预防兽医学

  • 2株H1N1猪流感病毒的遗传进化分析及其生物致病性

    黄俊明;蔡孟楷;李琪;卜德新;方博;冀池海;张桂红;

    对挑选的2株猪流感病毒A/swine/Guangdong/BRT15/2016(H1N1,BRT15)和A/swine/Guangdong/YJ4/2014(H1N1,YJ4)进行遗传进化分析与小鼠致病性试验。全基因组序列的遗传进化分析结果显示,BRT15与YJ4的HA、NA、M基因属于欧亚类禽猪源流感病毒分支,NP、PA、PB1和PB2基因属于pdm/09分支,NS基因属于北美三元重组分支。分别将BRT15与YJ4感染BALB/c小鼠进而比较分离株对小鼠的致病力,结果显示BRT15与YJ4毒株对小鼠具有不同的致病力,YJ4攻毒组小鼠死亡率高于BRT15组。肺部滴度检测显示,感染病毒后3d,YJ4组病毒滴度显著高于BRT15(P<0.01),感染病毒后6d,YJ4和BRT15组病毒滴度无明显差异(P>0.05);脑部滴度检测显示,感染病毒后3,6d,YJ4组和BRT15组病毒滴度均无明显差异(P>0.05)。

    2018年10期 v.38;No.262 1833-1839页 [查看摘要][在线阅读][下载 3720K]
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  • 猪细小病毒NS1基因的克隆、表达及密码子优化提高表达水平

    张建楼;徐瑞涛;霍珊珊;崔丹;左玉柱;仲飞;

    通过PCR方法从猪细小病毒(PPV)基因组中扩增NS1基因,将其克隆到pcDNA3.1A质粒中,构建成与Myc/His标签融合的NS1真核表达载体。将表达载体转染PK-15细胞使其表达。利用猪偏爱的密码子对NS1全基因进行了密码子优化,通过构建表达载体和转染细胞,检测并比较了密码子优化前后的表达水平。结果显示:扩增的NS1基因与GenBank序列一致,构建的表达载体结构正确;Western blot检测表明,NS1基因能够在PK-15细胞中进行表达,但表达水平很低,有时检测不到,从而严重影响对其的进一步研究;密码子优化后NS1基因的表达水平由优化前的7μg/T25培养瓶增加至32μg/T25培养瓶,是原来的4倍。可见密码子优化可明显提高NS1蛋白在PK-15细胞中的表达,这为下一步研究NS1蛋白的功能提供了有利条件。

    2018年10期 v.38;No.262 1840-1845页 [查看摘要][在线阅读][下载 2651K]
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  • 酵母双杂交筛选与呼肠孤病毒σ1、σ1S互作宿主蛋白

    杨丽娟;张兰桥;段怡芸;戴益民;赖芬菊;

    提取猪肠上皮细胞IPEC-1的总RNA,构建了IPEC-1的靶标cDNA文库。随机挑取文库克隆子进行PCR扩增,发现插入片段长度为200~1 500bp,文库的重组率为100%。以猪源呼肠孤病毒GD-1株S1基因节段为模板,通过PCR扩增,定向克隆构建诱饵载体pGBKT7-S1、pGBKT7-S1s。通过菌落PCR和测序验证的质粒被转化至酵母菌株Y2H Gold,诱饵载体pGBKT7-S1、pGBKT7-S1s均能在酵母细胞中正确表达出对应的σ1和σ1S蛋白,且无自激活活性,对酵母细胞无毒性,满足文库筛选实验的要求。将含有pGBKT7-S1、pGBKT7-S1s的酵母菌株Y2H Gold分别与靶标cDNA文库菌株Y187进行杂交,筛选、验证、测序后得到13个与σ1、6个与σ1S相互作用的宿主蛋白,其中的1个蛋白与σ1、σ1S同时存在相互作用。本试验成功构建了适用于研究肠道细菌、病毒作用机制的猪肠上皮细胞IPEC-1cDNA文库,筛选出18个与猪呼肠孤病毒σ1或σ1S的互作蛋白,为研究呼肠孤病毒与宿主相互作用,以及鉴定疾病控制的新靶标提供了线索。

    2018年10期 v.38;No.262 1846-1851页 [查看摘要][在线阅读][下载 662K]
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  • 绵羊痘病毒吉林株的分离鉴定及其RPO30、P32和Kl基因的克隆与进化分析

    田静;关继羽;周艳龙;钟嘉伟;周帅帅;徐梦实;魏新宇;高丰;赵魁;

    从病理学和病原学角度对临床一起疑似羊痘病例进行了系统的检测分析,确诊该起病例为绵羊痘病毒(sheep poxvirus,SPPV)感染所致。对病死羊进行大体病理剖检,病羊口腔黏膜、尾根及肺脏等内脏器官表面可见有大量痘疹样结节;病理组织学观察可见,肺脏支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞发生变性、坏死、脱落,并伴有上皮化生;此外,在肺泡上皮细胞胞浆中可见有嗜酸性病毒包涵体,该结果提示这起病例可能是羊痘病毒感染所致。之后从病原学角度进行了检测分析,电镜负染观察可见典型的痘病毒粒子;RPO30、P32、Kl基因的PCR检测结果显示,均扩增出与预期目的片段大小相一致的条带;P32基因的系统发育进化分析结果显示,该分离株与SPPV-AV40的亲缘关系较近,证实了该起病例的病因为SPPV感染所致,命名为SPPV-Jilin分离株(KF991006)。该分离株RPO30和Kl基因的测序分析结果发现,与山羊痘病毒相应序列相比,其RPO30基因缺少21bp的核酸序列,而Kl基因在902~925bp位置处存在缺失,该结果表明RPO30和Kl基因将可能用于绵羊痘病毒与山羊痘病毒的鉴别诊断。

    2018年10期 v.38;No.262 1852-1857页 [查看摘要][在线阅读][下载 2172K]
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  • 基因Ⅱ、Ⅶ型二价新城疫病毒样颗粒的制备和鉴定

    丁佳欣;李金斗;刘亚林;张国军;姜翠翠;徐小洪;钱晶;于喜冰;吴金;尹仁福;丁壮;

    将基因Ⅶ型新城疫NA-1株F、HN基因的胞外域与基因Ⅱ型新城疫Lasota株F、HN基因的胞内域及跨膜域进行融合,并命名为rNA-1 F/HN。利用昆虫杆状病毒表达系统构建含有新城疫LaSota株M、F、HN等3个结构基因及rNA-1F、rNA-1 HN基因的重组杆状病毒rBV-LaSota M、rBV-LaSota F、rBV-rNA-1 F、rBV-LaSota HN、rBV-rNA-1 HN。将几种重组杆状病毒共感染Sf9细胞96h后收取上清,经超速离心及蔗糖密度离心纯化病毒样粒子(virus-like particles,VLPs),并利用Western blot方法和透射电子显微镜技术检测,结果显示目的蛋白均正确表达且组装成与野生型NDV形态大小相似的VLPs。结果表明:成功制备了新城疫标准疫苗株(LaSota株)及流行强毒株(NA-1株)二价NDV VLPs,为当前新城疫的防控提供新策略。

    2018年10期 v.38;No.262 1858-1863页 [查看摘要][在线阅读][下载 1156K]
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  • 传染性法氏囊病病毒VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法的建立

    王晓丽;王永山;欧阳伟;夏兴霞;潘群兴;毕振威;诸玉梅;

    为建立敏感、特异、稳定的传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法,本试验以杆状病毒表达系统表达的重组IBDV-VP2结构蛋白为抗原,通过包被VP2单克隆抗体捕捉VP2结构蛋白的形式,建立鸡血清VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法(VP2-ELISA)。条件优化结果显示:单克隆抗体最适包被质量浓度为3mg/L,VP2最佳稀释度为1∶20,夹心ELISA效价1∶12.8,被捡血清的稀释度为1∶400。该方法与禽流感、鸡新城疫、鸡马立克氏病、鸡传染性喉气管炎病毒及杆状病毒阳性血清无交叉反应,对琼扩效价为1∶32的IBDV阳性血清的最低检出量为1∶12 800,ROC曲线确定的D450nm临界值为0.236,组内、组间重复性试验变异系数均小于10%。用本试验建立的VP2-ELISA方法与进口IBDV-ELISA抗体试剂盒平行检测100份背景已知的临床鸡血清样品,总符合率VP2-ELISA(97%)高于进口ELISA试剂盒(96%)。本试验为进一步研制鸡传染性法氏囊病病毒VP2结构蛋白抗体ELISA检测试剂盒奠定基础。

    2018年10期 v.38;No.262 1864-1871页 [查看摘要][在线阅读][下载 823K]
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  • 我国部分地区鸭病毒性疫病共感染的流行病学调查

    杨晶;张日腾;王振忠;于相龙;牛晓宇;唐熠;刁有祥;

    为了解我国部分地区规模化鸭场中病毒性疫病的流行与共感染情况,本试验对我国部分地区鸭常见病毒性疫病进行了检测。对2016年采自山东、河北、江西、内蒙古、广西、江苏等省份共计302份鸭的样品进行H9N2亚型禽流感病毒、坦布苏病毒、腺病毒、呼肠孤病毒、新型鹅细小病毒、鸭副黏病毒、鸭圆环病毒的PCR检测,结果7种病毒阳性率分别为28.8%,37.1%,26.1%,22.8%,31.1%,9.9%,20.2%。病毒共感染检测结果显示:多种病毒共感染,尤其是二重感染在鸭群中非常普遍,其中85份样品表现为单一感染,占样品总数的28.3%;97份样品表现为二重混合感染,占样品总数的32.3%;67份样品表现为三重混合感染,占22.0%;四重感染样品共计16份,占5.4%;未感染样品数为37份,占12.3%。商品肉鸭及种鸭的病原检测结果显示:商品肉鸭的感染率高达90.0%,而种鸭的感染率为85.3%。不同季节鸭群的病原检测结果显示:冬春季节检出率较高,达90.2%,而夏秋季节检出率为81.4%。结果表明,多种病毒病的共感染是当前我国规模化养鸭场疫病的主要流行形式,是造成我国规模化鸭场疫病防控复杂化的主要原因之一。

    2018年10期 v.38;No.262 1872-1877页 [查看摘要][在线阅读][下载 1698K]
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  • 鸭乙型肝炎病毒的流行病学调查与全基因组序列分析

    杨晓雪;王玉;王敬谕;薛文湘;张瑞华;蓝晶晶;李鹏飞;谢之景;姜世金;

    为了解鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus,DHBV)在我国鸭群中的感染状态,从我国养鸭业比较集中的山东、江苏2个省份10个鸭群采集临床有发病症状的150只病死鸭的心、肝、脾、肺、肾等5种脏器,以提取的组织DNA为模板通过PCR方法检测DHBV的感染情况,并进行了2株DHBV野毒SD-01和SD-02的全基因组序列测定及同源性和进化树的分析。结果显示,DHBV的群体阳性率为100.0%,个体阳性率为41.3%。被检测的器官中,肝脏的阳性率达100.0%,其他器官从高到低依次是心脏、脾脏、肺脏和肾脏,分别为77.4%,71.0%,67.7%,66.1%。SD-01和SD-02的全基因组全长分别为3 027bp和3 021bp,与其他15株GenBank已发表的全基因组序列同源性在89.6%~99.2%;全基因组核苷酸序列及S蛋白氨基酸序列进化树分析表明,SD01株与4株中国分离株位于同一进化分支上,而SD-02则与中国分离株DHBV-XY株以及9株美国、加拿大、德国、南非以及印度分离毒株处于同一分支。结果表明,我国目前樱桃谷鸭群中携带的DHBV毒株可能有不同的来源。

    2018年10期 v.38;No.262 1878-1882页 [查看摘要][在线阅读][下载 454K]
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  • 2014-2017年我国部分地区10株鸽副黏病毒的分布及其分子特征

    罗瑶瑶;王静静;王云平;魏润宇;吕艳;赵云玲;郑东霞;于松梅;张乐萃;刘华雷;王志亮;单虎;

    为了解我国鸽群新城疫病毒的感染情况,于2014-2017年在国内部分地区开展了基于风险的新城疫主动监测,结果从部分地区活禽市场的鸽群及环境样本中成功分离到10株新城疫病毒,并对其F基因全长进行扩增和遗传进化分析。结果显示,10株新城疫病毒F基因编码区长度均为1 662bp,共编码553个氨基酸,核苷酸和氨基酸同源性分别为96.7%~99.9%、95.7%~99.6%,表明不同地区分离株之间具有较高的同源性。所有分离株F蛋白裂解位点均为112R-R-Q-K-R-F117,具有新城疫病毒强毒株典型的分子特征。遗传进化分析结果显示,10株病毒均属于ClassⅡ基因Ⅵb亚型,表明基因VIb亚型为近年来我国鸽群中流行的新城疫病毒优势基因型。

    2018年10期 v.38;No.262 1883-1886+1931页 [查看摘要][在线阅读][下载 1289K]
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  • 外源粪菌干预对E.coli K88感染仔猪肠形态及肠道屏障功能的影响

    胡栾莎;扶雄锋;耿世杰;程赛赛;李媛;韩新燕;

    选取胎次一致、体质量接近的25日龄杜×长×大三元杂交断奶仔猪12头,随机分为对照组和粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)组。2组仔猪均先用E.coli K88攻毒3d,然后给FMT组仔猪灌服金华猪粪便菌悬液3d,对照组灌服等量无菌磷酸钾缓冲液。结果显示:外源粪菌可以改善受体仔猪肠绒毛形态及大肠杆菌引起的肠绒毛损伤,可以抑制K88攻毒引起的肠道通透性增加,提高空肠、结肠中杯状细胞数目,也可相应提高MUC2、紧密连接蛋白(ZO-1,Occludin)的蛋白表达水平。结果表明:粪菌移植可缓解E.coli K88攻毒引起的肠道损伤,改善肠道黏蛋白表达,并提高紧密连接蛋白表达从而增强肠道上皮屏障功能。

    2018年10期 v.38;No.262 1887-1892页 [查看摘要][在线阅读][下载 1535K]
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  • 猪呼吸道疾病综合征主要致病菌的分离鉴定

    王一涵;周宏超;罗丽华;冯秀;赵紫印;邢福珊;郭抗抗;

    对3个猪场的4头呼吸道疾病综合征病猪肺脏(猪场分别编号A、B、C,其中猪场A 1头、猪场B 2头、猪场C 1头)进行猪肺炎支原体(Mhp)、副猪嗜血杆菌(Hps)和猪胸膜肺炎放线杆菌(App)PCR检测,进而进行细菌的分离鉴定和药敏试验。结果显示:4份病料中App和Mhp均为阴性,Hps在猪场A和C的病料中为阴性,猪场B病料中为阳性;在猪场A分离出奇异变形杆菌和猪链球菌各1株;猪场B分离出1株化脓隐秘杆菌、1株嗜麦芽窄食单胞菌和1株奇异变形杆菌;猪场C分离出1株化脓隐秘杆菌和1株奇异变形杆菌。药敏试验结果显示:化脓隐秘杆菌对诺氟沙星、洛美沙星敏感,嗜麦芽窄食单胞菌对恩诺沙星敏感,奇异变形杆菌对诺氟沙星、恩诺沙星敏感,猪链球菌对诺氟沙星、洛美沙星、环丙沙星、氧氟沙星敏感。小鼠致病性试验结果表明:变形奇异杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌和化脓隐秘杆菌均能使小鼠出现一过性精神萎靡;猪链球菌引起试验小鼠全部死亡,具有较强致病力。

    2018年10期 v.38;No.262 1893-1900页 [查看摘要][在线阅读][下载 1263K]
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  • 斯氏副柔线虫免疫相关基因CSY原核表达载体的构建及生物信息学分析

    赵学亮;孙柯;王梦雅;白丽艳;冯陈晨;王文龙;

    采用RT-PCR克隆斯氏副柔线虫CSY基因的CDS区,限制性内切酶对目的片段与pET30a(+)原核表达载体进行双酶切,构建重组表达载体,利用生物信息学软件对该基因理化性质、结构特点进行分析。结果显示:CSY基因全长774bp,编码255个氨基酸,蛋白质理论大小值为29 240,理论等电点为7.53,蛋白质不稳定指数为40.09;跨膜结构和信号肽分析表明CSY蛋白无跨膜区,无信号肽区域。结果表明:成功构建了pET-30a(+)-CSY重组表达载体;生物信息学分析表明CSY蛋白是一种抗原性较高的亲水性蛋白,可能有7个B细胞抗原表位和8个T细胞抗原表位,有望用于斯氏副柔线虫的免疫诊断抗原和疫苗候选抗原。

    2018年10期 v.38;No.262 1901-1907页 [查看摘要][在线阅读][下载 1617K]
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人兽共患病

  • 山东省2010-2016年畜间和人间布鲁菌病疫情分析

    孙晓梅;寇增强;魏凯;刘娜;王玉建;徐煜琳;朱琳;胡莉萍;朱瑞良;

    应用Excel 2013软件对山东省2010-2016年的布鲁菌病档案和疫情报告以及山东省卫生和计划生育委员会公告数据进行统计描述性分析。结果显示,除2013年以外,山东省畜间布鲁菌病和人间布鲁菌病的走势一致,且2015年和2016年的畜间布鲁菌病和人间布鲁菌病的增幅都有所放缓。男女的发病比例为2.6∶1,不同年龄组中,40~50岁年龄组的人间布鲁菌病新发病例数占人间布鲁菌病新发病例总数的17.8%,且发病人群以农民为主,其次是牧民。感染布鲁菌病的家畜是人间布鲁菌病的主要传染源,人患布鲁菌病取决于与牲畜等传染源密切接触的程度,控制和根除畜间布鲁菌病能有效降低人间布鲁菌病的发病率。山东省畜间和人间布鲁菌病的情况依然严峻,应加强山东省畜间和人间布鲁菌病的疫情监测,密切关注疫情流行动态。

    2018年10期 v.38;No.262 1908-1911页 [查看摘要][在线阅读][下载 612K]
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  • 个人用葡萄糖传感器(PGM)即时检测金黄色葡萄球菌及血浆凝固酶鉴定

    黄浩然;窦文超;赵广英;

    建立基于个人用葡萄糖传感器(personal glucose meter,PGM)的血浆凝固酶阳性金黄色葡萄球菌(Staphylococus aureus,S.aureus)即时检测(point-of-care testing,POCT)方法,将定量和血浆凝固酶试验合并为一步完成,达到快速、简便、经济和准确的目的,便于推广应用。通过优化配方得到一种专用于PGM检测的Baird Parker-BHI-Glu混合培养基,并建立一套标准的检测方法;同时从自然界中分离纯化多株野生S.aureus;用加标回收法验证该方法与国标法在定量和血浆凝固酶试验上的符合程度,确定其可行性。结果显示:本试验成功设计优化了PGM即时检测血浆凝固酶阳性S.aureus的专用培养基,建立了检测标准方法,并制作了标准曲线,检测限为5.9×100CFU/mL,加标样品检出率及血浆凝固酶阳性样品检出率分别为100.00%和96.55%,检测时间不超过24h,为实际应用与商品化提供了理论支撑。

    2018年10期 v.38;No.262 1912-1919页 [查看摘要][在线阅读][下载 1519K]
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  • 驴源猪链球菌2型的分离和鉴定及MLST分型

    刘朋;程子龙;陈萌;刘思当;

    2017年4月,山东省济宁嘉祥县、梁山县和聊城东阿县的多个驴场从外地购买的驴相继发生体温升高、流鼻涕、咳嗽、呼吸困难等症状,病情严重的驴出现死亡。从5个驴场分别剖检5头病死驴,均表现化脓性肺炎及败血症病变,采集一典型病例的组织,进行细菌分离培养,并通过病理组织学检查、革兰染色、生化鉴定、血清学鉴定、16S基因序列分析以及MLST(aroA、cpn60、dpr、gki、mutS、recA、thrA)分型研究,此外还分析了中国目前所流行的ST型以及不同ST型之间的关系。结果显示:病原为猪链球菌2型;16SDNA序列与国内外部分地区菌株序列的同源性达到99%~100%;MLST分型为ST2型;该分离菌株对林可霉素、青霉素、阿莫西林、头孢噻呋钠产生耐药性,对左氧氟沙星、氟苯尼考高度敏感。

    2018年10期 v.38;No.262 1920-1925页 [查看摘要][在线阅读][下载 2318K]
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  • 貉肠炎沙门菌htra基因缺失株的构建及其生物学特性

    张志强;苏硕青;李永慧;段滇宁;杨楠;李巧玲;吴同垒;史秋梅;

    利用Red同源重组方法对HtrA蛋白编码基因htra进行敲除,并从生长特性、生化特性、耐pH应激与氧化应激、抗血清杀伤和菌株毒力等几方面对突变菌株进行评价。结果显示,与野生型菌株相比,htra基因缺失株生长特性和生化特性无明显差异,但其对酸性和碱性环境的敏感性增加,对血清的耐受力下降;动物试验结果显示,htra基因缺失后肠炎沙门菌对小鼠半数致死量有显著提高。本试验成功构建了貉肠炎沙门菌htra基因缺失株,为研究HtrA蛋白的作用机制奠定了基础。

    2018年10期 v.38;No.262 1926-1931页 [查看摘要][在线阅读][下载 545K]
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基础兽医学

  • 阿司匹林丁香酚酯的抗血小板聚集机制

    申栋帅;杨亚军;刘希望;孔晓军;秦哲;李世宏;焦增华;李剑勇;

    将空白血小板样品分为8组,包括溶剂对照组以及模型组、阿司匹林组、丁香酚组、联合给药组、阿司匹林丁香酚酯(aspirin eugenol ester,AEE)低剂量组、AEE中剂量组和AEE高剂量组这7个处理组。各组加入对应的药物,并在37℃孵育3min,而后各处理组加入血小板激活剂二磷酸腺苷(ADP),并于37℃孵育5min,从而激活血小板。最后,通过ELISA检测试剂盒分别对血小板胞内cAMP含量变化以及血小板ATP释放量进行测定;利用荧光分光光度法以及钙离子特异结合的荧光探针Fura-2/AM对血小板胞内钙离子浓度([Ca~(2+)]i)进行测定;通过蛋白质印迹法(Western blot)对血小板胞内Akt、ERK、JNK以及P38蛋白磷酸化程度进行测定。结果显示,AEE各组及其前药对照组均能显著降低胞内钙离子浓度以及ERK蛋白磷酸化(P<0.05),但对胞内cAMP含量变化以及JNK、P38和Akt蛋白的磷酸化过程无显著性影响(P>0.05)。此外,不同浓度AEE均可显著降低血小板ATP释放量(P<0.01),而阿司匹林、丁香酚以及两者联用则均无显著性影响(P>0.05)。在终浓度为25μmol/L时,AEE的降钙作用以及抑制ERK2蛋白磷酸化作用效果均优于其前药对照组,且该浓度下AEE能够显著降低血小板ATP释放量(P<0.01)。由此可见,AEE通过降低血小板胞内钙离子含量和ATP释放量,以及抑制ERK2磷酸化从而抑制ADP诱导的血小板聚集,且相比于其前药增加了降低血小板ATP释放量这一新的作用途径。

    2018年10期 v.38;No.262 1932-1937页 [查看摘要][在线阅读][下载 446K]
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  • 超高效液相色谱-串联质谱法检测鸡肌肉中8种抗球虫药物的残留

    奚照寿;赵霞;袁华根;刘建宇;王波;谢恺舟;

    为建立鸡肌肉中8种抗球虫药(氯苯胍、拉沙洛菌素、常山酮、莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素、尼日利亚菌素和马杜霉素)残留同时检测的超高效液相色谱-串联质谱检测法,用乙酸、乙腈和乙酸乙酯的混合液提取样品,乙腈饱和的正己烷去脂,C18固相萃取柱净化后,用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)仪进行分析。以多反应监测模式(MRM)运行,采用正离子模式下的电喷雾电离,外标法定量,并以0.1%(体积比)甲酸水溶液和纯甲醇为流动相。在定量限(LOQ)~100.0μg/kg线性关系良好,决定系数均在0.999 47以上。8种抗球虫药添加水平为LOQ、0.5MRL、1.0MRL和2.0MRL时,平均回收率在73.28%~101.83%,相对标准偏差(RSD)均低于12.76%。8种抗球虫药的检测限(LOD)和定量限(LOQ)的范围分别为0.17~0.44μg/kg和0.54~1.13μg/kg。结果表明,该方法高效、快速、灵敏度高,可用于同时检测鸡肌肉中8种抗球虫药物的残留。

    2018年10期 v.38;No.262 1938-1943+1947页 [查看摘要][在线阅读][下载 1273K]
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  • 冷应激大鼠肝脏中novel-rno-miR-3的功能预测

    付云超;薛琳琳;丁玉玲;郭文晋;杨焕民;

    将12只雄性Wistar大鼠随机分成2组,每组各6只分别放入冷应激气候室(4±0.5)℃和常温气候室中(4±0.5)℃,分别饲养12h后麻醉后采大鼠肝脏,并检测大鼠肝脏中novel-rno-miR-3的相对表达量。结果显示,急性冷应激组大鼠肝脏中的novel-rno-miR-3出现了极显著上调(P<0.01)。结果表明,novel-rno-miR-3可能在急性冷应激时发挥调控功能,通过与其靶基因结合达到维持机体生命活动的作用。

    2018年10期 v.38;No.262 1944-1947页 [查看摘要][在线阅读][下载 323K]
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  • 运输应激对肉牛肝脏和脾脏中应激相关蛋白的影响

    袁建彬;薛琳琳;高春柳;连帅;徐彬;杨焕民;郭景茹;

    选取15头体况相似的健康肉牛作为研究对象,随机分为运输0h组、运输3h组和运输6h组,每组5头肉牛,采用公路运输方式运输(平均速度为80km/h)。采集各组牛肝脏和脾脏组织样本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR(qRT-PCR)2种试验方法检测各组肝脏和脾脏组织中应激蛋白-热休克蛋白70(HSP70)和急性期蛋白-C反应蛋白(CRP)含量的变化。qRT-PCR检测结果显示:与运输0h组相比,运输3h和6h肝脏组织中HSP70mRNA的表达量极显著升高(P<0.01);而脾脏组织中HSP70mRNA只在运输应激6h后表达量显著增加(P<0.05)。与0h组相比,运输应激后肝脏组织中CRP mRNA的表达量极显著升高(P<0.01),脾脏组织中CRP mRNA的表达量显著升高(P<0.05)。ELISA检测结果显示:与0h组相比,运输应激3h和6h肝脏中的HSP70质量浓度极显著升高(P<0.01),脾脏中HSP70的质量浓度在运输6h后显著升高(P<0.05);肝脏和脾脏CRP的表达在运输应激6h后极显著升高(P<0.01)。结果表明:不同运输时间的运输应激可导致肝脏和脾脏中HSP70和CRP的浓度和mRNA转录水平升高,且肝脏中HSP70和CRP的表达量高于脾脏。HSP70和CRP可作为肉牛运输应激候选诊断标志物。

    2018年10期 v.38;No.262 1948-1951+1961页 [查看摘要][在线阅读][下载 510K]
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  • 产前冷应激对妊娠母鼠肝脏HSP70和P65的影响

    李文杰;连帅;李悦;张宇辰;王立鹏;臧树成;袁建彬;杨焕民;

    将20只SPF级妊娠Wister母鼠随机分为常温对照组和冷应激组,每组10只。对照组妊娠母鼠妊娠期全程在(22±2)℃的环境中饲养,冷应激组母鼠在产前7d置于(4±0.1)℃人工智能气候室中饲养,分别冷刺激3d和7d。麻醉后采集各时间点(每个时间点5只妊娠母鼠)肝脏组织样本,常温对照组在相同时间点采集肝脏组织样本。采用Westen blot方法检测肝脏中HSP70、P65蛋白的表达量。结果显示:冷应激组妊娠母鼠肝脏中HSP70和P65蛋白表达量均高于常温对照组,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结果表明:产前冷应激使妊娠母鼠肝脏中HSP70、P65蛋白表达量升高,推测这有可能促使肝脏中炎症反应的发生。

    2018年10期 v.38;No.262 1952-1955页 [查看摘要][在线阅读][下载 309K]
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  • C5a对类风湿关节炎小鼠嗜中性粒细胞的募集作用

    赵翠青;刘立明;孙文超;王茂鹏;陈征;王宝梅;李霄;鲁会军;金宁一;

    通过使用双光子显微镜活体成像技术优化了K/B×N血清诱导的关节炎小鼠模型,并观察了嗜中性粒细胞的募集情况。皮下注射K/B×N血清可以快速诱导大量的嗜中性粒细胞募集到局部炎症关节。通过使用这种方法,发现阻断C5a活性会减少嗜中性粒细胞募集,说明C5a是关节炎期间嗜中性粒细胞募集的关键调节因子。因此,本试验将为补体相关生物制剂治疗类风湿关节炎提供新的靶点。

    2018年10期 v.38;No.262 1956-1961页 [查看摘要][在线阅读][下载 2035K]
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  • miR-26a-5p对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

    耿红瑞;何卉;谭晓彤;郭东光;马勇江;张媛;李玉谷;

    分别将miR-26a-5p mimic和inhibitor成功转染至3T3-L1前脂肪细胞,使miR-26a-5p过表达和功能缺失。采用CCK-8和流式细胞术检测细胞活力及细胞周期,实时qPCR和Western blot技术分别检测细胞周期G1期标志基因CyclinD1和CDK4及成脂标志基因FABP4和C/EBPα的表达,油红O染色检测甘油三酯含量变化。结果显示:过表达miR-26a-5p显著降低3T3-L1前脂肪细胞的活力并导致其G1期阻滞;与对照组相比,miR-26a-5p mimic组CyclinD1和CDK4的mRNA和蛋白水平表达显著下调而FABP4和C/EBPα的mRNA和蛋白水平表达显著上调,甘油三酯积累增加;当抑制其表达后出现与之完全相反的结果。结果表明:miR-26a-5p显著抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖并促进其成脂分化。

    2018年10期 v.38;No.262 1962-1967+1981页 [查看摘要][在线阅读][下载 1296K]
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  • 混合乳酸菌对肠道RegⅢγ的表达及树突状细胞分化及成熟的调节作用

    李国江;刘立明;沙万里;刘东旭;尹柏双;李虹瑾;王玉茹;

    通过向小鼠口服灌胃混合乳酸菌、基因工程乳酸菌及肠道共生大肠杆菌,结果显示混合乳酸菌和基因工程乳酸菌的活菌及灭活菌均可以诱导小鼠小肠和结肠中RegⅢγ的表达,混合乳酸菌诱导RegⅢγ的表达水平显著高于基因工程乳酸菌,并且RegⅢγ的表达水平与混合乳酸菌呈剂量依赖关系,同时高剂量混合乳酸菌还可以显著诱导小鼠肠道树突状细胞的分化及成熟。结果表明:混合乳酸菌可对肠道RegⅢγ表达的调控以及树突状细胞的分化成熟产生影响,这为乳酸菌诱导宿主先天黏膜免疫机制研究奠定基础。

    2018年10期 v.38;No.262 1968-1973页 [查看摘要][在线阅读][下载 1841K]
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临床兽医学

  • 归芎益母散对奶牛的靶动物安全性试验

    黄雪利;范云鹏;麻武仁;刘迎秋;崔东安;宋晓平;

    选择20头健康奶牛,随机分为4组,每组5头。各组以0倍剂量(空白对照组)、1倍推荐剂量(400g/头,Ⅰ组)、3倍推荐剂量(1 200g/头,Ⅱ组)、5倍推荐剂量(2 000g/头,Ⅲ组)的归芎益母散经口灌服给药,每天1次,连用3d。试验期间,监测分析受试奶牛的临床症状以及给药后0,4,7,14d的产奶量变化和血液学指标。结果显示:与对照组比较,不同剂量的归芎益母散对受试奶牛的健康状况、日均产奶量和血液学生理指标均无不良影响(P>0.05);在用药后4d,Ⅲ组奶牛的AST、BUN水平显著升高(P<0.05),ALT、TG和CRE水平极显著升高(P<0.01);在用药后7d,Ⅲ组奶牛的ALT、AST、BUN和CRE水平显著升高(P<0.05),TG水平极显著升高(P<0.01);用药后14d,与对照组相比,Ⅲ组奶牛血液生化指标差异均不显著(P>0.05)。结果表明:归芎益母散至少以3倍推荐剂量口服给药对靶动物奶牛是安全的。

    2018年10期 v.38;No.262 1974-1981页 [查看摘要][在线阅读][下载 161K]
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  • 植物乳杆菌和屎肠球菌协同固体发酵黄芪的互作及在断奶仔猪上的应用

    乔宏兴;史洪涛;白静;赵圣振;边传周;张晓静;

    用不同比例植物乳杆菌和屎肠球菌固体发酵黄芪,优化发酵条件后应用于160头断奶仔猪。160头断奶仔猪被随机分成5个组(基础日粮分别添加0.2%,0.4%,0.6%,0.8%的发酵黄芪组和对照组),每组4个重复,每个重复8头猪,试验期28d,观察其对断奶仔猪生产性能和免疫性能的影响。结果显示:固体发酵优化条件的植物乳杆菌和屎肠球菌的比例为5∶5,药性基质黄芪50%,玉米、麸皮25%,接种量25%,发酵温度37℃,湿度50%,发酵时间12d的黄芪多糖得率为8.09%。添加0.6%发酵黄芪组断奶仔猪平均日采食量较对照组提高12.2%(P<0.05),平均日增重提高19.8%(P<0.05),料肉比降低9.81%(P<0.05)。在试验28d时,IgG含量最高较对照组提高30.2%(P<0.05);在14d和28d时,IgA含量较对照组分别提高35.7%(P<0.05)和22.1%(P<0.05)。

    2018年10期 v.38;No.262 1982-1988页 [查看摘要][在线阅读][下载 381K]
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  • 穴位埋线对非酒精性脂肪肝模型大鼠脂质代谢及AdipoR2-PPARα-CPT1a信号通路mRNA表达水平的影响

    杨茜雯;王岩;杨英;

    试验选用48只雌性Wistar大鼠,随机分为对照组和模型组。高脂饲料饲喂8周诱导非酒精性脂肪肝模型。模型验证后,将大鼠分为空白对照组、空白埋线A组、空白埋线B组、模型组、模型埋线A组、模型埋线B组,每组6只。埋线组进行穴位埋线,A组:肝俞、胆俞、后海;B组:肝俞、胆俞、后海、后三里。2周后检测血清TG、TC、FFA、LDL-C、HDL-C、ADPN含量及肝脏TG、TC、FFA、ACC、FAS含量;RT-PCR检测肝脏AdipoR2、PPARα、CPT-1a mRNA表达水平。结果显示:与模型组相比,模型埋线A、B组血清HDL-C、ADPN含量显著升高,TC/HDL-C、TG/HDL-C比值显著降低;模型埋线A、B组肝脏TG含量显著降低;模型埋线B组肝脏FFA、FAS含量显著降低;模型埋线A、B组肝脏PPARαmRNA表达水平显著升高(P<0.05)。结果表明:穴位埋线对非酒精性脂肪肝模型大鼠血脂指标有一定的改善作用,能有效降低肝脏TG、FAS含量,调节肝脏脂质的合成,其机理可能与其参与PPAR通路调节有关。

    2018年10期 v.38;No.262 1989-1993页 [查看摘要][在线阅读][下载 1134K]
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动物科学

  • 杜仲叶提取物对三元杂交断奶仔猪小肠内ghrelin表达的影响

    徐明涛;冯蕾;陈鹏;姜淑贞;黄丽波;侯衍猛;成子强;杨在宾;葛利江;杨维仁;

    选择28日龄体质量为(11.22±0.32)kg的24头健康"杜×长×大"杂交断奶仔猪为研究对象,对照组饲喂基础饲粮(n=12),试验组饲喂在基础饲粮的基础上添加250mg/kg杜仲叶提取物的饲粮(n=12),预试期7d,正试期42d。结果显示:杜仲叶提取物能增加仔猪的平均日采食量和平均日增重,促进小肠绒毛发育,增加小肠绒毛长度和黏膜层增厚,且回肠淋巴小结明显增多;免疫组化和Western blot检测结果显示杜仲叶提取物能引起仔猪十二指肠、空肠及回肠黏膜上皮细胞分泌ghrelin增多,显著上调小肠中ghrelin蛋白的表达量。结果表明:杜仲叶提取物增强了小肠黏膜上皮细胞自分泌ghrelin能力,以促进其对营养物质的消化吸收,进而提高仔猪的生长性能并增强机体免疫力。

    2018年10期 v.38;No.262 1994-2000页 [查看摘要][在线阅读][下载 6337K]
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  • DNA甲基化参与LPS诱导的牛子宫内膜细胞IL-6和IL-8表达调控

    王军;燕晓晓;丁赫;吕文发;

    利用DNA甲基化抑制剂等试验分析了DNA甲基化在细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的牛子宫内膜细胞IL-6和IL-8表达上调中的作用。首先用1mg/L LPS处理牛子宫内膜细胞24h,研究其对细胞IL-6、IL-8和TLR4(Toll-like receptor 4,TLR4)、DNA甲基化酶(DNMT1、DNMT3A、DNMT3B)和DNA甲基化结合蛋白2(methyl CpG-binding protein 2,MeCP2)表达的作用,随后用1,2,5,10μmol/L 5Aza-dc分别预处理牛子宫内膜细胞0,24,48,72h,荧光定量PCR技术测定IL-6和IL-8表达。结果显示:1mg/L LPS处理可显著上调牛子宫内膜细胞IL-6、IL-8、TLR4、DNMT1、DNMT3A、DNMT3B和MeCP2的表达,5Aza-dc预处理可显著提高LPS诱导的牛子宫内膜细胞IL-6和IL-8表达上调,且其作用效果存在浓度和时间依赖效应。结果表明:LPS通过抑制DNA甲基化诱导牛子宫内膜细胞IL-6和IL-8mRNA表达上调。

    2018年10期 v.38;No.262 2001-2005页 [查看摘要][在线阅读][下载 643K]
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  • 高钒对雏鸡肾脏生长及结构、Na~+-K~+-ATP酶活性和血清肌酐、尿酸含量的影响

    刘晓东;彭利兰;崔恒敏;张森;莘海亮;

    选用1日龄AA肉鸡健雏420只,随机分为6组,每组70只,分别饲以对照日粮(钒0.073mg/kg)和高钒日粮(钒5mg/kg,高钒Ⅰ组;钒15mg/kg,高钒Ⅱ组;钒30mg/kg,高钒Ⅲ组;钒45mg/kg,高钒Ⅳ组;钒60mg/kg,高钒Ⅴ组)42d,以实验病理学和生化试剂盒检测的方法观察研究雏鸡肾脏变化。结果显示:高钒Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组肾脏质量显著降低(P<0.05),同时肾小管上皮细胞发生不同程度颗粒变性和空泡变性;高钒Ⅳ、Ⅴ组Na~+-K~+-ATP酶活性显著降低(P<0.01),高钒Ⅳ、Ⅴ组血清肌酐、尿酸含量显著增加(P<0.05)。结果表明:高钒含量超过15mg/kg时对雏鸡肾脏可造成一定损伤,引起肾脏功能下降。

    2018年10期 v.38;No.262 2006-2010页 [查看摘要][在线阅读][下载 1008K]
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综述

  • 牛支原体膜蛋白的研究进展

    刘畅;曹钰晗;赵春阳;徐璐尧;张文劲;唐鑫;赖金伦;陈颖钰;郭爱珍;胡长敏;

    <正>支原体(Mycoplasma)是目前世界上最小的、进行自我复制的、且能在无生命培养基中生长的原核生物,结构简单,缺乏细胞壁,能通过0.22微米的细菌滤器。支原体种类繁多,对人类和动植物造成的危害大,且易污染体外培养的细胞,给科研工作带来

    2018年10期 v.38;No.262 2011-2014+2019页 [查看摘要][在线阅读][下载 446K]
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  • 药物体外肝代谢模型的研究进展

    刘利利;张继瑜;

    <正>新药研发是一个漫长而复杂的多程序过程。先导化合物要成为可用于临床试验的候选药物,必须深入了解其在生物体内的吸收、分布、代谢和排泄性质,这一环节贯穿于药物研发的整个过程。在1990年,据估计将近40%的药物因为DMPK(drug metabolism and pharmacokinetic)特性不佳而被淘汰,而在2000年这一数值下降到10%,可能是因为在后续的药物研发过程中更多地运用了DMPK原则

    2018年10期 v.38;No.262 2015-2019页 [查看摘要][在线阅读][下载 274K]
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  • 非洲猪瘟病毒实验室诊断方法的研究进展

    林彦星;曹琛福;杨俊兴;阮周曦;吴江;吕建强;花群义;

    <正>非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASF virus,ASFV)感染引起的猪的一种急性、烈性、高度传染性疾病,以高热、网状内皮系统出血和高死亡率为特征~([1])。世界动物卫生组织(OIE)将ASF列为法定报告疫病,我国将其列为一类动物疫病~([2])。ASFV是非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)非洲猪瘟病毒属(Asfivirus)的唯一成员,

    2018年10期 v.38;No.262 2020-2024+2032页 [查看摘要][在线阅读][下载 159K]
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  • 2型牛病毒性腹泻/黏膜病流行病学及其疫苗的研究进展

    黄慧文;刘芳芳;张学成;李真光;武华;

    <正>牛病毒性腹泻/黏膜病(BVD-MD)是在世界范围内对养牛业造成重大经济损失的疫病之一,主要能感染牛、羊、猪等多种经济动物,造成呼吸系统、消化系统和生殖系统疾病,在牛的病原学上具有很重要的地位,我国将该病列为三类动物疫病~([1])。目前,国际病毒分类委员会确定BVDV包括2种基因型,即BVDV1型和BVDV2型。该病广泛流行于全球

    2018年10期 v.38;No.262 2025-2027页 [查看摘要][在线阅读][下载 104K]
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  • 硫化氢对细胞增殖和凋亡作用的研究进展

    孙丽婷;王凤鸽;张雪莹;郑雪;李纯锦;周虚;

    <正>大多数情况下,人们提起硫化氢(H_2S)都知道它是一种无色、比空气重、有剧毒,具有臭鸡蛋气味、吸入过多会伤害生命的气体~([1-2])。H_2S的中毒机制通常被认为是其可使呼吸链中的细胞色素C氧化酶与Fe~(3+)结合,抑制分子氧的利用和电子传递,阻断氧化磷酸化~([2-5]),同时还会抑制其他酶的活性,使组织缺氧而中毒(如:碳酸酐酶~([6])、单胺氧化酶~([7])、Na~+/K~+-ATP酶和胆碱酯酶[2]),这也使得人们谈

    2018年10期 v.38;No.262 2028-2032页 [查看摘要][在线阅读][下载 256K]
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