显著提高。结果表明,重组蛋白OmpAⅠ具有较好的免疫原性和保护作用,为进一步研究外膜蛋白基因工程疫苗的开发奠定基础。

    2017年11期 v.37;No.251 2131-2136页 [查看摘要][在线阅读][下载 1132K]
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  • 山羊源第三梭菌的分离鉴定及耐药性分析

    董文龙;王巍;耿昕颖;王羽;张红伟;孙健;马红霞;高云航;

    为确定导致山羊严重腹泻的病原菌,从病死山羊肠道内分离到的1株优势菌并命名为CT-1,根据其形态特征、培养特性、生化特性及16SrDNA分子鉴定结果确定分离菌株为第三梭菌。随后对分离菌株进行了动物回归致病性试验及药敏试验。动物回归致病性试验表明,该分离株能够导致山羊严重腹泻。药敏结果显示,该菌对氯霉素,红霉素,庆大霉素,阿米卡星敏感;对恩诺沙星,环丙沙星,阿奇霉素,强力霉素,氟苯尼考,阿莫西林,磺胺间甲氧嘧啶耐药。

    2017年11期 v.37;No.251 2137-2140页 [查看摘要][在线阅读][下载 447K]
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  • 维氏气单胞菌TH0426株主要黏附素基因的克隆、生物信息学分析及原核表达

    许瑞;田佳鑫;张冬星;康元环;安鼎杰;单晓枫;钱爱东;

    为研究维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)主要黏附素Aha1基因的生物信息学特性,本试验克隆了A.veronii TH0426主要黏附素Aha1基因片段,构建了Aha1基因序列进化树,通过生物信息学软件分析其编码蛋白的理化性质、疏水性、信号肽、跨膜区、二级结构及三级结构,并进行了Aha1蛋白的原核表达及免疫原性的检测。结果显示:Aha1基因全长1 038bp,编码345个氨基酸。TH0426株Aha1与A.veronii属同一分支,具有信号肽,跨膜区,二级结构以β折叠、无规则卷曲为主。SDS-PAGE及Western blot分析结果显示,Aha1蛋白在大肠杆菌中成功表达且其能被鼠抗黏附素阳性血清识别,表明Aha1蛋白具有一定的反应原性。以上结果为进一步研究Aha1蛋白的结构功能Aha1基因工程亚单位疫苗的制备奠定了基础。

    2017年11期 v.37;No.251 2141-2146+2150页 [查看摘要][在线阅读][下载 1827K]
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  • 我国部分省份羊衣原体病血清学抗体监测调查

    樊天喜;吴锦艳;陈妍;王光祥;尹双辉;杨顺利;曹小安;何继军;尚佑军;刘湘涛;张志东;

    为了解我国羊衣原体病的流行近况,采用间接血凝试验(IHA)对我国13省的43个县(市)的921份羊血清样品进行了羊衣原体病抗体的检测。结果显示:被检血清样品平均阳性率为12.38%(114/921)。对被检地区羊衣原体病抗体阳性率进行统计分析,比较已有报道发现,此病呈逐年上升的趋势。

    2017年11期 v.37;No.251 2147-2150页 [查看摘要][在线阅读][下载 228K]
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  • 吉林省四平市周边地区莱姆病流行情况调查及优势菌株外膜蛋白C的表达

    冯嘉轩;杨莹莹;李俊姣;阎慧;

    为了解吉林省四平市周边地区伯氏疏螺旋体流行情况,本试验于2017年5-7月分别采集四平市周边地区蜱虫样品共25份。通过筛选扩增伯氏疏螺旋体外膜蛋白C(OspC)基因片段的通用引物、优化反应条件后建立用于检测蜱体内伯氏疏螺旋体的PCR方法。从25份样品中分离到8份阳性样品(阳性率约为32%),经过测序比对发现其基因型均为Borrelia burgdorferi;并以分离到的Borrelia burgdorferi DNA为模板,PCR扩增OspC基因,构建重组质粒pET-30a-OspC,以IPTG诱导蛋白表达,为建立伯氏疏螺旋体ELISA检测方法奠定了基础。

    2017年11期 v.37;No.251 2151-2155页 [查看摘要][在线阅读][下载 963K]
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基础兽医学

  • 广东地区鸭-鱼混养场鸭粪中耐药基因的污染现状

    钟晓霞;高上吉;孙静;王勉之;孙永学;

    采用荧光定量的方法对广东地区典型的鸭-鱼混养场中鸭粪中磺胺类、四环素类、β-内酰胺类和酰胺醇类的耐药基因丰度进行调查。结果显示:耐药基因的平均相对丰度为∑bla>∑tet>∑sul>∑cml;这17个耐药基因在所有的样品中均被检测到,其中sul1、sul2、tetO、tetA、tetB、blaTEM和fexB的平均相对丰度高分别达到了2.1×10-1copies/16SrDNA copies、3.82×10-1copies/16SrDNA copies、3.30×10-1 copies/16SrDNA copies、1.77×10-1 copies/16SrDNA copies、1.31×10-1 copies/16SrDNA copies、7.81×10-1 copies/16SrDNA copies和1.57×10-1 copies/16SrDNA copies,其中blaTEM的相对丰度最高。结果表明:鸭粪便中耐药基因的污染严重,其中β-内酰胺类药物耐药基因的丰度最高,酰胺醇类药物最低;在广东地区鸭粪中具有代表性的主要耐药基因,磺胺类是sul1和sul2;四环素类是tetO、tetA和tetB;β-内酰胺类是blaTEM;酰胺醇类是fexB、cmlA、fexA和floR。

    2017年11期 v.37;No.251 2156-2162页 [查看摘要][在线阅读][下载 635K]
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  • 硒化修饰太子参多糖对免疫损伤小鼠的免疫保护作用

    宋玉龙;丘富安;吴秀钦;任喆;秦韬;黄一帆;

    取220只小鼠随机分为11组,即健康对照组、给药组(9个组)和环磷酰胺(CY)模型组,每组20只。其中,给药组的9个组中,硒化太子参多糖2(sRPP2)、硒化太子参多糖3(sRPP3)和太子参多糖(RPP)各按质量浓度1,2,3g/L分别设3个组。健康对照组和环磷酰胺(CY)模型组皮下注射生理盐水,持续14d。给药组皮下注射给药,连续14d。15d开始,除了健康对照组,9个给药组和环磷酰胺(CY)模型组腹腔注射环磷酰胺,连续注射3d,分别测定免疫器官指数、免疫球蛋白IgM和IgG的含量、巨噬细胞分泌细胞因子TNF-α和IL-6含量、免疫细胞吞噬指数。结果显示:sRPP2、sRPP3、RPP各项指标都高于环磷酰胺组(P<0.05)。结果表明:硒化修饰能增强太子参多糖对免疫损伤小鼠的免疫保护作用,sRPP3的作用最好。

    2017年11期 v.37;No.251 2163-2167+2180页 [查看摘要][在线阅读][下载 1340K]
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  • 猪DDX1基因的克隆、序列分析及表达

    谢立兰;李晨;吴蔚;方六荣;肖少波;

    根据已知人、小鼠、牛、鸡、犬和恒河猴等物种的DEAD-box解旋酶1(DEAD-box helicase 1,DDX1)基因mRNA序列设计引物,从猪肾传代细胞系(PK-15)中克隆DDX1基因编码区(CDs)序列,对该基因进行生物信息学分析、组织表达谱分析。进一步将猪DDX1基因CDs序列克隆至真核表达载体pCMV-Tag2B,构建的重组真核表达质粒转染PK-15细胞后运用Western blot和间接免疫荧光试验检测DDX1基因的真核表达。结果显示:成功克隆了猪DDX1基因的cDNA序列(GenBank登录号为KU522467),其开放读码框全长为2 223bp,编码740个氨基酸;与牛、鸡、黑猩猩、犬、人、小鼠、大鼠和恒河猴的氨基酸序列同源性分别为98.8%、93.5%、97.6%、98.8%、97.7%、97.0%、97.6%和97.8%。表达谱分析表明,猪DDX1mRNA在不同组织中的表达水平存在差异,表现为脂肪、肝脏和脾脏中高表达,而在胃、心脏和肌肉中表达较低。成功构建了猪DDX1基因真核表达质粒,经证实目的基因可以在真核细胞中特异性表达,且表达的DDX1蛋白主要定位于细胞质中,少量定位于细胞核中。结果表明:本试验克隆了猪DDX1基因的序列,分析了其在不同组织的表达规律,并构建了DDX1基因重组表达质粒,为该基因下一步的功能学研究奠定了基础。

    2017年11期 v.37;No.251 2168-2174+2205页 [查看摘要][在线阅读][下载 1551K]
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  • 山羊CCRL2基因的分子克隆和表达分析

    廖红海;林亚秋;朱江江;李倩;林森;张小玉;李想;王永;

    本研究旨在克隆山羊趋化因子(C-C基序)受体2(chemokine(C C motif)receptor-like 2,CCRL2)基因序列,并研究其组织和时序表达谱。以简州大耳羊为试验材料,应用RT-PCR方法克隆CCRL2基因并进行生物信息学分析,qPCR方法构建该基因在山羊不同组织表达谱和不同月龄背最长肌、股二头肌和臂三头肌中的表达水平,并将基因表达与IMF含量进行相关分析。结果显示:克隆得到山羊CCRL2基因(GenBank登录号:KT165378)长度为1 143bp,编码区长度为1 047bp;qPCR分析表明,CCRL2mRNA在24月龄山羊心、肝、脾、肺、肾、脂肪、背最长肌、股二头肌和臂三头肌中均有不同程度的表达,其中脾表达量最高(P<0.01);时序表达中,CCRL2基因在股二头肌和臂三头肌中的表达量均在8~10月龄极显著高于1~3和24月龄(P<0.01),在背最长肌中则为24月龄极显著高于1~3和8~10月龄(P<0.01);相关分析显示,股二头肌中CCRL2基因mRNA表达量与IMF含量呈极显著负相关(P<0.01)。CCRL2基因可能参与山羊IMF沉积作用。

    2017年11期 v.37;No.251 2175-2180页 [查看摘要][在线阅读][下载 1661K]
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临床兽医学

  • X射线对实验性犬膝关节骨关节炎的诊断意义

    罗春海;刘健莹;刘瑶;郑程远;史金阳;徐美花;付世新;

    将36只健康雄性小型杂种犬随机平均分为模型组与对照组,模型组犬右后肢膝关节使用改良后的前十字韧带切断法诱导骨关节炎,对照组仅做切开右后肢膝关节囊后缝合处理。在造模后第4、8、12周对2组犬进行关节活动度检查、肉眼检查、X射线检查与K/L分级评分。结果显示:随造模时间延长,模型组犬膝关节肿胀、活动受限,出现跛行,肉眼检查观查同X射线结果一致呈加重表现,为关节间隙变窄、骨赘增多、软骨下骨密度升高,与对照组比较均差异显著(P<0.05)。X射线对中晚期骨关节炎病变敏感,为骨关节炎预后及治疗提供一种安全、简便的方法。

    2017年11期 v.37;No.251 2181-2185+2214页 [查看摘要][在线阅读][下载 757K]
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  • 镉及α-硫辛酸对大鼠肝脏GJIC功能的影响

    申瑶;韩涛;邹辉;顾建红;袁燕;卞建春;刘宗平;刘学忠;

    为探讨镉及α-硫辛酸(α-LA)对大鼠肝细胞缝隙通讯功能(GJIC)的影响,将30只100g左右SD雌性大鼠随机均分为3组:对照组(自由饮水及超纯水灌胃)、镉组(50mg/L醋酸镉自由饮水及超纯水灌胃)、镉与α-LA共同处理组(50mg/L醋酸镉自由饮水及α-LA灌胃50mg/kg)。12周后,采用荧光染料标记传输示踪法(IL/DT)测定GJIC功能,免疫印迹检测大鼠肝脏中Cx43、p-Cx43、Cx32蛋白表达变化,荧光定量PCR法检测大鼠肝脏中Cx32、Cx26、Cx43mRNA表达量的变化。IL/DT结果显示,大鼠长时间饮用醋酸镉后,肝脏细胞间荧光黄两侧扩散距离极显著减少(P<0.01),α-LA处理后极显著提高(P<0.01)。肝脏中Cx43、p-Cx43、Cx32蛋白表达量呈显著或极显著的降低,Cx43、Cx32、Cx26mRNA转录基因表达也呈显著或极显著的降低(P<0.05或P<0.01),α-LA处理后都有显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01)。结果表明:长期饮用醋酸镉可以抑制大鼠肝细胞GJIC,可能是连接蛋白或基因表达减少,α-LA能缓解镉对GJIC的影响。

    2017年11期 v.37;No.251 2186-2191页 [查看摘要][在线阅读][下载 839K]
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  • 酵母浓缩物的不同添加方式对罗斯肉鸡生长性能和营养物质表观代谢率的影响

    石琳;张少成;陈广信;曹赞;陈彩文;王志敬;高振华;

    选取192羽1日龄罗斯308肉仔鸡,随机分为3组,每组4个重复,每个重复16只鸡。Ⅰ组为对照组,饲喂基础饲粮,Ⅱ组和Ⅲ组在基础饲粮中添加0.2%的酵母浓缩物,其中II组添加方式为1~42日龄连续添加,Ⅲ组为1~21日龄添加而22~42日龄不添加,试验期42d。结果表明:1~21日龄,和对照组比较试验Ⅱ组和Ⅲ组ADG分别提高9.84%(P<0.05)和9.43%(P<0.05),干物质和粗脂肪表观代谢率提高(P<0.05),试验组间差异不显著(P>0.05);22~42日龄,Ⅱ组和Ⅲ组ADG分别提高12.06%(P<0.05)和5.18%(P>0.05),试验组组间差异不显著(P>0.05);试验组营养物质表观代谢率均高于对照组,但试验组组间差异不显著(P>0.05)。1~42日龄,Ⅱ组Ⅲ组ADG分别提高11.47%(P<0.05)和6.28%(P<0.05),ADFI提高(P>0.05),F/G降低(P>0.05)。综合分析,酵母浓缩物可以提高肉仔鸡的平均日增重和营养物质表观代谢率,降低料重比,并具有后续促生长的作用。

    2017年11期 v.37;No.251 2192-2196页 [查看摘要][在线阅读][下载 123K]
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  • 日粮添加β-葡聚糖对仔猪生长性能、肠道发育与免疫功能的影响

    刘金艳;王瑶;毛俊霞;石宝石;赖星;李金龙;唐志如;

    选取30头28日龄健康断奶仔猪(杜长大),随机分为3组,每组10个重复,每个重复1头猪。对照组饲喂基础日粮,试验1组在基础日粮中添加100mg/kg硫酸黏杆菌素,试验2组在基础日粮中添加400mg/kgβ-葡聚糖,试验期为28d。结果表明:与对照组和抗生素组相比,日粮添加400mg/kgβ-葡聚糖显著提高断奶仔猪的末重,平均日增重,平均日采食量,肉料比,脾脏指数,血浆T-AOC、T-SOD、CAT、NOS、GR、GSH-Px浓度,回肠绒毛高度,空肠黏膜TLR4、β-defensins-2蛋白浓度(P<0.05);降低血浆ALT和AST浓度,空肠、回肠和结肠的隐窝深度,空肠黏膜HSP90和PAPR-1蛋白浓度,IL-8和TGF-β1mRNA水平(P<0.05)。结论:在日粮中添加400 mg/kgβ-葡聚糖可替代100mg/kg饲料添加型抗生素硫酸粘杆菌素,从而提高断奶仔猪的生产性能、提高动物血液的抗氧化能力、增强断奶仔猪机体免疫力。

    2017年11期 v.37;No.251 2197-2205页 [查看摘要][在线阅读][下载 1037K]
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动物科学

  • 液态豆粕酶解发酵物对生长育肥猪的营养价值评定

    赵娜;杨雪海;陈芳;郭万正;黄少文;张巍;李绍章;魏金涛;

    用木瓜蛋白酶和酵母菌在液态状态下对豆粕进行酶解发酵,研究豆粕酶解发酵前后营养成分的变化,并通过猪消化试验对其进行了营养价值评定。结果显示:豆粕酶解发酵24h后,粗蛋白含量变化不显著(P>0.05),水溶性蛋白和小肽的含量显著提高(P<0.05);SDS-PAGE凝胶电泳图显示豆粕的大分子蛋白大部分已经被降解到了相对分子质量35 000以下;高分子蛋白质、中分子蛋白质的含量显著下降而低分子蛋白质的含量提高2.64倍(P<0.05);天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、亮氨酸、赖氨酸含量以及总氨基酸含量有了显著的提高(P<0.05),精氨酸含量降低18.87%(P<0.05);猪消化试验表明豆粕液态酶解发酵物的粗蛋白、苏氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸和酪氨酸的粪表观消化率和豆粕相比显著提高(P<0.05)。结果表明:豆粕经液态酶解发酵后蛋白质品质得到改善。

    2017年11期 v.37;No.251 2206-2210页 [查看摘要][在线阅读][下载 200K]
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  • 牛至精油对奶牛产后发情及繁殖性能的影响

    王欣荣;苏东伟;成述儒;刘婷;吴建平;

    研究牛至精油对奶牛产后子宫感染预防、子宫复旧的作用及对产后发情的影响,为奶牛产后护理和合理安排配种提供依据。将新产犊后的荷斯坦奶牛分为试验A组(子宫投放牛至精油)和B组(对照组),测定其部分繁殖及血液生理指标。结果显示:A组奶牛的宫颈黏液、直肠检查评分均显著高于B组,血液中白细胞和中性粒细胞数显著低于B组,其产后15和30d时血液白细胞数、中性粒细胞数、淋巴细胞数、红细胞数和血红蛋白浓度均显著低于产后0d的水平(P<0.05)。结果表明:牛至精油可杀灭一定数量的病原菌并可预防持续感染,有利于奶牛产后子宫复旧及提早发情,建议在奶牛生产中酌量使用。

    2017年11期 v.37;No.251 2211-2214页 [查看摘要][在线阅读][下载 112K]
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  • L-肉碱对水牛卵母细胞体外成熟的影响

    尹娜;沈朋雷;秦希玲;周文婷;陆凤花;石德顺;

    以水牛为模型,通过探讨L-肉碱(L-carnitine)对水牛卵母细胞体外成熟的影响,同时深入研究添加L-肉碱后卵母细胞抗氧化能力的变化情况,以进一步阐明L-肉碱影响卵母细胞成熟的作用机制。水牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)在添加有不同质量浓度的L-肉碱(0,1,10,100 mg/L即对照组、Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组)的成熟液中体外成熟培养24h后,统计卵母细胞第一极体排出率。结果显示:Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组卵母细胞第一极体排出率分别为(64.44±1.93)%、(66.17±2.76)%和(63.27±1.19)%,与对照组(56.60±1.56)%相比差异显著(P<0.05)。免疫荧光染色观察显示:添加L-肉碱的各处理组的卵母细胞中活性氧的含量显著低于对照组(P<0.05)。同时,利用酶联免疫法测定卵母细胞中脂质过氧化物丙二醛的含量,结果显示Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组的卵母细胞中脂质过氧化物丙二醛的含量分别为0.125 797,0.125 217,0.124 155μmol/L,极显著低于对照组(0.142 609μmol/L)(P<0.01)。此外,采用实时荧光定量PCR方法检测卵母细胞周围的卵丘细胞中卵丘扩展相关基因ptx3、has2以及卵母细胞抗氧化相关基因gpx4的表达情况,分析结果显示:Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组卵丘细胞中has2的表达量均显著高于对照组的表达量(P<0.05),其中以Ⅱ组的最高;而Ⅱ组和Ⅲ组的卵丘细胞中ptx3基因和卵母细胞中gpx4基因的表达量显著高于对照组(P<0.05)。综上可知,水牛卵母细胞体外成熟液中添加适合质量浓度的L-肉碱能显著提高卵母细胞体外成熟率,推测L-肉碱可以通过提高卵母细胞抗氧化能力来促进卵母细胞的体外成熟。

    2017年11期 v.37;No.251 2215-2221页 [查看摘要][在线阅读][下载 1072K]
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  • 藏猪睾丸DNA甲基化与HIF2α基因mRNA表达水平的相关性

    赵彦玲;张博;王志秀;张红亮;张浩;

    对藏猪睾丸组织基因组DNA甲基化水平与Dnmt3a、HIF2α基因mRNA表达水平的相关性进行研究。以大约克猪为对照,采用荧光法测定藏猪睾丸组织基因组DNA甲基化水平,采用实时荧光定量PCR技术测定DNA甲基化转移酶3a(Dnmt3a)与低氧诱导因子2α(HIF2α)的基因在藏猪睾丸组织中mRNA表达水平。结果显示:藏猪睾丸基因组DNA甲基化水平(0.392 9±0.099 2)%显著低于大约克猪睾丸基因组DNA甲基化水平(0.901 7±0.146 7)%(P<0.05);藏猪睾丸组织中Dnmt3a基因mRNA相对表达量(0.071 6±0.036 6)%显著低于大约克猪睾丸组织中Dnmt3a基因mRNA相对表达量(0.987 8±0.137 0)%(P<0.05);藏猪HIF2α基因mRNA相对表达量(0.158 8±0.066 1)%也显著低于大约克猪HIF2α基因mRNA相对表达量(1.2930±0.0756)%(P<0.05)。通过对藏猪睾丸基因组DNA甲基化水平与该组织中Dnmt3a和HIF2α基因mRNA表达量进行相关性分析,发现存在线性正相关,R2值分别达到0.846 3和0.917 4,这将为藏猪睾丸低氧适应性的DNA甲基化机制及藏猪的分子育种等相关研究奠定基础。

    2017年11期 v.37;No.251 2222-2226页 [查看摘要][在线阅读][下载 290K]
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  • 大白猪产仔数相关基因多态性及其遗传效应

    胡慧艳;贾青;赵思思;李晓敏;张伟峰;李书杨;赵坤峰;庞立欣;

    为比较繁殖性状主效基因对不同品系大白猪产仔性能的影响,以便在不同品系大白猪选种实际应用提供依据,本试验采用PCR-RFLP技术,分别对促卵泡素亚基β(FSHβ)、催乳素受体(PRLR)、视黄醛结合蛋白(RBP4)、核受体辅激活蛋白Ⅰ(NCOA1)、瘦素(LEP)等5种与繁殖性状相关候选基因的基因型频率以及不同基因型的总产仔数和产活仔数在英系、美系大白猪群体中进行了检测与关联分析。结果显示:NCOA1和LEP基因多态位点分别在英系和美系大白猪中未检测到BB基因型,其他基因多态位点均存在AA、AB、BB等3种基因型,在美系大白猪群体中5个基因多态位点均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05);而在英系大白猪群体中除在FSHβ、NCOA1、LEP基因多态位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)外,在PRLR、RBP4基因多态位点处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P<0.01)。各基因不同基因型与产仔性状关联分析结果表明,无论是英系大白猪还是美系大白猪,FSHβ基因多态位点在窝总产仔数和产活仔数中均表现为BB型为有利基因型,在美系大白猪中BB型较AA型总产仔数高1.6961头(P<0.05),产活仔数高1.696 9头(P<0.05),但在英系大白猪中不存在显著差异(P>0.05);LEP基因在英系大白猪中BB型为有利基因型,分别较AA型母猪总产仔数高0.790 7头、产活仔数高1.409 3头(P<0.05),而在美系大白猪中不存在显著差异(P>0.05);PRLR、RBP4、NCOA1基因对产仔数不存在显著差异(P>0.05)。

    2017年11期 v.37;No.251 2227-2234页 [查看摘要][在线阅读][下载 1291K]
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综述

  • 猪Delta冠状病毒的研究进展

    易新健;刘准;张翠翠;陈申秒;

    <正>Delta冠状病毒是冠状病毒科冠状病毒亚科的新成员,可感染禽类和哺乳动物。目前冠状病毒主要分为4个群,包括Alpha冠状病毒、Beta冠状病毒、Gamma冠状病毒和Delta冠状病毒。其中能对猪致病的另外4种病毒,即猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)以及猪呼吸道冠状病毒(PRCV)均属于Alpha冠状病毒。

    2017年11期 v.37;No.251 2235-2238页 [查看摘要][在线阅读][下载 311K]
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  • 动物线虫的耐药性相关基因

    孙颖;杨光友;

    <正>肠道寄生线虫是世界各地动物(尤其是草食反刍动物和马)体内最常见的寄生虫种。线虫的感染会影响动物的生长,降低畜禽的生产效率,导致饲料的严重浪费~([1])。长期大剂量驱虫药的使用已导致线虫药物抗性水平增加,产生耐药性;在驱虫效率降低的同时,也增加了养殖成本~([2])。除家畜外,近年来感染宠物的寄生线虫也被发现产生耐药现象,已有犬钩虫(Ancylostoma caninum)对烟碱激动剂(nico-

    2017年11期 v.37;No.251 2239-2248页 [查看摘要][在线阅读][下载 225K]
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简讯