预防兽医学

  • 近年我国部分省份PEDV流行毒株S基因及编码蛋白变异分析

    罗天霞;苏丹萍;熊景峰;徐帅飞;贺东生;

    为了解当前猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)在我国部分省份的发病情况以及猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的分子特征和遗传变异情况,本研究从山西、湖北、辽宁、江西、广东5个省份的部分猪场采集疑似PED症状的样品60份,利用RT-PCR方法对其进行PEDV检测。筛选其中的PEDV阳性毒株,利用分段克隆测序的方法获得其PEDV S基因全序列,并利用生物信息学方法对其进行分析。结果表明,PEDV检出率为61.7%;筛选的13株毒株S基因核苷酸同源性为96.6%~99.8%,与2010年以前我国分离株的同源性为92.6%~95.5%,与2010年以后我国分离株的同源性为93.8%~99.4%,与美韩毒株的同源性为93.8%~99.0%,与疫苗株的同源性为92.1%~98.1%;13株S蛋白氨基酸序列与疫苗株CV777氨基酸序列相比存在75个相同突变位点和12个差异突变位点,其中在S1区(1~789aa)占比71.26%,中和表位区域有2个相同突变位点,线性表位区域有9个相同突变位点,2个受体结合域有25个相同突变位点。其S蛋白均具有信号肽(1~20aa),剪切位点为20~21aa。S蛋白的二级结构主要是α-螺旋32.97%、β-折叠27.78%、β-转角8.59%和无规卷曲30.66%。遗传进化分析表明,13株PEDV均属于G2b类群,而我国现今常用的疫苗株CV777归属于G1a类群。说明当前PED在我国的流行趋势依然严峻,本次分离的13株PEDV与2010年前的野毒株以及现行疫苗株相比发生了较大的变异,因此需要引起相关猪场及检疫部门的高度重视,并及早采取措施以防止该病的大规模暴发。

    2018年08期 v.38;No.260 1457-1462页 [查看摘要][在线阅读][下载 1510K]
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  • 猪流行性腹泻病毒疫苗株与野毒株PCR-HRM鉴别检测方法的建立

    饶丹;丛锋;朱余军;练月晓;肖丽;黄韧;张钰;郭鹏举;陈梅丽;

    基于新型的PCR产物分析技术-高分辨率熔解曲线(HRM),大量分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)全基因序列的特点,建立鉴别PEDV CV777疫苗株与野毒株的PCR-HRM分析方法。在ORF1保守区域设计区分引物,同时用普通的RT-PCR方法进行对比。检测19份临床样品中,PCR-HRM方法检测均为阳性且鉴定为野毒株,普通RTPCR之后凝胶电泳分析检测18份阳性,为野毒株。结果表明,PCR-HRM方法具有特异性好,灵敏度高,PCR扩增之后产物无需开盖分析,极大地避免了污染问题,是一种新型的鉴别检测方法。

    2018年08期 v.38;No.260 1463-1466+1527页 [查看摘要][在线阅读][下载 805K]
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  • 猪源化抗PEDV单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

    刘慧敏;常琛;尹志安;朱文姣;周国丽;杨国庆;

    通过BL21(DE3)原核表达系统制备抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)猪源化单链抗体scFv-Fc。提取抗PEDV杂交瘤细胞2D1的总RNA,通过反转录与SOE-PCR方法获得单链抗体scFv基因,同时提取猪脾脏组织的总RNA,RT-PCR获得猪免疫球蛋白恒定区Fc基因。通过SOE-PCR方法将scFv与Fc连接获得猪源性单链抗体scFv-Fc融合基因,构建重组质粒pET-28a-scFv-Fc,将该重组质粒转入BL21(DE3)原核表达菌进行诱导表达,SDS-PAGE分析及Western blot检测融合蛋白的特异性,再对表达蛋白进行纯化和复性,通过间接ELISA鉴定融合蛋白与PEDV的结合活性。结果显示,插入pET-28a载体的scFv-Fc序列长度1 128bp,抗PEDV猪源化单链抗体的相对分子质量为45 800,重组蛋白具有较高的特异性。本研究成功构建了pET-28a-scFv-Fc原核表达系统,重组蛋白具有较高的免疫反应性,为PEDV重组抗体的研究奠定理论基础。

    2018年08期 v.38;No.260 1467-1472页 [查看摘要][在线阅读][下载 1064K]
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  • 融合表达TM-1基因和gD基因重组腺病毒的构建及其免疫效果初步评价

    李小慧;高珂珂;张东超;弓建芳;林静;李昕;孟佳丽;尚翠玲;金天明;

    为研究鸡毒支原体病和鸡传染性喉气管炎2种禽类接触性呼吸道传染病二联基因工程活载体疫苗,试验中选取鸡毒支原体TM-1基因和鸡传染性喉气管炎gD基因,经鉴定获得阳性pMD-TM-1和pMD-gD克隆质粒,酶切胶回收目的基因后分别克隆至穿梭载体构建重组pDC315-TM-1、pDC315-gD和pDC315-TM-1-gD。将构建成功的重组穿梭载体和骨架质粒同时转染293细胞,经荧光显微观察、RT-PCR和Western blot检测,成功包装出能表达TM-1蛋白、gD蛋白和TM-1-gD融合蛋白的重组腺病毒pBH-TM-1、pBH-gD和pBH-TM-1-gD。Vivapure AdenoPACKTM法纯化病毒粒子,以TCID50法确定pBH-EGFP、pBH-TM-1、pBH-gD和pBH-TM-1-gD的滴度分别为1010TCID50/mL、1010.125 TCID50/mL、109.75 TCID50/mL、1010.25 TCID50/mL,符合后续动物试验所需滴度要求。动物试验肌内免疫SFP雏鸡结果显示:重组腺病毒pBH-TM-1-gD组与常规疫苗组免疫效果无显著性差异(P>0.05),可以成为一种替代抗生素的生物治疗方式。

    2018年08期 v.38;No.260 1473-1478页 [查看摘要][在线阅读][下载 1166K]
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  • 鸭肠炎病毒UL18基因的转录、表达特征及原核表达蛋白的初步应用

    陈希文;程安春;汪铭书;常华;陈舜;孙昆峰;朱德康;贾仁勇;

    为了探讨鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)UL18基因的特性和功能,本研究运用生物信息学软件对DEV UL18基因及其编码蛋白进行了分析。构建原核表达质粒pET32a-UL18,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得了大小约为55 000的pET32a/DEV-UL18重组蛋白。将该重组蛋白纯化后免疫家兔,获得了兔抗pET32a/DEV-UL18重组蛋白高免血清。采用荧光定量RT-PCR和Western blot对DEV感染鸭胚成纤维细胞(DEF)后UL18基因的转录和表达情况进行检测,采用间接免疫荧光对DEV感染鸭的肠道和食道进行检测。生物信息学分析结果表明,DEV UL18基因大小969bp,编码1条由322个氨基酸残基组成的多肽,含15个潜在的磷酸化位点和2个N-糖基化位点,含15个潜在的B细胞表位;系统进化树分析表明,DEV UL18属于ɑ-疱疹病毒的1个成员,与MeHV-1亲缘关系最近;密码子偏爱性分析结果表明,若对DEV UL18基因进行外源表达,真核表达系统可能更容易,若选择原核表达系统,则需对宿主表达菌进行选择和条件优化。荧光定量RT-PCR和Western blot结果表明,DEV感染DEF后2h,UL18基因开始转录,感染后12h开始表达,感染24h后转录和表达产物急剧上升,到36和48h后转录和表达产物分别达最大值,之后逐渐下降。间接免疫荧光结果表明,被DEV感染鸭肠道、食道等组织能检测到明显的阳性信号,表明制备的DEV UL18原核表达蛋白及其兔抗多克隆抗体可用于DEV的诊断试剂材料。

    2018年08期 v.38;No.260 1479-1486页 [查看摘要][在线阅读][下载 2071K]
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  • 不同滴度鸭肠炎病毒感染对鸭脾脏的转录组变化分析

    吴良涛;郑敏;华敏;贺欣薇;万润;程振涛;周碧君;文明;

    为探讨不同滴度鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)感染对鸭组织器官转录组的影响,本研究采用2个不同DELD50滴度的DEV,接种50日龄健康鸭90h后,采集脾脏样本,高通量测序技术进行转录组测序,筛选差异表达基因,并应用GO与KEGG数据库进行分析。结果显示,当接种量为100×DELD5 0时,鸭脾脏差异表达基因有685个,其中上调基因341个,主要参与免疫反应、核糖体结构和酶活性等生物学过程,并在核糖体、氧化磷酸化和吞噬体信号通路中显著富集;下调基因为344个,主要参与细胞分化正调控、β转化生长因子生成正调控、酶与相关受体活性、细胞结构等生物学过程,并在细胞黏附分子、内吞作用、肠道免疫网络IgA产生、ECM受体互作、缝隙连接和黏着信号通路上显著富集。当接种量为10-2×DELD50时,鸭脾脏差异表达基因有485个,其中上调基因297个,主要参与细胞功能、蛋白结合和蛋白复合物等生物学过程,并在细胞黏附分子、吞噬体、肠道免疫网络IgA产生、球系列鞘糖脂生物合成及N-糖链合成信号通路中显著富集;下调基因188个,主要参与补体激活、肌肉组织活动调节、受体复合物、酶与受体活性等生物学过程,并在基础转录因子、PPAR信号通路、α-亚麻酸代谢等代谢途径与信号通路上显著富集。这些结果表明不同滴度DEV感染对鸭脾脏转录组产生不同的影响,为深入探究DEV致病分子机制提供基础资料。

    2018年08期 v.38;No.260 1487-1495页 [查看摘要][在线阅读][下载 3004K]
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  • 1型鸭甲肝病毒和鸭坦布苏病毒液相芯片抗体检测方法的建立

    王樱历;张连芝;路化梅;孙俊颖;崔言顺;李建亮;黄兵;马秀丽;宋敏训;

    为建立1型鸭甲肝病毒(duck hepatitis A virus type 1,DHAV-1)和鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)抗体的液相芯片检测方法,应用RT-PCR从鸭尿囊液中扩增获得714bp的DHAV-1VP1序列和1 503bp的DTMUV-E序列,将其分别克隆至原核表达载体pCold-Ⅲ和pET-28a(+)并进行表达。通过SDS-PAGE验证DHAV-1-VP1和DTMUV-E蛋白能够有效表达,通过Western blot进一步验证表达的蛋白均可与其对应的阳性血清发生反应。根据xMAP液相芯片技术原理,以表达的重组蛋白为抗原分别与不同编号的微球偶联,获得偶联复合体作为捕获载体,建立DHAV-1和DTMUV抗体单一和双重液相蛋白芯片检测方法。结果表明,DHAV-1和DTMUV的临界值分别为190.30和223.29,灵敏性检测2种阳性血清的抗体水平分别为1∶51 200和1∶6 400,重复性验证批内和批间变异系数分别为1.44%和3.94%,为DHAV-1和DTMUV抗体监测提供了高通量、重复性好、特异性高的抗体检测体系。

    2018年08期 v.38;No.260 1496-1503页 [查看摘要][在线阅读][下载 1331K]
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  • 牛传染性鼻气管炎病毒gG iELISA抗体检测方法的建立

    张芳;陈颖钰;郭爱珍;

    为了建立有效鉴别牛传染性鼻气管炎病毒(BoHV-1)gg-/tk-基因缺失疫苗人工免疫和BoHV-1野毒株自然感染的鉴别诊断方法,以BoHV-1gG蛋白为抗原建立了间接ELISA(iELISA)抗体检测方法。根据编码BoHV-1gG蛋白的基因序列设计特异性扩增引物,以BoHV-1基因组DNA为模板扩增gg基因截短片段,克隆至原核表达载体pGEX-6p-1并进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明,gg基因在大肠杆菌BL21(DE3)中呈可溶性及包涵体2种形式表达,纯化的gG蛋白具有良好的反应原性。将可溶性gG蛋白纯化后作为包被抗原,建立了BoHV-1gG iELISA抗体检测方法,并优化了各反应条件。使用该方法与商业化试剂盒BoHV-1gE和gB阻断ELISA进行比较检测,并与其他5种牛常见病原体的阳性血清进行交叉反应检测,同时进行了该方法的重复性试验、保存期试验及消长规律试验;最后使用该方法对临床1 031份牛血清进行了检测,血清流行率为83.71%(95%CI:81.30%~85.90%)。结果显示,该方法的阴、阳性血清检测的临界值(S/P值)为0.398,与进口试剂盒比较显示该方法具有良好的诊断敏感性和特异性,且本试剂盒可在1∶50倍样本稀释下进行检测,而商业化试剂盒是1∶1倍样本稀释检测。此外,该方法分析特异性良好,与其他非相关病原体的阳性血清无交叉反应;检测重复性良好;在4℃条件下可保存6个月。该方法在人工感染BoHV-1野毒株和人工免疫BoHV-1 gg-/tk-疫苗株20d后可以明显区分疫苗株免疫和野毒株感染。综上所述,本研究成功建立了BoHV-1gG iELISA抗体检测方法,敏感性和特异性良好,既可以用于有效鉴别疫苗免疫和自然感染,也可作为BoHV-1的血清学诊断方法。

    2018年08期 v.38;No.260 1504-1512页 [查看摘要][在线阅读][下载 873K]
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  • 副猪嗜血杆菌、PCV2及PRRSV多联RT-PCR检测方法的建立及其应用

    罗尚星;范京惠;刘宝京;邸晶美;代飞;常彦嫣;孔园园;左玉柱;

    副猪嗜血杆菌(H.parasuis)、猪圆环病毒2型(PCV2)及猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV)是引起猪呼吸系统疫病的3种重要病原,根据GenBank中这3种病原的基因组序列,选择基因序列的高保守区,分别设计合成了3对特异性引物进行3种病原的多重PCR,并对反应条件进行优化。利用建立的多重PCR方法,对河北省2012-2013年发生呼吸系统疾病的412份猪病料进行检测,并随机选择其中的57份,同时进行单一PCR检测,以确定2种方法检测结果的符合程度。结果表明,3对引物能特异扩增出大小分别为469,829,219bp的目的条带。灵敏度检测试验表明,H.parasuis,PCV2和PRRSV的最低检测量分别为52.7,335.0,137.0pg。412份临床样品检测结果显示,H.parasuis在2012年的阳性率为44.2%,2013年为45.1%,提示这2年引起猪呼吸道疫病的主要病原是H.parasuis。

    2018年08期 v.38;No.260 1513-1518页 [查看摘要][在线阅读][下载 593K]
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  • 猪白细胞介素4/6与牛融合抗菌肽共表达重组毕赤酵母的构建及其对小鼠的免疫协同效应

    马常俊;吴雪颖;万小平;肖永乐;熊旗;梁歌;李江凌;吕学斌;王泽洲;高荣;

    以2A自剪接技术构建猪白细胞介素4/6与牛融合抗菌肽(FBC)共表达重组毕赤酵母,为研究重组酵母对小鼠体内外的免疫协同效应,首先采用猪淋巴细胞增殖试验和抑菌试验研究重组毕赤酵母的体外生物学活性;再以发酵的重组酵母菌液进行小鼠灌胃试验,在试验的28d用致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行腹腔攻毒,每周采血检测小鼠的生长和免疫功能变化。体外试验结果显示,试验组比对照组显著刺激猪淋巴细胞增殖;明显抑制大肠杆菌标准菌、大肠杆菌耐药菌、金黄色葡萄球菌标准菌和金黄色葡萄球菌耐药菌的生长(P<0.05)。小鼠灌胃试验结果表明,试验组小鼠外周血的白细胞、Th和Tc细胞含量显著多于对照组;试验组tlrs(tlr-1,4,6,9),il-1,il-2,il-4,il-6,il-7,il-15,il-23和cd62l基因的表达明显高于对照组;试验组血清中的IgG、IgG1和IgG2a的含量比对照组显著增加。此外,试验组小鼠的体质量比对照组明显增加。攻毒后试验组80%的小鼠存活,而对照组小鼠则有明显的炎症及临床症状,最后全部死于感染,这表明试验组的存活率显著高于对照组(P<0.05)。白细胞介素4/6与牛融合抗菌肽共表达重组毕赤酵母能够有效提高小鼠免疫功能,为探索研制增强动物免疫机能的安全高效的免疫调节剂提供新途径。

    2018年08期 v.38;No.260 1519-1527页 [查看摘要][在线阅读][下载 3492K]
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  • 山羊海藻百伯史坦菌(Bibersteinia trehalosi)的分离鉴定及致病性

    李富祥;宋建领;赵文华;李华春;洪琼花;邵庆勇;杨仕标;

    为了确定一起山羊肺炎的病原体,从病羊肺脏中分离到1株巴氏杆菌样细菌,编号为ZY150911,对其进行形态学、生理生化和16SrDNA鉴定,并对其致病性和耐药性进行研究。分离株ZY150911经ATB-ID 32E生化鉴定系统初步鉴定为Bibersteinia trehalosi。16SrDNA进化分析表明ZY150911与各B.trehalosi株形成同一进化支,与B.trehalosi各株间的同源性为96.9%~98.4%,其中与模式菌株NCTC10370同源性为97.7%。根据形态学、生理生化和16SrDNA进化分析,将分离株ZY150911鉴定为B.trehalosi。致病性试验表明,分离株ZY150911对小鼠有强致病性,其LD50为3.2×106.2。分离株ZY150911对青霉素、氨苄西林耐药,对头孢噻吩、头孢呋辛、头孢曲松、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星、氧氟沙星、诺氟沙星、四环素、磺胺、氟苯尼考敏感。本研究在国内首次从动物体内分离到强致病性B.trehalosi,建议将其中文译名为海藻百伯坦菌,其可能为羊的一种新的致病菌,为羊B.trehalosi感染的诊断和流行病学研究奠定基础。

    2018年08期 v.38;No.260 1528-1532页 [查看摘要][在线阅读][下载 471K]
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  • 一种蜱源性粪产碱杆菌内蒙古株的分离与鉴定

    贺海燕;黄天鹏;黄芳;吴咪;朝木丽格;格日勒图;

    从内蒙古呼伦贝尔地区自然放牧的羊群中采集蜱虫样本,分离出可疑细菌,并采取常规方法和分子生物学方法对其进行种型鉴定。采用高盐普通琼脂培养基从收集的蜱虫体内分离和纯化培养可疑细菌,并进行革兰染色;对纯化的可疑细菌进行生理生化、药物敏感试验及对盐的耐受性鉴定;PCR方法扩增和测序16SrRNA基因序列并应用Mega6.0生物软件绘制出该细菌系统发育进化树。结果显示,分离菌革兰染色呈革兰阴性短杆菌;溶血性试验结果呈现α-溶血;药物敏感试验对头孢类抗生素敏感,对青霉素、两性霉素B耐药;该菌具有运动性并可在含有10%的NaCl的培养基中生长;蔗糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、葡萄糖等糖分解试验、吲哚试验、硝酸盐(还原)试验、明胶液化试验等结果为阴性;脲酶试验、氧化型与发酵型试验、西蒙氏枸橼酸盐试验、氧化酶试验结果为阳性;根据16SrRNA基因绘制的系统发育树可看出,本试验分离株与粪产碱杆菌遗传距离近,处在相同分支。本试验成功分离出1株新的蜱源性粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis),重新命名为Alcaligenes faecalis IMH(简称为A.faecalis IMH),其16S rRNA基因重新注册于GenBank中,注册号为:LC213619.1。本试验为进一步研究该菌的致病性奠定基础。

    2018年08期 v.38;No.260 1533-1538页 [查看摘要][在线阅读][下载 998K]
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  • 大菱鲆源美人鱼发光杆菌胞外产物生物学特性及蛋白成分分析

    吴同垒;张志强;李巧玲;王洪彬;任海;高桂生;史秋梅;

    为了研究美人鱼发光杆菌胞外产物对大菱鲆的致病作用以及美人鱼发光杆菌的致病机理,本试验以大菱鲆源美人鱼发光杆菌为研究对象,提取其胞外产物,采用打孔法测定其胞外产物的酶活性,并对溶血活性进行溶血谱分析,同时分析其致病性。应用LC-MSMS方法对其胞外产物蛋白成分进行鉴定,利用Gene Ontology(GO)对已鉴定蛋白进行生物学过程、分子功能和细胞组分的分类分析。结果表明:美人鱼发光杆菌胞外产物具有淀粉酶活性、脂肪酶活性、蛋白酶活性、卵磷脂酶活性和溶血活性,不具有明胶酶活性和脂肪酶活性;其可溶解多种动物红细胞,尤以对鱼类红细胞溶血性更强,但对鸡、鸭红细胞无溶血活性。通过对菌株胞外产物蛋白成分分析显示,有45种蛋白共参与34种生物学过程,主要涉及碳水化合物代谢过程、运输等;共有41种分子功能,主要涉及脱氢酶、磷酸酶、氧化还原酶和金属离子结合等;包括15种细胞组分,主要有细胞质和细胞外膜等。

    2018年08期 v.38;No.260 1539-1542+1591页 [查看摘要][在线阅读][下载 768K]
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人兽共患病

  • 重庆地区羊传染性脓疱与病原菌混合感染的检测与分析

    许国洋;付利芝;徐登峰;龙小飞;陈朝洪;李龙;张素辉;

    采集山羊口唇部痂皮,通过PCR检测、MDBK细胞培养、电镜观察、间接免疫荧光(IFA)检测对羊传染性脓疱病毒进行系统鉴定,同时,分离培养病灶部位主要病原菌,进行分子鉴定、致病性和药敏试验检测,初步分析病原特性。结果表明,共分离到1株羊传染性脓疱病毒,3种病原菌。通过对病原菌16SrDNA基因序列比对分析,发现其分别与多动物链球菌、金黄色葡萄球菌和溶血性曼氏杆菌同源性较高,在系统进化发育树中分别与其聚为一簇。致病性分析,发现多动物链球菌和溶血性曼氏杆菌对小鼠的致死率高达100%。3种病原菌主要侵染部位为小鼠心脏、肝脏和肺脏,能够引起肺脏和肝脏明显病变。药敏试验表明,3种菌均对舒巴坦、阿米卡星和培氟沙星等6种药物高度敏感。本研究首次从羊传染性脓疱病变部位分离到多动物链球菌、金黄色葡萄球菌和溶血性曼氏杆菌,为该病在重庆地区的流行特点和防治技术研究提供理论依据。

    2018年08期 v.38;No.260 1543-1547页 [查看摘要][在线阅读][下载 1178K]
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  • 奶牛荚膜血清A型巴氏杆菌的分离鉴定及致病性

    刘朋;陈萌;程子龙;闫振贵;刘思当;

    山东省某规模化奶牛场10~30日龄的犊牛出现发热、咳嗽和关节肿大的临床症状,并造成部分犊牛死亡。为查明死亡原因并制定相应的防控方案,在流行病学调查和现场剖检的基础上,对采集的病料进行病理组织学检查、细菌分离鉴定、生化试验,并对鉴定的病原菌进行动物感染试验和药敏试验,对分离菌的PCR产物进行多杀性巴氏杆菌特异性基因和荚膜血清型特异性基因序列的测定。结果表明,该场犊牛主要死于以纤维素性肺炎为特征的败血症,死亡原因为多杀性巴氏杆菌感染所致,且分离的多杀性巴氏杆菌为荚膜血清A型高致病性菌株,对小鼠呈高致死性;该分离菌株对林可霉素、头孢噻呋、多西环素耐药,对恩诺沙星、氟苯尼考高度敏感。

    2018年08期 v.38;No.260 1548-1552页 [查看摘要][在线阅读][下载 1810K]
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  • 死胎流产的蓝狐体内检出致病性大肠杆菌

    李巧玲;张召兴;张志强;吴同垒;李蕴玉;史秋梅;张艳英;贾青辉;李佩国;

    2015年4月,唐山地区不同的养殖场蓝狐出现了死胎、流产,无菌采集流产蓝狐阴道分泌物、死胎等病料组织,PCR检测阿留申病毒、伪狂犬病病毒、犬瘟热病毒均为阴性,通过形态学观察、培养特性、生化试验和16SrRNA等方法,鉴定出5株大肠杆菌。对分离的5株大肠杆菌进行动物致病性试验、血清型及毒力基因检测。结果表明,5株大肠杆菌分离菌株均对怀孕的小鼠和蓝狐有致病性;分离的5株致病性大肠杆菌属于3个不同血清型(O89、O3、O38),其中O89为流行血清型;毒力基因fuyA、irp2、papC、fimC、iucDa、vat的检出率分别为100%,80%,60%,80%,60%,60%,其中,毒力基因iutA、Ler、eaeA均未检出,致病性大肠杆菌流行血清型O89分离菌株同时携带6个毒力基因。药敏试验结果显示,5株致病性大肠杆菌均对丁胺卡那霉素、大观霉素、氟苯尼考3种药物敏感,对环丙沙星、恩诺沙星、头孢曲松、庆大霉素、诺氟沙星等药物中度敏感,对其他的药物存在不同耐药性。本研究为河北唐山地区的蓝狐死胎流产的防治提供基础。

    2018年08期 v.38;No.260 1553-1558页 [查看摘要][在线阅读][下载 503K]
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基础兽医学

  • 广东省规模化猪场猪粪中典型耐药基因污染分析

    杨亦文;米见对;邹永德;马保华;曹俊超;钟珊;吴银宝;

    选择广东省6家规模化猪场,采集后备期、空怀期、妊娠期、保育期和育成育肥期猪粪,利用实时荧光定量PCR技术检测四环素类耐药基因tetA、tetG、tetM、tetX,喹诺酮类耐药基因qnrS,磺胺类耐药基因sulI,链霉素耐药基因strA,β-内酰胺类耐药基因blaTEM和大环内酯类耐药基因ermB的含量,并利用单克隆测序技术比对分析了不同猪场猪粪中tetG基因的多样性。结果表明:(1)117份猪粪样品中,除strA的检出率为97.44%外,其余耐药基因的检出率均为100.00%;(2)猪粪中tetM的绝对含量最高,其拷贝数的对数值达到(10.27±0.68),显著高于其他耐药基因(P<0.05),其他耐药基因绝对含量由高到低依次为ermB、tetG、blaTEM、tetX、strA、sulI、qnrS和tetA,并且tetA、tetG、qnrS和blaTEM的绝对含量之间呈极显著正相关(P<0.01),tetM、sulI、strA和tetX的绝对含量之间呈极显著正相关(P<0.01);(3)妊娠前期母猪粪中耐药基因tetA、qnrS和blaTEM的相对含量显著高于其他阶段猪粪(P<0.05),其余各阶段猪粪耐药基因的相对含量无显著性差异,而且不同猪场猪粪中耐药基因相对含量也无显著性差异;(4)不同猪场猪粪中tetG耐药基因具有较高的多样性。由此表明,广东省规模化猪场猪粪中广泛存在耐药基因残留,应采取有效措施降低猪粪中耐药基因残留,减少其对环境的污染。

    2018年08期 v.38;No.260 1559-1567页 [查看摘要][在线阅读][下载 1160K]
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  • 钩吻素子在猪的体外代谢

    肖洒;黄亚军;刘艳纯;孙志良;刘兆颖;

    研究钩吻素子在猪体外肝S9的代谢,采用高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(HPLC/QqTOF MS)对孵育后的代谢物进行结构鉴定。结果表明,钩吻素子在猪肝S9中可生成7种代谢产物,根据原形及其代谢物的精确分子质量差、产物离子,鉴定了代谢物结构,包括N-脱甲基化代谢物(M1)、C18和C19的加氢代谢物(M3)、M3的去甲基代谢物(M4)、氧化代谢物(M6、M8和M12)和脱氢代谢物(M13)。钩吻素子在猪的代谢途径主要是氧化、还原、N-脱甲基化。其研究结果为钩吻素子在动物及人体内代谢研究奠定基础。

    2018年08期 v.38;No.260 1568-1572页 [查看摘要][在线阅读][下载 895K]
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  • 泰山松花粉多糖对鸡感染vvIBDV诱导的免疫抑制的免疫调理作用

    王淑娟;黄河;裴宗飞;胡莉萍;张静静;张浩;王慧宁;马丽莉;王海荣;朱瑞良;

    鸡传染性法氏囊超强毒株(vvIBDV)可引起鸡群高死亡率及严重的免疫抑制,给养禽业带来巨大的经济损失。为了探究泰山松花粉多糖(TPPPS)对鸡传染性法氏囊病(IBD)的免疫调理作用,本研究以IBDV GX8/99超强毒株经鼻腔感染19日龄SPF鸡,并分别于感染前、后连续14d口服饲喂TPPPS,同时设置IBD疫苗对照组,病毒对照组和健康对照组,分别对各组试验鸡体质量及法氏囊指数、法氏囊带毒量及抗体变化,以及其他相关免疫学指标进行检测比较。结果显示,连续14d口服TPPPS后,试验鸡体质量及法氏囊抑制程度得到明显改善,法氏囊带毒量减少,法氏囊损伤程度降低,IBD抗体分泌提前、分泌量增加,IL-2、IL-4细胞因子分泌水平提高,T淋巴细胞转化率、CD4+和CD8+T细胞数增加,ND抗体水平提高,其中TPPPS预防组的各项检测指标均高于TPPPS治疗组和IBD疫苗组。结果表明,TPPPS对vvIBDV诱导的鸡群免疫抑制具有一定的免疫调理作用,且以在病毒接种前口服TPPPS发挥的免疫调理作用最显著,TPPPS可以作为免疫增强剂用于防控vvIBDV的早期感染,降低其免疫抑制程度,减少经济损失。

    2018年08期 v.38;No.260 1573-1579页 [查看摘要][在线阅读][下载 1272K]
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  • 可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)在绵羊下丘脑中的分布

    沈向华;范奎奎;潘登;李婷;李强;杜晨光;

    可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)是一类具有调控动物食欲和体质量等生理功能的重要因子。但有关CART神经元在绵羊下丘脑的分布部位和基本神经投射通路尚无报道,限制了对其潜在功能的进一步研究。本试验以绵羊下丘脑为研究材料,运用免疫荧光技术研究CART神经元在下丘脑的分布。结果表明,CART神经元集中分布在绵羊下丘脑腹内侧视前核(ventromedial preoptic nucleus,VMPO)区域,且均有较为明晰的神经元胞体及纤维结构,与小鼠CART神经元的分布部位有明显的差异,但公母绵羊之间没有明显的分布差异。这一结果为进一步研究CART在绵羊机体能量代谢平衡中的生物学作用奠定了基础。

    2018年08期 v.38;No.260 1580-1584页 [查看摘要][在线阅读][下载 2975K]
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  • 急性冷应激大鼠肝脏中novel-miR-133-5p生物学功能预测

    臧树成;郭文晋;甄莉;连帅;王立鹏;袁建彬;李文杰;杨焕民;

    本研究旨在检测6种novel microRNA(novel-miR-1-5p,novel-miR-6-3p,novel-miR-9-3p,novel-miR-25-5p,novel-miR-133-5p和novel-miR-287-3p)在急性冷刺激大鼠肝脏中的表达情况,并对novel-miR-133-5p的生物学功能进行分析,预测了novel-miR-133-5p在冷应激大鼠肝脏内的功能。前期冷应激大鼠血清高通量测序试验的结果中发现这6种差异表达的novel microRNA。本试验采用了30只12周龄SPF级Wistar雄性大鼠,体质量(350±10)g,将大鼠放置人工气候室预饲7d,预饲温度为(24.0±0.1)℃。随机分成急性冷应激组(CSS)和常温对照组(NTS),对CSS急性冷刺激12h后,冷刺激温度为(4.0±0.1)℃。采取肝脏提取总RNA,应用qRT-PCR方法检测6种novel microRNA在急性冷刺激大鼠肝脏的表达情况。结果显示,6种novel microRNA在急性冷刺激大鼠肝脏均有表达,除novel-miR-9-3p外,其余的都显著升高,novel-miR-133-5p升高的最为明显(P<0.01)。对novel-miR-133-5p进行生物学信息分析发现,novel-miR-133-5p的靶基因有2 048个,其中bcl9与wnt11肿瘤的发生、增殖和迁移有关;同时wnt11也对正常细胞的增殖、分化和凋亡也有重要影响;Smarcal1是一种DNA结合蛋白,可以修复因损伤而停止复制的DNA。结果表明,在大鼠血清中存在的6种novel microRNA同样存在于冷应激大鼠肝脏中,在冷应激状态下novel-miR-133-5p的异常上调可能会对机体的生长发育、免疫调节和遗传等方面有重要的影响。

    2018年08期 v.38;No.260 1585-1591页 [查看摘要][在线阅读][下载 1038K]
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临床兽医学

  • 乳清急性期蛋白、乳酶作为奶牛隐性乳腺炎诊断指标的研究

    薛永康;闫磊;张震;赵玉玺;虎啸;朱邯豫;王新庄;

    为探索奶牛隐性乳腺炎快速、敏感的早期诊断指标,采集患隐性乳腺炎奶牛乳汁,研究其对乳清急性期蛋白含量、乳酶活性的影响,并做和乳汁体细胞数(somatic cell count,SCC)的相关性分析。结果显示:2组奶牛(健康奶牛与患隐性乳腺炎奶牛)乳清中HP、SAA、AGP、CRP含量均差异显著(P<0.01),且与SCC呈极显著正相关(P<0.01),相关性系数(r)分别为:HP(r=0.806)、SAA(r=0.662)、AGP(r=0.604)、CRP(r=0.717)。2组奶牛乳清中LDH、MPO、NAG、CAT活性差异极显著(P<0.01),且与SCC呈极显著正相关(P<0.01),相关性系数(r)分别为:LDH(r=0.729)、MPO(r=0.433)、NAG(r=0.932)、CAT(r=0.430)。结果提示:乳清中HP、SAA、AGP、CRP等急性期蛋白含量与LDH、MPO、NAG、CAT等乳酶活性均有可能作为奶牛隐性乳腺炎的诊断指标,但其具体诊断指示量还需进一步研究。

    2018年08期 v.38;No.260 1592-1597页 [查看摘要][在线阅读][下载 998K]
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  • 左旋肉碱治疗小鼠少弱精症机理

    卢彦欣;杨瑞;姚旭旺;贺红涛;张志刚;岳续朋;

    为了探讨左旋肉碱对环磷酰胺所致的小鼠少弱精症的治疗作用,将成年昆明小鼠30只,随机分成对照组(CG)、模型组(MG)和治疗组(TG)。按照60mg/kg给模型组和治疗组小鼠腹腔注射环磷酰胺,60mg/kg给对照组小鼠腹腔注射生理盐水,每天1次,连续5d。第6天开始按100mg/kg给治疗组小鼠灌胃左旋肉碱,按100mg/kg给空白对照组和模型组灌胃生理盐水,每天1次,持续25d。随后处死小鼠,进行小鼠精子的采集,对精子进行计数,活力检测;对睾丸进行固定包埋、切片和HE染色。结果显示,对照组、模型组和治疗组精子密度分别为(1.90±0.43)×109/L,(1.58±0.32)×109/L和(2.62±0.41)×109/L;精子活率分别为(65.46±14.98)%,(58.68±3.13)%和(74.66±1.04)%;精子畸形率分别为(58.35±1.25)%,(78.44±0.38)%和(51.62±0.11)%。治疗组精子密度显著高于模型组(P<0.05),治疗组的精子活率要高于模型组,畸形率要低于模型组。因此,对小鼠进行腹腔注射环磷酰胺可使小鼠精子的密度、活率降低,畸形率增高,左旋肉碱治疗后,可使小鼠的精子密度有明显的增高,同时在一定程度上可以提高精子活率,降低精子畸形率。睾丸切片HE染色显示,左旋肉碱能够对环磷酰胺所致的睾丸损伤有一定的保护作用。

    2018年08期 v.38;No.260 1598-1602页 [查看摘要][在线阅读][下载 685K]
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动物科学

  • 饲粮添加硬脂酰乳酸钠对生长期肉牛生长性能及蛋白质和脂类代谢的影响

    黄宝银;何平;杨威;陈媛媛;夏成;张洪友;李心慰;徐闯;

    本试验旨在研究硬脂酰乳酸钠对生长期肉牛生长性能及血液生化指标的影响。在2017年6月10日至2017年8月11日,试验在内蒙古阿荣旗中荣肉牛养殖基地进行,选择12月龄体质量在(407.27±20.79)kg的西门塔尔肉牛12头作为试验动物,随机分为2组,其中对照组肉牛饲喂基础日粮,试验组肉牛每头每天在饲喂基础日粮的基础上添加硬脂酰乳酸钠30g。结果表明,试验结束后,试验组肉牛的体质量比对照组提高了3.34%,试验组的平均日增体质量极显著高于对照组(P<0.01)。干物质采食量试验组显著高于对照组(P<0.05),料重比试验组极显著低于对照组(P<0.01)。试验组与对照组相比,血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量无显著变化,但随着试验的进行ALT的含量有升高的趋势。血清中门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量在试验40,50d时,试验组显著低于对照组(P<0.05),在60d时试验组极显著低于对照组(P<0.01)。血清中碱性磷酸酶(ALP)含量无显著变化,但与对照组相比有升高的趋势。血清中总蛋白(TP)的含量在60d时试验组极显著高于对照组(P<0.01)。血清中白蛋白(ALB)的含量在50d时试验组显著低于对照组(P<0.05),在60d时试验组极显著低于对照组(P<0.01)。血清中球蛋白(GLO)含量在60d试验组显著高于对照组(P<0.05)。血清中尿素氮(BUN)含量试验组与对照组相比呈升高的趋势,但无显著性差异(P>0.05)。在60d时试验组血清中总胆固醇(TC)的含量显著低于对照组(P<0.05)。血清中甘油三酯(TG)的含量在60d时试验组显著低于对照组(P<0.05)。血清中游离脂肪酸(NEFA)以及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量均无显著性差异(P>0.05)。经过计算试验组的利润为3.68元,对照组的利润为1.52元/天。结果显示,饲粮中添加30g硬脂酰乳酸钠可以提高肉牛的体质量,增强肉牛机体的抵抗力,改善肉牛蛋白质及脂类代谢的情况,同时还能够提高牧场的经济效益。

    2018年08期 v.38;No.260 1603-1608页 [查看摘要][在线阅读][下载 145K]
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  • 解淀粉芽孢杆菌对免疫抑制肉鸡生长性能和肝脏抗氧化功能的影响

    应志雄;李悦;张昊;苏伟鹏;黄强;张莉莉;陆兆新;王恬;

    旨在研究解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens,BA)对环磷酰胺(cyclophosphamide,CY)介导的免疫抑制肉鸡生长性能和肝脏抗氧化功能的影响。144只1日龄AA雄性肉仔鸡被随机分为3组,即对照组(CON),环磷酰胺处理组(CY)和环磷酰胺-解淀粉芽孢杆菌组(CY-BA),每组6个重复,每个重复8只鸡。CON组和CY组饲喂基础日粮,CY-BA组饲喂添加1.08×1010 CFU/kg BA的试验日粮。于16,17和18日龄对CY组与CY-BA组肉鸡肌肉注射80mg/kg的CY,CON组肌肉注射等量生理盐水,试验期为21d。结果显示,与CON组相比,CY刺激显著降低了CY组肉鸡1~21日龄体增质量、肝脏指数、肝脏总抗氧化能力(total antioxidative capacity,T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)活力(P<0.05),显著升高了肝脏丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量(P<0.05);Real-time PCR检测也发现,CY处理显著降低了CY组肉鸡肝脏核转录相关因子2(NF-E2-related factor 2,nrf2)和谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,gpx1)的mRNA表达水平(P<0.05)。与CY组相比,日粮添加BA显著提高了CY-BA组肉鸡21日龄时肝脏T-AOC水平和GSH-Px活力,降低了肝脏MDA水平(P<0.05)。上述指标在CON与CY-BA组间并无明显差异(P>0.05)。另外,CY-BA组肝脏GSH含量较CON或CY组均显著升高(P<0.05)。然而,日粮添加BA并未显著影响CY刺激肉鸡体增质量、肝脏指数、肝脏nrf2和gpx1mRNA水平(P>0.05)。综合结果表明,CY诱导的免疫抑制损伤了肉鸡生长和肝脏的抗氧化功能,并引起了肉鸡肝脏脂质过氧化程度升高。日粮添加BA具有改善CY介导的免疫抑制肉鸡肝脏抗氧化功能和缓解肝脏氧化损伤的作用。

    2018年08期 v.38;No.260 1609-1615页 [查看摘要][在线阅读][下载 186K]
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综述

  • 寨卡病毒致病机理和疫苗研究进展

    李政蓉;金宏丽;焦翠翠;闫飞虎;赵永坤;高玉伟;马爱民;王化磊;杨松涛;夏咸柱;

    寨卡病毒病是一种由寨卡病毒感染引起的重要的人兽共患病,可引起胎儿小头畸形。2015年寨卡病毒病在巴西和美国等国家大规模暴发流行,此次暴发流行被世界卫生组织定为世界公众健康紧急事件,目前在中国已有输入性病例的报道。尽管全球目前尚无批准的疫苗和治疗制剂上市,但许多研究机构相继开展了寨卡病毒疫苗和致病机理等研究,为有效防控寨卡病毒,加快对寨卡病毒新型疫苗的研究,现对近年来寨卡病毒致病机理和疫苗的研究进展进行综述。

    2018年08期 v.38;No.260 1616-1623页 [查看摘要][在线阅读][下载 391K]
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  • 大肠杆菌群体感应系统的研究进展

    羊扬;刘云;张信军;朱国强;

    群体感应(quorum sensing,QS)是细菌中以种群规模进行特定交流的方式,通过这一机制,细菌以多细胞形式发挥不同生物学功能。群体感应参与对致病菌毒力因子表达、与宿主互作、抗生素耐药性及细菌素合成等方面的调控,与细菌生理特性密切相关。大肠杆菌是广泛存在于自然界中的一类菌株,致病性大肠杆菌可导致人与动物严重腹泻或肠道外疾病。群体感应与大肠杆菌密切相关,现将大肠杆菌群体感应系统分为5类,对其最新研究进展进行综述,为进一步探索大肠杆菌致病机制打下基础。

    2018年08期 v.38;No.260 1624-1631页 [查看摘要][在线阅读][下载 317K]
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  • 马属动物软组织活检技术的临床研究进展

    杨珊珊;李云章;蒋瑞东;刘伟;程波;任书男;王煜;罗园渠;

    组织取样技术在医学上使用较多,无论是用于临床诊断还是科学研究。临床上用于癌症诊断、液体活检、癌症前期检查、炎症检查。实际操作中活检技术和超声配合使用,提高活组织取样技术的安全性和成功率。随着活检技术的不断改进,现探讨了活组织取样技术在马属动物的应用,介绍对肌肉、皮肤、肝脏、肾脏、蹄小叶、肺脏、脾脏、膀胱、子宫组织的取样部位、取样工具、注意事项及其并发症,以期为临床实际操作和科研试验提供指导。

    2018年08期 v.38;No.260 1632-1636页 [查看摘要][在线阅读][下载 323K]
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  • 应激相关诊断标志物的研究进展

    袁建彬;连帅;郭文晋;杨焕民;王立鹏;臧树成;李文杰;郭景茹;

    动物体在其生长发育过程中,在应激源的刺激下,会发生各种应激反应,从而影响畜禽生产性能,严重的还会导致动物死亡,给畜禽产业造成了巨大的经济损失,同时限制其快速发展。而衡量动物应激状态的重要指标就是寻找动物应激诊断标志物,这对动物应激的早期监测具有重要意义。现主要针对应激状态下应激相关诊断标志物,结合相关蛋白质、激素及miRNA等进行综述。

    2018年08期 v.38;No.260 1637-1640页 [查看摘要][在线阅读][下载 119K]
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