- 陈希文;尹苗;汪谦;杨勤;杨凤;李莲;罗文涛;周杰珑;马缨;赵洪;
为建立一种快速、灵敏、方便的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)早期诊断方法,本研究针对PEDV的M基因片段设计了4条引物,对反应体系的时间、温度进行了优化,对试验的特异性和敏感性进行了评估,初步建立了逆转录环介导恒温扩增技术(RT-LAMP)。结果表明,建立的PEDV RT-LAMP方法在65℃恒温下扩增60min,可通过琼脂糖凝胶电泳或SYBR Green I染料肉眼判断结果,灵敏性较普通RT-PCR高100倍。该方法与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)等无交叉反应,具有良好的特异性。采用该RT-LAMP对100份临床疑似发病粪便拭子、小肠组织、初乳样本进行检测,结果较RT-PCR更灵敏。因此,本研究初步建立了可用于临床PEDV检测的RT-LAMP检测方法,为PEDV的临床快速诊断和综合防控提供了一种新的手段。
2018年09期 v.38;No.261 1641-1647页 [查看摘要][在线阅读][下载 1594K] [下载次数：270 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：1 ] - 孙盼盼;孙娜;孙耀贵;段智变;李宏全;
为探讨苦参碱在猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染Marc-145细胞过程中的抗病毒机制。本研究建立感染PRRSV的Marc-145细胞模型,将试验分为4组:细胞对照组、病毒对照组、苦参碱对照组和苦参碱试验组,每组重复3次。PRRSV感染细胞3,6,12,24h后,收集细胞,采用qRT-PCR和Western blot分别检测苦参碱对PRRSV N基因及其细胞受体CD163、Vimentin和CD151的影响。结果表明,在PRRSV感染24h内苦参碱显著降低PRRSV N基因的表达(P<0.05)。与病毒对照组相比,在PRRSV感染6h时,苦参碱可显著降低CD163的表达量(P<0.05);在PRRSV感染3,6h,苦参碱试验组Vimentin的表达量显著降低(P<0.05);在PRRSV感染3,24h时,CD151的表达量显著低于病毒对照组(P<0.05)。以上结果表明苦参碱在PRRSV感染Marc-145细胞的不同时间点可通过抑制细胞不同受体的表达来抑制PRRSV吸附和侵入宿主细胞,从而干扰PRRSV在细胞中的复制。
2018年09期 v.38;No.261 1648-1654页 [查看摘要][在线阅读][下载 1514K] [下载次数：281 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：1 ] - 徐朋丽;郑慧华;赵宇;张宇;贾会斌;魏战勇;陈红英;
为了建立一种快捷、特异、敏感的检测猪圆环病毒3型(PCV3)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,根据GenBank公布的PCV3全基因组序列,在rep基因高度同源保守区设计并合成1对特异性引物,从阳性病料DNA中PCR扩增PCV3rep基因。PCR产物克隆入pMD~18-T载体中,构建重组质粒(pMD18-PCV3rep),转化到大肠杆菌DH-5α中。经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为荧光定量PCR的标准品模板,经过反应条件优化,建立了检测PCV3的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。该检测方法线性关系良好,R2=0.998 2;仅PCV3阳性病料出现特异性扩增,而与另外6种病原无交叉反应;该方法检测下限为21.9copies/μL;批间及批内变异系数分别为0.394%~0.935%和0.112%~0.775%,均小于1%。经临床应用证实,该方法具有良好地特异性、敏感性和稳定性,为PCV3的早期检测、定量检测及后期研究提供了技术支持。
2018年09期 v.38;No.261 1655-1660页 [查看摘要][在线阅读][下载 1034K] [下载次数：392 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：1 ] - 石远菊;汤德元;曾智勇;黄涛;王彬;韦冠东;胡玲玲;龙冬梅;杨伟;叶丽;
为了解近年来贵州省猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)流行株的分子流行特征和遗传变异情况,收集了贵州不同地区的4株PRV分离株,即Guizhou-DY株、GZ-Z1株、GZ-TH株和GZ-TD株,对其gE基因进行遗传变异分析。结果显示:Guizhou-DY株和GZ-Z1株与2012年以前国内外的传统分离株的核苷酸和氨基酸同源性较高,分别为98.3%~99.4%及96.7%~98.4%,而近期分离的GZ-TD株和GZ-TH株与2012年以来国内不同省份分离的PRV变异株的核苷酸及氨基酸序列的同源性较高,分别为98.7%~99.9%及98.1%~99.5%。Guizhou-DY株和GZZ1株的gE氨基酸第48位和第496位均没有天冬氨酸(D)的插入,但近期分离的GZ-TD株和GZ-TH株的gE氨基酸第48位和第496位均有D的插入,与2012年以来发现的PRV新毒株氨基酸变异位点相同。Guizhou-DY株和GZ-Z1株与传统PRV分离毒株的亲缘关系较近,而GZ-TD株和GZ-TH株与2012年之后的PRV变异毒株的亲缘关系较近。结果表明:猪伪狂犬病病毒贵州流行毒株的gE基因存在一定程度的变异。
2018年09期 v.38;No.261 1661-1665+1669页 [查看摘要][在线阅读][下载 2008K] [下载次数：165 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：1 ] - 周薇帆;陈田田;刘建勋;赵玉杰;王洁琼;刘琳;陈盼盼;李新生;
用实验室保存的1株血清4型禽腺病毒(FAdV-4)W株对雏鸡(1dSPF鸡)进行攻毒试验,研究其致病性及免疫原性,每日观察鸡只精神状态,持续14d,计算死亡率,对每组死亡鸡只立即剖检,记录眼观组织病变,并将肝脏固定于10%的福尔马林中用于组织学观察。SPF鸡攻毒试验结果表明,口服接种100TCID50病毒量对1dSPF鸡的致死率高达100%,死亡时间在144~150h之间;对死亡鸡只剖检均可见到明显的心包积液,肝脏出血坏死;肝组织切片HE染色可见典型的嗜碱性核内包涵体。用该病毒制备的灭活疫苗具有良好的免疫保护作用,制作的高免血清也具有良好的治疗效果。
2018年09期 v.38;No.261 1666-1669页 [查看摘要][在线阅读][下载 624K] [下载次数：245 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：1 ] - 王淑娟;魏凯;黄河;张浩;王慧宁;马丽莉;张静静;王海荣;朱瑞良;
鸡传染性法氏囊超强毒株(vvIBDV)可引起鸡群高死亡率及严重的免疫系统损伤,给养禽业带来巨大的经济损失。为探讨泰山松花粉多糖(TPPPS)体外抗vvIBDV感染鸡胚成纤维细胞(DF-1)作用机制,以DF-1细胞为宿主细胞,利巴韦林(Ribavirin)为抑病毒对照药物,从TPPPS对病毒的直接灭活作用、阻滞作用、抑制吸附及其复制4个方面探讨TPPPS抗vvIBDV机理。结果显示,在无毒质量浓度范围内TPPPS对vvIBDV的最高抑制率为92.4%,Ribavirin的最高抑制率仅为76.7%;在阻滞试验和抑病毒吸附试验中最高抑制率分别达到91.85%和78.36%;在抑制病毒复制试验和直接灭活病毒试验中抑制率很低,表明TPPPS不能抑制病毒复制和直接灭活病毒。结果表明,TPPPS在体外可有效抑制vvIBDV对DF-1细胞的感染,推测其抗病毒机制是TPPPS预处理DF-1细胞从而结合了病毒颗粒在细胞表面的吸附位点及病毒与多糖直接相互作用抑制病毒吸附细胞,或两种作用同时存在。提示TPPPS可作为预防及治疗超强鸡传染性法氏囊病病毒感染的药物。
2018年09期 v.38;No.261 1670-1676页 [查看摘要][在线阅读][下载 1293K] [下载次数：200 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：1 ] - 崔丹;张建楼;左玉柱;吴峰洋;郑志强;霍珊珊;仲飞;
为制备驴源抗犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)抗体,首先利用F81猫肾细胞扩增CPV-2a病毒株,经甲醛灭活和氢氧化铝胶乳化,制成CPV灭活疫苗,病毒滴度为10-8.5 TICD50,然后通过肌肉分点注射免疫驴,连续免疫3次(第1次注射3mL,后2次各注射6mL),每次免疫前采血,分析驴血清的抗体滴度和中和抗体效价;利用盐析法和离子交换层析法分离和纯化驴血清IgG。用IgG处理幼犬(50mg/kg),用CPV-2a毒株对IgG处理的犬进行攻毒,分析IgG抗CPV的活性。结果显示,免疫3次后驴血清的CPV抗体滴度为1∶8 192,中和抗体效价为28.5。用制备的IgG处理幼犬未发现不良反应,经CPV-2a攻毒实验证实IgG处理犬的发病率和死亡率分别为33%,0%,均明显低于非处理组(分别为100%,83%),说明制备的驴源IgG具有明显的抗CPV活性。
2018年09期 v.38;No.261 1677-1681页 [查看摘要][在线阅读][下载 689K] [下载次数：152 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：1 ] - 王春芳;邱佳熠;姜秀云;马红霞;王春凤;钱爱东;
非结核分枝杆菌与结核杆菌同属分枝杆菌属,在自然环境中分布广泛,是一种环境致病菌。本研究将分离的浅黄分枝杆菌感染C57BL/6J小鼠,应用病理切片分析肝脏的病理变化,并采用荧光定量PCR检测肝脏中细胞因子IFN-γ,IL-12b,TNF-α,IL-10,NLRP3和TGF-β表达量的变化。结果发现,肝脏组织出现少量的炎性细胞浸润,而且感染组小鼠肝脏IFN-γ,IL-12b的表达量明显高于对照组,IL-10只有微弱的表达。上述结果表明,抗浅黄分枝杆菌感染免疫反应主要以Th1免疫反应为主。
2018年09期 v.38;No.261 1682-1685页 [查看摘要][在线阅读][下载 894K] [下载次数：123 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ] - 汪渤森;韩笑;马天天;王航;杭奕;俞慧飞;赵碧波;邱旸;叶美伶;程昌勇;宋厚辉;
细菌中的硫氧还蛋白A(thioredoxin A,TrxA)能够通过对氧化受损的的二硫键进行修饰进而参与蛋白质的正确折叠。磷脂酶PlcB作为单核细胞增多性李斯特菌(Listeria moncoytogenes)关键的毒力因子在细菌逃逸吞噬体过程中起重要作用,但该蛋白是否受李斯特菌TrxA的修饰尚无报道。因此,本试验主要从转录和蛋白表达水平以及蛋白活性水平研究李斯特菌硫氧还蛋白TrxA对磷脂酶PlcB的调控关系。结果显示,单增李斯特菌野生株EGD-e缺失trxA基因后,PlcB的转录及蛋白表达水平显著降低,且利用天然启动子回补trxA后能够使PlcB的表达恢复至野生株水平,而组成型启动子回补效率较低,表明TrxA能够严谨调控李斯特菌毒力因子PlcB的表达。体外溶脂试验发现李斯特菌缺失trxA后导致其溶脂能力显著降低,磷脂酶活性检测发现重组PlcB的活性高度依赖TrxA的存在。本研究首次发现并证实李斯特菌PlcB的转录和表达及其磷脂酶活性维持受TrxA的调控,研究结果为深入解析李斯特菌硫氧还蛋白系统在细菌感染宿主过程中的氧化还原修饰机制奠定了理论基础。
2018年09期 v.38;No.261 1686-1692+1724页 [查看摘要][在线阅读][下载 1067K] [下载次数：280 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：1 ] - 赵肖;白昀;陈蓉;王海燕;刘茂军;田瑞雨;杨浩;吴猛;韦艳娜;王文绍;邵国青;雷治海;冯志新;
旨在建立猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)抗体胶体金免疫层析检测方法,从而快速地对Mhp的感染和免疫情况进行监测,预防和控制猪支原体肺炎传播。通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,确定Mhp特异性抗原P46蛋白的最适标记pH和标记浓度并进行标记,作为金标液。将P46蛋白包被检测线T线,抗P46蛋白单抗包被质控线C线,组装检测试纸条。经优化,建立可同时用于Mhp血清抗体和黏膜抗体检测的胶体金免疫层析检测方法。利用该检测方法对76份临床血清样品和40份临床鼻拭子样品进行检测,并与ELISA检测结果进行比较。用该试纸条检测血清样品时,灵敏性、特异性、重复性较好,与商品化Mhp ELISA抗体检测试剂盒符合率为96.1%;该方法检测呼吸道鼻拭子样品时,存在微弱的非特异性反应,检测结果与本实验室建立的sIgAELISA检测方法符合率为87.5%。本研究成功建立了Mhp抗体胶体金免疫层析检测方法,整个过程只需10 min。检测血清样品具有较好的特异性和灵敏性,检测鼻拭子样品时特异性还有待提高。
2018年09期 v.38;No.261 1693-1698页 [查看摘要][在线阅读][下载 604K] [下载次数：414 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：1 ] - 闻秀秀;王宁;苏布赛;刘世芳;许正茂;吾力江·卡马力;巴音查汗;
为了研究新疆部分地区优势种革蜱携带绵羊无浆体的情况及其进化关系,将2015—2016年在新疆部分地区共13个县市的试验点采集的4种优势种革蜱做为试验材料,通过PCR方法检测其是否携带绵羊无浆体,将目的条带送去测序,测序结果在NCBI上进行BLAST比对,进行同源性分析。结果显示,该序列与绵羊无浆体(KU497712.1)同源性达98%,确定为绵羊无浆体;蜱源性检测绵羊无浆体的携带率为14.4%,仅检测出银盾革蜱和边缘革蜱携带绵羊无浆体,其携带率分别为33.6%,24.0%,可确定银盾革蜱及边缘革蜱为绵羊无浆体的媒介蜱。结果表明,明确绵羊无浆体的媒介蜱,控制其传播范围,从而降低该病在新疆地区暴发流行的可能性,为新疆绵羊无浆体病原及其传播媒介蜱的研究提供理论参考。
2018年09期 v.38;No.261 1699-1703页 [查看摘要][在线阅读][下载 465K] [下载次数：304 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：18 ] |[阅读次数：1 ] - 潘耀谦;冯春花;王帅;岳峰;王选年;刘兴友;
为了提高对兔豆状囊尾蚴病的血清学诊断率,本研究用纯化的63 000囊液蛋白免疫BALB/c小鼠,获得了高效价一抗,再用63 000囊液蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠IgG为二抗,通过对各种试验条件的优化,建立了特异诊断兔豆状囊尾蚴病的阻断ELISA方法。结果显示,63 000囊液蛋白最佳包被浓度是5mg/L;一抗最佳稀释度为1∶800;最佳封闭时间是37℃3h;二抗最佳稀释度为1∶5 000,最佳反应时间是37℃30min;底物显色5min,终止反应后可先用目测法进行初步判定,并立即用酶标仪检测,根据D450值和判定标准确诊。用新建的阻断ELISA方法对兔的常见病,如兔脑炎原虫病、兔瘟、兔巴氏杆菌病、兔球虫病和弓形虫病进行了检测,均无交叉反应。从屠宰场和感染兔场随机采集150份血清样品,分别用阻断ELISA方法和间接血凝试验(IHA)进行比较检测,证明阻断ELISA方法的诊断率明显高于IHA。总之,阻断ELISA方法是一种简便、快速、灵敏和准确诊断兔豆状囊尾蚴病的新方法,适宜于基层兽医工作者应用和推广。
2018年09期 v.38;No.261 1704-1710页 [查看摘要][在线阅读][下载 787K] [下载次数：194 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：1 ] - 王瑞;祝晓蕊;梁萌;王新芳;王文蕊;陈林军;钱英红;陈湘江;杨晓野;
MTT法是一种灵敏、快速和便捷的计数生物活细胞的方法。为探讨这一方法用于计数活体线虫的主要影响因素和可行性,本试验以秀丽新杆线虫为研究对象,对MTT法检测秀丽新杆线虫的检测波长、MTT的用量、溶解用DMSO用量和与药物作用时间等主要影响因素进行分析,并将MTT法检测结果与显微镜直接镜检计数法结果比较。结果表明:甲瓒(Formazan)生成量与线虫活虫体数呈正相关;在试验反应体系中,MTT为10g/L,反应3h时,Formazan的最大吸收波长为550nm,溶解用DMSO最佳用量为150μL,与药物作用时间为24h;MTT法检测和直接镜检结果相似。结果表明,MTT法可用于秀丽新杆线虫虫体等的计数,且可以大大缩短检测的时间,有效减少人力的消耗,结果准确性也较高,对大批量的进行药物或其他物质对虫体活力作用的研究具有重要积极意义。
2018年09期 v.38;No.261 1711-1715页 [查看摘要][在线阅读][下载 381K] [下载次数：421 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：1 ] - 谢素珠;李航;张宁宁;陈健;杜秋明;贾立军;
为筛选出犬新孢子虫的最佳培养细胞,本试验对利用非洲绿猴肾细胞(Vero)、人胚肾细胞(HEK-293)、人宫颈癌细胞(HeLa)和小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)培养犬新孢子虫NC-GFP株进行了比较研究,连续培养犬新孢子虫15d,观察Vero细胞、HEK-293细胞、HeLa细胞及SP2/0细胞的形态变化并计数犬新孢子虫的数量,绘制虫体在细胞中生长曲线。结果表明,Vero细胞、HEK-293细胞、HeLa细胞及SP2/0细胞均可培养犬新孢子虫,尤其在HEK-293细胞和Vero细胞中虫体生长较快,分别在接种虫体的第5,6天虫体数量达到最大值;而犬新孢子虫在SP2/0细胞和HeLa细胞中生长缓慢,分别在第7,8天数量达到最大值,数量处于较低水平。综合比较,HEK-293细胞可以短期较快的培养犬新孢子虫,可作为一种新的细胞系培养犬新孢子虫。本试验为体外细胞培养犬新孢子虫提供了科学依据。
2018年09期 v.38;No.261 1716-1719页 [查看摘要][在线阅读][下载 1062K] [下载次数：202 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1 ] - 李忠宇;刘欢欢;刘全;马宏宇;魏峰;
为检测东北地区蜱传肝原虫,于2015年4—6月通过布旗法在吉林省和黑龙江省采集蜱2 767只,其中森林革蜱168只、草原革蜱212只、全沟硬蜱1 629只、嗜群血蜱378只、长角血蜱380只。根据蜱种和地区分组,每组约15只,提取基因组DNA,应用巢式PCR方法检测肝原虫18S rRNA,阳性样本克隆、测序并进行系统进化分析,利用MLE(Maximum Likelihood Estimation)法计算感染率。东北地区蜱的肝原虫感染率为1.6%(43/189),森林革蜱、草原革蜱、全沟硬蜱、嗜群血蜱和长角血蜱的肝原虫感染率分别为2.8%(4/12)、1.5%(3/16)、2.0%(29/110)、0.5%(2/26)和1.1%(5/25),吉林省和黑龙江省肝原虫感染率最高的蜱种分别为森林革蜱(2.8%)和全沟硬蜱(2.1%),进化分析结果显示东北地区蜱携带的肝原虫为2个不同基因型,且均与日本貂(Martes melampus melampus)肝原虫的同源性为99%,均能在草原革蜱和全沟硬蜱中检出,而且在不同地区蜱的感染率存在一定差异。本研究确定东北地区存在蜱感染肝原虫,但是其分类地位及动物宿主还需进一步鉴定。
2018年09期 v.38;No.261 1720-1724页 [查看摘要][在线阅读][下载 459K] [下载次数：206 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：1 ] - 袁如意;马雪婷;殷昊;龚振兴;杨顺利;曲自刚;韩政岚;刘保红;刘晓丽;蔡建平;
为了克隆表达纯化鸡颗粒溶素(chicken granulysin,ChGNLY)并进行活力鉴定。本试验以基因组数据库预测的ChGNLY基因为模板设计引物,对提取的鸡脾脏总RNA进行RT-PCR,扩增得到的ChGNLY基因插入pMD-19T载体中并测序。将测序正确的GNLY基因克隆至pGEX-6p-1,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-GNLY,并将其转化至感受态BL21,IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE、Western-blotting和蛋白质谱鉴定融合蛋白的正确性。CellTiter-Glo~2.0Assay检测融合蛋白的生物学活性。另外,对GNLY的分子特性进行了生物信息分析。结果显示,测序结果显示克隆的ChGNLY片段长237bp,编码79个氨基酸,所表达的融合蛋白相对分子质量约为36 000。重组ChGNLY融合蛋白能特异性与人颗粒溶素抗体发生反应。纯化后的GNLY融合蛋白经CellTiter-Glo~2.0Assay检测,发现其具有剂量依赖性的细胞毒活性。系统发生分析显示GNLY可明显分为4个群。结构分析发现,ChGNLY活性区域表面带有大量正电荷,且位点保守。结果表明,本试验利用原核表达系统成功表达了具有生物学活性的ChGNLY,为ChGNLY后续功能的研究奠定理论基础。
2018年09期 v.38;No.261 1725-1730+1734页 [查看摘要][在线阅读][下载 1344K] [下载次数：74 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ] - 金春梅;胡楠;蔡锦顺;于龙政;
本研究为构建新孢子虫NcGRA7与NcGRA2串联基因的真核表达载体,以SOE-PCR技术得到新孢子虫NcGRA7-NcGRA2串联基因,并先克隆到pMD-19T载体上,经测序未发现移码后,再克隆到pDNA3.1载体上,用IFA进行体外瞬时表达的鉴定。结果表明,pDNA3.1-NcGRA7-NcGRA2串联基因的真核表达载体构建成功,在体外真核细胞内能表达外源蛋白。
2018年09期 v.38;No.261 1731-1734页 [查看摘要][在线阅读][下载 451K] [下载次数：131 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：1 ]
- 周倩;唐梦君;张小燕;张静;陈大伟;顾荣;唐修君;万玉;高玉时;
为了解弯曲杆菌对消毒剂的耐药性及与耐药基因的相关性,本试验对江苏省分离的294株禽源弯曲杆菌进行季铵盐类消毒剂苯扎氯铵(benzalkonium chloride,BC)和十六烷基三甲基溴化铵(cetrimonium trimethyl ammonium bromide,CTAB)的最小抑菌浓度值测定,并PCR扩增qacC、qacG、qacJ、qacF和qacEΔ1 5种季铵盐类消毒剂基因。结果表明,空肠弯曲杆菌对CTAB的MIC值范围为0.125~1 024mg/L,BC的MIC值范围为0.125~64mg/L;结肠弯曲杆菌对CTAB的MIC值范围为0.5~1 024mg/L,BC的MIC值范围为0.125~64mg/L。可见,弯曲杆菌对消毒剂CTAB的耐受性明显高于BC。耐药基因检测结果表明,除可移动元件qacEΔ1的检出率为8.8%,其余基因qacC、qacG、qacJ、qacF均未检出,耐药基因与耐药表型不直接相关。2种细菌对2种消毒剂的耐受性未见明显差异。测定弯曲杆菌对消毒剂的耐药性,对整个生产链的消毒剂规范使用以及弯曲杆菌病的防控具有重要意义。
2018年09期 v.38;No.261 1735-1739页 [查看摘要][在线阅读][下载 330K] [下载次数：211 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：1 ] - 李巧玲;张召兴;吴同垒;张志强;李蕴玉;史秋梅;张艳英;吉志新;贾青辉;李佩国;
为鉴定所分离的貉源嗜水气单胞菌(A.hydrophila)生物学特性,本试验从无菌采集的10份病死貉的肝脏、心血、肺脏、脾脏等病料组织中分离到相同的单一病原菌,将其命名为HBA-2。通过细菌的生物特性检验与16SrRNA PCR方法对HBA-2进行鉴定。16Sr RNA基因序列的系统发育树分析结果表明,HBA-2与A.hydrophila参考菌株同源性达100%,HBA-2为貉A.hydrophila。动物回归试验结果表明,HBA-2对貉和小鼠具有很强的致病性。用PCR方法检测HBA-2的4种毒力基因aer、hlyA、epa、act,结果显示,HBA-2携带hlyA、epa2种毒力基因。免疫保护性试验结果显示,HBA-2具有很好的免疫原性。药敏试验结果显示,HBA-2对头孢曲松、恩诺沙星、阿米卡星、氟苯尼考、头孢克肟5种药物高敏,对其他药物具有不同程度的耐药。
2018年09期 v.38;No.261 1740-1744页 [查看摘要][在线阅读][下载 543K] [下载次数：269 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：1 ] - 李垚艳;梁宸;杨春梅;王双露;李金旺;冯宪敏;
棘阿米巴角膜炎的临床诊断比较困难,以角膜刮片的病原学诊断为主,样本采集困难,临床诊断率低。本研究构建了棘阿米巴原虫actin1基因进行原核表达载体,并进行鉴定。以棘阿米巴滋养体cDNA为模板,通过特异性引物,经聚合酶链反应,获得actin1基因开放阅读框(ORF)片段,进行克隆及序列分析,经双酶切,连接,构建重组表达载体pET22b(+)-actin1。将重组载体转化入大肠杆菌(E.coli)DH5α,筛选出阳性菌落,经PCR扩增和酶切鉴定后,阳性质粒送样测序;提取阳性质粒,转化入E.coli BL21(DE+),1mol/L IPTG诱导重组蛋白r-actin1的表达。自棘阿米巴滋养体cDNA扩增得到约774bp的actin1基因片段;经PCR和酶切鉴定表明,重组表达载体pET22b(+)-actin1构建成功;重组菌株BL21(DE+)/pET22b(+)-actin1,经培养、诱导、SDS-PAGE电泳,出现1条相对分子质量约为30 000重组蛋白条带,r-actin1表达诱导表达成功。成功构建重组表达载体pET22b(+)-actin1,并诱导表达。
2018年09期 v.38;No.261 1745-1747+1752页 [查看摘要][在线阅读][下载 442K] [下载次数：260 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ] - 刘立元;王建永;白云;康茜;任志军;王雪伟;唐欣浩;秦建华;赵月兰;
采用PCR技术扩增了微小隐孢子虫Cp23基因,将Cp23基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达载体pET28a-Cp23。将其转化至宿主菌E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE和Western blot分析。SDS-PAGE结果表明,蛋白相对分子质量为25 000,目的蛋白高效表达,且为包涵体蛋白。Western blot结果表明,表达产物可被微小隐孢子虫阳性血清识别,具有良好的免疫反应原性。本研究为抗微小隐孢子虫疫苗和免疫学诊断方法的研制提供候选抗原。
2018年09期 v.38;No.261 1748-1752页 [查看摘要][在线阅读][下载 1246K] [下载次数：149 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1 ]
- 马双;宋鹏琰;韩超;钟秀会;
为研究黄芩苷对双酚A(Bisphenol A,BPA)所致子代小鼠生殖毒性的缓解作用。本试验将60只昆明孕鼠随机分为A、B、C共3组,每组20只。A组为对照组,孕鼠妊娠1~14d灌胃生理盐水同时饲喂普通鼠粮;B组为BPA组,孕鼠妊娠1~7d给予生理盐水,妊娠8~14d给予500mg/kg BPA;C组为黄芩苷+BPA组,孕鼠妊娠1~7d灌胃1mg/kg黄芩苷,妊娠8~14d给予500mg/kg BPA,待孕鼠自然分娩。观察记录仔鼠死亡情况。至仔鼠8周龄剖杀,分离血清,摘取睾丸或卵巢,ELISA试剂盒分析仔鼠血清睾酮(T)、雌二醇(E2)及黄体生成素(LH)水平,HE染色观察卵巢或睾丸组织结构的变化,免疫组化及免疫荧光方法检测仔鼠睾丸或卵巢Bax,Bcl-2蛋白的表达。结果显示:黄芩苷能够降低BPA致子代小鼠死亡率,升高仔鼠T(♂)、LH(♀)含量,降低仔鼠(♀)E2水平(P<0.05)。HE染色结果表明,BPA组仔鼠睾丸组织损伤严重,间质细胞减少,卵巢组织结构空泡逐渐增多,颗粒数量逐渐减少。黄芩苷能改善BPA引起的睾丸及卵巢组织损伤。免疫组化结果显示,BPA对仔鼠睾丸或卵巢Bax蛋白表达无影响,但对睾丸或卵巢Bcl-2蛋白表达有降低作用。预先给于黄芩苷后能够升高仔鼠睾丸或卵巢Bcl-2蛋白表达,但对Bax蛋白表达无显著影响。免疫荧光结果发现,BPA升高仔鼠睾丸或卵巢组织中Bax阳性蛋白表达,降低Bcl-2阳性蛋白表达。黄芩苷降低睾丸或卵巢Bax蛋白表达,升高睾丸或卵巢Bcl-2蛋白表达。本试验结果表明,孕鼠妊娠期给予黄芩苷降低BPA引起的子代小鼠死亡率,平衡生殖激素水平和睾丸/卵巢中相关凋亡蛋白表达,缓解BPA染毒孕鼠对子代小鼠所致的生殖毒性。
2018年09期 v.38;No.261 1753-1760页 [查看摘要][在线阅读][下载 5329K] [下载次数：355 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：1 ] - 韩超;王霄;杨金凯;陶金良;包永占;史万玉;
为探究丹参多糖缓解肝损伤的机制,本研究将50只昆明小鼠随机分为正常对照组(A),LPS模型组(B),丹参多糖各剂量保护组500(C),250(D),125 mg/kg(E),每组10只。保护组用相应剂量的丹参多糖连续灌胃7d,1次/d。模型组和正常组给以等剂量的生理盐水。模型组和保护组在末次灌胃1h后,腹腔注射LPS(10mg/kg)建立肝损伤模型;正常对照组腹腔注射等体积的生理盐水。各组小鼠于注射LPS 2h后,处死小鼠摘取肝组织。RT-PCR检测肝组织中CXCL-10和iNOS mRNA的表达;Westiern blot测定肝组织中NF-κB,CXCL-10和iNOS蛋白的表达。结果显示,与空白组相比,LPS能显著性提高肝组织中CXCL-10和iNOS mRNA及其蛋白的表达量(P<0.01),可显著性促进NF-κB中P65和IκBα的磷酸化水平(P<0.01)。而丹参多糖提前处理可以并显著性降低肝组织中CXCL-10和iNOS mRNA及其蛋白的表达量(P<0.01或P<0.05),并能显著抑制P65和IκBα在体内外的磷酸化水平的表达(P<0.01或P<0.05)。结果表明,丹参多糖可以通过抑制炎症通路NF-κB和趋化因子CXCL-10的活性来降低炎症因子的释放达到抑制炎症反应的作用,进而缓解免疫性肝损伤。
2018年09期 v.38;No.261 1761-1765页 [查看摘要][在线阅读][下载 756K] [下载次数：357 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：2 ] - 陈梅;张换成;柳亦松;刘兆颖;曾建国;
建立了一种用于同时测定鸡肌肉中二氢血根碱和二氢白屈菜红碱的UPLC-MS/MS方法。肌肉样品经乙腈-水(95∶5)溶液超声提取后,离心取上清液经脱脂后氮吹浓缩,甲醇复溶。采用Agilent Poroshell 120 EC-C18(2.1mm×150mm i.d.,2.7μm)色谱柱分离,采用正离子化模式下的多反应监测模式进行测定。方法的特异性良好,二氢血根碱和二氢白屈菜红碱在0.2~200μg/L质量浓度范围内线性关系良好(r2≥0.999 6),最低定量限均为0.4μg/kg,平均回收率分别为103.44%和104.36%,准确度RE均≤10.49%,精密度RSD均≤7.43%。该方法应用于长期饲喂博落回散的健康雌性白羽肉鸡的鸡胸肌组织中二氢血根碱和二氢白屈菜红碱的残留量检测,在500mg/kg博落回散组测得DHSA残留量为0.804μg/kg。该方法灵敏度高,重复性好,适用于鸡肌肉中二氢血根碱和二氢白屈菜红碱的残留定量检测。
2018年09期 v.38;No.261 1766-1770页 [查看摘要][在线阅读][下载 578K] [下载次数：268 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：1 ] - 袁建彬;薛琳琳;高春柳;连帅;徐彬;杨焕民;郭景茹;
为研究不同时间运输应激对肉牛肝脏和脾脏中急性期蛋白的影响,选取15头体质量相近健康肉牛作为实验动物,并将其随机分为运输0h组、运输应激3h组和运输应激6h组,每组5头肉牛。以速度为80km/h公路运输。运输刺激后,立即采集试验肉牛肝脏和脾脏。采用酶联免疫吸附试验和荧光定量PCR方法分别测定肝脏和脾脏中急性期蛋白SAA和HP的水平。结果表明:qRT-PCR方法检测结果显示,与运输0h组相比,运输3,6h后,肝脏组织中SAA的mRNA的表达量均显著升高(P<0.05);而脾脏组织中SAA只在运输应激6h后,表达量显著增加(P<0.05)。与0h组相比,在运输应激3h后,肝脏组织中HP的mRNA显著升高。在运输应激6h后,脾脏组织中HP的mRNA的表达量呈极显著性水平升高(P<0.01)。使用ELISA方法检测结果显示,与0h组相比,运输应激后,肝脏组织中SAA浓度呈递增显著性水平升高(P<0.05)。与运输0h组相比,运输应激6h后,肝脏和脾脏组织中SAA、HP均极显著性升高(P<0.01)。说明不同运输时间可以引起不同组织中SAA和HP的变化,机体可以通过改变肝脏和脾脏中SAA和HP的含量来应对应激反应。
2018年09期 v.38;No.261 1771-1774+1778页 [查看摘要][在线阅读][下载 478K] [下载次数：189 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：1 ] - 芮亚培;邱刚;李家奎;孙红武;
采用伪三元相图法制备埃普利诺菌素纳米乳并考察其微观形态及粒径分布。结果显示:由EL-35,乙酸乙酯、1,2-丙二醇为主要组分制备的埃普利诺菌素纳米乳澄清透明,透射电镜下液滴均呈球形。经激光粒度分析仪检测,其平均粒径为18.85nm,多分散系数(PDI)为0.1,其分散度良好。该纳米乳以15 000r/min速度离心30min和留样2,4,6个月后,外观基本无变化。结果表明,所制备埃普利诺菌素纳米乳符合纳米乳的性质和特征。
2018年09期 v.38;No.261 1775-1778页 [查看摘要][在线阅读][下载 685K] [下载次数：273 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：1 ] - 王立鹏;连帅;臧树成;袁建彬;李文杰;杨焕民;
为探讨产前冷应激对妊娠期大鼠肝脏的影响。本研究选择20只体质量(230±20)g的健康SPF级雌性Wistar大鼠,预饲1周,合笼交配。受孕后随即分为常温对照组(RT)和冷应激组(C)2组,每组10只。RT组全程处于(22±2)℃、相对湿度(40.0±0.1)%的环境中饲养,C组在妊娠第15天转移到(4.0±0.1)℃,相对湿度(40.0±0.1)%环境中进行冷刺激。在妊娠第17,21天,各组随机选取5只进行麻醉处死,采集肝脏组织,用Western blot的方法检测肝脏中IL-1β、Bcl-xL和Bax的蛋白表达量。结果显示,在妊娠第17天(冷刺激3d),C组大鼠肝脏中IL-1β的表达量显著高于RT组(P<0.05);肝脏中Bcl-xL/Bax比值显著降低(P<0.05)。结果表明冷应激可能会导致妊娠期大鼠肝脏发生炎症反应,并促进细胞凋亡,对肝脏产生一定损伤。
2018年09期 v.38;No.261 1779-1782+1797页 [查看摘要][在线阅读][下载 377K] [下载次数：192 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：2 ]