预防兽医学

  • 表达猪细小病毒VP2基因的重组伪狂犬病病毒构建及其免疫原性

    宋文博;彭忠;喻红艳;国师榜;范桂芳;汤细彪;吴斌;

    猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)和伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)均可引起母猪的繁殖障碍疾病。本试验以PRV基因工程弱毒株rPRVSMX为载体,构建了表达PPV流行毒株VP2基因的重组PRV(rPRVSMX-VP2)。Western blot和IFA试验均证明了重组病毒在细胞中成功表达了VP2蛋白。动物试验结果证明重组病毒可以诱导猪体产生特异性的PPV抗体,首免后40 d血凝抑制抗体(HI)为1∶192±73.9,虽然低于PPV商品化灭活疫苗免疫后所产生的HI抗体,但此时免疫系统被认为是激活的水平;重组病毒诱导产生的PRV抗体与载体毒株rPRVSMX诱导产生的抗体相当。由此可见该重组毒株经过优化后,可以作为二联疫苗的候选毒株防控猪伪狂犬病和细小病毒病。

    2019年11期 v.39;No.275 2101-2106页 [查看摘要][在线阅读][下载 1040K]
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  • 猪圆环病毒3型Rep蛋白的表达与多克隆抗体制备

    连凯琪;周玲玲;张明亮;张杰;王英杰;宋玉伟;王双山;

    为研究猪圆环病毒3型(PCV3)Rep基因在大肠杆菌中表达产物的反应原性和免疫原性,本试验对Rep基因进行原核表达和纯化,鉴定表达产物与PCV3阳性血清的反应性;制备重组Rep蛋白的多克隆抗体,Western blot鉴定多克隆抗体与重组Rep蛋白的特异性识别能力,通过ELISA测定多克隆抗体的效价。结果显示,Rep在大肠杆菌中获得大量表达,且主要以包涵体形式存在,重组蛋白相对分子质量约为32 000,经纯化后得到单一条带。表达的重组Rep蛋白可以与PCV3阳性血清发生反应。制备的大鼠抗Rep血清与表达的重组Rep蛋白发生特异性反应,且效价大于1∶32 000。表明本试验表达的Rep具有良好的免疫原性和反应原性,为PCV3的ELISA诊断试剂盒研制提供依据。

    2019年11期 v.39;No.275 2107-2111页 [查看摘要][在线阅读][下载 632K]
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  • PCV3 Cap基因在昆虫杆状病毒中的表达与鉴定

    姜宇航;徐一鸣;许汪;杜寿文;宋利娜;陈竞;郝鹏飞;金宁一;李昌;

    试验旨在获得具有天然构象且反应原性良好的猪圆环病毒3型(porcine circoviurs 3,PCV3)Cap蛋白。以本实验室保存的PCV3 Cap基因为模板,设计不同引物扩增Cap基因,将其亚克隆至pEASY-Blunt载体上,验证正确后将目的基因分别克隆至杆状病毒表达载体pFastBac~(TM)上(含有双启动子),获得含有2个PCV3 Cap基因的重组质粒pFBD-P2C。将该重组质粒转化大肠杆菌DH10-Bac~(TM)感受态细胞当中,进行蓝白斑筛选,获得重组杆状质粒Bacmid P2C,利用脂质体转染至SF9细胞中进行病毒拯救,转染后72 h,收取上清病毒液,盲传3代,收取SF9细胞应用间接免疫荧光法(IFA)及Western blot检测目的蛋白是否表达。结果显示,重组质粒pFBD-P2C酶切验证正确,重组杆粒Bacmid P2C构建成功,杆状病毒中能够表达PCV3 Cap蛋白且能与His-tag抗体发生特异性反应,IFA鉴定出现特异性绿色荧光,表明成功表达了PCV3 Cap蛋白且具有反应原性,为深入开展PCV3抗体制备、新型疫苗研发奠定了基础。

    2019年11期 v.39;No.275 2112-2117+2128页 [查看摘要][在线阅读][下载 2718K]
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  • PEDV S基因的B细胞表位嵌入型乳杆菌S-层蛋白的原核表达及其鉴定

    朝木丽格;侯殿文;韩佳;黄天鹏;吴咪;贺海燕;格日勒图;

    利用生物软件和在线数据库中筛选出猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV) S基因的B细胞表位,通过overlap PCR方法将其嵌入到嗜酸性乳杆菌的S-层蛋白基因中,获得融合基因SLP-EpitopeS。将该融合基因导入到原核表达载体pGEX-4T-3中,成功构建了原核表达载体pGEX-SLP-EpitopeS。经过双酶切和PCR方法以及基因测序方法验证融合表达载体pGEX-SLP-EpitopeS的正确性。应用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达产物,其中SDS-PAGE结果显示:融合蛋白质的大小约为77 000,与理论值相符;Western blot结果显示:融合蛋白SLP-EpitopeS被GST血清所识别,而B细胞表位分别被表位特异的鼠源单克隆抗体(McAb)和表位合成多肽所识别。本试验为进一步嵌入型蛋白SLP-EpitopeS的免疫原性研究奠定了基础。

    2019年11期 v.39;No.275 2118-2122页 [查看摘要][在线阅读][下载 816K]
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  • 感染PRRSV弱毒株后仔猪病毒血症和抗体产生规律

    王冬梅;李闻;孙杨杨;李想通;许瑞勤;魏凤灵;张留君;冯延;马思续;杨国宇;夏平安;张改平;

    为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R弱毒株在仔猪体内的增殖及其诱导抗体产生的规律。本试验将PRRSV CH-1R弱毒株肌肉注射免疫9头45日龄健康仔猪,于免疫后0,7,14,28,35和42 d通过前腔静脉采取新鲜血液,利用实时荧光定量PCR方法检测PRRSV在猪体内的增殖,ELISA方法检测抗PRRSV抗体,并利用基于PAM细胞建立的中和试验检测中和抗体。结果显示:PRRSV CH-1R弱毒株免疫仔猪后7 d病毒在100%仔猪体内开始复制,免疫后7~14 d时100%仔猪出现病毒血症,且病毒拷贝数达到最高,28~35 d时56%仔猪病毒血症消失,42 d时67%仔猪病毒血症消失;ELISA检测发现免疫后7~14 d仔猪均未产生抗PRRSV抗体,28 d时44%仔猪开始产生抗PRRSV抗体,42 d时78%仔猪抗PRRSV抗体水平达到最高,有2头猪在0~42 d一直未检测到抗PRRSV抗体;利用基于PAM细胞上建立的检测中和抗体的方法检测,免疫后7~14 d均未产生中和抗体,28 d时仅有22%仔猪产生低水平的中和抗体,35 d时78%仔猪产生中和抗体,且在42 d时其中和抗体水平达到最高。结果表明,PRRSV CH-1R弱毒株免疫仔猪后病毒血症在7~14 d达到高峰,免疫接种后28~42 d大部分仔猪病毒血症逐渐消失,即病毒增殖随时间呈递减趋势;抗PRRSV抗体及中和抗体均在免疫接种后28 d开始出现且在42 d抗体水平达到顶峰,即抗体水平随时间呈递增趋势。抗PRRSV的ELISA抗体与中和抗体水平呈正相关,而抗PRRSV中和抗体水平与病毒增殖呈负相关,但是有33%仔猪体内一直存在病毒,表明PRRSV CH-1R弱毒株免疫仔猪后,可诱导较低水平的抗体免疫保护反应,同时也可引起较低水平的病毒血症。

    2019年11期 v.39;No.275 2123-2128页 [查看摘要][在线阅读][下载 1048K]
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  • IBRV gD蛋白的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

    魏鑫;张建华;郭婷;吕天星;周雅坪;张新竹;吴倩;陈新迪;王艳芳;白帆;郝永清;

    利用生物学软件分析牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gD蛋白的抗原决定簇,发现相应的核酸序列,设计特异性引物用PCR扩增IBRV gD基因片段并克隆到原核表达载体pET-32a中,通过双酶切鉴定正确和测序正确后进行诱导表达。利用间接ELISA方法和Western blot鉴定gD重组蛋白的免疫原性和反应原性。最后将gD重组蛋白用作包被抗原,并通过优化相应的反应条件建立检测IBRV抗体的间接ELISA方法。结果显示,表达的gD重组蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,间接ELISA阴阳性临界值为:D_(450 nm)值=0.23。重组抗原gD与口蹄疫、牛病毒性腹泻、赤羽病、副结核病、布鲁菌病、结核病等阳性血清无交叉反应,具有比较好的特异性。组内和组间变异系数均小于5%,重复性较好。建立的ELISA方法结果显示,当测试相同的200个临床血清样本时,与IDEXX牛传染性鼻气管炎病毒gB X3抗体检测试剂盒相比,两者符合率为96%。本试验为IBRV抗体间接ELISA检测试剂盒的开发奠定了基础。

    2019年11期 v.39;No.275 2129-2134页 [查看摘要][在线阅读][下载 661K]
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  • 水貂阿留申病毒串联表位重组抗原的表达及血清学初步评价

    秦飞燕;孙杰;马凡舒;王洋;柏玲;张蕾;闫喜军;

    为探究水貂阿留申病毒(ADV)VP2主要抗原表位在水貂阿留申病血清学诊断中的作用,本试验将VP2蛋白主要抗原区的表位基因用柔性肽串联连接,将其克隆到表达载体pET-30a(+)中进行原核表达,并对诱导条件进行优化。利用Ni-NTA His-Bind纯化系统对融合蛋白进行纯化,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,并将融合蛋白作为检测抗原进行CIEP试验。结果显示,融合蛋白在IPTG终浓度为1 mmol/L、37℃诱导表达4 h,蛋白表达量最高,其大小约为30 000,以可溶性表达形式为主;融合蛋白能与6×His单克隆抗体及ADV多克隆抗体发生特异性反应,说明该蛋白具有较好的反应原性;且该蛋白作为对流免疫电泳技术(CIEP)检测抗原与ADV阳性血清之间产生了明显的沉淀线,证实了该蛋白作为CIEP检测抗原的可能性。以纯化后的重组蛋白为抗原初步建立的间接ELISA方法具有较高的准确性。结果表明该蛋白具有良好的血清学检测价值,为水貂阿留申病血清学诊断方法的建立奠定了基础。

    2019年11期 v.39;No.275 2135-2139+2151页 [查看摘要][在线阅读][下载 564K]
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  • AILTV临床分离株鸡肝癌细胞培养特性及黏附因子测定

    张石磊;包佳鹭;王文静;翟向和;陆安;张铁;

    禽传染性喉气管炎病毒(avian infectious laryngotracheitis virus,AILTV)引起鸡上部呼吸道传染病,危害养鸡业的发展。2017年冬季至2018春季,本实验室从河北地区各发病鸡场病死鸡分离鉴定得到8株AILTV,分别编号为AILTV-HB-1~AILTV-HB-8。将病毒进行鸡胚传代后,与标准强毒王岗株和河北地区使用的2株疫苗分别接种于鸡肝癌细胞(LMH),检测LMH增殖速度。ELISA方法检测鸡整合素和鸡层黏连蛋白/板层素(LN),分析二者与AILTV致病力关系。结果显示:所分离的鸡传染性喉气管炎病毒中AILTV-HB-2不会导致LMH细胞贴壁力下降,其他毒株可导致LMH细胞贴壁力下降。AILTV-HB-1可导致LMH细胞LN蛋白降解,从而降低LMH细胞贴壁力,使其游离性增加,增强其增殖速度,推测温和型AILT病症气管中的干酪样堵塞物的产生可能与病毒降解LN有关。

    2019年11期 v.39;No.275 2140-2145页 [查看摘要][在线阅读][下载 1572K]
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  • 腹泻仔猪中奇异变形杆菌分离鉴定与耐药基因分析

    杨睿;王婷婷;王孝友;余远迪;张邑凡;付利芝;

    从腹泻仔猪中分离奇异变形杆菌,并对其耐药性和14种常用抗生素的耐药基因进行检测和分析。采用分离培养、攻毒试验、药敏试验和PCR特异性扩增等方法对分离菌进行鉴定和耐药基因的检测。结果显示,共分离到15株奇异变形杆菌,发现部分分离菌可以导致仔猪腹泻,所有分离菌均有多重耐药性,86.67%(13/15)的分离菌含有3种以上的耐药基因;四环素类、磺胺类、氯霉素类抗生素对分离菌无抑制作用,而β-内酰胺类和氨基糖胺类的部分抗生素对分离菌有抑制作用,喹诺酮类的抑菌效果较好;对β-内酰胺类抗生素、磺胺类抗生素、四环素类抗生素、氨基糖苷类抗生素和氯霉素类抗生素的耐药性主要是由cmy、sul-2、 tetA、aadA和floR耐药基因所导致的。结果表明,腹泻仔猪中分离的奇异变形杆菌含有大量的耐药基因和多重耐药性,可以引起仔猪腹泻症状,导致抗生素在临床治疗时不能发挥作用。

    2019年11期 v.39;No.275 2146-2151页 [查看摘要][在线阅读][下载 741K]
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  • 2017年我国规模化猪场副猪嗜血杆菌流行病学调查

    郭龙;宋文博;贾双;袁意;陈翔鸿;喻红艳;汤细彪;

    为了解副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)在我国规模化猪场中的流行情况及耐药情况,本试验对2017年全国20个省市疑似HPS感染的样品进行细菌分离培养、PCR鉴定分型和药敏试验。结果表明:从6 287份样品中共分离出563株HPS,分离率为8.42%。对其中115株HPS进行分型,得到血清型1型7株、2型2株、4型26株、5/12型38株、6型1株、7型2株、9型1株、10型1株、13型7株、14型16株、15型1株,未定型13株,可见4型、5/12型和14型HPS为我国规模化猪场中主要流行血清型。在HPS感染病例中,HPS单纯感染占比为57.93%,其与链球菌和大肠杆菌最易混合感染,比例分别为17.47%和10.34%。耐药性试验结果显示:HPS对氨苄青霉素和强力霉素的耐药率最高(均为55.56%),但对多黏菌素B、氟苯尼考、头孢类较为敏感,其中89株受试HPS均对多黏菌素B敏感,可见多黏菌素可作为对抗HPS感染的最后一道防线。

    2019年11期 v.39;No.275 2152-2156页 [查看摘要][在线阅读][下载 422K]
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  • 胸膜肺炎放线杆菌引起猪应激时急性期蛋白转录水平变化

    崔亮亮;王金坡;熊进城;刘晓丽;张万坡;胡薛英;谷长勤;程国富;

    为研究胸膜肺炎放线杆菌(APP)感染后猪肝组织急性期蛋白表达变化,选取6头健康三元杂交猪,随机分为应激组和对照组(每组3头,保证饲喂条件一致)。每头猪采血后,应激组滴鼻感染APP,对照组滴鼻等量的无菌生理盐水。感染4 h后对两组猪进行采血、剖杀,分别取肝组织冻存,肺组织进行细菌分离鉴定。采用ELISA试验测定血清中皮质醇质量浓度,荧光定量PCR法测定肝组织急性期蛋白CRP、HP、SAA、Apo-A1、ITIH-4的表达量。结果显示:应激组和对照组猪血清中皮质醇质量浓度在攻毒前无明显差异(P>0.05);攻毒4 h后,应激组猪血清中皮质醇含量较对照组显著上调(P<0.05);攻毒后,应激组猪肝组织SAA mRNA的表达量较对照组显著上调(P<0.05),Apo-A1 mRNA的表达量显著下调(P<0.01),CRP、HP和ITIH-4 mRNA表达量无显著变化。以上结果说明APP感染后,机体可通过调节SAA和Apo-A1表达量来参与应激调节。

    2019年11期 v.39;No.275 2157-2160页 [查看摘要][在线阅读][下载 505K]
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  • 迟缓爱德华菌分子伴侣蛋白GroEL原核表达及免疫特性

    张志强;葛成;杜万年;于秀剑;康元环;单晓枫;潘晓艺;史秋梅;刘莉;

    GroEL是细菌内分子伴侣蛋白,参与细菌多种生命活动,在布鲁菌、链球菌研究中,GroEL蛋白展示了良好的疫苗潜力。前期利用迟缓爱德华菌抗体Pull-down技术筛选到GroEL蛋白,揭示了该蛋白的潜在应用价值,本试验以迟缓爱德华菌GroEL蛋白作为研究对象,利用大肠杆菌表达系统表达纯化GroEL重组蛋白(rGroEL),进一步通过动物模型评估rGroEL的免疫效果。结果显示,rGroEL能够激发小鼠产生高水平的特异性抗体,具有较好的免疫原性,免疫小鼠对迟缓爱德华菌感染具有较好的抵抗力,相对保护率达95%。斑马鱼感染试验结果表明,rGroEL免疫对迟缓爱德华菌感染具有一定保护效果,保护率为60%。用rGroEL免疫斑马鱼可以产生针对嗜水气单胞菌的免疫保护力,保护率可达45%。本试验初步探索了迟缓爱德华菌重组蛋白rGroEL的免疫特性,为研制迟缓爱德华菌亚单位疫苗和核酸疫苗提供了依据。

    2019年11期 v.39;No.275 2161-2165+2172页 [查看摘要][在线阅读][下载 1013K]
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  • 爪哇花蜱的形态学和分子标记特征

    段德勇;张清飞;周鸿铭;程天印;

    为了便于识别和鉴定爪哇花蜱,本试验从湖南省长沙市南郊公园穿山甲体表采集了爪哇花蜱,并借助体视显微镜超景深系统观察雌、雄成蜱的形态结构,通过分子生物学技术测定了COX1和16S rDNA基因序列。结果显示,雌性成蜱假头基呈矩形;孔区小而深;须肢前宽后窄,第2节长;盾板暗赤褐色,无珐琅斑,心脏形;眼小而扁平,不明显,仅见一痕迹;肛沟位于肛门后;气门板呈逗点形。雄性成蜱假头基、须肢、眼、肛沟和气门板特征与雌蜱相一致;盾板特点为呈宽卵圆形,无珐琅斑,周缘暗赤褐色,中部稍浅,呈黄褐色。爪哇花蜱COX1基因序列与国外花蜱属蜱种Amblyomma fimbriatum、Amblyomma triguttatum等的COX1基因序列相似度均为83%;爪哇花蜱16S rDNA基因序列与嗜龟花蜱、龟形花蜱等花蜱的16S rDNA基因序列相似度为85%~88%,相似度均较低。结果表明:爪哇花蜱具有显著、易辨识、易鉴定的形态学和分子标记特征。

    2019年11期 v.39;No.275 2166-2172页 [查看摘要][在线阅读][下载 5294K]
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  • HB株E.tenella AMA-1基因的克隆及免疫调节型真核表达载体构建

    闫艳娟;李蕴玉;张东林;庞洪泽;张香斋;李佩国;

    为研究HB株柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)AMA-1基因的免疫原性,根据GenBank收录的AMA-1基因序列设计了1对引物,对HB株E.tenella的AMA-1基因进行克隆,应用生物信息学分析软件预测AMA-1基因的核苷酸及编码的蛋白质的结构和功能。连接pPIC9载体,并与细胞因子IL-2串联,构建真核表达载体pPIC9-IL-2-AMA-1,转化毕赤酵母细胞GS115,进行蛋白表达及纯化验证。结果显示,HB株E.tenella AMA-1基因全长为1 617 bp,编码535个氨基酸,具有跨膜区及信号肽。经酶切和测序鉴定表明,真核表达载体pPIC9-IL-2-AMA-1构建成功。毕赤酵母转化结果表明,成功将重组载体转化到毕赤酵母中,PCR鉴定得到2 200,2 100 bp 2条带。Western blot检测结果表明AMA-1在毕赤酵母中得到了很好的表达。本试验结果为AMA-1基因的功能和核酸疫苗的研制提供依据。

    2019年11期 v.39;No.275 2173-2178页 [查看摘要][在线阅读][下载 1288K]
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人兽共患病

  • 2017—2018年河南省规模化猪场弓形虫血清流行病学调查

    解伟涛;乔松林;梁跃;郝慧芳;邓瑞广;张龙现;李祥瑞;张改平;

    自2017年1月—2018年10月,在河南省不同地区不同规模的143个猪场采集4 203份血清样品,使用ELISA试剂盒检测弓形虫抗体。结果显示,河南省猪弓形虫抗体阳性率达38.7%。按不同季节汇总分析,冬季阳性率最高(45.7%),其次为秋季和春季,夏季最低(31.9%)(P<0.01)。按不同地区汇总分析,豫中阳性率最高(53.6%),其次为豫西、豫东和豫南,豫北最低(30.4%)(P<0.01)。按猪场不同规模汇总分析,小型规模猪场阳性率最高(46.0%),其次为中型规模猪场,大型规模猪场最低(32.9%)(P<0.01)。按猪群不同年龄汇总分析,母猪群阳性率最高(57.8%),其次为后备母猪和育肥猪,保育猪最低(12.2%)(P<0.01)。按繁殖母猪不同胎次汇总分析,6胎及以上母猪阳性率最高(73.8%),其次为3~5胎母猪和2胎母猪,1胎母猪最低(57.3%)(P>0.05)。同时,本试验也调查了猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪伪狂犬病(PR)对弓形虫抗体阳性率的影响。结果显示,PRRS发病场弓形虫抗体阳性率最高(49.4%),其次为PRRS阳性稳定场,最低为PRRS阴性净化场(9.2%),三者之间差异极显著(P<0.01)。在PR阳性带毒场和PR阴性净化场,弓形虫抗体阳性率差异不显著(P>0.05)。在24个PR阳性带毒场内,gE抗体阳性母猪和gE抗体阴性母猪的弓形虫抗体阳性率差异也不显著。结果表明,在河南省猪群中普遍存在弓形虫感染情况。猪场通过完善生物安全体系和提高饲养管理水平,可以减少弓形虫的感染。

    2019年11期 v.39;No.275 2179-2183+2189页 [查看摘要][在线阅读][下载 836K]
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  • 羊流产嗜性衣原体重组ompA蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

    付明哲;吴浩阳;许信刚;张琪;

    原核表达羊流产嗜性衣原体(Chlamydophila abortus,C.abortus)ompA蛋白,包被ompA蛋白抗原,筛选反应条件,成功建立了血清抗体ELISA检测方法。PCR扩增ompA蛋白基因并进行原核表达,经纯化、复性和Western blot鉴定后作为包被抗原,通过反应条件筛选、灵敏性、特异性、重复性检验和临床样品检测,创建了羊流产嗜性衣原体血清抗体间接ELISA检测方法。结果表明,建立pET-28α-ompA阳性质粒并表达约为40 000的ompA蛋白,Western blot显示纯化复性的ompA蛋白具备抗原性与特异性。反应条件筛选结果为ompA蛋白包被360 ng;血清及二抗分别稀释1∶50,1∶5 000并37℃作用1 h;TMB显色10 min。在优化条件下,D_(450)≥0.327为阳性,反之为阴性;特异性、敏感性和重复性结果显示,对布氏杆菌、羊痘、羊口疮、小反刍兽疫和产气荚膜梭菌阳性血清的检测结果均为阴性且50份流产性衣原体阳性血清检出率为98%,批内和批间D_(450)值变异系数分别为1.56%~2.56%和2.35%~3.25%。应用建立的方法对临床175份血清检测,阳性率为52%,商品化衣原体间接血凝检测阳性率为49.1%,阳性符合率为96.5%。本试验建立的间接ELISA检测方法可用于羊流产性衣原体血清抗体水平检测。

    2019年11期 v.39;No.275 2184-2189页 [查看摘要][在线阅读][下载 468K]
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  • 兔脑炎原虫致脑细胞凋亡的信号转导通路的研究

    潘耀谦;王选年;岳锋;李鹏;吴玉萍;刘兴友;

    为探讨兔脑炎原虫引起脑组织细胞凋亡的信号转导通路,本试验用普通染色、特殊染色、免疫组化染色和Western blot检测等方法,对40只病兔和10只对照兔的脑组织进行了研究。结果显示,病兔的脑组织中均检出了形态不一的肉芽肿和脑炎原虫。兔脑炎原虫可引起巨噬细胞和肉芽肿中的上皮样细胞表达TNF-α,anti-TNF-α抗体染色呈阳性反应。细胞凋亡信号转导通路的关键蛋白caspase-8和caspase-3在血管内皮细胞、星形胶质细胞和上皮样细胞中呈强阳性或阳性反应,被anti-caspase-8和anti-caspase-3抗体染成淡棕色或深棕色。对脑组织蛋白提取物进行Western blot检测,病兔脑组织中TNF-α,caspase-8和caspase-3的表达量明显高于对照兔,差异极显著(P<0.01)。结果表明,兔脑炎原虫可刺激脑组织中的巨噬细胞和上皮样细胞产生大量TNF-α,后者与细胞膜上的TNFR结合,从而激活死亡受体通路,引起胞浆内的caspase家族发生级联反应,导致细胞凋亡。

    2019年11期 v.39;No.275 2190-2194+2214页 [查看摘要][在线阅读][下载 1938K]
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基础兽医学

  • 河北省奶牛乳房炎主要致病菌多重PCR检测方法的建立

    夏颖;陈颖彬;马亚宾;王紫燕;刘智慧;高亚桃;赵月兰;秦建华;

    为同时检测奶牛源金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和绿脓杆菌,本试验根据GenBank中3种病原菌的nuc、ef-tu和eta基因保守序列分别合成了3对特异性引物,通过对反应条件、反应体系优化,建立了多重PCR检测方法。特异性试验结果表明,该方法与大肠杆菌、克雷伯杆菌、表皮葡萄球菌、巴氏杆菌无交叉反应,敏感性试验结果表明,多重PCR检测方法对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和绿脓杆菌的检出限为10~(-3) mg/L。应用该方法对150份临床样品进行检测,结果金黄色葡萄球菌与无乳链球菌混合感染检出率为28.7%(43/150),金黄色葡萄球菌与绿脓杆菌混合感染检出率为14%(21/150),无乳链球菌与绿脓杆菌混合感染检出率为11.3%(17/150),3种菌混合感染检出率为6%(9/150)。应用多重PCR检测结果与分离培养诊断方法结果进行比较,均能检测出样品中的病原菌,2种检测方法的总符合率分别为金黄色葡萄球菌92.6%,无乳链球菌91.3%,绿脓杆菌94.6%。该检测方法对奶牛乳房炎的防控、临床监测及疾病诊治具有重要意义。

    2019年11期 v.39;No.275 2195-2199页 [查看摘要][在线阅读][下载 940K]
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  • EP2受体对大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织中IL-1β和IL-6 mRNA表达的影响

    张超;李婷婷;毛伟;刘博;曹金山;

    为了研究前列腺素E2(PGE_2)受体-EP2受体对大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织中炎性因子的影响,本试验分别用1×10~(-8)~1×10~(-5 )mol/L的EP2受体激动剂(Butaprost)处理大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织,培养12 h,并选取Butaprost的有效作用浓度处理大肠杆菌感染的子宫内膜组织8,12和24 h,用RT-qPCR法检测IL-1β和IL-6 mRNA的表达,同时用HE染色技术观察组织形态结构。最后,在大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织中加入1×10~(-5 )mol/L的EP2受体阻断剂(AH6809),以验证EP2受体对IL-1β和IL-6 mRNA表达的特异性作用。结果显示:当10~(-7)mol/L的Butaprost处理大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织12 h时,对IL-1β和IL-6基因表达的促进作用最为明显,并且能够加剧大肠杆菌引起的奶牛子宫内膜组织的病理性损伤;AH6809能够有效阻断Butaprost对IL-1β和IL-6基因表达的促进作用。结果表明,EP2在调控大肠杆菌引起的奶牛子宫内膜组织的炎性损伤中发挥重要的作用,为更加高效地治疗细菌性奶牛子宫内膜炎提供理论依据。

    2019年11期 v.39;No.275 2200-2206页 [查看摘要][在线阅读][下载 1116K]
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  • 维生素D调控OC形成的差异蛋白表达及生物信息学分析

    顾建红;孔琦;王东;仝锡帅;卞建春;刘学忠;袁燕;刘宗平;

    旨在研究维生素D对破骨细胞(osteoclast,OC)形成中蛋白表达的影响。本试验利用差异蛋白组学检测1α,25-(OH)_2D_3处理后蛋白表达的变化,并对差异表达蛋白进行生物信息学分析。结果表明,质谱鉴定获得23个差异表达蛋白点,除去蛋白亚型,实际为19种蛋白。主要涉及氧化还原、结合与能量代谢等分子功能,参与细胞凋亡、蛋白折叠调控等生物学过程。其中,巨噬细胞游走抑制因子(MIF)、半乳糖凝集素-3(Gal-3)、膜联蛋白A2(Anxa2)、原肌球蛋白α-3链亚型X6(Tpm3)及SH3域结合谷氨酸富含样蛋白3(Sh3bgrl3)与OC形成密切相关。本试验为动物钙磷代谢紊乱性疾病研究奠定了基础。

    2019年11期 v.39;No.275 2207-2214页 [查看摘要][在线阅读][下载 2053K]
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  • 口服人参皂苷Rg1提高鸡的肠道黏膜免疫

    毕师诚;马晓丹;吴烨;崔雪梅;胡松华;

    将96只SPF母鸡随机分成4组,1,4组注射生理盐水;2,3组连续3 d肌肉注射环磷酰胺(Cy)诱导免疫抑制。3组在Cy引起免疫抑制后连续7 d每天饮水口服1 mg/kg人参皂甙Rg1,其余组只饮水。1,2,3组于给药结束后免疫传染性法氏囊病毒(IBDV)疫苗,4组不免疫。于给药前和免疫后1,2,3周计算脾脏和法氏囊指数,采血测定抗体阳性率,检测十二指肠灌洗液总sIgA和特异性sIgA含量;观察十二指肠黏膜上皮内淋巴细胞(IELs)以及IgA+细胞数。于免疫后1周提取十二指肠总RNA,检测肠组织免疫相关基因mRNA的表达。结果表明,和免疫抑制组相比,饮水口服1 mg/kg人参皂苷Rg1可提高IBDV抗体阳性率,显著增加脾脏和法氏囊指数,显著提高肠道总sIgA和特异性sIgA含量;此外,口服Rg1显著增加了十二指肠IELs和固有层IgA+细胞数量,上调了鸡十二指肠TLR4、p65、TGF-β、pIgR和CCR9基因的mRNA表达水平。

    2019年11期 v.39;No.275 2215-2221页 [查看摘要][在线阅读][下载 1875K]
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  • 甘草提取物对氟苯尼考在鸡体内药动学和生物利用度的影响

    杨锐;李旭廷;李金良;李思聪;王斌;张敏;

    为研究甘草提取物对氟苯尼考(florfenicol,FFC)在鸡体内药动学和生物利用度的影响,将30只鸡随机分成单用组、合用组和静脉组,合用组连续7 d灌服甘草提取物(0.3 g/kg,1次/d),单用组和静脉组则给予相同体积的生理盐水,第8天3个组均予FFC(30 mg/kg)给药后按时间点连续采样,数据采用DAS2.0进行分析。结果显示,单用组和合用组FFC的主要药动学参数:C_(max)分别为(5.637±0.825),(5.289±0.734) mg/L,T_(max)分别为(1.518±0.428),(1.083±0.343) h,AUC_(0-∞)分别为(30.774±5.683),(24.561±5.364) mg/L·h,t_(1/2z)分别为(2.472±0.314),(2.066±0.272) h,MRT分别为(3.149±0.459),(2.614±0.385) h,Vz分别为(4.466±0.375),(5.253±0.498) L/kg,CLz分别为(1.168±0.136),(1.401±0.152) L/h·kg。合用后,FFC药动学特征出现明显改变,AUC_(0-∞)、MRT、t_(1/2z)、T_(max)均显著降低(P<0.05),C_(max)降低(P>0.05),Vz和CLz则显著增加(P<0.05),口服生物利用度下降了16.26%。结果表明,甘草提取物连续给药7 d后加快了FFC在鸡体内的吸收和消除速度,减小了口服生物利用度,提示两者在临床上合用有潜在的药动学相互作用。

    2019年11期 v.39;No.275 2222-2226页 [查看摘要][在线阅读][下载 1414K]
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临床兽医学

  • 木糖醇对奶牛无乳链球菌的抑菌作用及其生物被膜干预

    李田;姜中其;

    通过电镜观察木糖醇对引起奶牛乳房炎的无乳链球菌生物被膜形成的影响并探索其抑菌机理。首先采用卡尔加里生物被膜发生装置与结晶紫染色法定量分析和评价无乳链球菌生物被膜形成能力,再选取生物被膜形成能力强的典型菌株,应用内置载体片法构建生物被膜,并进行扫描电镜观察;最后,分别通过透射及扫描电镜分析不同浓度的木糖醇对无乳链球菌及其生物被膜的影响。内置载体片法试验结果显示,无乳链球菌的生物被膜完全成熟需要连续培养4 d,此时细菌黏附于接触表面,分泌多糖基质等并逐渐将其自身包绕其中;透射电镜观察结果显示,木糖醇可通过破坏无乳链球菌结构来抑制其生长,且随浓度增加抑菌效果亦显著增加。此外,不同质量浓度木糖醇溶液(0.05,0.15,0.30和0.50 kg/L)处理的载体片上生物被膜细菌数量均有不同程度的减少,其中以0.50 kg/L最为显著。结果表明,木糖醇可改变无乳链球菌超微结构,也可通过破坏其生物被膜来抑制细菌生长。

    2019年11期 v.39;No.275 2227-2232页 [查看摘要][在线阅读][下载 5333K]
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  • 约氏乳杆菌对LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症反应的影响

    杨增;向炬富;徐高青;王军;吕文发;

    子宫内膜炎是影响奶牛生产的重要疾病之一,该病的有效防控至关重要。本试验探讨了约氏乳杆菌对LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症反应的预防作用。约氏乳杆菌悬浮至10~4,10~5,10~6 CFU/mL后,与奶牛子宫内膜上皮细胞共同培养3 h,添加1 mg/L LPS处理3 h,检测趋化因子IL-8和促炎因子TNF-αmRNA、蛋白分泌量和NF-κB信号通路关键蛋白表达量。结果表明,LPS处理奶牛子宫内膜上皮细胞3 h后,IL-8和TNF-αmRNA和蛋白分泌量均显著上升(P<0.05), 10~4 CFU/mL约氏乳杆菌预处理后IL-8、TNF-α表达和NF-κB信号通路关键蛋白均显著降低(P<0.05),而10~5或10~6 CFU/mL约氏乳杆菌预处理并未影响IL-8和TNF-α表达。结果提示,约氏乳杆菌具有预防奶牛子宫内膜炎的作用,且10~4 CFU/mL表现出良好的抗炎效用。

    2019年11期 v.39;No.275 2233-2237页 [查看摘要][在线阅读][下载 2023K]
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  • 叶酸对急性铅中毒大鼠海马和皮层组织中GSH及Nrf2、HO-1表达的影响

    李宁;张迪;乔明武;曹帅;张平安;赵秋艳;宋莲军;黄现青;

    探讨叶酸对急性铅中毒大鼠海马和皮层组织中谷胱甘肽(GSH)及核因子E2相关因子(nuclea factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧合酶1(heme oxygenase 1,HO-1)蛋白表达的影响。采用自由饮水模式将24只雄性6周龄大鼠平均随机分为4组,建立铅暴露模型,对照组C组(去离子水),铅暴露组L组(0.2%醋酸铅溶液),铅暴露和叶酸治疗组T组(0.2%醋酸铅溶液+0.4 mg/kg叶酸灌胃),叶酸组F组(去离子水+0.4 mg/kg叶酸灌胃)。分别取海马和皮层组织用石墨炉原子吸收光谱法测定铅含量,用比色法测量其GSH质量分数,通过免疫荧光法检测其Nrf2以及HO-1蛋白的表达情况。结果显示:铅含量在L和T组显著升高(P<0.01);海马和皮层中GSH含量L组中明显低于C组,T组显著高于L组,F组高于C组,具有显著差异(P<0.05);免疫荧光结果显示,L组中Nrf2和HO-1免疫荧光阳性反应物平均积分光密度值(IOD/area,mean density)相比于C组明显增高,T组相比于L组明显降低,F组低于C组,差异极显著(P<0.01)。叶酸可以调控Nrf2和HO-1蛋白的表达对铅暴露大鼠所诱导的氧化损伤具有修复作用。

    2019年11期 v.39;No.275 2238-2241+2259页 [查看摘要][在线阅读][下载 546K]
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  • 没食子酰芍药苷在脑缺血再灌注后神经保护作用和机制

    王婷婷;侯玮琛;赵阳;李小平;

    Wistar大鼠通过线栓法建立脑缺血再灌注模型,给予不同剂量没食子酸芍药苷治疗。结果显示,没食子酰芍药苷治疗使大鼠脑梗死体积明显减小,神经功能评分降低,并诱导大鼠脑组织中氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性、谷胱甘肽含量以及Nrf2/HO-1表达明显升高,而半胱天冬酶3活性、丙二醛含量、肿瘤坏死因子α和白介素1β的表达以及Tunel染色阳性细胞数明显降低。结果表明:没食子酰芍药苷可激活Nrf2/HO-1通路,减轻脑缺血再灌注后氧化应激和炎症反应,从而起到神经保护作用。

    2019年11期 v.39;No.275 2242-2246页 [查看摘要][在线阅读][下载 1578K]
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动物科学

  • 山羊妊娠早期胎盘滋养层细胞TET1、MMPs与TIMPs的表达规律

    高静;罗南剑;杨晓伟;杨永恒;赵永聚;

    TET1的去甲基化作用对胎盘功能具有重要调控作用,胎盘滋养层分泌的基质金属酶(matrix metalloproteinase,MMPs)使其具有迁移和侵袭功能,保证了滋养层细胞正常侵入子宫内膜建立妊娠,但滋养层细胞TET1、MMPs及TIMPs在山羊妊娠早期胎盘滋养层细胞中的表达规律未知。因此,本试验取妊娠20,25,30,45和60 d大足黑山羊胎盘滋养层,利用荧光定量PCR技术检测并分析了MMP2和MMP9、TIMP1和TIMP2基因相对表达规律,观察TET1和MMP9在各时期胎盘滋养层中的分布规律。结果显示,除20,25 d外,MMP9的表达量均高于MMP2,在30和60 d差异显著(P<0.05),45 d时差异达到极显著(P<0.01);除20 d外,TIMP1的表达量均高于TIMP2,且在30,45 d时具有显著性差异(P<0.05)。免疫组化染色结果发现TET1在细胞核和细胞质中均有表达,MMP9则主要分布于细胞质和细胞膜,且两者表达变化存在一定相似性。结果表明,山羊妊娠25~60 d,可能由MMP9和TIMP1主要调控胎盘滋养层细胞迁移和侵袭,且在该过程中,TET1可能通过影响MMP9的表达,进而影响山羊胎盘滋养层细胞迁移和侵袭。

    2019年11期 v.39;No.275 2247-2252页 [查看摘要][在线阅读][下载 2278K]
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  • 绒山羊泌乳期诱导发情效果及相关生殖激素变化

    周玲莉;段春辉;李月彩;郭云霞;纪守坤;严慧;张英杰;刘月琴;

    旨在研究燕山绒山羊母羊泌乳期诱导发情的效果及对相关生殖激素变化的影响。选择经产、体质量约为45 kg的泌乳期母羊45只,随机分为A、B和C组,分别于产后25,35,45 d采用孕酮阴道硅胶栓(CIDR)+促卵泡素(FSH)的方法诱导发情,统计96 h内发情率,在埋栓的0,4,9,13 d及试验羊发情时采血检测FSH、促黄体素(LH)、催乳素(PRL)、雌激素(E_2)和孕酮(P_4)浓度。结果显示,A、B和C组的发情率分别为60%,53.33%和80%,发情多集中在24~72 h;埋栓前,即试验0 d时A、B和C组FSH、LH、PRL、E_2和P_4无差异。FSH和LH在撤栓时达到最低,撤栓后升高;14~15 d,所有发情羊FSH和LH均高于未发情羊,但只有A、B组FSH差异显著(P<0.05)。14~15 d,PRL浓度最低(P<0.05);试验期间,除9 d外,C组发情羊PRL显著低于未发情羊(P<0.05),其余各组内发情羊与未发情羊PRL无差异。14~15 d,3组发情羊血清中E_2迅速升高而P_4降低,E_2浓度高于埋栓期(P<0.05),试验期间,各组内发情羊与未发情羊E_2和P_4无差异;0~15 d,各组发情羊之间及未发情羊之间PRL、P_4无差异,各组发情羊间FSH及未发情羊间E_2均无差异;4 d,A组未发情羊FSH低于B组(P<0.05),LH高于C组(P<0.05);13 d,B组发情羊LH低于C组(P<0.05),14~15 d,E_2高于C组(P<0.05)。结果表明,母羊产后45 d诱导发情效果较好;外源P_4可大幅度降低PRL,发情时FSH、LH和E_2的分泌同步上升。

    2019年11期 v.39;No.275 2253-2259页 [查看摘要][在线阅读][下载 162K]
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  • 母鼠孕期暴露双酚A对子代断乳雄鼠生殖内分泌以及睾丸DNA甲基化的影响

    魏媛媛;耿玉萌;李淑颖;钟秀会;包永占;史万玉;

    为探究母鼠妊娠期暴露双酚A(bisphenol A,BPA)对子代断乳雄鼠生殖内分泌与睾丸DNA甲基化的影响。按0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0 mg·kg~(-1)·d~(-1 )BPA剂量在妊娠期(PND)1~17 d灌胃孕鼠,制备孕鼠BPA暴露模型。然后统计母鼠妊娠期流产率,仔鼠断乳时存活率,睾丸系数。放射免疫法检测血清中雌二醇(E_2)、睾酮(T)含量;酶联免疫吸附法检测血清中雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)含量;实时定量荧光PCR法检测睾丸中DNA甲基转移酶1(Dnmt1)、DNA甲基转移酶3a(Dnmt3a)、DNA甲基转移酶3b(Dnmt3b)mRNA相对转录水平。结果显示,20.0 mg/kg BPA暴露可极显著增加断乳时仔鼠睾丸系数(P<0.01);20.0,40.0 mg/kg BPA暴露可显著增加母鼠流产率(P<0.05),极显著降低仔鼠存活率(P<0.01);2.5,20.0 mg/kg BPA暴露可极显著提高仔鼠血清T和ERβ含量(P<0.01);各BPA剂量均可极显著降低仔鼠血清雌二醇水平(P<0.01),促进睾丸内Dnmt1转录,抑制Dnmt3a和Dnmt3b转录;血清中雌激素受体α含量与BPA剂量呈现非线性关系。表明BPA通过干扰子代雄鼠睾丸内DNA甲基转移酶(Dnmt)的转录,使睾酮、雌二醇及雌激素受体分泌紊乱,影响子代雄鼠的生殖机能。

    2019年11期 v.39;No.275 2260-2265页 [查看摘要][在线阅读][下载 1115K]
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综述

  • 高铜日粮抑制猪生长的机制研究进展

    高阳;杨文艳;车东升;杨连玉;

    高铜对猪的促生长特性被发现后,一直作为廉价、高效的预防性饲料添加剂得到广泛的应用与研究。近年来,屡有报道指出长期补饲高铜不仅降低其促长效果,还会导致大量铜在动物组织器官积蓄,产生毒性,最终降低猪的生长性能。本文综述了长期补饲引起的高铜抑制猪生长的机制研究进展。

    2019年11期 v.39;No.275 2266-2271页 [查看摘要][在线阅读][下载 137K]
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  • 细胞缝隙连接通讯功能检测方法的研究进展

    邹辉;孙建;原俊朝;王涛;卞建春;刘宗平;

    细胞缝隙连接通讯(GJIC)是细胞间重要的通讯方式之一,已在兽医学科的相关研究中得到广泛应用。目前对缝隙连接检测方法的应用和评议并不统一。本文从代谢偶联、电化学生理、染料偶联三个方面,介绍GJIC功能的检测方法和应用,并对各种检测方法在实际应用中所表现出优势和局限性进行了阐述和探讨,为缝隙连接通讯检测方法的选择和联合应用提供参考。

    2019年11期 v.39;No.275 2272-2276页 [查看摘要][在线阅读][下载 130K]
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简讯

  • 更正

    <正>本刊2019年第39卷第9期第1801页发表的《免疫增强剂蛋虫草粉的喷雾干燥制备》一文的中文作者署名中共同第1作者和中文目次中此文章第2位作者马嘉轩均应为冯嘉轩;作者简介应为:赵庆枫(1977-),男,博士;冯嘉轩(1988-),女,硕士。特此声明。

    2019年11期 v.39;No.275 2271页 [查看摘要][在线阅读][下载 42K]
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