预防兽医学

  • 巴马小型猪内源性反转录病毒感染对HEK293细胞周期调控相关基因mRNA表达的影响

    刘金凤;唐海波;马玲;钟华;白安斌;陈凤莲;覃绍敏;吴健敏;

    以巴马小型猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)感染HEK293细胞模型(PERV-BMHEK293)为研究对象,分析PERV整合对HEK293细胞活性的影响,同时建立7种与人细胞增殖和周期调控密切相关基因的实时荧光定量PCR(q-PCR)检测方法,并对细胞感染模型中7个基因的mRNA表达情况进行分析。细胞活力分析结果显示,随着培养代次及培养时间增加,相对于母源HEK293细胞PERV感染模型的细胞活力下降;qPCR检测方法建立结果显示,所构建的cyclinD1、CDK1、CDK4、k-ras、c-myc、p53、p16基因检测方法检测各基因在1.0×10~1~1.0×10~9 copies/μL反应范围内有很好的线性关系,扩增产物熔解曲线只出现特异性单峰,各组内变异系数在0.31%~2.01%之间,组间变异系数在0.46%~2.19%之间,重复性好,可稳定地用于相关基因mRNA的定量检测。用建立的q-PCR检测方法对PERV感染模型进行细胞周期调控相关基因mRNA表达分析,结果显示,与母源细胞相比,模型细胞cyclinD1、CDK1、CDK4、k-ras、p53和p16基因的mRNA表达无明显变化,原癌基因c-myc基因表达下调,提示PERV感染可能抑制c-myc基因表达。该研究结果可为评价巴马小型猪来源PERV在人-猪异种移植中生物安全性提供参考。

    2018年03期 v.38;No.255 433-441页 [查看摘要][在线阅读][下载 557K]
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  • 猪细小病毒6型SYBR Green I real-time PCR检测方法的建立

    孙文超;刘立明;赵翠青;汪伟;赵冠宇;曹亮;张赫;庄忻雨;韩继成;鲁会军;金宁一;

    采用PCR方法扩增PPV6保守区域基因252bp,将其克隆到pClon007载体,构建重组质粒作为标准阳性质粒。以质粒模板建立PPV6的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法,并进行敏感性、特异性和重复性等验证。结果表明,重组质粒特异性好;建立的real-time PCR方法Ct值与标准品模板在8.80×109~8.80×101 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.993,斜率为-4.320。该方法检测灵敏度可达8.80×101 copies/μL。该方法对JEV、PRV、PRRSV、PCV2、FMDV等猪常见病原检测均无特异性扩增;对临床样品的检测结果表明,所建立的荧光定量PCR阳性检测率为40.63%。本试验成功建立了PPV6SYBR Green I real-time PCR检测方法,可实现对PPV6快速灵敏的诊断。

    2018年03期 v.38;No.255 442-445+452页 [查看摘要][在线阅读][下载 224K]
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  • 鸡传染性法氏囊病毒感染对B淋巴细胞线粒体能量代谢的影响

    杨丹芳;李银聚;张春杰;余祖华;贾艳艳;何雷;王臣;韩海锋;

    为研究鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)感染对宿主免疫细胞线粒体代谢的影响和从代谢方面揭示致病机制,本试验以IBDV毒株感染DT40细胞,分别于病毒感染后24,48,72和96h取样,细胞计数并分离细胞线粒体,通过线粒体染色,检测线粒体蛋白含量,线粒体膜电位,线粒体ATP水平,肉碱脂酰转移酶和NADH-CoQ还原酶活性,线粒体脂酰-CoA和NADH、NAD+的含量及NADH/NAD+比值,初步评估IBDV感染对宿主细胞线粒体生物氧化的影响。结果表明,IBDV感染DT40细胞48h后,线粒体蛋白含量显著降低(P<0.01),肉碱脂酰转移酶和NADH-CoQ还原酶活性在感染后24h开始下降(P<0.05),48h后显著被抑制(P<0.01);脂酰-CoA和ATP含量在感染后48h显著降低(P<0.01),NADH/NAD+比值显著增高(P<0.01)。说明IBDV感染DT40细胞后不但对线粒体造成了损伤,而且脂酰CoA的转运和NADH呼吸链受到抑制,导致线粒体能量代谢障碍。本研究从代谢角度为进一步探索IBDV感染对鸡细胞的致病机理提供依据。

    2018年03期 v.38;No.255 446-452页 [查看摘要][在线阅读][下载 489K]
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  • 抗原ELISA检测试剂盒和胶体金试纸条用于禽白血病病毒检测时的比较

    崔贺;孟凡峰;常爽;赵鹏;崔治中;

    为比较不同禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV)抗原ELISA检测试剂盒和胶体金试纸条的灵敏度,本研究将A、B、J 3种不同ALV亚群分别以50,100,500TCID503种剂量接种培养于DF1细胞上,接种后2~8d,每天收取上清,每份上清用3种不同的抗原ELISA检测试剂盒(A、B、C)和2种胶体金试纸条(D、E)同时检测。结果显示,3种亚群3种剂量分别应用A、B、C 3种ELISA检测试剂盒,灵敏度基本一致,但在针对3种亚群的个别剂量时B试剂盒灵敏度略高于A和C;2种胶体金试纸条检测结果完全一致,但其灵敏度均比ELISA试剂盒低,检出时间延后1~2d。同时应用ELISA试剂盒A、B和胶体金试纸条D、E对60枚种蛋蛋清进行了检测,结果显示胶体金试纸条检出率远低于ELISA试剂盒检出率,在某些应用方面还无法完全替代ELISA检测试剂盒。本研究为广大种鸡场开展禽白血病净化选择灵敏度高、操作简便的检测方法及其适用范围提供了借鉴。

    2018年03期 v.38;No.255 453-457页 [查看摘要][在线阅读][下载 143K]
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  • gga-miRNA155介导新城疫病毒感染机制

    陈严玉;刘新鑫;李俊姣;陶志;杨莹莹;费亦东;李青梅;丁壮;尹仁福;

    新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种禽类急性高度接触性病毒性传染病,对全球养禽业造成了严重危害。而现阶段主要依赖疫苗接种的方法对防控新城疫存在着一定的局限性,现已经有多个研究证明宿主miRNA对病毒具有调节作用。根据新城疫病毒NA-1感染鸡细胞HD11 microRNA(miRNA)表达谱分析,选取表达量显著上调的miRNA155作为研究对象,研究miRNA155在介导新城疫病毒感染中的作用。试验研究结果显示,在新城疫病毒感染后miRNA155表达量明显上调,但是miRNA155表达量的改变无法影响新城疫病毒的感染。

    2018年03期 v.38;No.255 458-463页 [查看摘要][在线阅读][下载 507K]
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  • 羊肠道病毒与小反刍兽疫病毒混合感染及流行病学调查

    张群;鲁海冰;郭昌明;李欣;赵伦凯;胡俊英;王旭;王新平;

    本实验室2014年从吉林省某地暴发严重腹泻的病羊群分离出肠道病毒(CEV-JL14)和小反刍兽疫病毒,表明这2种病毒在该次疫病的暴发中可能发挥重要作用。为进一步了解羊群中小反刍兽疫病毒与羊肠道病毒混合感染情况,本研究应用建立的检测小反刍兽疫病毒抗原的夹心ELISA试剂盒和检测羊肠道病毒抗原的双抗体夹心ELISA试剂盒,对采自吉林省和内蒙古地区的共计1 167份羊粪便分别进行检测,发现被检羊群存在较为严重的小反刍兽疫病毒与羊肠道病毒混合感染。羊群混合感染小反刍兽疫病毒和羊肠道病毒在国内外属首次报道,该发现为今后上述病毒引起的疫病的诊断、防治提供流行病学理论依据。

    2018年03期 v.38;No.255 464-468页 [查看摘要][在线阅读][下载 593K]
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  • 猴源rab基因shRNA文库及其稳定细胞株的构建

    郭珍珍;鲁绍芳;樊爽爽;李国利;韩立强;鲁维飞;王江;陈丽颖;杨国宇;褚贝贝;

    为揭示Rab蛋白在猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)入侵进入宿主细胞后的功能,本研究以PRRSV易感的猴胚胎肾上皮细胞Marc-145为模型,构建了针对猴源rab基因的短发夹RNA(shRNA)文库。此文库中的shRNA以pLKO.1为载体质粒,与pMD2.G和psPAX2包装质粒共同转染HEK293T/17细胞,获得慢病毒;利用慢病毒感染Marc-145,通过puromycin筛选获得稳定抑制猴源rab基因表达的细胞株。通过荧光定量PCR方法检测各细胞株中rab基因的敲减效率。本试验构建的文库包含187个克隆、涉及62种rab基因。荧光定量PCR结果证明,筛选出的稳定细胞株中相应rab基因mRNA的表达量均有显著下降。结果显示本试验成功构建了猴源rab基因shRNA文库并筛选出了稳定细胞株,可用于后续进一步研究Rab蛋白在PRRSV生活周期中发挥的重要功能。

    2018年03期 v.38;No.255 469-475页 [查看摘要][在线阅读][下载 249K]
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  • 江西省猪源粪肠球菌毒力基因及耐药性分析

    黄奕雯;幸文定;陶政;王萍;

    通过选择性培养基、PCR技术分离鉴定粪肠球菌,采用PCR技术检测agg、clyA、efaA、esp、ace和gelE基因,使用K-B法测定分离株对红霉素、多西环素、环丙沙星和氟苯尼考的敏感性。结果共分离并鉴定出226株粪肠球菌。98.23%的粪肠球菌至少携带1种毒力基因,各基因检出率由高到低依次为efaA、ace、gelE、agg、esp和clyA。有75.22%分离株携带3~5种毒力基因。分离株对红霉素和多西环素耐药率较高,分别为97.35%和92.48%,对环丙沙星和氟苯尼考耐药率相对较低,分别为65.04%和61.95%,但没有统计学上的区别。因此,携带毒力基因数的多少与抗菌药物的耐药性之间不存在统计学上的关联。

    2018年03期 v.38;No.255 476-480+514页 [查看摘要][在线阅读][下载 244K]
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  • 猪粪便中耐黏菌素大肠埃希菌的分离与鉴定

    韩一啸;周伟;梁冰;冯书章;孙洋;刘军;祝令伟;纪雪;郭学军;

    为比较不同阶段猪粪便中携带耐黏菌素大肠埃希菌的情况,从吉林省长春市某猪场饲养的生长哺乳期、生长育成期、生长育肥期3个阶段的猪粪便样品中分离耐黏菌素大肠埃希菌。耐黏菌素大肠埃希菌总分离率为47.5%(69/146),其中生长哺乳阶段为66.0%(31/47),生长育成阶段为65.4%(34/52),生长育肥阶段为8.5%(4/47)。通过系统进化分群、接合转移和质粒分型试验对分离菌进行系统鉴定,结果表明,耐黏菌素大肠埃希菌分离株以A群和B1群为主,这些大肠埃希菌携带的质粒共8种基因型,以IncFIB(32/69,46.4%)为主,其次为IncY(14/69,20.3%)和IncFIA(7/69,10.1%)等。其黏菌素耐药机制为携带mcr-1基因,均为质粒携带并可以通过质粒介导的方式发生水平转移,其接合转移发生率为87.0%(60/69)。本研究表明猪耐黏菌素大肠埃希菌并非长期稳定生活在猪肠道内,在不同生长发育阶段存在动态变化,其动态变化规律的成因尚待进一步分析。本研究也为黏菌素耐药性的监测提供参考。

    2018年03期 v.38;No.255 481-485页 [查看摘要][在线阅读][下载 183K]
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  • 大肠杆菌O26、O45、O121血清型多重PCR检测方法的建立及应用

    陈金龙;董林;魏凤;于新友;庄金秋;沈志强;王金良;

    大肠杆菌O26、O45、O121血清群是STEC中的常见血清群,传统的大肠杆菌血清学检测存在费时、费力而且不同血清型之间经常出现免疫交叉反应,这给大肠杆菌血清学鉴定带来了极大的困扰。本研究根据大肠杆菌O抗原决定簇相关基因之间的差异设计合成了3对引物,能够快速而准确的鉴定这3种血清群,建立的方法具有较高的特异性、灵敏性,其最低检测灵敏度可达到10pg细菌基因组DNA。

    2018年03期 v.38;No.255 486-490页 [查看摘要][在线阅读][下载 252K]
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  • 禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因壳聚糖纳米DNA疫苗的制备与检测

    宫强;孔梁宇;牛明福;

    为制备禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因壳聚糖纳米DNA疫苗,PCR扩增获得ptfa基因片段,克隆于真核表达载体pcDNA3.1(+)中构建重组质粒,以复凝聚法制备ptfa基因的壳聚糖纳米DNA疫苗。通过凝胶阻滞试验确定壳聚糖与DNA分子完全结合时的N/P比值;测定纳米DNA疫苗的包封率;透射电镜观察纳米DNA疫苗的形态;同时检测其抗DNA酶降解的能力及稳定性。结果成功构建禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因的裸DNA疫苗并制备出纳米DNA疫苗,该纳米DNA疫苗的N/P比值为2.5,包封率为95.3%,经电镜观察显示其形态大多呈规则的球状,粒径为200nm左右,且具有较好的稳定性,可有效抵抗DNA酶Ⅰ的降解。从而为进一步研究其免疫保护效果奠定了一定的基础。

    2018年03期 v.38;No.255 491-495页 [查看摘要][在线阅读][下载 271K]
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人兽共患病

  • 扎伊尔型埃博拉病毒糖蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

    吴芳芳;曹增国;王琪;迟航;金宏丽;冯娜;赵永坤;高玉伟;王化磊;杨松涛;夏咸柱;

    针对扎伊尔型埃博拉病毒(Zaire Ebolavirus,ZEBOV)的糖蛋白(GP)基因(158~368aa)设计引物,将PCR扩增产物克隆至原核表达载体pET30a(+),在宿主菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达。对诱导条件进行优化,纯化后的蛋白通过SDS-PAGE和Western blot鉴定正确后免疫BALB/c小鼠,二免后分离小鼠血清,制备多克隆抗体并进行间接免疫荧光鉴定。结果显示,埃博拉病毒GP在大肠杆菌中以包涵体的形式成功表达,蛋白最佳诱导条件为37℃,0.4mmol/L IPTG诱导6h。经间接免疫荧光鉴定多克隆抗体可以识别重组杆状病毒rBacmid-GP。本研究成功表达并纯化埃博拉病毒GP,制备鼠多克隆抗体,为建立基于ZEBOV GP的检测方法和相关研究奠定了基础。

    2018年03期 v.38;No.255 496-501页 [查看摘要][在线阅读][下载 341K]
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  • 狂犬病病毒入胞途径的初步探索

    王新宇;郭艺迪;高洁;赵铭昕;刘恩华;段铭;关振宏;Waqas Ahmad;张茂林;

    狂犬病病毒(rabies virus,RABV)具有高度嗜神经性,通过识别细胞膜上特异性受体并借助内吞途径侵入细胞。为了探究其入胞途径,本研究在人神经瘤细胞(SH-SY5Y)和非洲绿猴肾上皮细胞(Vero)上,应用氯丙嗪(chlorpromazine)、制霉菌素(nystatin)、巴弗洛霉素a1(bafilomycin a1)、dynasore等抑制剂处理细胞后,进行RABV感染,通过检测病毒N基因拷贝数和RABV效价,对RABV入胞途径进行初步探究。结果显示,RABV通过网格蛋白介导、低pH值和发动蛋白(dynamin)依赖途径侵入SH-SY5Y和Vero细胞,但不通过小窝蛋白依赖途径入胞。这些结果为进一步研究狂犬病病毒感染机制和药物靶点研究提供了新的数据。

    2018年03期 v.38;No.255 502-507页 [查看摘要][在线阅读][下载 377K]
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  • 扬州地区部分屠宰场、农贸市场及动物医院猪源沙门菌分离鉴定、耐药性分析及PFGE分型

    印广浩;王光华;盖晓雷;周金柱;王小波;高清清;高崧;焦新安;

    调查扬州地区部分屠宰场、农贸市场沙门菌的流行情况及耐药情况,同时根据动物医院送检病料中沙门菌的分离情况判断扬州周边地区猪源沙门菌的血清型及流行情况,为流行病学调查提供数据资料。共采集扬州某屠宰场样品、农贸市场和动物医院样品1 727份,分离沙门菌,鉴定血清型,并对所有分离株进行药物敏感性测定及PFGE分型。结果共分离出沙门菌184株,总分离率为10.7%;共鉴定出15种血清型,屠宰场分离株中德尔卑沙门菌分离率最高(63.6%),农贸市场分离株中罗森沙门菌和德尔卑沙门菌分离率最高,而动物医院送检病料中检出的全部为鼠伤寒沙门菌(100%)。84.8%沙门菌分离株对四环素表现出极高的耐药率,对强力霉素、羧苄西林也有较高的耐药率。从农贸市场中可以找到与屠宰场来源沙门菌相同的PFEG谱型。表明沙门菌可在屠宰场和农贸市场之间传播。因此,扬州部分屠宰场、农贸市场沙门菌污染较为严重,应采取措施降低生猪屠宰中沙门菌的污染,减少食物中毒事件。

    2018年03期 v.38;No.255 508-514页 [查看摘要][在线阅读][下载 340K]
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  • 牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛辅助蛋白AP1、AP2主要抗原域串联表达及其免疫活性鉴定

    布日额;王金良;吴金花;孙立杰;锡林高娃;董林;

    利用DNAStar Protean功能筛选AP1和AP2主要抗原结构域,引入15位柔性多肽,通过重叠延伸PCR技术串联融合AP1、AP2主要抗原域基因,PCR扩增串联体基因片段,将其克隆至pET-30a(+)载体,转化BL21(DM3)细胞,进行高效表达,目的蛋白经亲和层析纯化后进行Western blot鉴定。PCR扩增出320bp的AP1和759bp的AP2主要抗原域,经重叠延伸PCR获得了1 065bp的AP1、AP2串联体基因片段,DNA测序结果表明,无碱基的缺失、突变和移码。构建的重组表达载体经诱导能够可溶性表达,目的蛋白相对分子质量大小约46 000,纯化后重组蛋白的纯度>96%,Western blot分析重组融合蛋白结果表明,能够被兔源抗无乳链球菌阳性血清所识别。重叠延伸PCR获得了AP1、AP2主要抗原域串联体,构建了pET-30a(+)/AP1+AP2重组表达载体,诱导目的蛋白呈可溶性表达,表达产物具有良好的免疫反应原性,为进一步研究基于AP1、AP2蛋白的致病机制,检测制剂及疫苗奠定了试验基础。

    2018年03期 v.38;No.255 515-520+543页 [查看摘要][在线阅读][下载 471K]
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  • 非编码小RNA BSR1955在布鲁菌胞内生存和毒力中的作用

    严光文;徐晓阳;刘大伟;雷霜霜;田一男;彭广能;陈泽良;钟志军;

    首先采用RT-PCR鉴定布鲁菌16M在模拟胞内条件下BSR1955的转录,利用TargetRNA2预测BSR1955的靶基因;然后采用融合PCR构建BSR1955缺失株;将BSR1955插入pBBR1-MCS4质粒并电转入16M构建过表达株16M-BSR1955;分析缺失株和过表达株在模拟胞内环境和小鼠体内的存活能力。BSR1955在布鲁菌16M中存在转录且在不同刺激条件下转录水平不同;共预测出BSR1955的靶基因45个;BSR1955缺失或过表达影响布鲁菌16M在体外的生长能力,缺失BSR1955后在高盐、高渗环境中生存能力提高,第28和45天在小鼠脾脏内的细菌数量显著增加,表明BSR1955影响了布鲁菌的毒力。非编码小RNABSR1955影响布鲁菌16M在胞内的生存能力。

    2018年03期 v.38;No.255 521-527页 [查看摘要][在线阅读][下载 375K]
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  • 布鲁菌DnaK蛋白抑制宿主细胞凋亡

    段开放;邓雨明;崔桂梅;彭其胜;

    布鲁菌病是一种典型的人兽共患细菌病,胞内寄生是其感染宿主、并难以治疗的主要原因。目前有关布鲁菌胞内寄生的机制尚未清晰。在本试验中,通过克隆布鲁菌DnaK基因到表达载体pQE-80L,分离纯化His-DnaK融合蛋白,探讨DnaK蛋白调节宿主细胞凋亡的功能。试验表明,第一,His-DnaK处理的巨噬细胞Caspase3剪切被抑制;第二,His-DnaK处理的巨噬细胞TUNEL染色显著降低;第三,布鲁菌DnaK蛋白能抑制宿主细胞凋亡。这将为进一步阐明布鲁菌胞内寄生的分子机制奠定基础。

    2018年03期 v.38;No.255 528-531页 [查看摘要][在线阅读][下载 218K]
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  • 旋毛虫重组蛋白谷胱甘肽S-转移酶对小鼠骨髓源树突状细胞成熟和活化的影响

    索佳文;刘蕾;徐凝;刘晓雷;刘明远;白雪;

    通过原核表达和镍柱亲和层析获得纯度达95%以上的重组旋毛虫蛋白谷胱甘肽S-转移酶(rTs-GST),相对分子质量26 000。分离小鼠骨髓源树突状细胞(BMDC),体外培养至第7天,加入rTs-GST和rTs-GST+LPS刺激48h后,收集细胞进行流式细胞术和ELISA分析。流式结果显示:rTs-GST可抑制由LPS诱导的树突状细胞(DC)表面MHC-II和CD 86表达率的升高。ELISA结果显示:rTs-GST可促进DC分泌抗炎性细胞因子IL-10和TGF-β;抑制由LPS诱导的促炎性因子TNF-α和IL-1β的分泌。因此,旋毛虫可能通过蛋白谷胱甘肽S-转移酶改变DC活化和成熟,诱导T细胞向Th 2方向发展,从而调节宿主免疫反应达到长期寄生。

    2018年03期 v.38;No.255 532-537页 [查看摘要][在线阅读][下载 272K]
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基础兽医学

  • 维药阿魏根多糖体外抗新城疫病毒的作用

    德力拜尔·木拉提;

    用水提醇沉法得到阿魏根总多糖FSPt和4种分级多糖FSP_(30)、FSP_(50)、FSP_(70),FSP_(80)用苯酚-硫酸法及红外光谱对阿魏根多糖进行检测。用MTT法测定各多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,选择安全浓度范围内5种浓度的各多糖与新城疫病毒(NDV)用3种不同的加药方式(先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加)加入到鸡胚成纤维细胞(CEF)中,用MTT法测定各多糖对NDV感染CEF能力的影响。先加多糖后接病毒组和先接病毒后加多糖组FSP_(30)、FSP_(50)、FSP_(70)和FSPt均能显著抑制NDV感染CEF;多糖与病毒感作后加组FSP_(70)和FSP_(80)有显著抑制NDV感染CEF的作用(P<0.05)。结论:新疆阿魏根多糖具有较好的抗NDV作用,其中FSP_(30)和FSP_(50)对病毒的抑制率较高,FSP_(70)在3种加药方式中均表现出显著且稳定的抗NDV作用,综合考虑,FSP_(50)具有很好的研发前景。

    2018年03期 v.38;No.255 538-543页 [查看摘要][在线阅读][下载 245K]
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  • 乳酸菌协同新城疫疫苗对雏鸡肺脏树突状细胞的影响

    孙播东;单春兰;张美玲;孙朋;王凤娇;翟志超;栾维民;杨树宝;

    将1d雏鸡随机分为4组,A,B组分别于1~7d喷雾免疫乳酸菌菌液,7d时对A,C组滴鼻点眼免疫新城疫弱毒苗。分别于1,4,7,14,21和35d取肺脏制作冰冻切片,通过使用CD11c单克隆抗体进行免疫组织化学染色检测雏鸡肺脏中树突状细胞变化情况。结果显示:树突状细胞数量随着天数增长其不断增多,主要分布于支气管相关性淋巴组织与三级支气管气道内壁;乳酸菌与新城疫疫苗均能刺激雏鸡肺脏相关淋巴组织发育,促进树突状细胞增殖;乳酸菌与新城疫疫苗协同作用效果更显著。

    2018年03期 v.38;No.255 544-548页 [查看摘要][在线阅读][下载 647K]
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  • 泰山马尾松花粉多糖对ALV-J不同接种途径诱导的鸡群免疫抑制的免疫调理作用

    朱丽君;胡莉萍;董雯雯;马宁宁;周建波;魏凯;王海荣;朱瑞良;

    分别经口服、点眼、腹腔注射、肌肉注射模拟水平传播感染J亚群禽白血病病毒(ALV-J),同时连续10d口服给予泰山松花粉多糖(TPPPS),分别对各组试验鸡体质量及免疫器官指数、带毒、排毒及抗体、相关免疫学指标进行检测比较。结果显示,饲喂多糖组与接毒组相比,试验鸡体质量及免疫器官指数抑制程度得到改善,血液带毒及泄殖腔排毒量降低,抗体分泌提前、分泌量增加,而IL-2、IL-4细胞因子分泌水平提高,T淋巴细胞转化率、CD4+和CD8+T细胞数增加,其中以腹腔注射和肌肉注射组TPPPS的免疫调理作用最显著,而健康对照组饲喂TPPPS后试验鸡相关免疫指标水平提高。本研究结果表明,TPPPS对健康雏鸡具有一定的免疫增强作用,口服TPPPS对不同水平传播途径感染ALV-J引起的免疫抑制具有免疫调理作用,TPPPS可以作为免疫增强剂用于防控ALV-J的早期水平感染,降低其免疫抑制程度,减少经济损失。

    2018年03期 v.38;No.255 549-555+569页 [查看摘要][在线阅读][下载 467K]
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  • 太子参茎叶多糖的提取及其对小鼠免疫活性的影响

    檀新珠;陈语嫣;蔡旭滨;廖吕燕;黄一帆;马玉芳;

    应用响应面分析法(RSM)提取太子参茎叶多糖(RPSLP),观察RPSLP对小鼠免疫功能的影响。在单因素试验的基础上,根据Box-Behnken设计原理,通过响应面分析优化法提取太子参茎叶粗多糖,经乙醇沉淀及Sevage法除蛋白制备RPSLP。饲喂小鼠,称质量法测定免疫器官指数,碳粒廓清法检测巨噬细胞的吞噬指数,MTT法测定脾淋巴细胞增殖。响应面试验显示,太子参茎叶多糖提取率为3.60%,多糖含量为70.00%。动物试验显示,RPSLP能增加小鼠免疫器官总质量和提高巨噬细胞吞噬能力,并能增强脾淋巴细胞增殖能力,同时能促进细胞因子的分泌。结果表明太子参茎叶多糖含量高,且RPSLP能增强小鼠免疫功能。

    2018年03期 v.38;No.255 556-563页 [查看摘要][在线阅读][下载 473K]
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临床兽医学

  • 脐静脉血脂联素、胰岛素和IGF-1含量与犊牛初生质量的相关性

    傅宏庆;宗佳丽;江涛;巫晓峰;邓俊良;姚志兰;沈留红;

    选取规模化养殖场正常分娩奶牛54头,按犊牛初生质量划分为A组(≤40kg)9头、B组(40~45kg)25头、C组(≥45kg)20头共3组,母牛分娩后立即采集脐静脉血,ELISA法检测血液脂联素、胰岛素和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)含量,分析其间的相关性及与犊牛初生质量的相关性。结果表明,3组脐静脉血中均有脂联素、胰岛素和IGF-1表达,随犊牛初生质量增加,脐静脉血中脂联素、胰岛素和IGF-1含量均逐渐增加。其中A组脂联素含量显著低于C组(P<0.05),A、B组和B、C组脂联素含量均分别差异不显著(P>0.05);A、B组胰岛素、IGF-1含量均分别显著低于C组(P<0.05);A、B组胰岛素、IGF-1含量均分别差异不显著(P>0.05);脐静脉血脂联素、胰岛素和IGF-1含量均分别与犊牛初生质量呈极显著性正相关(P<0.01);脐静脉血脂联素、胰岛素和IGF-1含量两两间均呈极显著性正相关(P<0.01);公犊牛脐静脉血脂联素和胰岛素含量均略高于母犊牛脐静脉血,而公犊牛脐静脉血IGF-1含量略低于母犊牛脐静脉血,但脐静脉血脂联素、胰岛素、IGF-1含量在公、母犊间差异均分别不显著(P>0.05)。据此得出,脐静脉血均有脂联素、胰岛素和IGF-1表达;脐静脉血脂联素、胰岛素和IGF-1含量均对犊牛初生质量影响较大;但脐静脉血脂联素、胰岛素、IGF-1含量在公、母犊间差异性均不显著;为进一步研究脐静脉血脂联素、胰岛素和IGF-1对犊牛宫内生长发育的影响机理提供参考。

    2018年03期 v.38;No.255 564-569页 [查看摘要][在线阅读][下载 149K]
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  • 催乳素调控肝脏细胞脂代谢的信号机制

    张强;崔媛旭;贾红豆;李莹;吴媛媛;李心慰;李小兵;

    催乳素(prolactin,PRL)是启动和维持泌乳所必须的激素,在泌乳期间能够优先将机体营养物质和能量流向乳腺,用于乳脂和乳蛋白的合成。本试验采用体外分离培养奶牛肝脏细胞,分别添加PRL和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)抑制剂LY294002、PRL和酪氨酸蛋白激酶2(janus kinase 2,JAK2)抑制剂AG490,通过甘油三脂(triglyceride,TG)测定试剂盒测定细胞内TG含量,以确定PRL的脂质合成通路,进而探讨其对脂合成相关基因的作用。结果显示,PRL通过PI3K-Akt信号通路促进奶牛肝脏细胞TG的合成,此时关键转录因子固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)的表达活性和转录活性及下游控制脂合成的脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)基因表达均显著升高。而与之相反,添加LY294002之后,SREBP-1c基因的表达活性和转录活性及下游基因FAS、ACC1的表达则显著降低。结果表明,PRL通过PI3K-Akt通路调节SREBP-1c、FAS和ACC1的表达来调控肝脏细胞的TG合成。

    2018年03期 v.38;No.255 570-575页 [查看摘要][在线阅读][下载 361K]
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  • 镉致大鼠睾丸损伤及葛根素的保护作用

    汪纪仓;范婷婷;苏煜智;李诗;郭蒙蒙;杨自军;刘宗平;

    24只4周龄雄性SD大鼠,分成4组并每天按以下处理:对照组灌服蒸馏水(10 mL/kg);葛根素组每日按照100mg/kg的用量灌服葛根素;镉组按照2mg/kg的Cd2+用量腹腔注射氯化镉溶液(10g/L);镉+葛根素组,在镉组的处理基础上,再按照100mg/kg的用量灌服葛根素。4周后,将大鼠麻醉并处死,摘取睾丸称其质量并计算脏器系数,睾丸制成组织匀浆检测大鼠睾丸中过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量,并制作睾丸病理切片显微镜观察。结果显示与对照组相比,镉组大鼠睾丸脏器系数极显著降低(P<0.01);睾丸组织中CAT和MDA的含量显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01),GSH含量极显著减少(P<0.01);与镉组相比,镉+葛根素组睾丸脏器系数极显著升高(P<0.01);睾丸组织中CAT和MDA的含量显著降低(P<0.05),GSH含量显著增加(P<0.05)。病理切片显示镉组大鼠睾丸组织的细胞出现实化,看不到各级睾丸细胞正常结构,镉+葛根素组与镉组相比,睾丸细胞损坏程度都有所减轻。本试验表明镉对大鼠睾丸有损伤作用,而葛根素能减轻这种损伤,对镉致大鼠睾丸损伤具有保护作用。

    2018年03期 v.38;No.255 576-580页 [查看摘要][在线阅读][下载 404K]
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  • rhG-CSF对大肠杆菌性乳房炎昆明小鼠血液生理指标和乳腺组织形态的影响

    李浪;万涛梅;袁贵强;左之才;王正义;任毅;

    将120只泌乳8~10d的初产昆明小鼠,随机分为5组。Ⅰ,Ⅱ组皮下注射0.1mL生理盐水,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组分别按10,20,30μg/kg体质量注射0.1mL rhG-CSF;24h后,Ⅰ组第4对乳房每侧灌注25μL生理盐水,Ⅱ~Ⅴ组灌注等量含1.5×107 CFU/mL大肠杆菌菌液。于感染后0,24,72,120h,每组选取6只小鼠,检测血液白细胞数量、血清TNF-α含量、乳腺组织大肠杆菌数量并观察组织病理学变化。结果显示,整个试验期间,Ⅴ组血液中白细胞总数及其分类均显著高于Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ组,Ⅳ组高于Ⅱ,Ⅲ组,Ⅲ组高于Ⅰ,Ⅱ组,Ⅱ组高于Ⅰ组;血清中TNF-α含量比较,24h时,Ⅱ组显著高于Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组,72和120h时,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组显著高于Ⅰ组,Ⅱ,Ⅲ组显著高于Ⅴ组;120h时,Ⅴ组未检出大肠杆菌,且乳腺组织无明显炎症损伤,Ⅱ组大肠杆菌数量极显著高于Ⅲ,Ⅳ组,Ⅲ组极显著高于Ⅳ组,其中Ⅱ组小鼠乳腺腔和间质内大量炎性细胞浸润,组织结构紊乱,Ⅲ组有少量炎性细胞浸润,Ⅳ组组织结构完整,组织损伤轻微。结果表明,rhG-CSF能通过升高小鼠血液中白细胞数量和TNF-α浓度,达到提高病原菌清除率,从而减轻组织损伤的目的,且以30μg/kg效果最佳。

    2018年03期 v.38;No.255 581-585+590页 [查看摘要][在线阅读][下载 250K]
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动物科学

  • 小鼠卵母细胞及体细胞核移植重构早期端粒酶活性的测定

    刘宇;张日欣;李钟淑;

    采用端粒酶重复序列扩增(telomeric repeat amplification protocol,TRAP)-银染法,对小鼠卵母细胞、体内受精胚胎及重构胚的各阶段端粒酶活性进行测定,对PCR产物的电泳条带进行灰度值分析,计算端粒酶总产品总量。结果表明:(1)体内受精胚胎及核移植重构胚各阶段的端粒酶活性随胚胎分裂呈上升趋势,囊胚期最高(P<0.05);(2)体内受精胚胎的端粒酶活性高于体细胞核移植重构胚端粒酶活性。同时进行囊胚计数并测定单卵裂球相对端粒酶活性,结果表明:单卵裂球的端粒酶活性呈下降趋势,囊胚期端粒酶活性最低(P<0.05)。以上结果说明小鼠卵母细胞及体细胞核移植重构胚端粒酶活性变化与细胞发育水平及细胞发育全能性有关。

    2018年03期 v.38;No.255 586-590页 [查看摘要][在线阅读][下载 232K]
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  • 山羊FGF1基因克隆及表达特性

    李倩;林亚秋;朱江江;王永;林森;

    以简州大耳羊为试验动物,采用RT-PCR技术克隆FGF1基因,采用胶原酶消化法获得山羊原代前体脂肪细胞,利用荧光定量PCR(qPCR)技术检测FGF1的表达差异,并与IMF含量进行相关分析。结果显示,成功克隆山羊FGF1基因(GenBank登录号:KT899959)序列1 165bp,其中开放阅读框468bp,编码155个氨基酸。FGF1在各组织中存在广泛表达,且在心脏和脂肪组织中高表达,极显著高于肝脏、脾脏、肾脏和肌肉组织(P<0.01)。FGF1mRNA表达量与山羊背最长肌和臂三头肌IMF含量呈显著正相关(P<0.05)。随着脂肪细胞分化的进行,FGF1mRNA表达水平呈上升趋势,且在第5天达到最高,随后显著下降(P<0.05)。FGF1可能在山羊脂肪细胞分化早期发挥正调控作用,本研究结果为揭示FGF1基因在山羊肌内脂肪沉积中的作用及机制提供重要数据。

    2018年03期 v.38;No.255 591-597页 [查看摘要][在线阅读][下载 386K]
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综述

  • 奶牛隐性乳房炎综合防制措施的研究与应用

    张哲;李新圃;杨峰;罗金印;刘龙海;李宏胜;

    先后在6个奶牛场开展了为期2~3年的试验,通过加强饲养管理,人工药物干奶及淘汰久治无效的病牛等措施;采集试验前后的奶样,统计分析试验前后乳房炎的发病率及产奶量。结果表明,经过2~3年的防制,6个牛场隐性乳房炎平均检出率由试验前的43.29%降为20.96%;临床型乳房炎的发病率与试验前相比,平均降低了59.84%。经人工药物干奶,试验组奶牛(908头,干奶期乳区内注射干奶安)产犊后比干奶前的隐性乳房炎发病率降低了74.78%,而对照组奶牛(310头,干奶期不做处理)的发病率仅降低了23.62%;产犊后与干奶前瞎奶头数相比,试验组减少25.51%,而对照组却升高32.26%。与试验前相比,奶牛产奶量平均提高了11.85%。结果说明制定的奶牛隐性乳房炎综合防制措施行之有效,能降低奶牛乳房炎发病率,提高奶产量和质量。

    2018年03期 v.38;No.255 598-601+608页 [查看摘要][在线阅读][下载 122K]
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  • 布鲁菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白的研究进展

    吴同垒;单晓枫;康元环;孙武文;吴清民;钱爱东;

    布鲁菌是一种严重危害家畜和人类健康的人兽共患致病菌,近几年国内牛羊养殖场和人的感染率急速攀升,造成了一定程度的社会恐慌。研究认为,布鲁菌在细胞内可以利用Ⅳ型分泌系统(typeⅣsecretion system,T4SS)分泌多种效应蛋白进入宿主细胞,这些效应蛋白能够改变病原菌在感染细胞内的转运,避免最终被杀死;也能逃避感染细胞的免疫监视功能,维持其在细胞内的持续存在。本文将主要从Ⅳ型分泌系统的基本功能、效应蛋白筛选的方法、以及效应蛋白的功能研究作一简要总结,以期为后续研究提供一定的参考。

    2018年03期 v.38;No.255 602-608页 [查看摘要][在线阅读][下载 169K]
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