预防兽医学

  • 河南省猪流行性腹泻病毒流行株的遗传变异分析

    黎作华;张彬;余兴龙;周绪斌;

    为分析河南省猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因的遗传变异情况,设计并合成能够扩增N基因和S基因的引物,利用RT-PCR方法对2017年1月至2018年5月河南省11个地区规模猪场的178份病料进行检测、克隆和测序,并在氨基酸水平上将本研究分离株的S基因与国内外流行毒株的S基因进行比对分析。结果显示,河南省11个地区的178份样品,PEDV阳性样品113份,阳性率63.5%(113/178)。选取29株PEDV代表株进行氨基酸序列比较,结果显示,29株分离株与经典株CV777同源性为88.4%~90.3%,与经典株CV777相比,29株代表株在S1区域存在碱基的插入、缺失和变异现象;基于S基因的遗传进化分析表明,本研究的29株分离株均属于G2群,而以CV777为代表的经典株属于G1群。通过与经典株CV777的S蛋白进行抗原表位比对分析,在5~190 aa存在较大差异。本研究结果明确了目前河南省PEDV的遗传变异情况,为河南省猪流行性腹泻(PED)的诊断和防控提供参考依据。

    2020年06期 v.40;No.282 1073-1079页 [查看摘要][在线阅读][下载 3667K]
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  • PCV2多表位靶向性疫苗仔猪免疫应答及疫苗免疫效力评价

    王艳萍;王金良;谢金文;徐倩倩;苗立中;董林;沈志强;

    制备猪圆环病毒2型(PCV2)多表位靶向性疫苗探讨其免疫应答类型及对仔猪免疫效力。用参考疫苗和PCV2多表位疫苗免疫21日龄PCV2和PRRSV抗原、抗体双阴性仔猪,流式细胞仪检测外周血T、B细胞含量和Th1/Th2比值,荧光定量RT-PCR检测IL-17、TGF-β及IFN-γ基因转录和ELISA测定IL-2、IL-4和IL-10蛋白表达,以期确定免疫应答类型。通过PCV2抗体效价和仔猪免疫攻毒保护试验评价疫苗免疫效力。结果显示,参考疫苗(A组)和PCV2多表位疫苗(B组)T细胞含量于免疫后7,14 d显著升高;Th1细胞在7~28 d显著升高,而Th2细胞含量无明显变化,使得Th1/Th2比值发生明显偏移,其中B组发生偏移程度较A组轻,表明疫苗免疫发生以Th1为主的T细胞免疫应答。A和B组IL-17和IFN-γ转录水平均显著升高,其中B组在7~14 d达到峰值,显著高于A组,显示B组细胞免疫活化和非特异性反应更强。外周血中IL-2蛋白含量A和B组均有所升高,组间差异不明显;IL-4蛋白含量A组在免疫后35 d明显高于B组,说明A组体液免疫强于B组。TGF-β基因转录水平和IL-10蛋白含量在免疫后无明显变化,显示均未导致免疫抑制的发生。A和B组疫苗均能刺激机体产生抗体,保护仔猪抵御PCV2强毒攻击,但B组疫苗免疫效力高于A组。结果表明,PCV2多表位靶向性疫苗主要刺激Th1介导的细胞免疫应答,激活IL-17和IFN-γ基因转录和IL-2、IL-4蛋白表达,有效保护免疫仔猪抵御PCV2强毒的攻击,具有良好的免疫保护效力。该研究为PCV2新型疫苗的研制和推广应用提供了技术和数据支撑。

    2020年06期 v.40;No.282 1080-1086+1095页 [查看摘要][在线阅读][下载 843K]
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  • 核因子I/A(NFIA)依赖其N末端的DNA结合结构域抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制

    赵旭阳;史西保;张小转;陈静;王丽;邓瑞广;张改平;

    猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)严重危害世界养猪业,目前仍无有效防控策略,因此探究宿主内源性蛋白拮抗PRRSV的分子机理意义重大。前期试验发现核因子I/A(nuclear factor I/A,NFIA)可以有效抑制PRRSV复制,故本试验以非洲绿猴胚胎肾细胞Marc-145细胞为模型,对NFIA抑制PRRSV复制的分子机理进行了深入探究。首先,构建NFIA的N末端DNA结合结构域缺失质粒pcDNA3.1-Flag-ΔN和C末端转录激活结构域缺失质粒pcDNA3.1-Flag-ΔC并分别转染Marc-145细胞,24 h后感染PRRSV,48 h后用qRT-PCR和Western blot的试验方法分别检测病毒N蛋白的RNA和蛋白表达水平。结果显示ΔC仍能有效降低PRRSV的RNA水平和N蛋白水平,但ΔN则不再能降低PRRSV的RNA水平和N蛋白水平,这表明NFIA的N末端结构域是抑制病毒的关键。其次,对NFIA全长质粒pcDNA3.1-Flag-WT进行N末端结构域内不同功能位点的双碱基突变,分别破坏掉NFIA的促腺病毒复制功能(Mut1,YR86~87WL)、DNA结合功能(Mut2,LR119~120VD)和二聚化功能(Mut3,LF135~136VD),将突变质粒分别转染Marc-145细胞,24 h后感染PRRSV,48 h后通过qRT-PCR和Western blot检测发现,Mut2和Mut3不再能降低PRRSV的RNA水平和N蛋白水平,说明N端结构域的DNA结合功能位点和二聚化功能位点是NFIA抑制PRRSV复制的关键。结果表明,核因子I/A(NFIA)主要依赖其DNA结合结构域的二聚化与DNA结合功能来抑制PRRSV复制。

    2020年06期 v.40;No.282 1087-1095页 [查看摘要][在线阅读][下载 1272K]
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  • 广西猪细小病毒6型分子流行病学调查

    汪伟;杜倩;韩知晓;辛佳亮;孙文超;曹亮;田明尧;鲁会军;金宁一;

    为了解广西壮族自治区是否存在猪细小病毒6型(PPV6)毒株,分析其分子特征和遗传进化,本研究利用PCR技术对广西壮族自治区的猪血清临床样本进行检测。结果表明,广西壮族自治区猪群有PPV6的存在,感染率为18.5%(25/135),与PCV2的共感染率为24.0%(6/25)。与参考毒株的NS1核苷酸同源性为99.4%~99.6%;NS1遗传进化分析表明,GX44毒株和GX3-3毒株与中国参考毒株TJ株、韩国KSU1-AZ-2014株、波兰P15-1株同处一个亚群,而美国U18-9株属于另一个亚群。这一研究结果将为中国PPV6毒株的流行病学调查与分析提供最基础的研究资料。

    2020年06期 v.40;No.282 1096-1100页 [查看摘要][在线阅读][下载 1310K]
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  • PRRSV GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后特异性抗体的中和活性分析

    许瑞勤;孙杨杨;孔令昊;刘创创;李想通;李闻;魏凤灵;杨国宇;夏平安;张改平;

    为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后产生的特异性抗体的中和活性,研究以原核表达的重组蛋白GP5和M为抗原分别与霍乱毒素B亚基(CTB)佐剂按10∶1的比例混合制备成CTB黏膜佐剂疫苗,滴鼻免疫小鼠,于首次免疫后0,7,14,21,28,35,42 d收集唾液和血清样品,利用间接ELISA方法分别检测免疫小鼠唾液中特异性抗体IgA,结果均于28 d时S/N值达到最高,ELISA效价均为1∶2;血清中特异性抗体IgG分别于21,28 d时S/N值达到最高,ELISA效价均为1∶800。通过本实验室建立的基于PAM细胞中和试验方法分别检测唾液中特异性抗体IgA和血清中特异性抗体IgG中和滴度均<1∶2,结果表明PRRSV GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后产生的特异性抗体未达到免疫保护作用的中和抗体水平。

    2020年06期 v.40;No.282 1101-1108页 [查看摘要][在线阅读][下载 1748K]
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  • 血清4型禽腺病毒hexon-penton串联蛋白在293T细胞中的表达

    庞洪泽;吴同垒;李蕴玉;李佩国;闫艳娟;

    为了获得293T细胞表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)六邻体(hexon)和五邻体(penton)的串联蛋白,采用PCR方法从因FAdV-4致死的鸡肝脏中扩增出hexon基因和penton基因,其大小分别为1 014,900 bp。使用重叠PCR将hexon基因和penton基因串联,得到hexon-penton(HP)串联基因。将HP基因导入表达质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA3.1-HP,转染293T细胞,获得HP真核蛋白。经间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot鉴定结果表明,HP真核蛋白可与多抗血清发生特异性反应,蛋白质相对分子质量约为90 000,HP串联蛋白在293T细胞中获得了良好表达。研究结果表明成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-HP,并在真核细胞中获得表达,为进一步研制FAdV-4核酸疫苗奠定基础。

    2020年06期 v.40;No.282 1109-1113页 [查看摘要][在线阅读][下载 474K]
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  • 鸭大肠杆菌O_(78)血清型强毒株分离鉴定及其高密度发酵新工艺

    龚凤平;马海彬;罗梦萍;王贵平;袁建丰;

    依据大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)持家基因PhoA PCR检测,从临床病料中分离鉴定出11株鸭致病性E.coli。经O抗原血清型鉴定以及毒力分析,筛选出1株O_(78)血清型鸭E.coli强毒株EC-KP120427。以此菌株为基础,使用单因素法以及正交法,获得O_(78)血清型鸭E.coli强毒株新型高密度发酵培养基,配方中初糖采用甘油替代葡萄糖,无机盐仅添加磷酸氢二钾,同时补充铁、锰、铝3种微量元素,在普通摇床上37℃培养菌液D_(600 nm)可达到9.0以上。使用赛多利斯5 L发酵罐,对EC-KP120427菌株进行发酵培养试验。使用优化的新型高密度发酵培养基,按1∶10比例接种对数生长期种子菌,菌液D_(600 nm)值为1.0、控制温度37℃、pH 7.0、调节空气通气量1.5~5.0 L/min、转速100~400 r/min、发酵至对数生长期以15 mL·h~(-1)·L~(-1)流速慢速流加50%葡萄糖溶液,培养菌液D_(600 nm)值可高达30.0以上,成功实现了O_(78)血清型鸭E.coli强毒株高密度发酵。本研究为致病性E.coli高密度发酵技术标准的建立奠定基础,同时为水禽E.coli细菌疫苗的改进提供了技术支持。

    2020年06期 v.40;No.282 1114-1118页 [查看摘要][在线阅读][下载 685K]
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  • 犬源干扰素刺激基因ISG15和IFIT2荧光定量PCR检测方法的建立及应用

    王改丽;程悦宁;张淑琴;王建科;王超;孙娜;易立;程世鹏;

    干扰素刺激基因在抗病毒及调节IFN信号通路的过程中具有重要作用。本课题组前期对犬瘟热病毒(CDV)感染宿主前后全转录组进行测序分析,发现干扰素刺激基因ISG15和IFIT2明显上调,为了进一步探究ISG15和IFIT2对CDV感染的影响,本研究设计合成了犬源ISG15、IFIT2和持家基因GAPDH的特异性引物,分别进行PCR扩增,构建质粒标准品,建立荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行检验。结果表明,犬源ISG15、IFIT2和GAPDH的荧光定量PCR标准曲线的相关性R~2均大于0.98,表明线性关系良好。ISG15、IFIT2和GAPDH的融解曲线均为单峰,扩增产物单一,且峰值一致,表明建立的荧光定量PCR方法特异性良好。组内与组间的变异系数均小于0.2%,表明该方法重复性较好。对CDV感染宿主细胞前后的ISG15和IFIT2 mRNA表达水平进行检测,发现CDV感染后ISG15和IFIT2的表达量升高,表明ISG15和IFIT2在CDV感染过程中发挥重要作用。该结果为针对CDV与干扰素抗病毒研究的开展提供重要的技术手段,并为进一步揭示CDV致病的分子机制奠定基础。

    2020年06期 v.40;No.282 1119-1123+1135页 [查看摘要][在线阅读][下载 1055K]
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  • 牛支原体P48膜蛋白的原核表达及生物信息学分析

    郭亚男;罗海峰;司朵朵;曹晓真;段洪威;何生虎;

    对牛支原体(M.bovis)主要免疫蛋白P48蛋白的保守性和蛋白结构与功能进行分析,为进一步对P48蛋白的免疫特性和致病机制研究奠定基础。本研究通过获取M.bovis Ningxia-1菌株P48蛋白基因序列,构建pET28a-P48质粒并导入大肠杆菌BL21感受态细胞进行原核表达,并通过Ni柱进行重组蛋白纯化、SDS-PAGE电泳和免疫小鼠试验进行验证;利用生物信息学工具分析P48蛋白核酸序列的保守性和蛋白序列的理化性质、二级结构、疏水区、跨膜区、信号肽、亚细胞定位、抗原表位、三级结构及不同碱基的突变对该蛋白功能的影响。结果表明,通过大肠杆菌原核表达系统可以成功表达重组P48蛋白,并且该蛋白可以激发小鼠产生较高水平的抗体;P48蛋白核酸序列保守,在不同M.bovis菌株中碱基序列无差异;P48蛋白相对分子质量为51 159.08,含有468个氨基酸,其中强酸性氨基酸57个,强碱性氨基酸63个,极性氨基酸116个,疏水氨基酸169个,等电点为8.776;1~24位为P48蛋白的信号肽,具有较强的疏水性,并且为跨膜螺旋区;二级结构包含alpha helix、beta sheet、beta turn、random coil 4种形式;抗原表位有13个区域;P48蛋白位于细胞内膜上,是膜脂蛋白家族中ABC转运体的溶质结合蛋白2;该蛋白存在多个突变敏感区域,该区域的改变可能直接影响P48蛋白的功能。本研究的开展为M.bovis P48蛋白的免疫特性和致病机制研究奠定了基础,为M.bovis抗体检测试剂的研制和M.bovis病原的诊断提供了科学的依据。

    2020年06期 v.40;No.282 1124-1130页 [查看摘要][在线阅读][下载 1859K]
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  • 牛溶血曼氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

    刘心;彭清洁;彭永崇;王子健;章恺伦;周珊锡;陈曦;陈颖钰;郭爱珍;

    对1例不明原因死亡牛肺脏进行了病原学分离及鉴定。根据已报道的溶血曼氏杆菌基因序列,设计合成引物。通过细菌分离、染色、16S rRNA、溶血曼氏杆菌特异性PCR扩增、荚膜血清型及生化试验来确定该菌株。结果确定该牛感染了溶血曼氏杆菌,进一步分型确定为血清6型。成功从牛肺脏中分离到该菌株,从药敏试验结果可以看出该菌对大多数药物敏感。该试验对牛溶血曼氏杆菌病临床用药具有参考意义,也为牛溶血曼氏杆菌病临床诊断与治疗提供了技术参考。

    2020年06期 v.40;No.282 1131-1135页 [查看摘要][在线阅读][下载 484K]
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  • 扩展莫尼茨绦虫vasa基因的原核表达及多克隆抗体的制备

    钱凌霄;王正荣;李红欢;刘乙;张艳艳;王炜烨;薄新文;马勋;

    试验旨在表达、纯化扩展莫尼茨绦虫VASA蛋白,并制备兔抗VASA多克隆抗体。根据扩展莫尼茨绦虫全基因核苷酸序列设计特异性引物,利用PCR方法扩增vasa基因片段;将扩增产物与原核表达载体pET-22b(+)连接,获得重组质粒pET-22b-VASA;经Amp抗性筛选阳性菌,双酶切、PCR测序鉴定后,将其转化大肠杆菌(DE3)感受态细胞中,并进行IPTG诱导表达;重组融合蛋白经镍柱纯化后,进行Western blot鉴定;将融合蛋白免疫兔,制备多克隆抗体。结果显示,重组质粒pET-22b-VASA构建正确,通过IPTG诱导获得大小约32 200的VASA重组融合蛋白;Western blot分析表明其与鼠抗His单克隆抗体呈阳性反应。纯化的VASA蛋白免疫兔获得了多克隆抗体,ELISA检测其效价为1∶128 000。本试验成功制备了具有免疫原性的VASA蛋白及其兔源多克隆抗体,为VASA蛋白生物学功能及该蛋白在绦虫体内的分布等研究奠定基础。

    2020年06期 v.40;No.282 1136-1141页 [查看摘要][在线阅读][下载 639K]
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人兽共患病

  • 2018年湖北省猪源沙门菌的分离鉴定及耐药性分析

    罗郑;彭忠;杨迪;王湘如;杨斓;杨丹;王斐;华琳;陈焕春;吴斌;

    为了解规模化猪场沙门菌的流行和耐药情况,本研究于2018年10-12月采集湖北武汉、钟祥、大冶、襄阳、黄冈地区5个规模化猪场各年龄段猪的肛门拭子进行沙门菌的分离鉴定,并对所分离的菌株进行耐药表型分析和耐药基因检测。采用沙门菌选择性培养基进行细菌的分离培养,并通过生化试验和PCR扩增invA基因确定所分离的细菌为沙门菌;采用玻片凝集法对所分离的沙门菌进行血清分型;采用微量肉汤稀释法进行6种抗菌药物的耐药表型检测,并采用PCR方法对相关的15种耐药基因的携带情况进行检测。结果显示,从采集的640份肛门拭子分离鉴定出39株沙门菌,分离率为6.09%,其中来源于保育猪的样品中沙门菌的分离率最高,为16.25%;所分离沙门菌的血清型主要为鼠伤寒沙门菌(69.23%),其次是德比沙门菌(15.38%),其他血清型所占比例为15.38%。药敏试验发现所分离的沙门菌至少对1种抗生素耐药,其中94.87%的分离株对氨苄西林表现出耐药性,对氯霉素和卡那霉素表现出耐药性的分离株所占的比例分别为58.97%和53.84%,仅有20.51%的分离株对阿奇霉素表现出耐药性;此外,53.84%的菌株对3种以上的受试抗生素同时表现出抗性,其中20.51%的分离株同时对5种受试抗生素表现出耐药性。用PCR方法共检测出12种耐药基因,其中bla_(CMY)(79.49%)、aph(3′)-Ⅱ(76.92%)、catA1(76.92%)的检出率较高。研究结果为湖北地区猪场制定沙门菌病的综合防控措施提供参考。

    2020年06期 v.40;No.282 1142-1147+1152页 [查看摘要][在线阅读][下载 528K]
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  • 牛种布鲁菌sRNA的预测与鉴定

    高强;孙佳丽;牛凯;刘郁夫;郭晓芳;丁家波;董浩;彭小薇;

    为了对牛种布鲁菌2308株基因组中的sRNA进行预测和鉴定,提取牛种布鲁菌2308株的总RNA,进行RNA-Seq高通量测序,基于测序结果采用sRNA-Detect算法进行sRNA的预测,并采用反转录PCR对sRNA进行验证。结果显示,共预测筛选出3 523条候选的sRNA,采用反转录PCR验证出14个sRNA可以表达,其中13个sRNA的正常表达与Hfq伴侣蛋白密切相关。本研究在牛种布鲁菌中预测出3 523条sRNA,Hfq蛋白可以调控部分sRNA的正常表达。

    2020年06期 v.40;No.282 1148-1152页 [查看摘要][在线阅读][下载 341K]
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  • BALB/c和IFN-γ~(-/-)小鼠感染虎源弓形虫急性期组织损伤和抗原分布

    董辉;苏瑞景;杨卫华;杨玉荣;

    以BALB/c小鼠和IFN-γ~(-/-)小鼠为研究对象,应用病理组织学方法,H&E和IHC技术,观察研究TgTigerCHn2(Chinese1,ToxoDB#9)弓形虫感染后急性期死亡小鼠主要器官的组织细胞损伤和虫体分布特点。病理和组织学检查显示,10~6个TgTigerCHn2速殖子腹腔感染的BALB/c和IFN-γ~(-/-)小鼠平均生存时间分别约为9.8 DPI(days post infection)和7.7 DPI (P<0.05)。BALB/c小鼠病理表现为脾脏和淋巴结淋巴细胞坏死,弓形虫虫体抗原弥散性分布;间质性肺炎;肝细胞空泡变性及坏死,淋巴细胞弥散性浸润;大脑可见严重的脑膜炎和血管袖套现象。IFN-γ~(-/-)小鼠主要表现为肝脏有坏死灶,脾脏和淋巴结实质细胞的坏死和减少。IHC显示,BALB/c小鼠大脑的虫体抗原显著多于IFN-γ~(-/-)小鼠(P<0.01)。结果表明,TgTigerCHn2感染BALB/c小鼠后,虫体主要分布在大脑、肝脏、脾脏、淋巴结和肺脏,而IFN-γ~(-/-)小鼠各器官表现为炎症反应较轻的坏死性病变。

    2020年06期 v.40;No.282 1153-1157页 [查看摘要][在线阅读][下载 1616K]
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  • 猕猴源马链球菌兽疫亚种的分离鉴定

    程龙飞;吴志强;刘荣昌;孔丽芳;傅光华;陈红梅;黄瑜;

    为鉴定死亡猕猴血液中分离的细菌,本试验采用16S rRNA序列比对的方法对该菌进行鉴定。药敏试验采用纸片法,毒力试验采用皮下注射小鼠的方法。结果显示,所鉴定细菌为马链球菌兽疫亚种,敏感的药物有氨苄青霉素、阿莫西林、头孢唑啉、克林霉素、利福平、氟苯尼考、红霉素和罗红霉素等。经皮下注射700个活菌即能致死小鼠。结果表明,南平某动物园此次猕猴死亡是由马链球菌兽疫亚种引起的。

    2020年06期 v.40;No.282 1158-1161页 [查看摘要][在线阅读][下载 319K]
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  • 广东省候鸟副溶血性弧菌的分离与鉴定

    郑林;祝令伟;纪雪;关佳瑶;景洁;王莹;梁冰;陈萍;郭学军;

    为了解广东省候鸟副溶血性弧菌及其携带的毒力基因、抗生素敏感性和遗传进化特征,收集广东省候鸟粪便,用国标法和toxR基因PCR检测的方法进行分离鉴定获得副溶血性弧菌;通过PCR对毒力基因进行鉴定、用Etset测定MIC值,通过ERIC-PCR对副溶血性弧菌进行遗传进化分析。结果共获得122株副溶血性弧菌,这些细菌仅含有tlh(不耐热溶血素基因),而tdh(耐热溶血素基因)与trh(耐热溶血素相关毒素基因)等均为阴性。通过ERIC分群发现福田红树林保护区与湛江的鹭源菌株和湛江雷州的鹭源菌株具有高度相似性,深圳华侨城湿地菌株分布在3群,与雷州的鹭源相似度较高,为95%;福田红树林保护区分离株与深圳华侨城湿地菌株相似度大于75%。广东省候鸟携带的副溶血性弧菌具有较为丰富的遗传多样性,毒力基因携带单一,保持着较高的药物敏感性。

    2020年06期 v.40;No.282 1162-1169页 [查看摘要][在线阅读][下载 1432K]
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基础兽医学

  • 广西规模化猪场猪源大肠杆菌耐药表型和耐药基因检测及相关性分析

    冯世文;李军;李常挺;许力士;潘艳;胡帅;钟舒红;贺会利;

    对广西规模化猪场分离的120株猪源大肠杆菌进行了头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类和酰胺醇类药物耐药表型检测,并通过PCR检测菌株的β-内酰胺酶基因(bla_(TEM)、bla_(CTX-M))、氟喹诺酮类耐药基因(qnrA、oqxA、oqxB)、氨基糖苷类耐药基因(aac(6′)-Ib-cr)、大环内酯类耐药基因(ermB)和酰胺醇类耐药基因(floR)携带情况。耐药性检测结果显示,猪源大肠杆菌对头孢西丁、头孢他啶和阿米卡星具有高敏感率(>74.0%),而耐药率最高为四环素类84.2%,酰胺醇类为70.8%,氟喹诺酮类为68.9%,氨基糖苷类为49.4%,大环内酯类为43.3%,最低为头孢菌素类31.4%。猪源大肠杆菌最低对1种药物耐药,最高对18种药物耐药,111株为多重耐药菌,以11耐(15株)、8耐(13株)和7耐(12株)为主,共有82种耐药谱型。耐药基因检测结果显示,8个耐药基因的阳性率均≥50.0%,其中阳性率最高为bla_(TEM)基因(91.7%),最低为aac(6′)-Ib-cr基因(50.0%),共存在53种基因组合类型,主要为bla_(TEM)+bla_(CTX-M)+qnrA+oqxA+oqxB+aac(6′)-Ib-cr+ermB+floR(14株,11.7%)和bla_(TEM)+bla_(CTX-M)+qnrA+oqxA+oqxB+ermB+floR(13株,10.8%)。耐药基因和耐药表型相关性分析结果显示,bla_(TEM)和bla_(CTX-M)与大肠杆菌对头孢氨苄耐药情况极显著相关(P<0.01),bla_(CTX-M)与大肠杆菌对头孢拉啶和头孢曲松耐药情况极显著相关(P<0.01),qnrA、oqxA、oqxB和aac(6′)-Ib-cr基因与大肠杆菌对诺氟沙星、氧氟沙星、恩诺沙星和环丙沙星耐药极显著相关(P<0.01),aac(6′)-Ib-cr基因与大肠杆菌对庆大霉素和卡那霉素耐药极显著相关(P<0.01),floR基因与大肠杆菌对氟苯尼考耐药情况极显著相关(P<0.01)。本研究结果表明广西规模化猪场猪源大肠杆菌仅对极少数抗菌药物具有较高敏感率,多重耐药情况严重,具有丰富的耐药谱型,携带多种耐药基因且具有复杂的基因组合类型,所携带的耐药基因与其耐药表型具有一定的相关性。

    2020年06期 v.40;No.282 1170-1178页 [查看摘要][在线阅读][下载 481K]
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  • 孕酮诱导猪中性粒细胞胞外诱捕网形成及其机制

    王超群;刘潇;韩震;王晶晶;魏正凯;杨正涛;

    中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophils,PMN)胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)是一种重要的先天性免疫反应机制。为了探究孕酮是否与猪PMN NETs形成相关,本研究通过分离母猪外周血获得PMN,与不同质量浓度孕酮(10,20,40μg/L)共孵育2 h后,通过激光共聚焦显微镜观察NETs的形成;运用picoGreen~?试剂盒定量分析NETs的释放水平;通过乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒分析细胞外LDH活性。结果表明,孕酮可以显著诱导以DNA为骨架,装饰有PMN弹性蛋白(neutrophil elastase,NE)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)等蛋白颗粒的NETs形成,NETs形成与孕酮诱导剂量以及孵育时间呈正相关,且孕酮诱导猪PMN释放NETs的过程中,细胞外LDH活性无改变。本研究为有关雌性生殖激素参与调节母猪免疫系统的相关研究提供了新思路。

    2020年06期 v.40;No.282 1179-1182页 [查看摘要][在线阅读][下载 1846K]
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  • 急性冷暴露对仔猪比目鱼肌GSK3β及凋亡蛋白Caspase-3表达的影响

    刘鹏;史宏昭;姚睿智;刘洋;杨玉英;李士泽;

    气候条件与畜牧业的发展密切相关,尤其在我国北方寒区,养殖动物极易受到寒冷刺激的危害,但寒冷刺激引起动物机体损伤的机制尚不明确,因此本研究旨在探究急性冷暴露对仔猪比目鱼肌糖原合酶激酶3β(GSK3β)及凋亡蛋白半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达的影响。将12只仔猪随机分成3组,分别为常温对照组、冷暴露4 h组和冷暴露8 h组,采集各组仔猪比目鱼肌样本进行Western blot分析。结果显示,冷暴露组Cleaved Caspase-3和GSK3β磷酸化显著高于对照组,B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)/Bcl-2-Associated X蛋白质(Bax)比值与对照组相比显著降低。结果表明,急性冷暴露引起Cleaved Caspase-3和GSK3β磷酸化水平的升高和Bcl-2/Bax比值的降低,推测可能是机体通过抑制GSK3β的磷酸化来减弱急性冷暴露诱导的细胞凋亡。

    2020年06期 v.40;No.282 1183-1187页 [查看摘要][在线阅读][下载 523K]
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  • 绵羊原代Cajal间质细胞的分离培养与鉴定

    付强;李胜男;胡新艳;田瑞鑫;李祯;郭妍婷;赵新艳;陈俊贞;姚刚;史慧君;

    采集美利奴绵羊的十二指肠,在解剖显微镜下剥去黏膜层及黏膜下层,剪碎后采用Ⅱ型胶原酶和胰酶消化并分离获得绵羊十二指肠原代Cajal间质细胞(ICC);传代培养后,通过倒置显微镜观察不同时间的细胞形态,使用反转录PCR和免疫荧光染色检测ICC特异性标记物c-Kit。结果显示,成功分离了ICC,且细胞在培养24 h后贴壁,呈现出其固有的形态。RT-PCR检测c-kit基因为阳性,免疫荧光染色鉴定ICC表达c-Kit蛋白。本试验成功分离ICC且传代后细胞稳定增殖生长,为后期开展病原微生物导致ICC改变造成胃肠道炎性病变提供材料。

    2020年06期 v.40;No.282 1188-1192页 [查看摘要][在线阅读][下载 665K]
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临床兽医学

  • 板芩桔甘合剂对人工感染IBV-M41雏鸡生长性能与支气管中JAK、STAT1、IFN-α mRNA转录的影响

    林春发;冯静波;罗艺晨;王旭杰;樊力超;刘海燕;刘娟;

    为探讨板芩桔甘合剂(BQJGHJ)对人工感染IBV-M41雏鸡生长性能与支气管中JAK、STAT1、IFN-αmRNA转录的影响,将120只雏鸡分为空白组、模型组、阳性药物组、BQJGHJ高、中、低剂量组,每组20只,饮水给药,连用5 d。造模第4天及停药后2 d,测雏鸡的体质量,计算采食量、日增重和饲料增重比。采用H.E染色观察雏鸡的组织学变化;RT-PCR法检测IBV-M41雏鸡支气管中JAK、STAT1、IFN-αmRNA转录情况。结果显示,停药后2 d模型组雏鸡的料重比增加,与空白组相比差异极显著(P<0.01);BQJGHJ高、中、低剂量组和阳性药物组雏鸡的料重比降低,与模型组相比差异极显著(P<0.01)。模型组雏鸡支气管中JAK、STAT1、IFN-αmRNA的转录量降低,与空白组相比差异显著(P<0.05);BQJGHJ各剂量组雏鸡支气管中IFN-αmRNA转录量均升高,其中BQJGHJ高剂量组雏鸡支气管中JAK、STAT1、IFN-αmRNA转录量,与模型组相比差异极显著(P<0.01),BQJGHJ中、低剂量组和阳性药物组雏鸡支气管中JAK、STAT1、IFN-αmRNA转录量,与模型组相比差异显著(P<0.05),BQJGHJ高、中剂量组雏鸡支气管中JAK、STAT1、IFN-αmRNA转录量,与阳性药物组相比差异显著(P<0.05)。结果表明,BQJGHJ能降低感染IBV-M41雏鸡的料重比,提高传染性支气管炎雏鸡支气管中JAK、STAT1、IFN-αmRNA转录量。

    2020年06期 v.40;No.282 1193-1199+1208页 [查看摘要][在线阅读][下载 2862K]
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  • 胎儿期至性成熟期持续暴露双酚A影响雌鼠卵巢核糖体功能

    张石磊;包佳鹭;宫新城;史万玉;钟秀会;

    双酚A(BPA)是一种常见的环境类雌激素,对动物产生生殖毒性。为了探究长期双酚A暴露对卵巢发育的影响,将孕0 d昆明小鼠(8周龄,体质量25~30 g,SPF级)随机分为7组,每组4个重复,每个重复5只。A组每天饮水给予蒸馏水(0.00 mg/kg BPA)作为对照组,B组每天饮水给与0.05 mg/kg BPA,C组每天饮水给与0.50 mg/kg BPA,D组每天饮水给与5.00 mg/kg BPA,E组每天饮水给与10.00 mg/kg BPA,F组每天饮水给与20.00 mg/kg BPA,G组每天饮水给与50.00 mg/kg BPA。BPA饮水自母鼠孕0 d到仔鼠45 d性成熟,共计63 d。结果显示,BPA剂量≥0.50 mg/kg时,仔鼠血清和卵巢中BPA含量显著增加(P<0.05),但仔鼠卵巢器官指数均无显著变化和病理损伤。TUNEL结果显示,染毒BPA≥10.00 mg/kg时卵巢颗粒细胞发生细胞凋亡(P<0.05)。当染毒BPA剂量≥0.50 mg/kg时仔鼠卵巢ERα表达量显著增多(P<0.05);低剂量BPA (0.05~10.00 mg/kg)显著降低ERβ表达,较高剂量(20.00~50.00 mg/kg)显著增加ERβ表达。转录组测序结果显示,BPA影响了卵巢核糖体通路,其中核糖体蛋白L21、Sa表达基因显著下调,核糖体蛋白L3、S2、L7a、S26、L26表达基因显著上调。这些基因的改变可能会导致胚胎生殖系统发育受阻和卵巢早熟。荧光定量PCR验证了转录组结果。本研究证实长期低剂量BPA暴露不会导致性成熟期小鼠卵巢器官指数变化和明显病理损伤,但会导致卵巢细胞凋亡和ER表达异常,BPA的生殖毒性可能与核糖体功能蛋白表达异常有关。

    2020年06期 v.40;No.282 1200-1208页 [查看摘要][在线阅读][下载 3398K]
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动物科学

  • 2种饲草对湖羊增重、采食量及血液生化指标的影响

    姜婉茹;纪晓霞;高铭谣;陈希;张源淑;

    在等能等氮条件下,比较研究2种不同粗料对湖羊食欲及采食量的影响。试验选用12只雄性湖羊均分为2组每组6只,苜蓿干草组与麦秸组,试验期4周,每天饲喂2次,统计采食量、体质量,每周采血,测定血液中常规生化指标、血液中酶含量及激素水平。结果显示,苜蓿干草组与麦秸组在初始体质量相近的情况下(40.63±1.48),(41.32±1.52) kg,饲喂28 d后2组动物体质量均有所增加(46.44±1.17),(45.52±1.49) kg;苜蓿干草组平均日增体质量(207±33) g和相对增长率(14.14±2.14)%均高于麦秸组(150±35) g和(10.40±2.57)%;苜蓿干草组平均采食量从1 500.00增至1 738.50 g/d显著高于(P<0.01)麦秸组从1 200.00到1 430.53 g/d。饲喂28 d,球蛋白(GLB)、白球比(A/G)、尿素(Urea)含量麦秸组显著低于苜蓿干草组(P<0.05);麦秸组中血糖(GLU)、总胆红素(T-BIL)、甘油三酯(TG)含量均高于苜蓿干草组,而直接胆红素(D-BIL)、间接胆红素(I-BIL)含量与苜蓿干草组相近,但均无显著性差异(P>0.05)。麦秸组湖羊血液中乳酸脱氢酶(LDH)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量显著低于苜蓿干草组(P<0.05);碱性磷酸酶(ALP)含量显著高于苜蓿干草组;血液中胰岛素(INS)含量低于苜蓿干草组且差异显著(P<0.05);瘦素(leptin)含量显著高于苜蓿干草组(P<0.05)。结论显示,饲喂苜蓿干草和麦秸对湖羊生产性能等有不同影响,主要表现在采食量及体增重苜蓿干草组高于麦秸组,血液中相关指标2组间没有明显差异,但抑制食欲激素INS含量麦秸组明显低于苜蓿干草组,促食欲激素胃饥饿素(GAS)含量低于苜蓿干草组。结果提示:饲喂麦秸采食量和体增重均低于饲喂苜蓿干草,推测与控制食欲有关激素的分泌变化导致食欲下降有关,相关机制有待于进一步研究。

    2020年06期 v.40;No.282 1209-1215页 [查看摘要][在线阅读][下载 267K]
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  • 膨化微贮玉米秸秆对肉牛生产性能及血液生化指标的影响

    王玉婷;于维;祁宏伟;赵玉民;

    选用体质量相近的(354.83±16.11) kg西门塔尔杂交母牛18头,随机分为3组,每组6头。3组试验动物饲粮的精料相同,粗料比为膨化微贮、黄贮、干玉米秸秆。结果表明:(1)膨化微贮玉米秸秆组的日增重显著大于黄贮、干玉米秸秆组(P<0.05),且黄贮与干玉米秸秆组之间无显著性差异(P>0.05)。膨化微贮玉米秸秆组的干物质采食量极显著大于黄贮组,黄贮组极显著大于干玉米秸秆组(P<0.01)。(2)各组肉牛血清中总蛋白(TP)、球蛋白(GLB)、葡萄糖(GLU)、谷丙转氨酶(ALT)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量无显著性差异(P>0.05)。膨化微贮玉米秸秆组的白蛋白(ALB)含量显著高于干玉米秸秆组(P<0.05),黄贮和膨化微贮玉米秸秆组的谷草转氨酶(AST)含量极显著高于干玉米秸秆组(P<0.01)。结果表明,膨化微贮玉米秸秆组肉牛的生产性能高于黄贮和干玉米秸秆组,且对血液中大多数的生理指标无显著影响。

    2020年06期 v.40;No.282 1216-1219+1227页 [查看摘要][在线阅读][下载 127K]
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  • PIK3C2A基因多态性及其与宁海黄鸡和广西黄鸡屠体性状的相关分析

    刘珂;谭雨革;曹海月;徐秀丽;毛海光;尹兆正;

    磷脂酰肌醇-4-磷酸3-激酶催化亚基2型α(phosphatidylinositol-4-phosphate 3-kinase,catalytic subunit type 2 alpha,PIK3C2A)基因在生物体中主要参与细胞代谢、细胞增殖以及细胞内蛋白质的转移,并与蛋白质合成以及肌肉质量有关。本研究分析宁海黄鸡和广西黄鸡2个国内优质地方鸡种PIK3C2A基因多态性及其与屠体性状之间的相关性,以期为标记辅助选择提供理论依据。应用鸡高密度(600 K)SNP芯片对PIK3C2A基因中的单核苷酸多态性(SNP)进行分析,在总共被检测出的42个SNPs中,有4个SNPs(rs312835349、rs13757033、rs16466818和rs317679804)位于PIK3C2A基因的外显子区域,且这4个SNPs共显示出3种基因型(AA、AB和BB),并呈现出中度多态性;在PIK3C2A基因内含子区域的38个SNPs中,发现宁海黄鸡的7个SNPs和广西黄鸡的6个SNPs分别与部分屠体性状显著相关(P<0.05或P<0.01),其中有3个SNPs为2个鸡品种共有(C939A、T6477C和A38680G),推测这3个SNPs可能是鸡标记辅助选种的潜在候选遗传标记。研究结果表明,PIK3C2A基因可能是影响鸡屠体性状的关键基因之一,可作为分子标记辅助选择的候选基因。

    2020年06期 v.40;No.282 1220-1227页 [查看摘要][在线阅读][下载 2678K]
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  • 鸡胚胎干细胞的分离培养与鉴定

    李欣;于永生;吕阳;柳俭强;金海国;朴庆林;赵中利;

    利用胰蛋白酶消化法从X期鸡胚中分离胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs),以鸡胚成纤维细胞为滋养层,进行体外培养,采用形态法和标志分子检测对获得的干细胞进行鉴定。结果显示,获得典型的呈巢状或岛状的鸡胚胎干细胞(chicken embryonic stem cells,cESCs)克隆,细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)染色呈蓝紫色,表明具有较高的内源性AKP活性;胚胎阶段特异性表面抗原SSEA-1(stage specific embryonic antigen 1,SSEA-1)鉴定结果呈阳性,显示cESCs克隆具有多能性。本试验成功分离出cESCs,可体外培养并保持未分化状态及多能性。

    2020年06期 v.40;No.282 1228-1231页 [查看摘要][在线阅读][下载 799K]
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  • 无角牦牛crtc3基因多态性及其与生长性状的相关分析

    马武;王宏博;张浩;贾聪俊;马晓明;吴晓云;褚敏;阎萍;成述儒;梁春年;

    为探究crtc3基因在无角牦牛群体中的遗传多态性,开展其与生长性状间的关联性。利用PCR-SSCP技术结合DNA测序对354头无角牦牛crtc3基因进行多态性分析,并运用SPSS 20.0软件对各基因型间不同月龄(6,12和18月龄)的体质量、体高、体斜长和胸围等生长性状指标进行关联分析。结果表明,在牦牛crtc3基因的第14内含子的第86 041处发生C→T单个碱基突变,结合PCR-SSCP结果分析后,分为CC、CT和TT 3种基因型。关联分析发现,在6月龄,CC基因型个体体高显著高于TT基因型个体, CC基因型个体胸围显著高于CT基因型个体;在12月龄,CC基因型和CT基因型个体体高极显著高于TT基因型个体,CC基因型个体胸围极显著高于TT基因型个体;在18月龄,CC基因型个体体质量和体高显著高于TT基因型个体。综上所述,在牦牛crtc3基因上检测到第14内含子的第86 041处发生C→T单个碱基突变,该突变位点对无角牦牛各时期的体质量、体高和胸围等生长性状等有显著影响,可以作为一种遗传标记用于辅助选择。

    2020年06期 v.40;No.282 1232-1236+1240页 [查看摘要][在线阅读][下载 486K]
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  • ε-聚赖氨酸对小鼠胚胎玻璃化冷冻的影响

    高妍;吕岩;官员;张嘉保;

    为研究ε-聚赖氨酸(ε-PL)对小鼠胚胎玻璃化冷冻效果的影响,探讨冷冻保护剂ε-PL适宜的浓度和平衡时间,试验采用了不同质量浓度的ε-PL(20,30,40 g/L)及不同的平衡时间(0.5,1.0,2.0 min)对小鼠囊胚进行玻璃化冷冻,统计胚胎解冻后存活率及孵化率。结果表明:在冷冻液中添加30 g/L的ε-PL,平衡时间为1.0 min时,冷冻效果最好,囊胚胚胎的存活率达91.2%,孵化率达89.7%。因此,ε-PL可以作为一种高分子非渗透性保护剂对胚胎玻璃化冷冻起保护作用。

    2020年06期 v.40;No.282 1237-1240页 [查看摘要][在线阅读][下载 114K]
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综述

  • PD-1/PD-Ls通路的特性及在动物疾病中的研究进展

    岳锋;周娟娟;章金刚;王选年;

    程序性死亡因子1(programmed cell death-1,PD-1)是非常重要的免疫抑制性受体分子之一,其配体为PD-L1和PD-L2(PD-Ls)。PD-1/PD-Ls通路传递负免疫信号,导致机体免疫功能衰竭或免疫抑制,是慢性或持续性病毒感染、肿瘤性疾病和自身性免疫疾病的重要致病机制之一,阻断PD-1/PD-Ls通路可以逆转或恢复衰竭淋巴细胞的免疫功能。因此,开展PD-1/PD-Ls通路在相关疾病中的致病机制研究,对其防控和治疗均具有重要的意义。现综述PD-1/PD-Ls通路的特性及其在猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病和猪瘟、牛白血病和牛边缘无浆体病、鸡马立克病、鸡疱疹病毒Ⅱ型和鸡传染性法氏囊病、犬利什曼原虫病和犬肿瘤性疾病等相关疾病中的研究进展与效应机制,以期为相关疾病的治疗和防控提供新的治疗靶点和策略。

    2020年06期 v.40;No.282 1241-1247+1252页 [查看摘要][在线阅读][下载 195K]
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  • 犬瘟热病毒受体及抑制物质的相关研究进展

    朱宇航;韩志强;贾赟;宋兴超;赵家平;王全凯;李滋睿;徐超;

    犬瘟热(canine distemper,CD)是一种由犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)引起的在全球范围内发生的传染病,可感染食肉目的所有8个科及其他一些科属的动物,对经济动物养殖业及野生动物危害巨大。CDV进入宿主主要依靠信号淋巴细胞活化分子(SLAM,又称CD150)和细胞黏附分子4(Nectin-4,又称PVRL-4)。SLAM和Nectin-4可以分别与CDV血凝素蛋白(H)的不同部位结合,在CDV对宿主识别、致病性及病毒传播中起到重要作用。有一些物质对CDV具有抑制作用,这些物质可分为2类,一类是天然酚类化合物,另一类是人工合成的化合物。现主要综述CDV的传播途径、病毒受体及其作用机制,2类对CDV表现出抑制作用的化合物的实验室表现,以期为CD的治疗及控制提供参考。

    2020年06期 v.40;No.282 1248-1252页 [查看摘要][在线阅读][下载 133K]
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  • 伪狂犬病病毒感染动物神经系统的分子机制研究进展

    杨冰洁;罗国栋;甘玲;

    伪狂犬病病毒(PRV)是猪伪狂犬病的病原体,在世界范围内造成了毁灭性的疾病和经济损失。由于该病毒的嗜神经性,因此引起病毒学家和神经生物学家的高度兴趣。当前,PRV已经成为研究疱疹病毒生物学的一种模式病毒。此外,由于该病毒具有感染突触连接神经元的显著倾向,被用作神经通路的示踪剂。我国虽然在根除PRV上取得了很大进展,但在许多国家仍然是一个地方性问题。现从PRV的最新研究技术、感染动物神经系统的致病机制以及功能应用3个方面进行综述。

    2020年06期 v.40;No.282 1253-1257页 [查看摘要][在线阅读][下载 125K]
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  • 噬菌体解聚酶的分类与结构特征及其应用研究进展

    蔡若鹏;顾敬敏;韩文瑜;

    噬菌体解聚酶(depolymerase)是一种可特异性降解细菌表面多糖的噬菌体蛋白。自该蛋白于1956年被首次报道以来,相关学者不断对其功能进行挖掘和探索。现已证实该蛋白具有快速鉴定微生物荚膜类型、清除并抑制生物被膜(biofilm)、降低细菌毒力等功能,在控制病原细菌感染等公共卫生领域具有重要的应用价值。现主要围绕噬菌体解聚酶的分类学特征、结构生物学特性以及相关应用研究进展进行综述。

    2020年06期 v.40;No.282 1258-1264页 [查看摘要][在线阅读][下载 1100K]
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