- 赵冠宇;解长占;孙文超;张赫;那少龙;李卓昕;张涵;李成辉;哈卓;李金凤;韩继成;南福龙;庄忻雨;张英;金宁一;
采用PCR方法扩增猪细小病毒7型(PPV7)衣壳蛋白基因保守区域493 bp,将其克隆到pMD18-T载体,构建重组质粒作为标准阳性质粒,以其为模板建立用于检测PPV7的SYBR GreenⅠ实时PCR检测方法,并验证其灵敏性、特异性和重复性。结果表明,本试验建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法在2.85×10~1～2.85×10~8拷贝/μL呈良好的线性关系,相关系数为0.995,斜率为4.158,灵敏度可达到2.85×10~1拷贝/μL。该方法对于猪繁殖障碍性传染病常见病原如PRRSV、PCV2和PRV未出现特异性扩增,表明特异性好。所有标准曲线在溶解温度为83.103℃时出现单一的特异峰。使用本方法检测了2017年山东地区7家养猪场216份临床样品,总阳性率为12.5%。
2019年10期 v.39;No.274 1885-1889页 [查看摘要][在线阅读][下载 2282K] [下载次数：345 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 吴明臻;江云波;敖超杰;于学祥;库旭钢;陈芳洲;孙琪;吴昊;何启盖;赵青;
猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)主要引起猪的多系统功能障碍性疾病,同时,还可侵害猪的免疫系统,造成猪免疫抑制,容易继发细菌及其他病毒感染,大大增加猪群的死亡率。为了解PCV2在浙江金华猪群中的分布与流行状况以及PCV2变异规律,对从浙江省金华猪场收集的3 433份血清进行PCR检测,结果显示,2012-2018年PCV2阳性率分别为10.16%,11.95%,8.50%,9.94%,6.19%,5.94%,8.28%,母猪阳性率最高为13.49%。本研究发现在2012年浙江金华地区PCV2优势毒株已经由PCV2b变为PCV2d,且全部为PCV2d-2。将得到的ORF2序列同已知的疫苗序列对比后,发现SH株与浙江金华目前PCV2主流毒株序列一致性最高,但抗原位点比较仍有5处差异,这可能会对疫苗效果产生影响,需要进一步验证。另外只有PCV2d在免疫显性诱饵表位上发生了突变,这可能是PCV2d成为主流的原因。
2019年10期 v.39;No.274 1890-1896页 [查看摘要][在线阅读][下载 4163K] [下载次数：382 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：1 ] - 孙文超;汪伟;辛佳亮;张世亨;黄海鑫;曹亮;郑敏;张红云;韦显凯;鲁会军;金宁一;
为研究广西地区牛源PCV2流行毒株基因组特性和遗传进化情况,运用PCR技术对广西地区采集的210份牛血清进行检测,结果其中35份样品为PCV2阳性。将3份阳性样品进行全基因组克隆与序列分析,分别命名为PCV2/GX-B2(1 769 nt)、PCV2/GX-B131(1 768 nt)、PCV2/GX-B132(1 767 nt)。同源性显示与猪DK1980PMWS-free株同源性最低(94%),与牛源的Buffalo2株同源性最高(98.6%)。遗传进化分析,3株牛源PCV2毒株均属于PCV2d基因型。本研究报道了PCV2在我国广西地区牛群中的感染情况,并发现广西地区牛群中PCV2的主要流行基因亚型为PCV2d。
2019年10期 v.39;No.274 1897-1901页 [查看摘要][在线阅读][下载 6038K] [下载次数：150 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ] - 陈新;曹雨;薄宗义;陈欢;孙雯;张志芳;印春生;钱莺娟;JUNG Yong-sam;戴建君;
蓝舌病(bluetongue,BT)是由蓝舌病毒(bluetongue virus,BTV)感染反刍动物,包括山羊、绵羊、水牛和骆驼等,引起的非接触性传染病,以口腔、鼻腔及胃黏膜发生溃疡性炎症病变为主要特征,库蠓是其主要传播媒介。BTV传播相当广泛,除了南极洲外的所有洲都有发现,近20年间在欧洲肆虐传播,造成了巨大的经济损失。目前发现的BTV包含26个血清型,型间没有交叉保护作用,使用传统疫苗只能提供部分保护。虽然目前已经有针对多种血清型BTV重组疫苗的研究,但保护效果并不理想。因此,研究防治BT的药物具有重要的应用价值。本研究发现,组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)的特异性抑制剂Tubacin能够抑制13型BTV感染,通过半定量PCR、Western blot、TCID_(50)等试验验证,Tubacin处理后细胞病变减轻,病毒RNA和蛋白表达水平下降,上清中病毒粒子含量减少。结果证明Tubacin可在一定程度上抑制BTV感染,Tubacin是抗BTV的候选药,HDAC6可能是抗BTV感染的靶点之一。
2019年10期 v.39;No.274 1902-1906页 [查看摘要][在线阅读][下载 635K] [下载次数：160 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 范慧;曾洁;李亮;李仕海;张盼盼;延君芳;姜平;白娟;
为建立快速检测塞内卡病毒A (Senecavirus A,SVA)血清学方法,以纯化的重组VP1蛋白作为包被抗原,建立了SVA VP1间接ELISA抗体检测方法。结果表明,VP1蛋白以包涵体形式表达,纯化后的蛋白经Western blot鉴定具有较好的反应原性。该ELISA检测方法阴、阳性临界值为0.278,与口蹄疫病毒(FMDV)、脑心肌炎病毒(EMCV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等猪常见病原阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性。批内和批间重复性试验的变异系数均小于13%,表明该方法重复性和稳定性均较好。相比于血清中和试验(SN),该方法的相对敏感性为98.0%,两种方法的符合率为84%。用该方法对来自山东、广东省的8个猪场的276份血清进行检测,阳性率为22.1%。SVA VP1间接ELISA抗体检测法可作为一种快速、简便的血清学诊断方法,用于猪群SVA感染监测和流行病学初步调查。
2019年10期 v.39;No.274 1907-1912页 [查看摘要][在线阅读][下载 922K] [下载次数：296 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：24 ] |[阅读次数：0 ] - 辛波;徐琼;李思洁;任东兴;吕传忠;孙阳阳;付旭彬;黄灿平;鲍恩东;
VP2蛋白是传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)的保护性抗原。原核表达中能否获得具有天然构象的可溶性VP2蛋白是研发IBD亚单位疫苗的关键问题。为了解是否存在鸡自体促溶标签蛋白以及外源促溶标签能否在一定程度上促进蛋白的正确折叠,试验对不同物种来源的类泛素蛋白修饰分子(small ubiquitin-like modifier,SUMO)进行比对研究。结果显示,获取到的3种鸡源SUMO蛋白与酵母源SUMO蛋白的氨基酸同源性均高于40%,其中SUMO-1与SUMO-3两种蛋白可以在大肠杆菌中可溶性表达;通过SUMO-1、SUMO-3与VP2蛋白的融合表达,证明了鸡源SUMO蛋白对VP2具有促溶效果,得到的重组菌株P-28A-s1-VP2和P-28A-Os3-VP2琼脂扩散效价均达到1∶16;经过纯化后,融合蛋白SUMO-1-VP2的琼脂扩散效价可达到1∶256;使用SUMO蛋白酶酶切融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot结果表明鸡源SUMO蛋白可以被成功切割,说明试验发现的鸡源SUMO蛋白可以作为促溶标签,在亚单位疫苗关键抗原表达中具有广阔的应用前景。
2019年10期 v.39;No.274 1913-1920页 [查看摘要][在线阅读][下载 5101K] [下载次数：304 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：1 ] - 孟佳丽;龙雨清;林静;李昕;尚翠玲;王小月;蓝肇煜;李丹;金天明;
为探讨双启动子调控HN基因重组腺病毒Ad-mTERTp-mTyrp-HN对小鼠黑色素瘤动物模型的抑瘤作用,试验构建B16裸鼠皮下移植瘤模型,采用HEK293细胞扩增重组腺病毒,进行纯化和滴度检测。将重组腺病毒Ad-HN、Ad-mTERTp-HN、Ad-mTyrp-HN、Ad-mTERTp-mTyrp-HN、Ad-GFP和PBS通过尾静脉注射裸鼠,冰冻切片观察裸鼠肿瘤内GFP绿色荧光表达情况,通过肿瘤生长和裸鼠存活情况计算抑瘤率,探究其在体内的抗肿瘤作用。结果显示:重组腺病毒在HEK293细胞中扩增,滴度分别为10~(11.250),10~(12.250),10~(10.625),10~(12.125),10~(12.250)TCID_(50)/mL;肿瘤组织中能观察到黑色素细胞,证明皮下黑色素移植瘤模型构建成功;重组腺病毒对脏器无损伤,且在双启动子组脏器中没有观察到黑色素细胞的肝肺转移;通过尾静脉注射重组腺病毒后能够在肿瘤中观察到荧光表达;与其他组相比双启动子组重组腺病毒不但能抑制黑色素瘤的生长,而且能延长裸鼠的生存期,抑瘤率为55.5%。因此,该重组腺病毒Ad-mTERTp-mTyrp-HN具有靶向性,并且可以抑制肿瘤生长,可为黑色素瘤的治疗提供参考。
2019年10期 v.39;No.274 1921-1926页 [查看摘要][在线阅读][下载 5710K] [下载次数：179 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 李帆;魏单单;刘建华;吴宁鹏;贺丹丹;潘玉善;苑丽;胡功政;
为探究猪源沙门菌分离株对四环素类抗菌药物耐药性及四环素耐药基因(tet)的流行与分布情况,从7省的合作猪场采集病死猪肝脏、肺脏、肠道作细菌分离,利用沙门菌属特异性侵袭基因(invA)和16S rDNA扩增、测序等方法进行鉴定,并用微量肉汤稀释法测定沙门菌分离株对四环素类抗菌药物的敏感性,PCR方法测定tet基因,以及ERIC-PCR方法分析猪源沙门菌之间的相关性和遗传关系。从823份病料中分离鉴定出247株猪源沙门菌,分离率为30.01%。药敏结果显示,对多西环素、土霉素的耐药率分别为87.45%和94.74%。PCR检测发现,分别有62,66,3株单独携带tetA、tetB、tetC基因;分别有38,8,4,7,1株菌同时携带两种不同的tet基因(tetA+B、tetA+C、tetA+D、tetB+C、tetC+D);分别有9,6,1,6,1,4,3株菌同时携带3种不同的tet基因(tetA+B+C、tetA+B+D、tetA+B+M、tetA+C+D、tetA+D+M、tetB+C+D、tetB+C+M);分别有6,2株菌同时携带4种不同的tet基因(tetA+B+C+D、tetA+C+D+M);没有检测到单独携带tetD、tetM以及同时携带5种tet基因的菌株。接合试验表明,tetM可与tetA或tetC共同在沙门菌与大肠杆菌间转移,导致菌株多西环素抗性水平转移。试验菌共分为A～δ共30个ERIC型,tet基因分布于不同ERIC型菌株中,表明其在试验菌株间水平扩散。本试验首次在猪源沙门菌中发现了编码核糖体保护蛋白的四环素类耐药基因tetM。猪源沙门菌对四环素类药物耐药严重,对多西环素、土霉素具有普遍耐药性,tetA、tetB基因在7省猪源沙门菌中流行最广泛,分离菌对四环素类药物的普遍耐药性与单个或多个tet基因的普遍存在密切相关。
2019年10期 v.39;No.274 1927-1933页 [查看摘要][在线阅读][下载 409K] [下载次数：543 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：24 ] |[阅读次数：1 ] - 张岩;龙薇;林晓玲;孙银焕;蔡润茂;蒋红霞;
从2014年和2016年保存的来自河南、广东、山东和湖北4个省1 100株食品动物肠道大肠杆菌中筛选出58株bla_(CTX-M-27)阳性菌株,采用药敏试验测定产bla_(CTX-M-27)的大肠杆菌对20种抗生素的敏感性,并用PCR的方法检测其所携带的其他耐药基因;通过脉冲场凝胶电泳分析各菌株之间的亲缘关系,通过接合或转化试验、复制子分型和Southern blot对携带bla_(CTX-M-27)的质粒特征进行分析。结果显示,58株bla_(CTX-M-27)阳性大肠杆菌对除了β-内酰胺类外的其他抗生素,尤其氟喹诺酮类呈现高水平耐药;大多数菌株还同时携带2～3种编码其他抗生素的耐药基因。PFGE分型结果表明,来源于同一采样地及不同省的菌株存在克隆现象,但不同省或来自于同一省份的不同采样地之间的菌株亲缘关系较远;菌株携带的bla_(CTX-M-27)基因全部定位在质粒上,其中38株位于可接合的IncFIB质粒,另外20株位于不可分型的质粒。
2019年10期 v.39;No.274 1934-1941页 [查看摘要][在线阅读][下载 1286K] [下载次数：171 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 王治方;徐引弟;朱文豪;张青娴;焦文强;李海利;许峰;王克领;
为调查研究河南规模化猪场副猪嗜血杆菌(HPS)流行优势菌株及其耐药性情况,2017-2018年从河南规模化猪场分离到30株HPS,根据菌株分离部位统计,肺脏、气管是HPS分离的首要组织部位,肺脏分离14株,占46.67%;气管分离11株,占36.67%。通过PCR分子血清型鉴定,河南流行的优势菌株为血清5,7,4型,其中血清型5型有9株,占30%;血清型7型有5株,占16.67%;血清型4型有4株,占13.33%。通过K-B纸片琼脂法药敏试验,30株分离菌株除对头孢噻呋100%敏感外,对其他17种常用抗生素都有不同程度的耐药现象,多重耐药现象突出,预防控制HPS病选药、用药方面更需慎重和规范。
2019年10期 v.39;No.274 1942-1946页 [查看摘要][在线阅读][下载 227K] [下载次数：243 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：21 ] |[阅读次数：1 ] - 王亨;祝启成;毕崇亮;周钰奇;王建强;崔璐莹;孟霞;朱国强;李建基;
采用金黄色葡萄球菌侵袭原代奶牛乳腺上皮细胞,观察该病原菌对乳腺上皮细胞Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白和相关修复因子EGFR、TGF-β3和VEGF基因mRNA表达的影响。金黄色葡萄球菌以MOI=1∶1的比例接种奶牛乳腺上皮细胞,分别作用0,15,30,45,60,120,240 min,采用Western blot法检测乳腺上皮细胞β-catenin、Cyclin D1及c-Myc蛋白表达水平;免疫荧光法检测β-catenin的表达及核易位;荧光定量PCR检测EGFR、TGF-β3和VEGF基因mRNA表达。结果显示,β-catenin蛋白在45,60,120 min表达量升高,与0 min相比差异显著(P<0.05);Cyclin D1蛋白在45,60,120和240 min表达量升高,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01);c-Myc蛋白在15,30,60,120,240 min表达量升高,差异极显著(P<0.01)。修复相关因子EGFR、TGF-β3和VEGF基因mRNA的表达量在30 min均出现极显著升高(P<0.01),且VEGF基因mRNA在45,60,120和240 min均呈现极显著升高(P<0.01),EGFR基因mRNA表达量在30,45和60 min时表达量极显著升高(P<0.01)。结果表明,金黄色葡萄球菌侵袭奶牛乳腺上皮细胞后,诱导Wnt/β-catenin信号通路的转导和修复因子EGFR、TGF-β3和VEGF基因转录,该信号通路和修复因子可能参与金黄色葡萄球菌导致的炎症和细胞损伤的修复过程。
2019年10期 v.39;No.274 1947-1952页 [查看摘要][在线阅读][下载 1344K] [下载次数：186 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ] - 任绍科;何深宏;李小燕;刘威;周作勇;曹立亭;郭建华;程方俊;
为确定引起山羊肺炎的病原,本研究从病死山羊肺脏中分离纯化获得1株细菌,通过生化试验和分子生物学方法鉴定为海藻糖比伯斯坦杆菌。利用生物信息学软件MEGA6.0对巴氏杆菌科5个属细菌的白细胞毒素基因(lktA)和RNA聚合酶β亚基基因(rpoB)分别构建遗传系统发育树,可知分离株与海藻糖比伯斯坦杆菌(AF314526.2、CP003745.1、CP006955.1等)的lktA基因相似性最高,位于同一簇内;分离株和海藻糖比伯斯坦杆菌(CP006956.1、JACI01000002.1、CP003745.1等)的rpoB基因聚类为一簇,相似性最高;而与和葡萄糖苷曼氏杆菌(KU986490.1)的rpoB基因相似性最低。药敏试验显示,该菌对头孢噻肟、头孢他啶和环丙沙星等抗菌药物最敏感,对多西环素、阿莫西林和林可霉素等耐药。本研究为该菌致病机理的研究与疫苗的研发奠定了基础,也为临床用药提供了参考依据。
2019年10期 v.39;No.274 1953-1958页 [查看摘要][在线阅读][下载 1172K] [下载次数：354 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：2 ] - 孙莹慧;刘康军;陶璐瑶;孟霞;崔璐莹;姜桂苗;赵付伟;李建基;王亨;
为了解驴源马流产沙门菌临床分离株的耐药表型及毒力基因的携带情况,本试验通过K-B药敏纸片扩散法对9株马流产沙门菌进行11种临床常用抗菌药物的敏感性测试,采用PCR方法检测与沙门菌致病性相关的10种毒力基因。结果显示:9株驴源马流产沙门菌存在2种耐药表型,对链霉素耐药率达100%,对阿莫西林耐药率为33%;10种毒力基因中仅traT未被检出,invA、avrA、ssaQ、mgtC、sopB、spvC、spvR、pefA和misL的检出率均为100%。结果表明,驴源马流产沙门菌耐药谱较为单一,但携带的毒力基因为多样性组合。
2019年10期 v.39;No.274 1959-1962页 [查看摘要][在线阅读][下载 952K] [下载次数：219 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：1 ] - 李金龙;王瑶;马娅君;陈庆菊;卢昌文;唐志如;
旨在研究色氨酸对产肠毒素大肠杆菌(ETEC)感染损伤SD大鼠肠道的防御作用。本试验采用2*2双因子试验设计,将40只28日龄雌性SD大鼠,体质量(68.41±0.29)g,随机分为4组:基础日粮组(B);ETEC攻毒组(E,1.0×10~8 ETEC K88);色氨酸缺乏组(I,0.1 mL/d、10 g/L依那普利)。色氨酸缺乏+ETEC攻毒组(E+I,1.0×10~8 ETEC K88+0.1 mL/d、10 g/L依那普利),每组10个重复,每个重复1只。采用H.E染色组织切片观察、酶联免疫吸附测定(ELISA)、三重聚合酶链式反应(PCR)、免疫蛋白印迹、实时荧光定量(RT-PCR)和变性梯度凝胶电泳(DGGE)法分别对SD大鼠肠道细胞因子水平、抗菌肽表达和蛋白水平、粪便中ETEC数量以及盲肠微生物区系变化进行检测。结果表明,依那普利通过抑制ACE2酶阻碍肠道色氨酸吸收,显著降低大鼠空肠和回肠黏膜绒毛高度、淋巴细胞数量和绒毛高度/隐窝深度值(P<0.05);ETEC攻毒显著降低大鼠空肠淋巴细胞数量、绒毛高度/隐窝深度值(P<0.05)和回肠绒毛高度和淋巴细胞数量(P<0.05)。ETEC攻毒使SD大鼠粪便中ETEC数量显著增高(P<0.05)。依那普利抑制剂对SD大鼠粪便中ETEC数量无显著影响(P<0.05);依那普利通过抑制ACE2酶阻碍肠道色氨酸吸收增加空肠和回肠IL-6(P<0.05)和空肠TNF-α质量浓度(P=0.059),降低空肠TGF-β质量浓度(P=0.056);ETEC攻毒使空肠IL-6和回肠IL-6、IL-8和TNF-α质量浓度显著增加(P<0.05),降低空肠TGF-β质量浓度(P=0.059)。依那普利通过抑制ACE2酶阻碍肠道色氨酸吸收显著降低大鼠空肠和回肠Defa-5、BD-2基因mRNA相对表达量(P<0.05);ETEC攻毒使空肠Defa-5、IDO基因和回肠IDO基因mRNA相对表达量显著增加(P<0.05);依那普利通过抑制ACE2酶阻碍肠道色氨酸吸收使空肠、回肠mTOR、BD-2蛋白水平显著降低(P<0.05),使空肠TLR-4蛋白水平显著增加(P<0.05)。色氨酸缺乏、ETEC攻毒降低盲肠微生物多样性,降低拟杆菌门微生物数量,色氨酸不缺乏组盲肠微生物多样性优于缺乏组。结果显示色氨酸通过维持肠道炎性细胞因子浓度稳定、促进肠道黏膜发育和提高肠道抗菌肽基因表达改善肠道微生态环境,对ETEC感染SD大鼠肠道具有防御作用。
2019年10期 v.39;No.274 1963-1973页 [查看摘要][在线阅读][下载 1410K] [下载次数：330 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1 ] - 吕天星;郝永清;
为了探究奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌毒力因子的重组蛋白能否经上皮屏障被转运至特定的乳腺局部免疫触发位点,本研究对金黄色葡萄球菌毒力因子重组蛋白FnBPB-ClfA和Fc融合蛋白Fc-FnBPB-ClfA的跨细胞转运机制、新生儿Fc受体(FcRn)是否参与此进程进行了验证。原代奶牛乳腺上皮细胞(pbMECs)接种于Transwell嵌套内的多孔膜上,培养至极性状态且细胞屏障完整,用于胞吞转运试验。将pbMECs对重组蛋白的胞吞转运试验设置为温度处理组(37℃和4℃)、蛋白A处理组、胞转途径抑制剂处理组。结果表明,2种重组蛋白均可被转运跨过pbMECs屏障,该转运作用呈温度依赖性,可能与囊泡介导的转运路径及FcRn受体有关,排除了细胞旁路扩散的可能。蛋白A对FnBPB-ClfA的跨细胞转运及亚细胞定位无明显影响,但明显减少了Fc-FnBPB-ClfA的跨细胞转运及其在细胞膜蛋白、骨架蛋白中的数量,说明Fc-FnBPB-ClfA的Fc与FcRn的结合在胞吞转运作用中发挥重要作用。LY294002、非律平以剂量-效应关系分别降低了FnBPB-ClfA、Fc-FnBPB-ClfA的跨细胞转运。结果表明,Fc融合蛋白Fc-FnBPB-ClfA能经胞吞转运作用跨过pbMECs屏障至局部免疫触发位点,且FcRn参与并促进了Fc融合蛋白的胞吞转运作用。
2019年10期 v.39;No.274 1974-1980页 [查看摘要][在线阅读][下载 2018K] [下载次数：151 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 于志超;陈林军;赵治国;崔强;延涵;王海艳;赵林立;李刚;
为建立一种快速检测羊鞭虫病实时荧光PCR方法,根据GenBank已经公布的羊鞭虫(Trichuris ovis)ITS基因序列(登录号:JF680987.1),设计特异性引物和TaqMan探针,以重组质粒作为绝对定量模板,建立检测羊鞭虫病的TaqMan实时荧光PCR方法。对反应体系的特异性、敏感性和稳定性进行评价,并用该方法对临床样品进行检测。结果显示,该检测方法线性关系良好,标准曲线的相关系数R~2=0.994,扩增效率E=1.05。该方法特异性强,与其他8种常见家畜寄生性线虫病不发生交叉反应;灵敏度高,最低检出下限为31.7拷贝/μL;重复性好,组内和组间变异系数分别为0.43%～1.04%和1.20%～1.91%,均小于2.00%。用建立的实时荧光PCR方法和显微镜检查方法分别对20份临床样品进行检测,实时荧光PCR和显微镜检查方法检出的阳性样品分别为14和9份。本研究建立的TaqMan实时荧光PCR方法能在粪便中快速、准确、灵敏检测羊鞭虫卵,为羊鞭虫病的检测和防控提供新的方法。
2019年10期 v.39;No.274 1981-1986页 [查看摘要][在线阅读][下载 1295K] [下载次数：135 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ]
- 王彪;杨雅楠;刘成泽;毛彩琴;王欣荣;
从青海西宁、内蒙古赤峰、浙江桐乡和山东菏泽分别采集高原型藏羊、敖汉细毛羊、湖羊和小尾寒羊卵巢各20枚,利用微血管立体构筑和扫描电镜(SEM)技术相结合的方法,研究不同品种绵羊卵巢微动脉的构筑及超微结构特征。结果显示,绵羊卵巢微动脉呈迂曲盘旋的螺旋状,卵巢门动脉经3～4次分支后发出毛细血管;在卵巢微动脉的Ⅱ～Ⅳ级分支表面均有梭形凹痕,呈典型的"树皮样"或"波浪状";在毛细血管前微动脉处有多个与微动脉横轴平行或呈一定夹角的环行缩窄。比较发现,高原型藏羊的卵巢微动脉螺旋程度更高,且各级微动脉的管径均较粗,"树皮样"压痕和环形缩窄较深且密;小尾寒羊卵巢微血管网更密集、分支更多。研究认为,高原型藏羊卵巢微动脉的解剖学特征,有利于增加卵巢内各部分的氧供,调节和分配血液供应以适应高原环境,而小尾寒羊卵巢更密集的微血管网可能是其排卵数高的生理学基础之一。
2019年10期 v.39;No.274 2006-2010页 [查看摘要][在线阅读][下载 692K] [下载次数：136 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：1 ] - 张小婷;丘伟巍;肖珂;宋卉;刘华珍;王家乡;李鹏;彭克美;
为了研究硼对小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子的影响,分别采用CCK-8、ELISA及qPCR技术检测不同浓度硼协同刀豆凝集素(concanavalin A,ConA)或脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对小鼠脾淋巴细胞增殖、细胞因子分泌及其mRNA表达的影响。结果显示,当硼协同ConA作用于脾淋巴细胞时,随着硼浓度的增加,细胞存活率呈先上升后下降的趋势;IL-2的分泌量逐渐下降,IL-6的分泌量没有显著变化;IL-2、IFN-γ及IL-6 mRNA的相对表达量有所增加,IL-10则表现为逐渐下降的趋势。当硼协同LPS作用于脾淋巴细胞时,随着硼浓度的增加,细胞存活率也呈先上升后下降的趋势;显著促进了IL-2、IL-6的分泌(P<0.05);硼浓度为1,10,50 mmol/L时,IL-2及IL-10 mRNA的相对表达量均显著低于LPS单独刺激组(P<0.05),IL-6 mRNA的相对表达量先下降后上升,IFN-γ则表现为逐渐下降。结果说明低浓度的硼对脾淋巴细胞的增殖及细胞因子的分泌起促进作用,高浓度的硼则对细胞产生毒性作用且在一定程度上抑制相关细胞因子的分泌,且硼对脾淋巴细胞的细胞因子表达也起到了一定的调控作用。
2019年10期 v.39;No.274 2011-2018页 [查看摘要][在线阅读][下载 1563K] [下载次数：355 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ] - 李婷婷;毛伟;刘博;曹金山;
为研究大肠杆菌感染奶牛子宫内膜组织而蓄积的PGE_2与感染组织表达趋化因子的相关性,本试验采用浓度为1×10~(-6)和1×10~(-5) mol/L的COX-2和mPGES-1抑制剂处置体外培养的大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织12 h,用RT-qPCR法检测组织中CXCL1、CXCL2、CXCL3和CXCL5 mRNA表达变化。结果显示:与对照组相比,大肠杆菌感染后12 h奶牛子宫内膜组织中趋化因子mRNA的表达量显著升高,而COX-2和mPGES-1抑制剂处置显著降低趋化因子mRNA的表达。结果表明:病理性蓄积的PGE_2也许是大肠杆菌所致奶牛子宫内膜组织炎症反应过程中趋化因子等炎症介质表达的必要条件。
2019年10期 v.39;No.274 2019-2025页 [查看摘要][在线阅读][下载 3311K] [下载次数：109 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1 ] - 贾泽;王春光;张石磊;张鹏;张铁;
旨在考察中药赤芍水提物及其主要成分芍药苷对磷霉素钠的抗菌增敏活性,验证芍药苷对外排泵转运子AcrB的抑制作用,推测其抗菌增敏机制。首先,通过微量棋盘稀释法检测赤芍水提物及其主要成分芍药苷与磷霉素钠联合应用对临床分离的禽多重耐药大肠杆菌E320和质控菌株大肠杆菌ATCC35218的抑菌作用;其次,利用YASARA软件,以大肠杆菌多重耐药AcrAB-TolC系统中的外排泵转运子AcrB为靶标,与芍药苷进行分子对接模拟,探讨两者的识别机制;通过尼罗红外排试验验证芍药苷对外排泵的抑制作用;最后,通过实时荧光定量PCR验证芍药苷降低AcrB mRNA的表达量进而发挥抗菌增敏作用。试验结果证实赤芍水提物和芍药苷与磷霉素钠联合用药均具有协同抑制多重耐药大肠杆菌E320的作用(FICI≤0.5);分子对接结果显示芍药苷与AcrB蛋白受体的结合能达到8.333 kJ/mol,作用主要位点是AcrB蛋白受体上Phe628、Phe615、Val612、Ile277、Asn274、Gly179、Phe178等氨基酸残基,分子间主要作用力为疏水作用力;外排抑制试验结果显示芍药苷可以抑制耐药大肠杆菌外排泵活性,明显阻滞尼罗红的外排;实时荧光定量PCR结果显示芍药苷联合磷霉素钠比单独使用磷霉素钠显著降低大肠杆菌AcrB mRNA的表达量。本试验证明芍药苷通过作用外排泵转运子AcrB,使抗生素在菌体内积聚;并能显著降低AcrB mRNA的表达量进而起到抗菌增敏作用,为临床提供一种有效的抗菌增敏剂,对治疗耐药菌引起的细菌感染具有重要意义。
2019年10期 v.39;No.274 2026-2032页 [查看摘要][在线阅读][下载 2367K] [下载次数：551 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：25 ] |[阅读次数：1 ] - 康桂英;董武;杨景峰;杨晓野;
为了研究对乙酰氨基酚对斑马鱼发育影响,采用高通量转录组测序RNA-seq技术对对乙酰氨基酚处理组(CAPAP组)与对照组(CO组)斑马鱼进行检测,以斑马鱼基因(danio rerio assembly version GRCz10)作为参考基因组,对检测结果进行拼接与质量评估,筛选出差异表达基因,并进行GO和Pathway功能分析。荧光定量PCR对部分与肝脏有关的差异表达基因进行验证。结果表明,CO与CAPAP组的差异表达基因数量为72个,其中上调差异表达基因40个,下调差异表达基因32个。对CO与CAPAP组差异表达基因进行GO富集分析,上调基因主要富集于47个条目中,下调基因主要富集于16个条目中,这些基因涉及生物进程和分子功能等多种生物活性方面,说明对乙酰氨基酚对斑马鱼的发育有一定的影响。
2019年10期 v.39;No.274 2033-2039页 [查看摘要][在线阅读][下载 4709K] [下载次数：423 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1 ]
- 马红;刘宇;汪亮;刘娣;
民猪是具有抗寒特性的地方猪种,研究民猪对环境温度的适应机制对于理解其抗寒特性具有重要意义。本试验通过检测4个季节民猪外周血单核细胞中含CSD结构域的E1蛋白(cold shock domain-containing protein E1,CSDE1)、miR-1和miR-331-3p表达情况,并通过在PK15细胞中过表达CSDE1基因,检测细胞中7种干扰小RNA和8种基因,研究CSDE1在民猪环境温度适应中的作用和分子调控网络。结果表明,CSDE1在春、秋季表达量较低,而在夏、冬季表达量较高,而RNA miR-1和miR-133-3p的表达规律则相反;过表达CSDE1后细胞中小RNA miR-1、miR-101、miR-1307和基因HDAC3、BTF3、HSF2、TCEA1 mRNA的相对表达量明显上升,miR-143-3p和CHD7mRNA的相对表达量明显下降,各试验组差异显著(P<0.05)。结果表明,CSDE1的表达受到民猪所处环境温度的影响,可以被干扰小RNA调节,并进一步影响其他基因的表达。
2019年10期 v.39;No.274 2061-2066页 [查看摘要][在线阅读][下载 880K] [下载次数：111 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 俸云;赵鑫;许洁;余庆;沈朋雷;王露露;吴飞;石德顺;陆凤花;
旨在克隆水牛组蛋白去甲基化酶KDM4D (lysine K-specific demethylase 4D)基因,对其进行生物信息学分析,并构建KDM4D基因的真核表达载体,为研究KDM4D基因在水牛体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎发育中的作用奠定基础。试验从水牛睾丸组织中提取总RNA,反转录cDNA后, RT-PCR技术克隆KDM4D基因片段,并运用生物信息学软件对序列进行分析;随后将KDM4D基因片段连接至真核表达载体pEGFP-C1,再把重组质粒转染进HEK293T细胞。结果表明,克隆所得的水牛KDM4D基因片段编码区全长1 155 bp,共编码384个氨基酸。水牛KDM4D基因与黄牛、山羊、绵羊、犬、猫、猪、人、小鼠、大鼠的同源性分别为98.4%,96.6%,96.3%,84.9%,84.1%,81.4%,80.4%,77.4%,77.3%。多重比较和进化树分析结果显示,KDM4D基因在不同物种及生物进化中具有较高的保守性。蛋白结构域分析显示,克隆所得的KDM4D蛋白结构特殊,只具有1个JmjN (Jumonji N)和1个JmjC (jumonji C)结构域,与KDM4家族其他成员相比缺少PHD (plant homeodomain)和Tud (tudor)功能域。KDM4D蛋白质三级结构预测结果显示,水牛、黄牛和人3种物种间具有较高的相似性。转染结果显示,构建的重组质粒可以在HEK293T细胞中表达。本试验成功克隆水牛KDM4D基因,对其进行生物信息学分析,构建了真核表达载体pEGFP-C1-KDM4D,并在HEK293T细胞中成功表达。
2019年10期 v.39;No.274 2067-2074页 [查看摘要][在线阅读][下载 3950K] [下载次数：316 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：2 ] - 覃媛钰;罗华伦;吴磊;张依裕;
脂肪酸转位酶(CD36)具有广泛的生物学功能,能够促进长链脂肪酸转入脂肪细胞、心肌细胞和骨骼肌细胞,对细胞脂质代谢有重要调控作用。为探究CD36对鸭原代肝细胞和PC3细胞脂质效应,本试验采用Ⅳ型胶原酶消化法成功分离孵化了21日龄鸭胚原代肝细胞并进行培养,RT-PCR法获取鸭CD36基因序列,构建了携带HIS标签的pEGFP-N3-CD36真核表达载体pEGFP-N3-CD36-His,脂质体法转染至鸭胚原代肝细胞和PC3细胞,His标签检测试剂盒测定CD36在2种细胞中的过表达量,探讨鸭CD36基因过表达与原代肝细胞和PC3细胞中脂质性状的关联性。结果显示,pEGFP-N3-CD36-His重组质粒在鸭原代肝细胞和PC3细胞中均能发出绿色荧光,说明构建的载体转染成功;CD36过表达对2种细胞中脂质指标的影响相似,均与细胞中的甘油三酯(TG)呈极显著正相关(P<0.01),与总胆固醇(TCH)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)呈极显著负相关(P<0.01);揭示CD36基因过表达可能引起2种细胞中脂质代谢活动的不平衡而引起脂质代谢相关疾病的发生,为进一步研究CD36基因对细胞脂质代谢的调控奠定了基础。
2019年10期 v.39;No.274 2075-2081页 [查看摘要][在线阅读][下载 1312K] [下载次数：210 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ] - 路兵龙;王焕杰;张清海;陈金勇;张雪洁;陈文;
试验旨在研究肠道营养保健剂通过改善弱僵猪肠道功能,提高弱僵猪的生产性能的作用机制。选取30日龄杜长大三元杂交断奶弱僵猪80头,随机分为2个组(每组4个重复,每个重复10头猪),对照组饲喂清水与基础饲粮按照2∶1比例配制成的粥拌料;试验组饲喂肠道营养保健剂水溶液(1 kg/100 kg水)与基础饲粮按照2∶1比例配制成的粥拌料。试验期为21 d,并于试验第15天屠宰取样。结果表明:在试验1～7 d,肠道营养保健剂显著提高了弱僵猪的平均日增体质量(P<0.05),降低料重比;在8～21 d,显著降低了腹泻率和死亡率(P<0.05);肠道营养保健剂能显著降低白球比和尿素氮(P<0.05)含量,提高血清球蛋白IgA、IgM、IgG质量浓度(P>0.05)及肝脏和脾脏指数(P<0.05);肠道营养保健剂能降低弱僵猪胃pH值,提高胃蛋白酶的活性(P>0.05)。由此可见,肠道营养保健剂能提高弱僵猪的采食量、胃蛋白酶和糜蛋白酶活性、增强免疫机能、减少腹泻率和死淘率,从而提高了弱僵猪的生长性能。
2019年10期 v.39;No.274 2082-2087+2095页 [查看摘要][在线阅读][下载 165K] [下载次数：224 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：1 ]