预防兽医学

  • 产气荚膜梭菌多毒素融合蛋白的表达与纯化及基因工程亚单位多价疫苗的制备

    孙雨;翟新验;董浩;赵柏林;王晓英;曲萍;胡冬梅;杨天意;石慧;宋晓晖;

    产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的α、β2和ε毒素是病原的主要外毒素,也是制备预防该病基因工程亚单位多价疫苗的主要研究对象。本研究通过优化密码子、去除蛋白信号肽、选择亲水性与抗原性较好的序列、同时优化表达条件等方法的探索,在大肠杆菌表达系统中获得了高效表达的可溶性α-β2-ε融合蛋白;用该蛋白免疫小鼠后可产生较高水平的血清抗体,针对A、B、C和D型产气荚膜梭菌的免疫保护率分别为100%,100%,90%,100%;小鼠三免后7~14d的抗体效价达到峰值。本研究构建了多毒素融合蛋白表达载体Pet30a-α-β2-ε,并成功表达与纯化出了高效可溶性的目的蛋白,且表达出的融合蛋白具有良好的免疫原性,可以进一步用于羊三联四防基因工程亚单位疫苗的研制,具有较强的研究价值和应用前景。

    2017年12期 v.37;No.252 2249-2255页 [查看摘要][在线阅读][下载 739K]
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  • 6株猪源绿色气球菌的分离鉴定及耐药性分析

    董文龙;王巍;勾长龙;王羽;张红伟;孙健;马红霞;高云航;

    从吉林省不同猪场病死猪肺脏组织中分离到6株优势菌群,通过细菌形态观察,生化试验及16SrDNA基因序列测定确定6株分离株为猪源绿色气球菌,将其命名为Aer-1~Are-6。动物致病性试验结果显示分离菌株对小鼠均有致病性。动物回归致病性试验表明,分离株对仔猪具有致病性。药敏试验结果显示,分离菌株具有多重耐药性,只对阿米卡星、氟苯尼考、环丙沙星及恩诺沙星较敏感。

    2017年12期 v.37;No.252 2256-2259页 [查看摘要][在线阅读][下载 587K]
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  • 鸡致病性E.coli地方株血清型的鉴定、毒力基因及致病性检测

    张召兴;张香斋;李蕴玉;张艳英;常超越;贾青辉;李佩国;

    为了研究河北秦皇岛地区鸡致病性大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)地方流行株的优势血清型、毒力基因和致病性,本研究采用常规鉴定方法和16SrRNA PCR方法,从采集自河北秦皇岛地区不同养鸡场的83份病鸡组织中分离鉴定出56株E.coli。人工感染1日龄雏鸡试验表明,46株分离株为致病性E.coli。采用玻片凝集试验、PCR方法分别测定致病性E.coli分离株的血清型分布和16种毒力基因携带情况。结果显示,定型的42株致病性E.coli分离株包括11种血清型,以O7 8、O89、O142及O1为优势血清型;46株致病性E.coli分离株中以irp2、fuyA、ompT、Iss a、iutA、iroN和hlyF毒力基因检出率较高,在89.1%~100.0%,其他毒力基因检出率为22.0%~72.0%。选择优势血清型代表株QH1(O78)、QH1(O89)、QH1(O142)和QH1(O1)人工感染1日龄雏鸡,计算半数致死量(LD50),确定其致病性。结果表明,QH1(O78)株致病性最强,对1日龄雏鸡的LD50为3.16×106 CFU/mL;对14,49日龄雏鸡的LD50分别为1.07×107,5×108 CFU/mL。本研究为河北秦皇岛地区鸡致病性E.coli地方流行株防控提供试验依据。

    2017年12期 v.37;No.252 2260-2265页 [查看摘要][在线阅读][下载 768K]
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  • 牛化脓隐秘杆菌病肾脏Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax和Bcl-2的表达

    范春玲;胡丹;兰明慧;郭东华;原冬伟;刘琳珊;张国华;朱战波;周玉龙;

    通过研究牛化脓隐秘杆菌感染牛肾脏组织的病理学变化及检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax和Bcl-2的表达,来确定牛肾脏组织的坏死和细胞凋亡情况。本研究首先筛检5头自然感染化脓隐秘杆菌病牛和2头阴性健康对照牛,采集其肾脏组织样本。采用H.E.染色法观察病理组织学变化;采用免疫组织化学方法来检测肾脏组织中与细胞正负凋亡有关的调节基因Bax和Bcl-2的表达情况以及凋亡通路蛋白Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达情况。结果显示,感染牛肾脏组织有坏死,间质有中性粒细胞浸润;感染组牛肾脏肾小球内皮细胞和肾小管上皮细胞Bax、Caspase-3和Caspase-9表达呈阳性,与对照组相比,差异显著;有少量肾小管上皮细胞、肾小球内皮细胞Caspase-8和Bcl-2表达呈阳性,但与对照组相比差异不显著。结果表明,化脓隐秘杆菌能够引起牛肾脏组织实质细胞发生坏死和凋亡,且以线粒体凋亡途径为主。

    2017年12期 v.37;No.252 2266-2269+2274页 [查看摘要][在线阅读][下载 2390K]
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  • DNA免疫法制备抗鸡IL-4单克隆抗体

    戴华;闫加庆;张海霞;徐正中;陈祥;焦新安;

    为建立有效检测鸡IL-4(ChIL-4)的生物学方法,将重组真核表达质粒pVAX1-ChIL-4作为免疫抗原,肌肉注射法免疫6周龄BALB/c小鼠,免疫的间隔时间为4周,共免疫5次;于加强免疫3次后,取免疫鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合。以His-ChIL-4为检测抗原,建立间接ELISA筛选杂交瘤细胞株;采用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞株进行亚克隆,体内诱生腹水法大量制备腹水单抗;采用ELISA、Western blot法分析mAbs的特异性。结果本研究共获得3株抗ChIL-4mAbs:1C11、5C1和3E10,其亚类分别为IgM、IgM和IgG2a,腹水效价为(1.6~6.4)×104。间接ELISA及Western blot结果显示,所获得的mAbs均只识别重组ChIL-4,而不能识别其他无关抗原,表明所获得的3株mAbs均特异性针对ChIL-4。该mAbs的获得为建立检测ChIL-4的生物学方法及进一步研究ChIL-4的生物学功能提供了有效的生物材料。

    2017年12期 v.37;No.252 2270-2274页 [查看摘要][在线阅读][下载 451K]
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  • 猪肺炎支原体脂蛋白LppB的克隆表达及其编码氨基酸的生物学分析

    刘威;袁芳艳;周丹娜;刘泽文;杨克礼;段正赢;郭锐;蔡行;刘保亮;吴修竹;肖少波;田永祥;

    本研究旨在获得猪肺炎支原体脂蛋白LppB的表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究脂蛋白LppB的功能奠定基础。试验构建重组表达质粒pET30a-LppB,通过快速定点突变试剂盒将LppB基因中1 068,1 353,1 578nt处的A突变为G,使改造后的LppB基因能在大肠杆菌系统中正确表达,IPTG诱导重组蛋白的表达并进行蛋白纯化。SDS-PAGE分析结果显示,IPTG诱导表达后获得一条特异性蛋白条带,相对分子质量约为70 000,与预期蛋白大小一致。可溶性分析结果表明目的蛋白主要以可溶的形式表达于上清中;Western blot鉴定结果表明纯化的蛋白能与抗6×His标签的单抗发生特异性反应。采用DNAStar Protean模块对脂蛋白LppB进行了二级结构、蛋白质骨架柔性区域、抗原指数的预测,并确定了B细胞抗原优势表位的可能分布。

    2017年12期 v.37;No.252 2275-2280页 [查看摘要][在线阅读][下载 1679K]
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  • 鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白可溶性原核表达及免疫原性分析

    李赛赛;郭玉堃;舒静超;曾磊;郭婉莹;郭豫杰;

    为在大肠杆菌中表达出高可溶性的VP2-LS3蛋白笼纳米颗粒并检测其免疫原性,将扩增的7种融合标签(GST、NusA、MBP、PpiB、γ-crystallin、ArsC和Grifin)片段连在VP2-LS3基因的N端,构建7个带有不同标签的重组原核表达载体。再将其分别转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳分析,筛选出显著促进VP2-LS3蛋白可溶性表达的融合标签,并进行大量诱导表达、纯化。纯化得到的VP2-LS3重组蛋白分别进行TEV酶酶切、电镜观察分析及免疫家兔,并对获得的兔抗VP2血清进行Western blot和间接ELISA分析。结果显示,与其他6个标签相比,MBP标签促进VP2-LS3蛋白的可溶性表达具有显著性,可溶性表达水平达到69.5%;TEV酶可以把His6-MBP标签蛋白与VP2-LS3蛋白分开,获得高纯度的VP2-LS3蛋白;镜检显示形成了LS3蛋白笼纳米颗粒;Western blot结果表明,表达的VP2-LS3重组蛋白可与兔抗血清发生特异性反应,而不与阴性对照血清发生反应;间接ELISA检测制备的兔抗VP2血清效价达到1∶12 800。本研究获得了高可溶性的VP2-LS3蛋白笼纳米颗粒,为传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因工程疫苗的研发奠定基础。

    2017年12期 v.37;No.252 2281-2287页 [查看摘要][在线阅读][下载 1625K]
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  • 持续低产蛋率蛋鸭群主要病毒感染的检测与分析

    陈珍;傅秋玲;陈红梅;陈翠腾;施少华;傅光华;程龙飞;朱春华;万春和;林建生;黄瑜;

    为了明确持续低产蛋率开产蛋鸭群的主要病毒病感染情况,应用已建立的间接ELISA方法和血凝抑制试验对2013年1月至2015年10月采自福建、广东、广西、江西、浙江、江苏和安徽等7省(区)免疫过H5亚型和H9亚型禽流感灭活疫苗但未免疫禽1型副黏病毒病疫苗和禽坦布苏病毒病疫苗,表现为持续低产蛋率的29个开产蛋鸭群的4 737份血清样品进行抗体检测,同时采集蛋鸭卵巢组织进行RT-PCR检测。结果显示,29个开产蛋鸭群中,H5亚型禽流感、H9亚型禽流感、禽1型副黏病毒病和禽坦布苏病毒病抗体的群阳性率分别为100.0%,100.0%,10.3%和100.0%,群内阳性率分别为79.4%~100.0%,82.5%~100.0%,0.0%~13.1%和33.7%~100.0%;蛋鸭卵巢组织中H5亚型禽流感病毒、H9亚型禽流感病毒、禽1型副黏病毒和禽坦布苏病毒的阳性率依次为13.8%(4/29),0.0%(0/0),3.5%(1/29)和86.2%(25/29)。上述结果表明,我国以上7省(区)表现持续低产蛋率的开产蛋鸭群存在禽坦布苏病毒的严重感染,应引起养鸭生产者的高度重视。

    2017年12期 v.37;No.252 2288-2293+2299页 [查看摘要][在线阅读][下载 451K]
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  • 1株猪流行性腹泻病毒S基因的克隆及序列分析

    周如月;刘琪;甘振磊;贾爱卿;王贵平;

    本研究对分离的1株猪流行性腹泻病毒(PEDV)的S基因进行克隆和测序,并进行生物信息学分析。通过ORF3序列分析发现,未有核苷酸的缺失,推测为PEDV野毒株。S基因分析结果表明,该毒株(以GD/JMEP表示)与经典的CV777毒株亲缘关系较远,核苷酸同源性为93.2%,存在多个氨基酸的缺失、插入或者突变;与近几年广东流行的PEDV毒株处于同一个群,亲缘关系较近;相比于经典传统毒株,GD/JMEP株在S基因的几个位点存在核苷酸的缺失或者插入;与目前流行毒株比较,在S基因的406位点存在新的突变。通过氨基酸序列比对分析,GD/JMEP株发生了6个新的氨基酸位点突变,表明本试验检测的GD/JMEP株为目前广东PEDV流行毒株。

    2017年12期 v.37;No.252 2294-2299页 [查看摘要][在线阅读][下载 464K]
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  • 山羊地方性鼻内肿瘤病毒gag蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

    何亚鹏;张琪;王景;周曼;付明哲;许信刚;

    为获得纯化的山羊地方性鼻内肿瘤病毒(enzootic nasal tumor virus of goats,ENTV)gag蛋白和抗gag蛋白的多克隆抗体,根据GenBank已登录的ENTVgag基因序列,设计合成1对特异性引物,应用PCP扩增gag基因并连接于原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-gag,经鉴定正确后转化大肠杆菌Rosetta(DE3)株进行诱导表达,并进行SDS-PAGE分析。重组菌经IPTG诱导后成功表达相对分子质量约为69 000的重组蛋白,重组蛋白经镍柱亲和层析纯化、尿素梯度透析复性后免疫小鼠制备多克隆抗体。Western blot试验表明,重组蛋白能与制得的多克隆抗体反应,而与正常小鼠血清和山羊地方性鼻内肿瘤患羊血清不反应。本试验成功获得了纯化的ENTV gag蛋白和小鼠抗gag蛋白的多克隆抗体,为进一步研究gag蛋白在ENTV致病过程中的作用提供了材料。

    2017年12期 v.37;No.252 2300-2303页 [查看摘要][在线阅读][下载 685K]
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  • 小反刍兽疫病毒N基因部分序列分子演化规律

    王净;王鹏;王长顺;

    为分析中国小反刍兽疫的流行特点,本研究采用生物信息学方法,从NCBI下载小反刍兽疫病毒(PPRV)N基因,以最大似然法建立分子进化树。结果显示,中国PPRV流行株分布于Ⅳ系,有2个分支,2007-2008年中国西藏流行株与2003年印度毒株遗传关系最近,2013-2015年中国西藏流行株与2012年巴基斯坦毒株遗传关系最近。中国小反刍兽疫主要发生于山羊,2015年新疆巴州毒株来自阿尔卑斯野山羊,与2013年以来的毒株在同一分支。China-BJ_2014与China-XJBZ_2015的遗传距离为0.011 7。中国两簇PPRV分支均与西部邻国毒株遗传关系最近,目前出现多宿主和变异性的流行特点,本研究为有效防控PPRV疫情提供基本的科学依据。

    2017年12期 v.37;No.252 2304-2309页 [查看摘要][在线阅读][下载 1716K]
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  • 捕食线虫性真菌Duddingtonia flagrans冻干制剂的杀虫效果

    李莹莹;乔蕾;杨晓野;王瑞;陈林军;李军燕;罗晓平;连建华;

    本试验通过在含有0.05%琼脂粉的沙氏葡萄糖肉汤培养基中培养Duddingtonia flagrans(D.flagrans)再转接到玉米粒培养基的方法,对D.flagrans厚壁孢子进行培养,之后将其洗脱并制备成冻干制剂,然后对冻干制剂的萌发率和杀虫率进行观察。结果显示,D.flagrans冻干制剂厚壁孢子在接种玉米粉琼脂培养基(CMA)培养后5d萌发率达到峰值78.3%;经口饲喂绵羊D.flagrans冻干厚壁孢子剂量为1×106个/kg时,幼虫平均减少率为81.4%。结果表明,D.flagrans冻干制剂使用方便,复苏和杀虫效果较好,其在生物防制家畜胃肠道线虫病方面有很大的应用前景。

    2017年12期 v.37;No.252 2310-2314页 [查看摘要][在线阅读][下载 623K]
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  • 基于Gateway技术的E.stiedai孢子化卵囊cDNA表达文库构建

    赵爱云;齐萌;江春雨;井波;

    为深入研究斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)的分子生物学特征,揭示其与宿主细胞的互作及免疫机理,以E.stiedai阿拉尔分离株的新鲜孢子化卵囊为材料,采用Gateway技术分别构建了E.stiedai孢子化卵囊cDNA原核和慢病毒表达文库,并测定了文库质量。分析表明,表达文库平均插入片段大小为1.5kb,重组率为100%,慢病毒表达文库和原核表达文库容量分别为3.5×106,3.9×106 CFU/mL,符合高质量文库的标准,可用于进一步开展相关基因的克隆及功能研究,为研究E.stiedai的入侵及免疫机制奠定基础。

    2017年12期 v.37;No.252 2315-2320页 [查看摘要][在线阅读][下载 964K]
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人兽共患病

  • 流感病毒PR8F的拯救及其对BALB/c小鼠的致病力

    崔卓栋;柴丹;溫树波;解长占;孙文超;张萍;韩继成;曹亮;田明尧;金宁一;

    为了研究H1N1流感病毒对BALB/c小鼠的致病相关分子机制、传播机制以及开发新型疫苗,将本实验室保存的A/PR/8/34株的8个质粒参照Paulina构建的流感病毒8质粒突变系统做定点突变,利用反向遗传操作技术,成功拯救出H1N1流感病毒突变株PR8F。将PR8F株以106 TCID50/100μL的剂量滴鼻感染BALB/c小鼠,观察小鼠临床表现及体质量变化。解剖攻毒后不同时间小鼠并观察体内主要脏器的病理特征,提取各脏器RNA,通过实时荧光定量PCR方法,检测PR8F株在小鼠体内不同脏器中的病毒残留量和在BALB/c小鼠肺脏中的扩增效率。结果表明,H1N1流感病毒突变株PR8F感染小鼠4~7d后全部致死;PR8F株在小鼠体内各脏器中的病毒残留量有很大差异,肺脏中最多,且病毒在肺脏内呈指数形式扩增。本试验建立了H1N1流感病毒PR8F株对BALB/c小鼠的感染模型,为H1N1流感病毒致病机制和传播机制的研究奠定基础。

    2017年12期 v.37;No.252 2321-2326页 [查看摘要][在线阅读][下载 849K]
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  • REST缓解由PrP106-126毒性多肽诱导的原代神经元死亡

    宋志琦;朱婷;王进;杨威;崔永勇;周向梅;杨利峰;赵德明;

    为检测神经元限制性沉默因子(REST)蛋白过表达或干扰对由PrP106-126毒性多肽引起的原代神经元死亡的影响,首先通过脂质体转染法将已经构建好的pCMV-HA-REST质粒转染原代神经元,或利用靶向REST的小干扰siRNA技术干扰原代神经元中REST蛋白的表达。用PrP106-126毒性多肽刺激构建好的REST过表达或干扰的原代神经元,利用Annexin V-FITC试剂盒检测细胞活性;利用TUNEL和Hoechest试剂盒,在激光共聚焦显微镜下直接观察细胞凋亡情况;在透射电镜下观察原代神经元亚细胞结构的变化和损伤情况;使用JC-1线粒体膜电位试剂盒检测线粒体膜电位的改变,同时检测凋亡相关蛋白FOXO1、细胞色素C以及Caspase-3的变化情况。结果显示,受到多肽刺激后,REST的过表达可减轻由毒性多肽引起的神经元死亡、神经元空泡化、细胞器损伤,抑制线粒体膜电位的改变,维持促存活蛋白FOXO1的表达,阻止线粒体向胞浆中释放细胞色素C以及Caspase-3的激活。相应地,干扰REST后,可加剧毒性多肽对神经元的损伤并抑制FOXO1的表达。这表明REST蛋白的过表达可缓解由PrP106-126毒性多肽引起的神经元死亡,对神经元起保护作用,为进一步阐释REST对朊病毒及相关神经退行性疾病引起的病理性损伤的治疗作用和神经保护机制提供依据。

    2017年12期 v.37;No.252 2327-2332页 [查看摘要][在线阅读][下载 1728K]
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  • 维氏气单胞菌TH0426株外膜蛋白lamB基因的原核表达及其免疫原性分析

    康元环;陈亨利;张冬星;张海月;安鼎杰;田佳鑫;贾俊鹏;孙武文;单晓枫;钱爱东;

    为研究维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)的免疫原性,本试验对A.veronii的lamB基因进行了克隆,构建了原核表达质粒pET-30a(+)-lamB,并转化大肠杆菌BL21(DE3),将其表达后纯化重组蛋白Maltoporin,利用SDS-PAGE和Western blot进行分析鉴定。将灭活菌体+弗氏佐剂、纯化的Maltoporin蛋白、Maltoporin蛋白+弗氏佐剂及PBS分别免疫鲤鱼后,检测每周各试验组鱼体血清的免疫指标:酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶活力以及IgM抗体水平变化情况,并于加强免疫2周后对鲤鱼进行攻毒保护性试验。结果显示:重组蛋白Maltoporin免疫鲤鱼后能产生明显的免疫反应,保护率在84.2%以上;免疫后鲤鱼血清中IgM抗体水平、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶及超氧化物歧化酶活力较对照组有显著提高。结果表明,重组蛋白Maltoporin具有较好的免疫原性和保护作用,为进一步研究A.veronii外膜蛋白基因工程疫苗奠定一定的基础。

    2017年12期 v.37;No.252 2333-2338+2343页 [查看摘要][在线阅读][下载 1171K]
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  • 成纤维细胞生长因子21介导TLR/MyD88通路减缓布鲁菌诱导巨噬细胞分泌细胞因子

    刘立明;庄昕雨;赵海洋;李霄;赵翠青;金宁一;

    为探讨成纤维细胞生长因子21(FGF21)对布鲁菌感染的抗炎作用,本试验检测患布鲁菌病羊外周血中FGF21的含量;体外试验使用FGF21与布鲁菌共培养后检测细菌存活率;分析FGF21对Raw264.7细胞毒性,并以FGF21预处理Raw264.7细胞后,使用布鲁菌侵染细胞,观察细胞因子的释放以及TLR/MyD88信号通路的变化。结果显示,患布鲁菌病羊外周血中FGF21的含量显著升高,FGF21并不影响布鲁菌的存活率且对Raw264.7细胞没有毒性;FGF21预处理后可以抑制布鲁菌侵染诱导的IL-6、TNF-α、MCP1和LDH的释放,并且FGF21可提高IL-10的含量;同时FGF21可降低布鲁菌侵染引起的TLR/MyD88表达的升高。结果表明,患布鲁菌病羊外周血中FGF21的含量显著升高,FGF21通过TLR/MyD88通路缓解布鲁菌侵染诱导的炎性细胞因子的释放。

    2017年12期 v.37;No.252 2339-2343页 [查看摘要][在线阅读][下载 611K]
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  • 刚地弓形虫PTS核酸疫苗的构建及免疫保护力评价

    朱伟宁;王金磊;陈凯;黄思扬;朱兴全;

    旨在构建弓形虫磷脂酰苏氨酸合成酶(Toxoplasma gondii phosphatidylthreonine synthase,PTS)基因DNA疫苗,评价其抗弓形虫的免疫保护力。利用RT-PCR技术扩增得到弓形虫PTS基因,构建真核表达质粒pVAXTgPTS,然后转染HEK 293-T细胞,分析pVAX-TgPTS在细胞中的表达情况。利用真核表达质粒pVAX-TgPTS对BABL/c小鼠进行3次免疫,并用空质粒pVAX1作为对照,在每次免疫前和第3次免疫后2周收集小鼠血清,经ELISA方法检测小鼠血清中的IgG水平。第3次免疫后2周每组取3只小鼠,将其剖杀取脾脏,CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖能力,流式细胞仪测定CD4+和CD8+T细胞百分比。小鼠脾细胞经STAg刺激后,利用ELISA试剂盒检测脾细胞细胞因子的表达情况。第3次免疫后2周,每只小鼠腹腔注射1 000个弓形虫RH株速殖子,观察记录小鼠的存活时间。结果显示,pVAX-TgPTS能够在HEK 293-T细胞中表达;第3次免疫后2周pVAX-TgPTS组血清中IgG含量相比对照组有了显著提高;pVAX-TgPTS组淋巴细胞刺激指数(SI)略微高于对照组;CD4+和CD8+T细胞百分比含量明显高于对照组;pVAX-TgPTS组中脾细胞经STAg刺激后能够明显提高IFN-γ的表达量。攻虫试验结果表明,pVAX-TgPTS组小鼠存活时间比对照组明显增长。本试验成功构建真核表达质粒pVAX-TgPTS,证明pVAX-TgPTS能够诱导小鼠产生一定的体液免疫和细胞免疫反应,并对弓形虫感染产生一定程度的免疫保护力,该研究结果为进一步研发弓形虫核酸疫苗奠定基础。

    2017年12期 v.37;No.252 2344-2349+2357页 [查看摘要][在线阅读][下载 594K]
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基础兽医学

  • shRNA介导chTERT基因沉默抑制MDCC-MSB1细胞增殖

    邹亚学;杜利强;孙莹;潘风光;郑梅竹;艾永兴;张玉静;刘朋朋;赵丽;安翠萍;卢鹤真;姚传玉;

    几乎所有类型的人类肿瘤都可以检测到端粒酶的活性,通过抑制端粒酶逆转录酶基因(TERT)表达降低端粒酶活性可能是进行抗肿瘤治疗的一个新靶点。本试验通过构建靶向端粒酶TERT基因的shRNA(Sh1,Sh2和Sh3)表达质粒载体转染MDCC-MSB1细胞抑制chTERT基因表达,从而降低端粒酶活性及细胞增殖。Real-time PCR结果显示,Sh1和Sh3在质粒载体转染细胞后48,72,96h显著抑制chTERT基因表达(P<0.05),且呈持续效果;TRAP法端粒酶活性分析显示,Sh1和Sh3在质粒转染细胞72h显著降低端粒酶活性;流式细胞分析显示,Sh3在转染后72h显著降低了S期细胞的比例(P<0.01),G2/M期细胞比例显著上升(P<0.01),G0/G1期细胞比例没有明显变化(P>0.05),抑制了MDCC-MSB1细胞的增殖。结果提示,shRNA通过抑制TERT基因表达可有效降低端粒酶活性,阻滞肿瘤细胞的增殖,为抗癌症治疗提供了新的备选方案及具有参考价值的基础科学数据。

    2017年12期 v.37;No.252 2350-2357页 [查看摘要][在线阅读][下载 925K]
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  • 大肠杆菌磺胺类药物抗性基因的检测

    金明兰;孟庆玲;陈松;曾庆雄;窦梦雪;徐莹莹;陆海;金宁一;

    为了解不同来源大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)对磺胺类药物的抗性,从鸡(128)、鸽子(86)和鹌鹑(36)的病变器官以及养殖场周围水(45)、土壤(35)中共分离到330株E.coli,应用肉汤微量稀释法和PCR方法,分离、鉴定磺胺类药物抗性菌株,检测抗生素抗性基因,分析抗生素抗性。结果显示,不同来源的330株E.coli分离株中,对磺胺甲恶唑、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶和磺胺甲氧嘧啶的敏感菌株分别为118株(35.8%)、109株(33.0%)、95株(28.8%)、81株(24.5%)。磺胺类药物敏感菌株对抗生素的耐受能力依次为:氯霉素、青霉素、四环素、环丙沙星、庆大霉素、利福平;且病变器官分离菌株的抗生素抗性高于水、土壤中分离的菌株,鸡源分离菌株抗生素抗性高于鸽子、鹌鹑;菌株的磺胺类抗性基因sul1、sul2、int1检出率较高,Int2、sul3检出率较低。磺胺类抗生素抗性菌的抗性基因检出率依次为鸡、鸽子、鹌鹑、水、土壤。病变组织、水、土壤分离株中共检出182个抗性基因,其中,97株只含1种抗性基因,11株含2种抗性基因,6株含3种抗性基因,5株含有4种抗性基因,5株含有5种抗性基因。磺胺类抗生素抗性菌株有11株未检出抗生素抗性基因,而无磺胺类抗生素抗性的菌株有7株检出磺胺类抗生素抗性基因。结果表明,不同来源菌株的磺胺类药物抗性不同,E.coli的磺胺类抗生素抗性较高,且磺胺类抗生素抗性菌株具有多重抗生素抗性,E.coli磺胺类抗生素抗性的表现型与其基因型之间存在不完全吻合现象。

    2017年12期 v.37;No.252 2358-2363页 [查看摘要][在线阅读][下载 1055K]
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  • 特比萘芬在比格犬体内的药动学和绝对生物利用度

    王东亮;聂巧;李宇琛;李士洋;卜仕金;

    8只健康比格犬采用随机交叉试验设计,盐酸特比萘芬注射液按5 mg/kg单剂量静注,盐酸特比萘芬片按20mg/kg单剂量口服给药,洗脱期为2周。采用高效液相色谱法测定犬血浆中特比萘芬的浓度,以药动学分析软件WinNonlin5.2的非房室模型分析方法处理血药浓度-时间数据。结果显示,犬静注盐酸特比萘芬注射液的药动学参数分别为:Tmax(0.083±0.000)h,Cmax(3.334±0.185)mg/L,T1/2β(15.158±8.558)h,MRT(2.443±1.132)h,AUClast(1.803±0.374)h·mg/L,Vd(49 778.164±25 594.370)mL/kg,CLB(2 414.907±577.369)kg·mL/h。犬口服盐酸特比萘芬片的主要药动学参数为:Tmax(1.875±0.791)h,Cmax(0.324±0.126)mg/L,T1/2β(18.150±10.557)h,MRT(5.019±1.591)h,AUClast(1.094±0.588)h·mg/L,Vd(395 321.202±236 694.989)mL/kg,CLB(14 340.535±3 560.508)kg·mL/h,Flast(16.589±11.495)%,F0~∞(18.236±8.114)%。结果表明,特比萘芬片剂在犬体内吸收迅速,保留时间更长,消除更为缓慢,有长效抑菌效果。

    2017年12期 v.37;No.252 2364-2369页 [查看摘要][在线阅读][下载 455K]
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  • MarA和SoxS共同调节大肠杆菌K12外排泵AcrAB-TolC的表达

    张传珍;常满霞;杨磊;刘艳艳;陈品仙;蒋红霞;

    利用Red同源重组技术构建大肠杆菌K12调控基因缺失菌株,探讨耐药发展过程中marRAB和soxRS对大肠杆菌K12外排泵AcrAB-TolC表达的调控作用。在环丙沙星浓度递增的条件下诱导K12及调控基因缺失菌株,分别获得系列突变菌株,测定各菌株对其他药物的MIC,并检测靶位基因突变情况。利用RT-PCR方法检测诱导突变株中外排泵基因、调控基因、膜孔蛋白基因的表达水平。结果表明,K12正向调控基因(marA和soxS)缺失株在环丙沙星选择压力下仅获得环丙沙星敏感性降低的菌株,而负向调控基因(marR和soxR)在环丙沙星选择压力下可获得环丙沙星中介和耐药的菌株,且诱导突变株仅出现与耐药有关的gyrA单突变(Ser83Leu和Asp87His)。正向调控基因marA和soxS缺失后,外排泵基因表达水平变化不明显,而负向调控基因marR和soxR缺失后,marA和soxS的表达水平显著升高,引起外排泵基因表达水平显著升高,最高达到约13倍。当阻遏蛋白SoxR被敲除后,soxS的表达水平没有变化,而marA的表达水平显著升高,外排泵基因acrB表达水平也升高,说明在调控AcrAB-TolC外排泵基因表达方面,marRA与soxRS存在功能上的冗余,即当其中一个调控因子功能缺陷时,另一个调控因子可以发挥互补调控功能。因此,MarA和SoxS对三聚体系统AcrAB-TolC的正向调控作用是通过解除负向调控蛋白MarR和SoxR对其的阻遏作用实现的,MarRA和SoxRS共同调节外排泵AcrAB-TolC的表达水平。

    2017年12期 v.37;No.252 2370-2377页 [查看摘要][在线阅读][下载 903K]
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临床兽医学

  • 中药组方对腹腔注射大肠杆菌小鼠血清Th17、Treg型细胞因子的影响

    任志华;王婵;邓俊良;沈留红;左之才;

    为探讨中药组方对动物机体免疫调节的作用机理,试验研究了预防用中药组方对感染大肠杆菌小鼠血清中Th17及Treg型细胞因子的影响。选取6只健康小鼠为对照组(记为-72h)。另选取252只精神、体况接近的小鼠,按照性别、体质量分为6组:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为中药组方高、中、低剂量组,灌胃剂量(相当于生药含量,按0.1mL/10g灌胃)分别为20,10,5g/kg;Ⅳ组为药物对照组,按66mg/kg灌胃黄芪多糖;Ⅴ组为模型组及Ⅵ组为健康对照组灌胃同体积蒸馏水,均1次/d,连用3d。试验第4天,Ⅰ~Ⅴ组小鼠均腹腔注射1.7×108 CFU/mL大肠杆菌液(0.1 mL/只),Ⅵ组小鼠注射等量生理盐水。于感染后0,3,6,12,24,48,168h,每组分别选取6只小鼠处死获取全血及血清样本,用ELISA方法测量血清IL-17、IL-23、TGF-β、IL-10的含量,并计算IL-17/IL-10的比值。结果显示:用药后3d,中药组方组小鼠血清IL-17、IL-23,高剂量组的IL-10,中、低剂量组的IL-17/IL-10比值均显著高于模型组及对照组(P<0.05);在感染3h中药组方的IL-10均显著低于感染组(P<0.05),IL-17/IL-10比值均极显著高于感染组(P<0.01),高、中剂量组的IL-17均高于感染组(P>0.05),IL-23、TGF-β均低于模型组(P>0.05)。在试验期间,感染3h后中药组方组的IL-17、IL-23均低于黄芪多糖组,而TGF-β、IL-10和IL-17/IL-10比值部分高于黄芪多糖组。这表明预防用中药组方通过影响感染小鼠血清IL-17、IL-23、TGF-β、IL-10等细胞因子的分泌,调节Th17及Treg细胞亚群平衡,增强机体免疫力。

    2017年12期 v.37;No.252 2378-2383页 [查看摘要][在线阅读][下载 700K]
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  • 维药阿里红5种活性成分体外抗鸡新城疫病毒作用

    阿依姑丽·买买提明;努尔艾力·麦提尼亚孜;阿得力江·吾斯曼;德力拜尔;李建军;赛福丁·阿不拉;

    为了研究维药阿里红各活性成分抗鸡新城疫病毒(NDV)的活性,本试验分别提取了阿里红多糖、多酚、黄酮、生物碱、挥发油并测定其含量。通过MTT法测定阿里红各活性成分对鸡胚成纤维细胞的最大安全浓度。以3种加药方式将药物与NDV加入已制备好的鸡胚成纤维细胞上,即先加药后接种病毒,先接种病毒后加药,病毒和药物混合作用后加入,以检测各组分对NDV的阻断作用、抑制作用以及直接杀灭作用。结果表明,多糖、多酚、黄酮、生物碱、挥发油均有抗病毒活性,其中多糖对NDV的直接杀灭作用及抑制作用强于对NDV的阻断作用。多糖、多酚、黄酮、生物碱、挥发油在抑制作用下的病毒抑制率分别为49.12%,39.64%,42.45%,40.00%,18.59%;杀灭作用下的病毒抑制率分别为45.35%,35.71%,38.57%,35.71%,41.07%;阻断作用下的病毒抑制率分别为15.58%,8.57%,32.98%,43.11%,31.42%。综上可知,维药阿里红的活性成分多糖和生物碱的抗NDV活性较好,可以作为进一步研究的材料。

    2017年12期 v.37;No.252 2384-2388+2396页 [查看摘要][在线阅读][下载 360K]
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  • 丙泊酚纳米乳的制备、质量评价及安全性

    郝朝双;欧阳五庆;杨鸣琦;李红连;王波臻;魏云鹏;

    本研究制备了丙泊酚纳米乳注射液,并对其理化性质及安全性进行了分析。通过考察纳米乳的载药量、稳定性,结合伪三元相图,筛选出纳米乳的最佳配方:丙泊酚1.0%、盐酸利多卡因0.1%、泊洛沙姆188为10.0%、1,2-丙二醇10.0%、生理盐水78.8%;通过透射电镜、激光粒度分析仪观察,发现纳米乳注射液的乳滴呈圆球形,平均粒径为86.82nm,稳定性良好;用高效液相色谱仪检测药物含量,建立了纳米乳中丙泊酚、盐酸利多卡因含量测定的专属性方法;血管刺激性试验和溶血性试验表明纳米乳的安全性与市售力蒙欣相比无明显差异。结果表明,丙泊酚纳米乳注射液制备成功,且该纳米乳安全、稳定。

    2017年12期 v.37;No.252 2389-2396页 [查看摘要][在线阅读][下载 2408K]
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  • 2株枯草芽孢杆菌协同降解黄曲霉毒素B_1的效果

    乔宏兴;史洪涛;姜亚乐;王永芬;赵圣振;边传周;

    旨在研究2株枯草芽孢杆菌协同降解黄曲霉毒B1(AFB1)的作用。将2株枯草芽孢杆菌进行生理生化特性鉴定和16SrRNA序列测定后,以AFB1降解率为依据,分别进行优化培养并观察协同降解作用。结果表明:菌株K-3优化条件为装液量50mL/250mL、温度37℃、4%接种量、初始pH7.0、发酵周期48h,150r/min振荡培养,对AFB1降解率为88.07%(P<0.05);菌株K-TM装液量为50mL/250mL、温度37℃、6%接种量、初始pH7.0、发酵周期60h,150r/min振荡培养,对AFB1降解率为84.81%(P<0.05);K-3、K-TM按体积1∶2组合,对AFB1协同降解率达到88.43%。本研究为益生菌在降解黄曲霉毒素中的应用奠定理论基础及试验依据。

    2017年12期 v.37;No.252 2397-2401页 [查看摘要][在线阅读][下载 283K]
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  • 某规模化奶牛场牛肺外结核的病理学诊断

    许芳;田莉莉;刘朋;孙翔翔;曾巧英;刘思当;范伟兴;

    验证牛结核菌素阳性反应牛的结核病变及其病变的组织分布及病变特征,追踪感染源及传播途径,为奶牛场结核检疫净化提供技术支持。在新疆某规模化奶牛场应用牛结核菌素皮内变态反应(SIT)、IFN-γ试验、PPD点眼反应、ELISA抗体检测4种方法联合检疫,综合判定感染牛23头,全部扑杀并进行系统剖检,采集病料,进行病理组织学和细菌学诊断。剖检结果表明,23头牛中14头牛在肝、脾、淋巴结等肺外组织器官发现眼观结核病变而未见肺脏结核病变,仅有2头发现肺脏及肺门淋巴结病变,7头牛在全身组织器官未能发现眼观结核病变;病理组织学检查结果表明,剖检的23头牛均呈现早、中、后期典型结核结节病变,11头牛的病料分离培养到牛分枝杆菌。该奶牛场结核主要表现为肺外结核,经典肺结核较少,这可能是该奶牛场在以往扑杀的阳性牛中很少发现肺脏结核病变的原因。

    2017年12期 v.37;No.252 2402-2407页 [查看摘要][在线阅读][下载 2337K]
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动物科学

  • 大足黑山羊妊娠不同阶段胎盘组织线粒体酶活性和超微结构变化

    陈秋羊;罗南剑;徐恢仲;娜日苏;赵永聚;

    山羊的胎盘属于子叶型胎盘,胎盘子叶性状和结构与山羊繁殖性能具有较强的相关性。胎盘子叶组织线粒体发挥正常功能是保证胎儿生长发育,进而维持正常妊娠的关键。本试验采用大足黑山羊妊娠60,90,120d的胎盘和胎儿组织为研究对象,检测胎盘子叶及胎儿心、肝、脾、肺、肾组织的线粒体细胞色素C氧化酶(CCO)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、Ca++-Mg++-ATP酶和Na+-K+-ATP酶的活性变化,并通过透射电镜技术观测胎盘子叶组织线粒体的形态结构。结果发现,胎盘子叶及胎儿心、肝、脾、肺、肾的线粒体CCO、SDH及ATP酶的活性都有随着妊娠时间的增加而显著提高的趋势,且在妊娠90~120d的上升趋势高于妊娠60~90d,表明妊娠中后期的胎儿生长发育所需要的能量较多;在同一妊娠阶段,胎盘子叶线粒体酶活性均高于胎儿各组织,且差异显著(P<0.05),说明胎盘子叶是妊娠过程中的重要部位,胎儿组织器官在发育过程中存在先后顺序,并且与该器官的功能作用有关;透射电镜观察发现,随着妊娠时间的增加胎盘线粒体数量增多,密度增大且主要聚集在子叶绒毛附近,这体现了胎盘子叶的营养交换作用。

    2017年12期 v.37;No.252 2408-2412+2417页 [查看摘要][在线阅读][下载 1020K]
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  • 胚蛋给养二糖对朗德鹅生长及能量贮存状态的影响

    滕战伟;李德生;徐晗;周海柱;高云航;娄玉杰;

    采用胚蛋注射技术研究胚胎后期补充外源性营养物质二糖对朗德鹅生长和能量贮存状态的影响。选取发育良好的朗德鹅种蛋300枚随机分为2组,每组3个重复,每个重复50枚种蛋。在孵化第24天进行二糖注射,对照组不做任何处理,处理组注射含蔗糖25g/L、麦芽糖25g/L和NaCl 7.5g/L的二糖混合营养液1.5mL。孵化至出雏后,每个重复选取体质量均匀、健康的雏鹅20只进行饲养试验,饲养期28d。结果显示,处理组对朗德鹅孵化率和初生体质量无显著性影响(P>0.10),处理组显著提高了绝对体质量及其指数(P<0.05)并降低了卵黄囊指数(P<0.05),但对体质量无显著性影响(P>0.10)。处理组显著提高了0日龄(d)的胸肌质量和胸肌指数(P<0.05)。处理组雏鹅0d的肝糖原含量、糖原指数及血糖浓度均显著提高(P<0.05),但肝脏中葡萄糖-6-磷酸酶的活性显著降低(P<0.05)。结果表明,通过胚蛋给养二糖,增加了雏鹅肝糖原和肌糖原的贮备进而缓解了出壳前后能量紧缺的状态,促进了机体的生长发育。

    2017年12期 v.37;No.252 2413-2417页 [查看摘要][在线阅读][下载 132K]
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  • 中国荷斯坦牛SLC35A3-66基因SNP突变与奶牛疾病及泌乳性能的相关性分析

    王梦琦;倪炜;郭译蔚;张慧敏;杨章平;毛永江;

    旨在研究中国荷斯坦牛SLC35A3-66基因SNP突变与疾病及泌乳性能的相关性,为加快奶牛的育种进程提供理论基础。通过对866头中国荷斯坦牛SLC35A3基因编码区进行直接测序和飞行质谱分析,检测SLC35A3基因DNA序列第559位上核苷酸突变G>T,同时收集采样牛只疾病与泌乳性能等信息,用Logistic回归分析其与流产的相关关系,用方差分析法分析SLC35A3-66G>T突变与各胎次临床乳房炎病例数和蹄病发生次数、生产寿命及泌乳性能的相关关系,用Cox回归分析不同基因型奶牛的生存曲线。结果表明:中国荷斯坦牛SLC35A3基因编码区SNP存在1个SNP突变位点c.66G>T;SLC35A3-66G>T与乳脂率、蛋白率、脂蛋白比和总固体极显著性相关(P<0.01),与体细胞评分(SCS)和乳糖含量显著性相关(P<0.05),GT型个体各项指标均显著高于GG型个体;SLC35A3-66G>T与各胎次流产、临床乳房炎发生次数和蹄病发生次数之间无显著性相关(P>0.05);SLC35A3-66G>T与离群月龄显著性相关(P<0.05),GT型个体的离群月龄显著高于GG型个体,与生产月龄和离群胎次无显著性相关(P>0.05)。Cox回归分析表明,SLC35A3-66G>T与荷斯坦牛生产寿命显著性相关(P<0.05),GT型个体的离群月龄显著高于GG型纯合子个体;SLC35A3-66G>T与乳脂率、蛋白率、脂蛋白比和总固体极显著性相关(P<0.01),与乳糖、SCS和奶牛生产寿命显著性相关(P<0.05)。该结果为中国荷斯坦牛泌乳性能和乳房炎抗性的分子标记辅助选择提供参考。

    2017年12期 v.37;No.252 2418-2424页 [查看摘要][在线阅读][下载 237K]
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  • 日粮纤维源对鹅盲肠细菌结构的影响

    周海柱;高云航;徐博;陶大鹏;勾长龙;滕战伟;娄玉杰;

    采用Miseq高通量测序方法分别对饲喂玉米秸秆和苜蓿为纤维源日粮的鹅盲肠黏膜细菌进行检测,并分析各样品中菌种类别、菌落组成和物种差异。结果显示:玉米纤维组(J组)检测出的细菌属于20门类的225个属,苜蓿组(M组)检测出的细菌属于17门类的199个属;J组和M组细菌多样性无显著性差异(P>0.05);M组Verrucomicrobia菌门和Desulfovibrio、Akkermansia菌属相对丰度显著高于J组(P<0.05),M组Clostridium、cc_115、Campylobacter菌属相对丰度显著低于J组(P<0.05)。结果表明:玉米秸秆和苜蓿纤维源对鹅盲肠细菌多样性无显著性影响,但可影响Verrucomicrobia菌门和Desulfovibrio、Akkermansia、Clostridium、cc_115、Campylobacter菌属的相对丰度。

    2017年12期 v.37;No.252 2425-2429页 [查看摘要][在线阅读][下载 375K]
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综述

  • 家禽分子育种技术的重要应用及进展

    张宇辰;连帅;郭文晋;翟骏飞;李悦;杨焕民;

    <正>随着现代畜牧业的快速发展,人们对畜牧产品的需求量也逐渐提高,而家禽养殖业在这个产业化链条中占有非常重要的地位~([1]),其以高密度饲养、低成本饲喂、高出栏率为特征一直被畜牧行业发展者所看好,且高利润回报也是规模化饲养的重要前提~([2-3])。我国家禽产业化养殖模式正处于快速发展阶段,且蛋鸡、肉鸡、鹅和鸭的饲养规模一直居于世界前列,也是世界禽类及其副产品出口大国,正因如

    2017年12期 v.37;No.252 2430-2433页 [查看摘要][在线阅读][下载 220K]
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  • 抗生素残留受体分析法的研究进展

    宁佳囡;程古月;王玉莲;陶亚雄;陈婷;袁宗辉;

    <正>抗生素在抑制或杀灭病原微生物方面发挥着重要的作用,已被广泛用于预防和治疗动物细菌感染性疾病。但由于这类药物使用不当、滥用或不遵守休药期的规定等原因,动物源性食品中出现抗生素残留,对人类健康、生态环境、食品安全等都带来巨大危害~([1-2])。为了保障动物源性食品质量安全,世界各国对抗生素的最高残留限量均有相关法律规定,因此建立快速简便、准确灵敏的抗生素残留检测方法是食品安全必不可少的保障。

    2017年12期 v.37;No.252 2434-2440+2448页 [查看摘要][在线阅读][下载 321K]
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  • 基于全细胞生物传感器的抗生素残留检测方法研究进展

    陈婷;程古月;王玉莲;宁佳囡;郝海红;袁宗辉;

    <正>抗生素是用于治疗感染性疾病最常用的一类药物,但是随着抗生素品种的增加及应用的日益广泛,导致其在动物源性食品中残留和耐药细菌的出现,从而严重危害人类和动物的健康~([1]);因此,合理地使用抗生素以及创建更加快速、简便、灵敏高、检测限低的动物源性食品中抗生素残留检测方法具有非常重要的意义~([2])。传统的抗生素残留检测的方法有仪器分析法、免疫学分析法和微生物学方法等。仪器分析法精确性好、可定量,但仪器昂贵、前处理复杂、

    2017年12期 v.37;No.252 2441-2448页 [查看摘要][在线阅读][下载 544K]
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简讯