预防兽医学

  • 河北省 PEDV 流行毒株的分离鉴定及遗传演化分析

    辛树阳;严世杰;宋涛;郝建香;付琦媛;李文傲;王春芳;回卫荣;唐梦虎;马增军;芮萍;

    为掌握河北省猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的流行和变异情况,2017—2018年本研究在河北地区(秦皇岛、唐山、承德、张家口、廊坊、保定和石家庄)共收集278份疑似猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)病死猪临床样品,采用RT-PCR技术进行PEDV筛查,共检测到53份阳性病料,阳性率为19.1%。通过Vero细胞传代培养,成功分离到1株PEDV毒株,将其命名为CH-HB1-2018,对其进行全基因组测序,结合GenBank中公布的PEDV毒株序列对其进行全基因序列同源性比对及系统进化树分析,结果显示所分离毒株与CV777,CH-S,SM98等早期经典毒株的核苷酸同源性在96.6%~97.6%之间,与2010年后分离的变异毒株JS-HZ2012,LC,JSX2014等的核苷酸同源性在98.9%~99.1%之间,进化树分析结果表明所分离毒株为变异毒株,与JS-HZ2012,JSX2014等变异毒株属于同一进化分支,与同源性分析结果一致。本研究为河北省PEDV的流行情况研究提供了理论依据。

    2020年07期 v.40;No.283 1265-1271页 [查看摘要][在线阅读][下载 4374K]
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  • 猪传染性胃肠炎病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立

    焦韵洁;张欣;朱海鹏;吴小萍;贾存瑜;赵毅;周恩民;穆杨;

    通过对比猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)主要流行毒株的M基因序列,选择其高度保守的区域设计LAMP引物,以羟基萘酚蓝(HNB)为指示剂,建立了1种快速检测TGEV的可视化环介导等温扩增方法。结果显示,采用建立的方法在恒温水浴锅中约1 h即可完成检测;用该方法检测猪流行性腹泻病毒,猪轮状病毒,猪繁殖与呼吸综合征病毒,猪细小病毒,猪圆环病毒,均不发生交叉反应;以pET-21b-M质粒为模板评价所建立方法的敏感性,最低检测限为3.7×10~3个拷贝,比普通PCR方法高2个数量级;在反应前向反应体系中加入HNB,反应结束后阳性反应管颜色从紫罗兰色变为天蓝色,阴性反应管颜色无变化,且阴阳性管颜色差异明显。用建立的方法对收集的42份临床腹泻样品进行检测,共检测到21份样品阳性。为快速检测TGEV提供方法。

    2020年07期 v.40;No.283 1272-1279+1285页 [查看摘要][在线阅读][下载 4056K]
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  • LGALS1对猪繁殖与呼吸综合征病毒在Marc-145中复制的影响

    崔一龙;石芸;薛江东;马德慧;

    为探索LGALS1对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在Marc-145中复制的影响,设置LGALS1免疫血清和PRRSV共同孵育Marc-145细胞的试验组、LGALS1 siRNA转染Marc-145细胞后再接种PRRSV的试验组以及PRRSV直接孵育Marc-145细胞的对照组,利用间接免疫荧光、TCID_(50)测定、荧光定量和Western blot来测定病毒的增殖、滴度变化和表达情况。结果发现,抗LGALS1血清组、转染LGALS1 siRNA质粒组与对照组荧光、TCID_(50)、病毒mRNA和蛋白水平差异均不显著。结果表明,LGALS1对PRRSV在Marc-145中复制无影响。

    2020年07期 v.40;No.283 1280-1285页 [查看摘要][在线阅读][下载 1554K]
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  • 猪萨佩罗病毒原位杂交检测方法的建立

    焦哲;梁继翔;严治山;刘晓丽;谷长勤;胡薛英;程国富;张万坡;

    为了直观、原位且特异性的检测猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)在感染仔猪后器官和组织中病毒核酸的分布,本研究根据GenBank中PSV的5′端非编码区基因的保守序列设计并合成1对引物,利用PCR地高辛探针合成的方法制备成原位杂交检测探针,建立了PSV原位杂交组织切片检测的方法。应用该方法检测PSV感染仔猪小肠组织,结果表明阳性信号主要存在与在于肠绒毛上皮细胞和固有层淋巴细胞中,阴性对照无显色。该方法可以用于组织切片中的PSV核酸的定位,为猪萨佩罗病毒在感染仔猪后器官和组织中病毒核酸分布及致病机理研究奠定基础。

    2020年07期 v.40;No.283 1286-1289页 [查看摘要][在线阅读][下载 1282K]
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  • 盖塔病毒TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立

    朱翔宇;鲁荣光;胡博;蔡熙姮;刘昊;史宁;

    为了建立特异、灵敏、快速的荧光定量RT-PCR方法用于检测盖塔病毒(Getah virus,GETV)的核酸,并初步应用于GETV的临床标本检测。根据GenBank登录的GETV全基因组序列,应用生物学软件进行序列比对,在NSP1保守区设计1对特异性引物和TaqMan探针。建立实时荧光定量RT-PCR检测GETV的方法,并对建立的方法进行敏感性、特异性测定和临床样品检验。结果显示,该方法能特异性地鉴别检测GETV;检测灵敏度高,检测的最低模板量可以达到2.03×10~1 copies/μL;将收集到的10 000只蚊子样品分成100份进行检测,共检测出8份GETV阳性样品,与常规反转录PCR(RT-PCR)检测及病毒分离结果吻合。本研究建立的GETV TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法特异、灵敏,适用于GETV的临床早期诊断。

    2020年07期 v.40;No.283 1290-1295页 [查看摘要][在线阅读][下载 1276K]
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  • 贵州省HPAIV和NDV免疫抗体检测及其R语言分析

    陈国权;吴征卓;姚碧琼;施大军;张旭;阎朝华;周碧君;王开功;程振涛;文明;

    为探究贵州省不同地区、养殖方式、温度和海拔对H5亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)、H7亚型AIV和新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)免疫抗体阳性率的影响,采用血凝抑制试验对2015—2018年本实验室收集的贵州省各市(州)294个养殖场的鸡血清(共计11 017份)进行上述疫病的免疫抗体检测,并对检测结果使用易侕统计软件(www.empowerstats.com)和R语言进行单因素和多因素分析。统计结果显示,H5,H7亚型AIV和NDV的免疫抗体阳性率分别为84.80%,64.95%和90.48%。单因素分析结果显示,H5,H7亚型AIV免疫抗体阳性率在贵州省的不同地区中差异均极显著(P<0.01);不同养殖方式对H5亚型AIV的免疫效果影响差异显著(P<0.05);不同温度对H5亚型AIV的免疫效果影响差异极显著(P<0.01);不同海拔对H5,H7亚型AIV和NDV的免疫效果影响不显著(P>0.05)。多因素分析结果显示,综合考虑不同地区、养殖方式、温度和海拔4个因素对H5,H7亚型AIV和NDV免疫抗体阳性率的影响,只有H5亚型AIV的免疫效果受到显著影响(P<0.05)。结果表明,贵州省H5亚型AIV和NDV的免疫抗体阳性率均达到国家农业部动物疫病监测合格要求;贵州省不同地区H5和H7亚型AIV免疫抗体阳性率存在极显著差异;不同养殖方式和温度对H5亚型AIV的免疫效果影响差异均显著;贵州省的平均海拔条件有利于H7亚型AIV和NDV的免疫防控。本研究为贵州省H5,H7亚型AIV和NDV疫苗合理免疫程序的制定提供一定的理论依据。

    2020年07期 v.40;No.283 1296-1301页 [查看摘要][在线阅读][下载 871K]
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  • 基因工程表达鸡IFN-λ抗Ⅰ群禽腺病毒感染

    许鑫燕;王延龙;杨倩;吴艳涛;张小荣;

    Ⅲ型干扰素(IFN)又被称为IFN-λ,具有与Ⅰ,Ⅱ型IFN类似的抗病毒特性,但利用不同的配体-受体系统,主要在一些上皮细胞及免疫细胞上发挥作用。本研究评价了用昆虫杆状病毒表达系统制备的重组鸡IFN-λ(chIFN-λ)在体内、外对禽Ⅰ群腺病毒4型(FAdV-4)GX2013株和8b型(FAdV-8b)QD2016株感染的抗病毒效果。在体外抗病毒试验中,重组chIFN-λ在LMH细胞上对GX2013株和QD2016株的抗病毒效价分别达到1.33×10~6,1.78×10~6 U/mL。在体内抗FAdV-4感染试验中,重组chIFN-λ治疗组在攻毒5 d后试验鸡存活率达60%,而未进行治疗的对照组3 d内死亡率为100%。在体内抗FAdV-8b感染试验中,重组chIFN-λ治疗组和非治疗组试验鸡均无明显临床症状,但治疗组在攻毒5 d后呼吸道和消化道排毒水平均低于未治疗组,且差异极显著(P<0.01)。上述结果表明重组chIFN-λ作为一种新型的生物制剂,有望在禽腺病毒感染防控中发挥重要的作用。

    2020年07期 v.40;No.283 1302-1305页 [查看摘要][在线阅读][下载 336K]
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  • 牛冠状病毒、牛诺如病毒和牛嵴病毒多重PCR检测方法的建立及初步应用

    王文佳;徐照学;兰亚莉;师志海;

    为建立能同时检测牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)、牛诺如病毒(bovine norovirus,BNoV)和牛嵴病毒(bovine kobuvirus,BKV)的方法,根据BCoV、BNoV和BKV基因组的保守区域设计3对特异性引物,预期特异性扩增BCoV、BNoV和BKV的片段大小分别为896,542,216 bp,建立了BCoV、BNoV和BKV的多重PCR检测方法。特异性检测结果显示,该方法能特异性扩增BCoV、BNoV和BKV的目的条带,且未扩增出其他犊牛腹泻(calf diarrhea,CD)病原;BCoV、BNoV和BKV的最低检测限分别为9.51×10~5,5.39×10~5,2.23×10~6 copies/μL。对采集自河南部分地区的127份CD样品的检测结果显示,BCoV的阳性率为14.96%(19/127),BNoV的阳性率为6.30%(8/127),BKV的阳性率为4.72%(6/127),三者与单一PCR检测结果相一致。结果表明,本研究建立的多重PCR方法可用于BCoV、BNoV和BKV的检测和流行病学调查。

    2020年07期 v.40;No.283 1306-1310+1355页 [查看摘要][在线阅读][下载 783K]
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  • 鸭疫里默杆菌表型相关基因在重庆、四川分离株中的分布及遗传多样性分析

    高继业;黎容红;黄伟;李德龙;陈思怀;陈学情;

    为研究鸭疫里默杆菌(R.anatipestifer)表型相关基因在四川、重庆地区分离株中的分布及遗传多样性,探讨其致病力发生差异的分子基础及可能机制,以分离自鸭、鹅的22株鸭疫里默杆菌为对象,采用PCR方法检测细胞壁相关水解酶(CWAH)、转录调节子(TR)、类脂A生物合成酰基转移酶(Lipid A)、插入元素蛋白IS1转座(IS1)、双组份转录调控因子(TCTR)、转录调控因子(LuxR1、LuxR2)、酰基-CoA还原酶(LuxC)、嗜好模块毒素(AMT)、协同溶血素(CAMP)、血凝素(Hema)、三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、外膜蛋白A(OmpA)、热休克蛋白类似物(GroEL)、Ton依赖识别受体(TbdR1、TbdR2)、滑动性运动蛋白J(GldJ)、铁限制性依赖受体(DtxR)共计18个蛋白编码基因在分离菌株中的分布,并对阳性扩增基因进行测序和遗传多样性分析。使用CLC Genomics Workbench 6.5进行二代数据的基因组测序和拼接,将获得的血清Ⅰ型菌株RS、RC和血清Ⅱ型菌株RA的全基因组序列与GenBank登录序列进行比对分析。PCR检测结果显示,22个菌株均检测到OmpA、Lipid A、Hema、CAMP、TbdR1、TbdR2、DtxR的编码基因,鹅源分离株中未能检测到CWAH、AMT基因,而非致病性菌株DX1、YC1、YC2未能检测到LuxR1、LuxR2、GroEL、AMT、GAPDH基因。全基因组测序结果显示,RA、RC、RS菌株的基因组大小分别为2 129 862,2 172 619,2 067 830 bp,G+C含量分别为35.03%,35.09%,34.96%,蛋白编码基因数量分别为2 022,2 057,1 923。遗传多样性分析结果显示,阳性扩增基因序列与标准菌株ATCC1848相对应的序列的同源性均在93%以上,其中TCTR、GroEL、LuxR1、IS1、DtxR、TR、TbdR1、TbdR2基因在阳性菌株中的同源性均在96%以上,而CAMP、Hema基因则存在较强的遗传多样性;3株非致病菌株DX1、YC1、YC2的OmpA、LipidA、Hema、CAMP、TbdR1、TbdR2、DtxR基因与其他菌株的同源性均在95%以上。全基因组序列比对分析显示,血清Ⅰ型菌株RC与CH3、RA-CH-1处于同一分支,血清Ⅱ型菌株RA、RS与RA-GD、RA-SG、RA-YM、ATCC11845菌株属于同一分支,同为血清Ⅱ型的RA、RS RA-CH-2菌株处于不同的遗传节点上。以上研究结果表明,鸭疫里默杆菌基因组存在遗传学多样性,OmpA、CAMP为鸭疫里默杆菌的非必需毒力因子,且某些优势血清型表型基因在鸭疫里默杆菌群体中发生了缺失,推测鸭疫里默杆菌的毒力因子间可能存在协同作用和网络调控。

    2020年07期 v.40;No.283 1311-1318页 [查看摘要][在线阅读][下载 607K]
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  • 过表达TPL2蛋白PK-15细胞系的建立及其功能验证

    郝军红;闫鸣昊;张大俊;张学刚;申超超;徐国伟;李国丽;张克山;郑海学;刘湘涛;

    通过基因合成的TPL2(tumor progression locus 2)质粒,获得稳定表达TPL2的PK-15/TPL2细胞系。将慢病毒载体Lv-PCDH和TPL2(Pig)重组慢病毒载体Lv-TPL2(Pig)利用转染试剂将其转染至PK-15细胞。感染48 h后,加入嘌呤霉素进行药物筛选,通过筛选得到的阳性细胞株PK-15/TPL2即为稳定表达TPL2蛋白的PK-15细胞株。通过qRT-PCR法和琼脂糖凝胶电泳、IFA,TCID_(50)技术验证PK-15/TPL2细胞系和对口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)和猪塞内加谷病毒(seneca valley virus,SVV)病原复制的影响。结果显示,细胞表达大量的TPL2的基因产物,用FMDV、SVV病毒感染稳定表达TPL2的PK-15细胞株时,明显抑制病毒的复制。结果表明,利用该技术可高效快速地建立了稳定高表达TPL2的PK-15细胞系,该细胞株的建立为病毒的分离及TPL2的生物学活性研究奠定理论基础。

    2020年07期 v.40;No.283 1319-1324页 [查看摘要][在线阅读][下载 1422K]
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  • 仔猪肺、肠组织离体感染模型的建立及应用

    黄石磊;谢录异;余秋寒;冉玲;杨洋;王凯;宋振辉;

    目前,病毒的研究多局限于细胞水平,精密组织切片(Precision-cut tissue slices,PCTS)与细胞水平相比不仅能够比较完整的保存正常组织结构、细胞间的联系及细胞极性,而且也能保证切片的生存能力,使其能够最大限度地模拟在体状态,为病毒的深入研究带来福音。本研究通过制备仔猪肺、肠的离体感染模型,并对离体模型的可行性进行验证,采用ATP检测试剂盒验证切片活性,并对其感染猪流行腹泻病毒(porcine epidemic diahorrea virus,PEDV) CV777和猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)GFP,进行RT-PCR检测和免疫荧光分析,结果显示小肠精密切片活性较好,维持在48 h左右,且能成功感染PEDV CV777和TGEV GFP,通过将肺脏气道内填充1.5%的低熔点琼脂糖,然后转移至切片机制作仔猪肺精密切片,观察气道上皮细胞纤毛活力,同时感染猪呼吸道冠状病毒(porcine respiratory coronavirus,PRCoV)后,进行RT-PCR检测和免疫荧光分析,结果显示肺精密切片生存力能够维持5 d左右,PRCoV成功感染肺精密切片且分布于气道上皮细胞周围,且病毒感染组纤毛活力比正常组下降快,结果表明,肺切片纤毛活性可作为病毒感染的重要评价指标。该研究可为模拟体内感染试验的离体模型提供理论依据,也为防制PEDV、TGEV、PRCoV提供新方法。

    2020年07期 v.40;No.283 1325-1333页 [查看摘要][在线阅读][下载 7162K]
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人兽共患病

  • 马抗天花病毒免疫球蛋白F(ab′)_2的制备及免疫防护效果评价

    闫莉;李敏;刘媛;杨晓岚;谷宏婧;范铁炯;张志平;闫芳;赵忠鹏;

    采用鸡胚成纤维原代细胞培养痘苗病毒天坛株抗原,甲醛灭活后,利用密度梯度离心法和层析法两步纯化抗原,加入等量ISA206佐剂充分乳化,免疫健康马匹,当中和抗体效价达1∶3 200时,采血,分离血清,按照免疫球蛋白F(ab′)_2生产工艺制备治疗性抗体成品,并对其进行中和抗体效价、防护效力、安全性检测。结果显示,鸡胚成纤维原代细胞培养痘苗病毒天坛株滴度均在1.0×10~7 PFU/mL以上;纯化的抗原纯度在90%以上;纯化的F(ab′)_2成品,纯度在90%以上,中和抗体效价超过1∶3 200,有很好的免疫防护效力,安全性符合现行《中国药典》要求。结果表明,建立了马抗天花病毒免疫球蛋白F(ab′)_2制品生产工艺,制备的成品符合现行《中国药典》要求,为天花治疗提供了新的救命药。

    2020年07期 v.40;No.283 1334-1338页 [查看摘要][在线阅读][下载 696K]
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  • 异牡荆苷作为sortase A抑制剂对小鼠金黄色葡萄球菌肺炎的保护作用

    田莉莉;母丹;王莉;王铁东;王大成;高丰;王琳;

    sortase A (SrtA)是一种重要的毒力决定因子,负责将多种毒力相关蛋白锚定在金黄色葡萄球菌(S.aureus)的细胞表面,在其致病过程中发挥重要作用,是开发抗金黄色葡萄球菌毒力药物的理想靶点。本研究首先通过荧光共振能量转移试验发现异牡荆苷是SrtA的可逆抑制剂;又利用细胞侵袭试验证明异牡荆苷能够显著抑制金黄色葡萄球菌对A549细胞的内化作用;最后考察了异牡荆苷对小鼠肺炎的保护作用,发现异牡荆苷能明显减轻金黄色葡萄球菌感染性肺炎小鼠肺组织的病理损伤和炎症反应,减少肺部载菌量,显著提高小鼠存活率。以上结果表明,异牡荆苷能够通过抑制毒力因子SrtA对金黄色葡萄球菌引起的小鼠肺炎起到保护作用,是一种很有前景的抗金黄色葡萄球菌毒力活性化合物,可作为开发治疗金黄色葡萄球菌感染药物的先导化合物。

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  • 宁夏部分地区奶牛犊牛隐孢子虫感染情况调查

    高海慧;施安;张立强;厉龙;王培柱;吴学青;康晓冬;

    为了解宁夏地区犊牛隐孢子虫的感染情况,从3个市8个规模化奶牛场采集272份犊牛粪便样品,利用巢氏PCR技术对18S rRNA基因位点进行检测和分析。结果显示,隐孢子虫的总感染率为12.88%,银川市隐孢子虫感染率为16.89%,吴忠市隐孢子虫感染率为6.94%,石嘴山市隐孢子虫感染率为9.62%,三者差异不显著(P>0.05),断奶前、后感染率分别为14.14%,12.14%。序列处理分析发现3种隐孢子虫,分别为牛隐孢子虫(Cryptosporidium bovis,C.bovis)、瑞氏隐孢子虫(Cryptosporidium ryanae,C.ryanae)和微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,C.parvum),其中C.bovis分离率最高(54.29%)。研究表明这些地区犊牛隐孢子虫感染比较普遍,且感染的虫种有3种,其为深入了解宁夏部分地区隐孢子虫的分子流行情况提供了参考数据。

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  • 河北省貉子毛滴虫感染情况调查及超微结构观察

    柳佳;梅汝蕃;李永秀;潘素敏;杜义明;陈丽凤;史秋梅;张西臣;刘璐;王秋悦;

    为了调查河北省貉子毛滴虫病的感染情况,本研究采用直接镜检法对2015年6月—2017年8月采集的680个患腹泻病貉子样品进行毛滴虫检测,并采用了瑞士染色,以及扫描电镜和透射电镜对其形态特征进行超微结构观察。结果显示患腹泻病貉子普遍存在毛滴虫感染,共检测腹泻貉子680只,毛滴虫感染率为54%(364/680),以夏秋季季节感染为主,其中2月龄以下貉子毛滴虫感染较为严重,阳性率为59.4%(199/335)。形态学观察结果表明,貉子体内的毛滴虫具有4根前鞭毛和1根独立鞭毛,为人五毛滴虫形态结构,表明貉子毛滴虫病由人体内的毛滴虫感染所致。该研究为河北省貉子毛滴虫病的防治提供重要参考依据。

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  • 小鼠感染Chinese1型弓形虫慢性期中枢神经系统的损伤和包囊分布研究

    郭子璇;苏瑞景;肖传斌;仝宗喜;杨玉荣;

    采用虎源TgTigerCHn1(Chinese 1)弓形虫虫株接种小鼠,建立慢性感染模型,探究BALB/c小鼠感染Chinese 1型弓形虫慢性期中枢神经系统的病理损伤和弓形虫包囊的分布特点。采用MAT方法和连续石蜡切片染色法观察分析小鼠感染弓形虫的情况,中枢神经系统损伤和包囊分布、并统计包囊数量。结果显示,小鼠弓形虫慢性感染期中枢神经系统的弓形虫包囊呈现不平均分布的特点,分布在大脑灰质的最多,小脑最少,包囊总数量约达10 700个/只小鼠。病理变化表现为非化脓性脑炎,且与包囊的分布关系密切。结果表明,小鼠感染TgTigerCHn1弓形虫慢性期,中枢神经系统有广泛的病理损伤和炎症反应,推测影响宿主的神经功能。本研究为探讨人和动物慢性弓形虫感染对神经系统的致病机理提供了基础数据。

    2020年07期 v.40;No.283 1356-1360页 [查看摘要][在线阅读][下载 3094K]
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  • 锡兰钩虫谷胱甘肽-S-转移酶基因的克隆表达与免疫原性分析

    杭建雄;黄岳;颜欣欣;刘云秋;赵琪;何龙;冉荣坤;李秀;刘菊枚;李国清;

    为了克隆表达锡兰钩虫谷胱甘肽-S-转移酶(Ace-GST)基因,制备多克隆抗体并分析其免疫原性,为疫苗候选分子的筛选奠定基础。根据GenBank上锡兰钩虫GST基因序列设计引物,利用RT-PCR法扩增Ace-GST基因,将扩增产物克隆至pET-32a载体并转入E.coli BL21(DE3)宿主菌表达,重组蛋白纯化后免疫昆明小鼠,分别用间接ELISA法和MTT法检测免疫鼠血清IgG抗体水平与脾淋巴细胞增殖情况。结果显示Ace-GST基因ORF全长468 bp,编码155个氨基酸,与ν类GSTs聚为同一分支;重组Ace-GST相对分子质量为36 000,可诱导产生特异性IgG抗体,并能显著刺激免疫小鼠脾淋巴细胞增殖。结果表明重组Ace-GST蛋白能诱导昆明小鼠产生特异性免疫应答,具有良好的免疫原性。

    2020年07期 v.40;No.283 1361-1365页 [查看摘要][在线阅读][下载 609K]
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简讯

  • 更正

    <正>本刊第40卷第5期947-952页论文《厚朴酚调节TLR2和NF-κB位点对猪链球菌2型诱导巨噬细胞炎症反应的影响》中所标注的基金项目"辽宁省科技厅自然科学基金指导计划项目"未注明项目编号,现更正为"2019年度辽宁省科技厅自然科学基金计划指导计划

    2020年07期 v.40;No.283 1365页 [查看摘要][在线阅读][下载 48K]
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  • 中国畜牧兽医核心期刊表

    <正>~~

    2020年07期 v.40;No.283 1434页 [查看摘要][在线阅读][下载 149K]
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基础兽医学

  • 糖尿病和心血管病相关的重要靶点基因PPARγ过表达转基因克隆猪模型的建立

    吴彩霞;刘朝明;颜泉梅;张全军;欧阳振;赵宇;樊娜娜;赖良学;

    动物模型是科学研究不可缺少的工具,特别是对于人类疾病相关的研究,受到取材和伦理道德的限制,很多研究无法直接在人体中进行,必须首先依靠动物模型进行广泛的试验和评估。猪的心血管系统在结构和功能上与人类非常相似,例如脉搏,在静息状态下,人的脉搏每分钟60~90次,猪的则为65~80次。猪的动脉循环系统几乎是人的动脉循环系统的复制品。目前,以猪作为动物模型来研究动脉粥样硬化和心肌梗塞等心血管疾病,是猪作为人类疾病模型应用最为成功的范例之一。PPARγ是噻唑烷二酮类药物的靶点,科学家们利用小鼠的研究结果表明,噻唑烷二酮类药物在治疗糖尿病的同时对心血管系统也有保护作用,但由于小鼠心血管系统与人类相差甚远,使得小鼠的研究结果与近年临床上观察到的病人心脏毒副作用不一致。因此,科学家们急需建立与人类更为接近的大动物模型来研究糖尿病及其心血管并发症,由于猪的心血管系统与人类接近,猪成为理想的研究糖尿病和心血管疾病的动物模型。我们共计构建了1 100枚重构胚胎,分别移植到5头受体猪内,经B超鉴定3头怀孕,共计出生8头猪,经PCR鉴定8头全为阳性猪模型。结果表明我们利用体细胞核移植技术成功建立了糖尿病和心血管病相关的重要靶点基因PPARγ过表达转基因克隆猪模型。

    2020年07期 v.40;No.283 1366-1371页 [查看摘要][在线阅读][下载 1433K]
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  • 奶牛子宫组织a-7nAChR介导LPS上调PGE_2合成抑制效应

    阿如娜;杨超;陈灰;魏泓毓;刘科;贺鹏飞;

    产后奶牛子宫内膜炎是我国奶牛养殖业高发病之一,因此开发防治子宫内膜炎的药物及筛选药物靶点是当前研究热点。前期研究表明,脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)可明显促进奶牛子宫组织前列腺素E_2(PGE_2)合成, PGE_2是炎症反应中疼痛和发热的重要介质,抑制PGE_2合成可有效控制炎症损伤。在多种组织中激动α-7烟碱乙酰胆碱受体(α-7 nicotinic acetylcholine receptor,α-7 nAChR)具有抗炎效应,但是否通过PGE_2合成途径发挥抗炎作用尚有争议。本研究目的在于调查在LPS刺激奶牛子宫内膜组织中,α-7nAChR能否调控PGE_2合成。结果表明,LPS刺激子宫内膜组织12 h IL-6 mRNA表达量最高,因此作本研究炎症模型最佳LPS作用时间;α-7nAChR特异性激动剂PNU-282987 5,10和15μmol/L浓度下可显著抑制环氧合酶-2(cyclooxygenase 2,COX-2)和微粒体前列腺素E合成酶-1(Microsomal prostaglandin E synthase-1,m PGES-1)mRNA和蛋白表达及PGE_2分泌,该抑制效应可被α-7nAChR特异性抑制剂甲基牛扁碱(MLA)逆转。上述结果表明奶牛子宫内膜组织α-7nAChR可抑制LPS上调PGE_2合成效应,是防治奶牛子宫内膜炎潜在的药物靶点。

    2020年07期 v.40;No.283 1372-1377页 [查看摘要][在线阅读][下载 579K]
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  • 慢性冷应激对放牧西门塔尔母牛免疫功能、抗氧化功能及血清激素分泌的影响

    陈浩;敖日格乐;王纯洁;斯木吉德;阿日查;张剑;刘波;

    为研究慢性冷应激对西门塔尔母牛免疫功能、抗氧化功能及血清激素分泌的影响,选取在内蒙古锡林郭勒草原体况相近,体质健康的全年放牧西门塔尔牛母牛各8头,并于试验期最后1 d清晨进行颈静脉采血并制备血清,采用ELISA方法检测血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素释放激素(ACTH)、促甲状腺激素(TSH)、生长激素(GH)、糖皮质激素(GC)、葡萄糖(GLU)及尿素氮(BUN)的含量。结果表明冷应激对西门塔尔母牛产生了较强的应激:与非应激期相比,冷应激状态下西门塔尔母牛血液中的T3、T4、ACTH、GC及GLU等血清激素分泌显著升高(P<0.05),GH含量显著下降(P<0.05),TSH及BUN含量差异不显著(P>0.05);冷应激引起西门塔尔母牛血清中IL-2、IL-4、IgA、IgG和T-AOC含量显著降低(P<0.05),MDA含量显著升高(P<0.05),但IgM和SOD含量差异不显著(P>0.05)。综上,冬季低温环境对西门塔尔母牛造成了较严重应激,HPA轴被激活,机体产热增加以抵抗低温应激;在低温应激刺激下,西门塔尔母牛免疫功能和抗氧化功能遭受严重破坏,说明西门塔尔牛对内蒙古草原冬季低温环境适应能力不足。

    2020年07期 v.40;No.283 1378-1383页 [查看摘要][在线阅读][下载 142K]
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临床兽医学

  • 梭状芽孢杆菌对DON处理生长猪肠道屏障和菌群区系的影响

    杨婉莹;陈红菊;袁学军;王鹏巍;黄丽波;王春阳;

    旨在研究添加梭状芽孢杆菌(Clostridium)对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)处理生长猪肠道屏障和菌群区系的影响,为DON生物解霉的研究提供基础。选取了24头4月龄,平均体质量为(55.58±1.83)kg的健康PIC父母代生长猪,随机分为3组,每组8个重复,每个重复1头。分别饲喂基础日粮(对照组)、5 mg/kg DON污染日粮(DON组)、添加Clostridium菌液(15 mL·kg~(-1)·d~(-1))的污染日粮(DON+C组)。预饲期7 d,正试期28 d。电镜扫描结果显示,DON能引起生长猪肠道屏障,特别是回肠绒毛的严重损伤,添加Clostridium后,肠道损伤减弱;16S rRNA结果表明,DON能导致回肠菌群区系的显著变化,而添加Clostridium后,其能在猪后段肠段中定植,维持肠道菌群的相对稳定。结果表明,Clostridium能够保护DON处理猪的肠道屏障及菌群结构。

    2020年07期 v.40;No.283 1384-1390页 [查看摘要][在线阅读][下载 3659K]
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  • 不同纤维源日粮下东北梅花鹿瘤胃微生物功能基因的宏基因组分析

    张辉;丛立新;魏园;赵晨旭;刘国文;

    为了研究不同粗纤维源日粮对梅花鹿瘤胃微生物区系的影响,选择10头健康公鹿分成JG、ZS 2组,每组5头,分别以玉米秸叶和柞树叶作为粗纤维源,试验时期为2个月,提取梅花鹿瘤胃液中微生物总基因,构建文库并测序及基因功能注释分析。结果表明:JG和ZS 2组样本的总碱基数量和总序列数量分别为11150909160和12540742633、75018396和84518090。在JG和ZS 2组样品中约1/2以上的纤维素糖苷水解酶(glycoside hydrolases,GHs)来自于瘤胃球菌属(Ruminococcus)(JG和ZS 2组样品分别为52.79%和51.07%)和纤维杆菌属(Fibrobacter)(JG和ZS 2组样品分别为14.22%和15.49%)。而很大一部分半纤维素酶由Ruminococcus(分别为39.20和37.55%)、普雷沃菌属(Prevotella)(分别为22.68%和20.66%)、Fibrobacter(8.86%,9.48%)、梭状芽孢杆菌属(Clostridium)(2.27%,1.94%)分泌。此外,共有24个GHs家族参与植物细胞壁多糖的降解,其中GH5、GH9、GH45和GH48为降解纤维素的优势酶类,GH8、GH10、GH11、GH26、GH28、GH51、GH53、GH78对于半纤维素降解起重要作用,而对于寡糖降解起主要作用的有GH1、GH2、GH3、GH43和GH94。结论:当饲喂粗纤维较多玉米叶时,以降解纤维素为主的纤维降解酶的比例升高,而寡糖降解酶在瘤胃中的比例降低;当饲喂含丰富可发酵碳水化合物的柞树叶时,结果相反。

    2020年07期 v.40;No.283 1391-1396页 [查看摘要][在线阅读][下载 1816K]
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动物科学

  • 呕吐毒素脱毒菌对生长猪小肠内Hsp70分布和表达的影响

    董永芳;王金全;陈红菊;杨婉莹;黄丽波;王春阳;

    根据生长性能指标及小肠内Hsp70的蛋白定位及表达量的变化,探讨DON对生长猪小肠的影响以及脱毒菌(sp.WJ106)对DON的脱毒效果,为脱毒菌在养猪生产中的应用提供理论依据。本试验选择4月龄24头体质量为(55.58±1.83) kg的健康PIC父母代生长猪为研究对象,随机分为3组(n=8)。对照组饲喂基础日粮,DON组饲喂基础日粮+5.0 mg/kg DON,DON+脱毒菌组饲喂DON组日粮+15 mL/kg脱毒菌,预试期7 d,正试期28 d,试验结束取十二指肠、空肠和回肠。结果表明:DON组的平均日增质量下降(P<0.05),但平均日采食量的升高,生产性能下降,添加脱毒菌之后,平均日增质量增加(P<0.05),生产性能提高。Hsp70表达量显示与对照组相比DON引起了小肠黏膜上皮细胞及小肠腺内Hsp70蛋白表达量的异常增多,其中十二指肠尤为显著(P<0.05),脱毒菌的添加,十二指肠的绒毛上皮阳性反应较DON组减弱尤为明显,空肠及回肠的Hsp70的蛋白量也呈下降趋势。本试验条件下,脱毒菌可在一定程度上减少DON对肠道的刺激,从而正向调节了Hsp70蛋白的异常表达。

    2020年07期 v.40;No.283 1397-1403页 [查看摘要][在线阅读][下载 4716K]
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  • 鸡前等级卵泡中RAC1基因的表达

    秦宁;

    为探讨RAC1基因在鸡前等级卵泡的表达特性及定位,本试验以海兰褐蛋鸡为供试材料,采用半定量RT-PCR方法对RAC1基因在鸡前等级卵泡组织中的mRNA表达水平进行测定分析,并进一步采用免疫组化的方法对RAC1蛋白在前等级卵泡的表达模式进行蛋白质定位研究。结果表明,RAC1基因在鸡不同直径的前等级卵泡内均有表达,但表达丰度存在一定的差异,在直径6~8 mm卵泡中相对表达量显著高于直径4~5.9,1~3.9 mm的卵泡(P<0.05);RAC1蛋白主要在卵母细胞、颗粒细胞和膜层细胞中表达,且主要分布在细胞质中,为进一步研究RAC1在鸡前等级卵泡发育中的作用提供了理论基础。

    2020年07期 v.40;No.283 1404-1408页 [查看摘要][在线阅读][下载 1247K]
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  • 延边黄牛FABP4基因组织表达及基因多态性分析

    尹宝珍;邵静;焦石;殷成港;夏广军;

    为了解FABP4基因在延边黄牛各组织中的表达特征,深入探讨FABP4基因在肌内脂肪沉积中的作用以及该基因是否可以作为延边黄牛肉质性状的候选基因。本研究运用实时荧光定量PCR方法检测延边黄牛不同组织FABP4基因的表达水平及其与肌内脂肪沉积的相关性;同时运用直接测序和PCR-RFLP技术对FABP4基因的SNPs位点进行检测,并与延边黄牛肉质性状进行相关性分析。结果显示FABP4基因在延边黄牛肾脏、肺脏、心脏、脾脏、肝脏、后腿肌及背最长肌中均有表达,其中心脏中的表达量最高,肾脏中的表达量最低。在心脏中的表达量极显著高于脾脏、后腿肌、肺脏、肝脏、肾脏组织(P<0.01)。背最长肌中FABP4基因表达量与肌内脂肪(IMF)含量呈极显著正相关(P<0.01),相关系数为0.994。后腿肌组织中FABP4基因表达量与IMF含量呈显著正相关(P<0.05),相关系数为0.952。在FABP4基因中存在呈现中度多态的g.3691 G>A位点,该位点GG基因型的水分含量显著高于GA和AA基因型,GA基因型的脂肪含量显著高于GG和AA基因型,GG和AA基因型的蛋白含量显著高于GA基因型。研究结果提示,FABP4基因参与延边黄牛肌内脂肪沉积调控,可以作为延边黄牛肉质性状的候选基因。

    2020年07期 v.40;No.283 1409-1414页 [查看摘要][在线阅读][下载 1160K]
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综述

  • 我国猪繁殖和呼吸综合征流行及疫苗现状

    侯谦;代军飞;张杰;

    猪繁殖和呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种发病迅速、高度传染的病毒性传染病。自20世纪90年代在我国发现以后,逐渐广泛流行,不同毒株也相继分离报道。21世纪初的高致病性变异毒株的出现,更是席卷全国各地。各个品种,不同年龄,不同用途的猪只均可感染。随后毒株NADC30-like的出现,增加了猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的多样性。并且PRRSV高基因性的突变和不同毒株间相互重组导致新的变异毒株频繁出现。现有商用疫苗不能提供足够的保护力,给养猪业造成了巨大的损失。因此针对我国的猪繁殖和呼吸综合征流行现状进行综述,为进一步做好该病的防控提供参考。

    2020年07期 v.40;No.283 1415-1419页 [查看摘要][在线阅读][下载 130K]
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  • 牛疱疹病毒1型诱发牛呼吸道综合征的研究进展

    柳翠翠;于秀剑;杜万年;刘勃兴;张志强;吴同垒;史秋梅;

    牛疱疹病毒1型(BHV-1)感染牛可导致上呼吸道疾病、结膜炎、生殖疾病和免疫抑制。BHV-1诱导的免疫抑制引起了牛呼吸系统疾病(BRDC)。BHV-1至少编码3个可以抑制免疫系统的特定蛋白:1.hICP0抑制干扰素依赖性转录。2.UL41.5蛋白通过防止病毒多肽转运到细胞表面抑制CD8~+T细胞识别的感染细胞。3.糖蛋白G是一种化学激酶结合蛋白,可以防止淋巴细胞回到感染的部位。在犊牛急性感染后,BHV-1也可感染和诱导CD4~+T细胞的高水平凋亡。因此,BHV-1损害免疫反应的能力可导致BRDC。急性感染后,BHV-1在三叉神经节感觉神经元(TG)和咽扁桃体生发中心建立潜伏期。BHV-1从潜伏期周期性地重新激活,病毒脱落,从而发生病毒传播。潜伏期相关基因和ORF-E两种病毒基因在潜伏期大量表达,说明它们调控着潜伏期再活化周期。BHV-1能够进入受纳细胞,感染感觉神经元,促进病毒从感觉神经元向黏膜表面传播,潜伏期的再激活也受几种病毒糖蛋白的调控。本文综述了BHV-1的生物学特性及其与BRDC的关系。

    2020年07期 v.40;No.283 1420-1425页 [查看摘要][在线阅读][下载 144K]
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  • 肉牛亚急性瘤胃酸中毒对瘤胃菌群和瘤胃功能的影响

    卜也;孙芳;武瑞;王建发;赵晓川;

    肉牛强度育肥期间,大量高精料摄入极易诱发亚急性瘤胃酸中毒(SARA)。发生SARA后,瘤胃内环境长时间处于低pH值状态,使瘤胃菌群结构改变,代谢功能异常。革兰阴性菌在过酸环境中裂解释放LPS等有毒代谢物,使瘤胃上皮受损,功能减弱,不同程度影响肉牛生产性能。因此,为了降低SARA对肉牛育肥的影响,对国内外关于SARA的研究进行总结,针对瘤胃内菌群变化、瘤胃内菌群异常代谢、瘤胃上皮细胞表达等方面展开分析,了解SARA发生机制,为开发该病诊断和治疗新方法及后续研究明确方向。

    2020年07期 v.40;No.283 1426-1428页 [查看摘要][在线阅读][下载 100K]
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  • 猪δ冠状病毒基因组学及诊断技术研究进展

    张森;杨伟;汤德元;曾智勇;黄涛;王彬;石远菊;叶丽;郭倩妤;廖少山;

    猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)是引起猪δ冠状病毒病(PDCoVD)的病原,是近年来发现的一种新型的引起猪腹泻等肠道症状的病毒。本文对该病毒基因组学引起的临床症状及诊断方法研究进展进行综述,以期对该病的研究及诊断提供参考。

    2020年07期 v.40;No.283 1429-1432页 [查看摘要][在线阅读][下载 120K]
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