- 林野;刘芳;舒婧妍;李姿;张海涛;张竞;兰云刚;高丰;宋德光;贺文琦;
以猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)重组蛋白N (PHEV-N)为包被抗原,在建立间接ELISA抗体检测方法的基础上,进行了试剂盒组装及初步应用。结果显示,利用该试剂盒检测来自吉林、山东、天津、辽宁和黑龙江等地区部分猪场(前期曾有哺乳期发病仔猪表现神经症状和呕吐等)的血清样品,PHEV抗体阳性率分别为62.56%(127/203),85.96%(153/178),71.11%(96/135),53.74%(79/147),60.75%(113/186)。结果表明,该试剂盒兼具操作简便、快速、高通量等优势,不仅可用于PHEV感染猪群的快速诊断,而且可用于该病的血清学调查。
2020年08期 v.40;No.284 1433-1437页 [查看摘要][在线阅读][下载 321K] [下载次数：238 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 黄超华;史卫军;曹琛福;王潇;花群义;林彦星;陈金顶;
利用原核表达系统表达并纯化获得蓝舌病病毒NS3蛋白。以NS3重组蛋白作为包被抗原,经过对包被浓度、样品稀释度以及二抗工作浓度和作用时间等一系列条件的优化,建立了一种鉴别蓝舌病野毒感染的间接ELISA抗体检测方法。结果显示,该方法的检测灵敏度可达1∶1 280,批内、批间变异系数均小于10%,具有良好的重复性。与商业化的蓝舌病试剂盒对比检测的结果显示,两者的蓝舌病阳性样品符合率为100%,本试验建立的间接ELISA方法可以区分蓝舌病自然感染和疫苗免疫动物。
2020年08期 v.40;No.284 1438-1442页 [查看摘要][在线阅读][下载 859K] [下载次数：183 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 朱沛;孟锦昕;牛保生;姚萍芬;杨恒;朱建波;肖雷;李华春;
为掌握云南省虫媒病毒的流行情况及基因分型,本试验在云南省师宗、江城和芒市设立监控点,对哨兵动物定期采血来监测其血清转阳情况,将阳性样品在BHK上传代以分离病毒,用RT-PCR及MNT鉴定病毒,通过特异性引物扩增分离毒株的Segment2 (Seg-2)及Segment7(Seg-7)基因片段来分析其遗传特性。结果显示,在2014年从师宗监控点分离得到4株帕利亚姆病毒(PALV),经鉴定均为中山病毒(Chuzan virus,CHUV),并掌握了分离株Seg-2及Seg-7基因片段的遗传特征。本试验确认了CHUV在云南省的分离,为进一步掌握CHUV在中国的流行病学、致病性以及疫苗研究奠定良好基础。
2020年08期 v.40;No.284 1443-1448+1467页 [查看摘要][在线阅读][下载 1295K] [下载次数：48 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 陈金龙;黄兴军;郝胜楠;张德普;王金良;沈志强;
为建立山羊副流感病毒3型ELSIA抗体检测方法,利用DNAStar生物信息学软件对山羊副流感病毒3型NP蛋白抗原区域进行预测,利用Primer 6.0软件设计合成1对引物,通过RT-PCR技术扩增到807 bp基因片段,将其连接到原核表达质粒pET28a(+)中,成功表达了相对分子质量约39 000的目的蛋白,以纯化后的蛋白为包被抗原,建立检测山羊副流感病毒3型的ELISA抗体检测方法,并对方法的敏感性、特异性、稳定性进行了验证。结果显示,建立的方法具有敏感性高、特异性强、稳定性好等优点;对送检的745份临床羊血清进行检测,总阳性率为14.5%。本试验建立的间接ELISA检测方法为山羊副流感病毒3型抗体的快速检测及流行病学调查提供了技术支持。
2020年08期 v.40;No.284 1449-1453页 [查看摘要][在线阅读][下载 548K] [下载次数：340 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 万曾培;王征帆;庞旋飞;王凤求;王贵平;李中圣;白挨泉;
对3株(GD1406、FS2015、FJFZ株)变异伪狂犬病病毒(PRV)的gB和gC全基因进行扩增、测序及生物信息学分析,应用微量交叉中和试验分析抗原差异性。基因序列比对结果显示,3株PRV变异株之间gB、gC基因核苷酸和氨基酸同源性分别为99.7%～100.0%和99.6%～100.0%,100.0%和99.0%～100.0%;gB和gC基因系统进化树遗传进化分析显示:系统进化树分为2大支,其中一个大支为国内经典毒株群、2011年后分离的变异毒株群2个小分支所占据的中国毒株群;另一个大支为欧洲分离株和美洲分离株组成的欧美毒株群。微量交叉中和试验结果显示,PRV-Bartha K61高免血清中和PRV-GD1406和PRV-Bartha K61的效价分别为22和53,PRV-GD1406高免血清中和PRV-GD1406和PRV-Bartha K61的效价分别为37和44;PRV-GD1406毒株异源血清中和效价/同源血清中和效价约为0.83,PRV-Bartha K61毒株异源血清中和效价/同源血清中和效价约为0.59;2个毒株(PRV-GD1406、PRV-Bartha K61)间交叉反应程度相关系数R=0.72。
2020年08期 v.40;No.284 1454-1460页 [查看摘要][在线阅读][下载 4228K] [下载次数：246 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 阎武勇;谢鹏;梁健鹏;林秋燕;崔小欣;丁铲;廖明;向斌;任涛;
应用核质分离、Western blot和激光共聚焦等试验方法检测新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)V蛋白在DF-1细胞的亚细胞分布;通过对预测的V蛋白核定位信号(nuclear location signal,NLS)序列进行缺失表达,鉴定V蛋白核定位的关键结构域;通过荧光素酶报告基因试验检测核定位序列对V蛋白拮抗干扰素功能的影响。结果显示,V蛋白主要分布在细胞质,少量分布于细胞核中;NLS-2(~(138)GSPRRASPTSGPTTREPTELWKQPGKTAAP~(167))或NLS-3(~(171)RPWKPGHRREHSISWTMEGVTTISWCNPSC~(200))是V蛋白入核关键结构域,其中V-NLS-2中R141、R142、R152、K159可能为影响其入核的关键氨基酸;NLS-2是影响V蛋白发挥拮抗IFN-β功能的重要结构域。
2020年08期 v.40;No.284 1461-1467页 [查看摘要][在线阅读][下载 2015K] [下载次数：280 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 张会霞;张慧;曹胜亮;李悦;姜胜男;宋一诺;刘思当;
2019年5月份以来,山东省各地蛋鸡场送诊的疑似鸡马立克病(Marek's disease,MD)的临床病例明显增多,为明确诊断并探究其发病原因,本试验采用病理剖检、组织病理学观察、病毒分离鉴定等实验室诊断方法进行综合诊断并对分离毒株的分子生物学特性进行分析。剖检病死鸡的心脏、肝脏、肺脏、肾脏表面均见灰白色肿瘤病灶,脾脏颜色变淡、显著肿大。镜检发现在各器官组织内浸润性生长的肿瘤组织为大小不等的淋巴样瘤细胞并多见核分裂象。分离到3株马立克病病毒(MDV),分别命名为SDHZ1、SDLC1、SDTA1,采用PCR方法扩增分离毒株的Meq、gE及gI基因,并与参考毒株相应序列比对,结果显示分离毒株的Meq基因编码的氨基酸在77E、80Y、115A和176R位点均有相同的氨基酸突变,与中国的参考强毒株GX0101、Js201801相同,且Meq基因编码的氨基酸的176位氨基酸突变(P→R)改变了原有的Pro重复序列,这可能与vvMDV的毒力有关。分离毒株MDVs与已报道的中国毒株的gE和gI基因突变位置相同,具有明显的地域性遗传特点。经过遗传进化分析,分离株MDVs与GX0101的同源性最高,属血清1型MDV且极有可能是超强毒株。但MDV分离株的致病性及鸡群免疫失败的原因有待于进一步研究探讨。
2020年08期 v.40;No.284 1468-1473+1490页 [查看摘要][在线阅读][下载 4639K] [下载次数：163 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 张召兴;李佩国;张海龙;李蕴玉;张香斋;贾青辉;张建文;
试验采用三重PCR法、结晶紫微孔板法和K-B药敏纸片法对分离自河北地区的120株蛋鸡源大肠杆菌分离株的系统进化分群、耐药性及生物被膜形成能力进行检测。结果显示,120株大肠杆菌中属于A群9株(7.5%),B1群24株(20%),B2群64株(53.3%),D群23株(27.5%),以B2+D群流行为主;120株大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢曲松等8种药物耐药率为45.8%～93.3%,其他药物的耐药率为15.0%～43.3%; B2+D群的大肠杆菌分离株对氨苄西林、阿莫西林、头孢曲松等12种药物的耐药率均高于A+B1群;120株大肠杆菌中强形成膜能力的菌株有58株(48.3%)、中形成膜能力的菌株有29株(24.3%)、弱形成膜能力的菌株有24株(20.0%)、不形成BF菌株的有9株(7.5%),BF形成能力强、中的菌株多属于B2群和D群;120株大肠杆菌分离株的BF形成能力与14种抗生素耐药性的符合率在73.7%以上。结果表明,120株蛋鸡源大肠杆菌的分子分群、耐药性及生物被膜形成能力之间存在一定的相关性。
2020年08期 v.40;No.284 1474-1478页 [查看摘要][在线阅读][下载 229K] [下载次数：375 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：17 ] |[阅读次数：0 ] - 杨怡;张红丽;周静茹;陈学秋;杜爱芳;
为研究宿主感染捻转血矛线虫的早期免疫应答,本试验使用细胞小室建立了捻转血矛线虫-胃癌细胞气液界面共培养系统。捻转血矛线虫在共培养系统中以弦运动和圆运动的方式生活。细胞远红外荧光染色结果显示,线虫以细胞蛋白为食维持基本营养,进食的方式可能为叮咬胃癌细胞后吸食。脱鞘幼虫在体外培养系统中生长发育速度缓慢,共培养0,4,7 d时的虫体长度分别为(981.5±24.3),(1 113.9±24.4),(1 157.0±47.6)μm,其中7 d时与宿主感染4 d体内的虫体大小相似。捻转血矛线虫和细胞在共培养系统中互相胁迫,随着共培养时间的增加,线虫呈现活力下降和蜷缩状的生理状态,同时贴壁细胞逐渐从胶原板脱落并进入坏死状态。相较于共培养0 d时,共培养4 d时胃癌细胞(MGC)坏死的比例由12.91%增加到53.25%,胃腺癌细胞(BGC)坏死的比例由2.63%增加到24.81%。线虫还能诱导细胞表达大量的IL-33,MGC与线虫共培养4,7 d时IL-33的表达量分别上升至共培养0 d时的2.520,4.180倍;BGC与线虫共培养4,7 d时IL-33的表达量分别上升至共培养0 d时的1.732,5.150倍,这与宿主早期感染时IL-33的高表达一致。本试验为阐明捻转血矛线虫早期感染时宿主的免疫应答分子机制提供了新方法。
2020年08期 v.40;No.284 1479-1484+1584页 [查看摘要][在线阅读][下载 5888K] [下载次数：111 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 杨学财;常凡凡;赵天宇;刘新宇;王峰;王波波;蔡葵蒸;
在体外试验中评估7株当地分离的食线虫真菌奇妙单顶孢菌(Monacrosporium thaumasium)对捻转血矛线虫感染性幼虫(L3)的捕食能力。取2 mL试验菌株的菌悬液加入含有10 g捻转血矛线虫虫卵的粪便中作为试验组,对照组中不加真菌,然后进行粪便培养、L3分离和计数,计算L3的平均数和百分减少率。选择NBS063分离株灌服感染有捻转血矛线虫的绵羊,收集灌服后0 h(对照组)、12～96 h不同时间点的粪便(试验组),经粪便培养后,计算L3百分减少率。结果显示,7株当地分离株在与绵羊粪便中发育的幼虫相互作用后,与对照组相比,试验组粪便培养后所分离的L3显著减少(P<0.05),它们对粪便中L3的减少率为89.21%～99.86%。NBS063灌服绵羊后,分别在灌服真菌后12,24,36,48,72,96 h对L3的减少率是85.18%,95.26%,94.82%,53.60%,29.49%和15.06%。7株奇妙单顶孢菌当地分离株具有将来应用于动物寄生线虫病生物防治中的潜力。
2020年08期 v.40;No.284 1485-1490页 [查看摘要][在线阅读][下载 258K] [下载次数：174 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ]
- 易华山;马鲜平;赵瑶;廖启超;朱飘;张云珍;王艳;邓艳红;郑凯;陈忠琼;梁望旺;谢远兵;
无菌采集重庆市某奶牛场乳房炎患牛奶样,利用MYP选择培养基无菌分离培养得到1株疑似蜡样芽孢杆菌的纯培养物,利用全自动微生物鉴定系统、16S rRNA、KB法药敏试验、MLST分型和PCR扩增hblA、hblC、hblD、nheA、nheB、nheC、cytK、entFM、Ces毒力基因及测序,并通过测定小鼠LD_(50),血清ALT、AST、LDH和ALP活性,肝脏组织SOD、MDA、GSH-Px水平及病变组织病理组织学观察进行分析鉴定。结果显示,分离株在甘露醇卵黄多黏菌素琼脂(MYP)平板上,形成周围有白色至淡粉红色的菌落,在蜡样芽孢杆菌显色培养基上形成具有白色光晕的蓝色菌落,革兰染色阳性。全自动微生物鉴定系统鉴定为蜡样芽孢杆菌,鉴定可信度为99.9%,典型度为132 (典型)。16S rRNA序列与与韩国(FJ982661.1)、美国(NZ_JURK01000037.1)、斯里兰卡(MG827268.1)、马来西亚(MN093796.1)株同源性为100%,同美国奶源分离株(NZ_ASPZ01000016.1)亲缘关系最近。药敏试验结果表明,分离株对青霉素G、红霉素、苯唑西林、四环素、克拉霉素、环丙沙星、左氧氟沙星等极度敏感,对大观霉素、万古霉素、多黏菌素B耐药。该菌株MLST基因型为ST476,与ST1813亲缘关系最近,对扩增相关毒力基因PCR产物测序结果表明,nheA基因片段同日本分离炭疽杆菌(AP019731.1)毒力基因同源性高达96.91%,entFM基因片段同美国蜡样芽孢杆菌(CP001186.1)同源性为97.45%,nheB基因片段同挪威蜡样芽孢杆菌(CP001283.1)同源性高达95.48%。对小鼠的LD_(50)为1.44×10~(10)CFU。ALT、AST、LDH、ALP及MDA显著升高,SOD、GSH-Px含量明显降低。显微观察显示对照组小鼠肝小叶结构正常,攻毒组可见肝脏肿大、充血、质地脆弱、肝索排列紊乱,肝细胞变性坏死等肝损伤特征。本试验从奶牛乳房炎奶样中分离鉴定出1株耐多黏菌素、万古霉素及大观霉素的肠毒素基因型蜡样芽孢杆菌,命名为蜡样芽孢杆菌2018CQ-CMM01。该分离菌对小鼠LD_(50)为1.44×10~(10)CFU,对小鼠具有明显的肝脏毒性,目前暂未发现国内其他地区乳源中有该型蜡样芽孢杆菌报道。
2020年08期 v.40;No.284 1491-1500页 [查看摘要][在线阅读][下载 2267K] [下载次数：469 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 杜万年;王苗;苏硕青;于秀剑;刘勃兴;吴同垒;康元环;史秋梅;张志强;
NmpC是沙门菌编码的外膜蛋白,也是沙门菌诱导体液免疫的主要抗原。为研究沙门菌NmpC蛋白的免疫特性,本试验对沙门菌nmpC基因进行扩增,并将其克隆到pET-28a载体上,利用大肠杆菌表达系统表达重组蛋白rNmpC,进一步将rNmpC免疫小鼠,检测特异性抗体水平;用肠炎沙门菌C50336菌株感染rNmpC免疫小鼠评测其免疫保护效果。结果显示,成功表达和纯化出肠炎沙门菌NmpC重组蛋白,rNmpC大小为38 000;将rNmpC蛋白免疫小鼠,可以刺激小鼠产生高水平特异性抗体;细菌感染试验表明,rNmpC蛋白免疫小鼠可使其产生针对肠炎沙门菌感染的保护力,保护率为70%。本试验证实沙门菌NmpC蛋白的免疫潜力,为进一步研制沙门菌新型疫苗提供了参考。
2020年08期 v.40;No.284 1501-1505页 [查看摘要][在线阅读][下载 1408K] [下载次数：76 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 王刚;赵燕娟;焦新安;潘志明;索朗斯珠;陈祥;
利用细菌的分离鉴定、K-B法和PCR检测方法,对西藏自治区林芝市朗县、昌都市2个地区所分离的33株藏猪源沙门菌的药物敏感性及耐药基因进行了研究。结果显示,共分离得到33株藏猪源沙门菌,其中肠炎沙门菌是优势血清型;33株藏猪源沙门菌分离菌株对氨基糖苷类、酰胺醇类和磺胺类药物均表现出不同程度的耐药,对链霉素耐药率33.33%,对庆大霉素耐药率33.33%,对丁胺卡那耐药率0.00%,对氯霉素耐药率为96.96%,对氟苯尼考耐药率96.96%,对复方新诺明的耐药率为75.75%,同时存在多重耐药现象,耐药基因检测结果与药敏试验结果一致。结果表明,藏猪源沙门菌确实存在,并且分离株表现出不同程度的耐药现象;沙门菌在西藏林芝、昌都均有分布,应引起重视。西藏地区要根据各地实际情况需要加强监测沙门菌引起的腹泻,建立流行毒株预警机制并合理用药。
2020年08期 v.40;No.284 1506-1510页 [查看摘要][在线阅读][下载 396K] [下载次数：227 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 刘佳卉;李子荷;李军伟;张传美;蒋文明;
在散养鹅群中检测到流感病毒,经全基因组测序和遗传进化分析,结果显示该分离株为H5N6亚型流感病毒,其HA基因属于Clade2.3.4.4分支,裂解位点序列符合高致病性禽流感病毒的特性。NP基因与M基因均与人源H5N6亚型同源性最近,提示该分离株可能与人源H5N6亚型流感分离株发生过基因重组,并具有感染人类的潜在风险。对SPF鸡致病性试验结果显示,攻毒组和同居组中的所有鸡均死亡;在肺脏、肝脏、肾脏、脾脏、心脏、脑等组织器官均检测到病毒,表明该分离株对鸡具有高致病性和水平传播能力,这警示应该继续加强对H5N6亚型流感病毒的监视和防控。
2020年08期 v.40;No.284 1511-1514页 [查看摘要][在线阅读][下载 2368K] [下载次数：204 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 张霞;戴鹏秀;高登科;阮晨梅;王璟璐;李佳锴;陈奕静;张露文;张翊华;
构建腺病毒重组表达载体pADTrack-ISL1-AdEasy,经293A细胞的包装和扩增,获得具有感染性的重组腺病毒,将其按感染复数(MOI)=100感染犬脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs),观察感染后4,7,10,13,16 d绿色荧光蛋白表达情况、细胞形态变化和胰岛β细胞发育相关基因的mRNA表达情况。结果显示,含ISL1基因的重组腺病毒感染犬ADSCs 48 h后,绿色荧光蛋白开始表达;13 d后犬ADSCs出现细胞形态变化,由梭形变为神经细胞样;qRT-PCR分析表明在犬ADSCs中过表达ISL1基因提高了PDX1、NGN3、MNX1、MAFA和NKX6.1基因的内源性表达。结果表明,含ISL1基因的重组腺病毒成功感染犬ADSCs,并可促进其向胰岛样前体细胞分化,具有进一步诱导形成胰岛样细胞的可能。
2020年08期 v.40;No.284 1515-1521页 [查看摘要][在线阅读][下载 2786K] [下载次数：132 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李鑫月;徐彬;连帅;陈妍;郎立敏;杨焕民;
为在细胞水平探讨皮质酮(CORT)诱导HT22细胞凋亡的机制,以模拟冷应激过程中机体分泌的糖皮质激素对海马神经元的作用。试验组HT22细胞用500μmol/L CORT处理3 h,对照组不予处理。用CCK8法检测CORT对HT22细胞活力的影响,Annexin/PI流式细胞术检测细胞凋亡率。为了进一步研究CORT引起的海马神经元凋亡是否是由线粒体凋亡通路介导的,用JC-1探针检测线粒体膜电位的变化,免疫蛋白印迹(Western blot)检测凋亡相关蛋白细胞色素c(Cyt-c)、Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达。结果显示,与对照组相比,500μmol/L CORT处理组细胞生存率显著降低,细胞凋亡率显著升高,线粒体膜电位显著下降,Cyt-c、Bax/Bcl-2及活化的Caspase-3表达水平显著升高。结果表明,500μmol/L CORT处理3 h会导致HT22细胞凋亡,并且线粒体凋亡通路在该过程中发挥重要作用。
2020年08期 v.40;No.284 1522-1527+1552页 [查看摘要][在线阅读][下载 2152K] [下载次数：388 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 黄橙;邵珊;郭小权;刘佩;王玲;邹振兴;李谷月;李麟;阮业召;程素芳;陈佳玲;刘平;
克隆构建肉鸡间充质同源盒蛋白2(mesenchyme homeobox,MEOX2)重组质粒pUCm-T-MEOX2,并对其进行生物信息学分析。通过提取肉鸡肺动脉组织基因组RNA,并反转录为cDNA,利用PCR方法扩增MEOX2基因片段,并将目的片段通过TA克隆到pUCm-T载体上获得重组质粒,测序后对其进行生物信息学分析。结果显示,成功获得pUCm-T-MEOX2重组质粒,目的基因片段为819 bp,可编码273个氨基酸,其序列同源性与原鸡无差异;其存在45个磷酸化位点和1个N-糖基化修饰位点;经预测MEOX2蛋白亚细胞定位于细胞核,无信号肽;MEOX2蛋白为亲水性蛋白且无跨膜结构;二级结构预测为α-螺旋、延伸链、β-转角和无规卷曲,分别占22.79%,9.93%,3.68%,63.60%;三级结构主要由无规卷曲和α-螺旋组成;其有11个B细胞抗原表位。本试验结果可为MEOX2基因抗体制备奠定良好的基础,进而为肉鸡腹水综合征的肺动脉血管重构病理检测及基因药物治疗提供有力的依据。
2020年08期 v.40;No.284 1528-1535+1570页 [查看摘要][在线阅读][下载 2377K] [下载次数：188 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 马生妍;周学章;
采用微量稀释法测定月桂酸单甘油酯(GML)对致病性念珠菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC),利用时间-抑菌曲线分析GML对念珠菌的动态抑菌作用;通过XTT法测定GML对生物被膜形成早期1～4 h黏附阶段以及成熟生物被膜的抑制作用;采用Sport assay结合激光共聚焦显微镜检测其对念珠菌生物被膜细胞活性和形态结构的影响,进而显微镜观察不同浓度GML作用不同时间抑制菌丝和芽管生成的程度,以及对生物被膜细胞表面疏水性的影响;最后用分子生物学qRT-PCR检测白色念珠菌生物被膜形成相关基因ALS3、HWP1、ECE1、ERG11及克柔念珠菌ERG11在不同处理组中表达水平的变化。结果显示,GML对克柔念珠菌的MIC为15.625 mg/L,MFC为31.25 mg/L,对白色念珠菌的MIC为250 mg/L,MFC为500 mg/L;GML作用有效延长了真菌生长的延滞期;对不同生长阶段(前、中、成熟期)生物被膜均有显著抑制作用,克柔念珠菌生物被膜的最低黏附抑菌质量浓度(SMIC_(50))为62.5 mg/L,白色念珠菌SMIC_(50)>1 000 mg/L;GML不仅可以抑制生物被膜的形成,还可以破坏成熟生物被膜的维持,有效降低生物被膜的厚度和活力;并且对菌丝的形成及芽管长度具有明显的抑制作用,显著降低生物被膜细胞表面疏水性;白色念株菌ALS3、HWP1、ECE1、ERG11和克柔念珠菌ERG11基因均出现了不同倍数的下调趋势。结果表明,GML对浮游态和生物被膜态白色念珠菌和克柔念珠菌具有较好的抑制作用,尤其对克柔念珠菌抑菌效果明显。GML可以通过降低黏附、形态转换和杀真菌作用来抑制致病性念珠菌生物被膜的形成,还可以破坏成熟生物被膜的维持,有效降低生物被膜的厚度和活力。
2020年08期 v.40;No.284 1536-1545页 [查看摘要][在线阅读][下载 5608K] [下载次数：345 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 王秋菊;王梦竹;崔一喆;贾军峰;
选用体质量相近、日龄接近的21日龄杜长大健康仔猪24头,随机分为4组,每组6头。各组每头仔猪每日添加栀子花粉0.00,1.25,2.50,5.00 g,于饲养第10天的清晨用LPS腹腔注射致炎,注射后0,3,24 h采血分离血清和血液淋巴细胞。结果显示,添加栀子花粉显著降低仔猪的日增重及日采食量(P<0.05)。注射LPS之前,添加栀子花各组NF-κB通路的P65和IκB蛋白表达量显著低于对照组(P<0.05),磷酸化的P-P65和P-IκB蛋白表达量也显著低于对照组(P<0.05);而在注射LPS之后,P65和IκB蛋白表达量与炎症组相比无显著性差异,添加栀子花组的IAP、IKB、磷酸化的P-P65和P-IκB蛋白表达量均显著低于炎症对照组(P<0.05)。同时细胞因子发生相应变化,抗炎细胞因子IL-4和IL-10在添加栀子花组含量显著高于致炎对照组(P<0.05),而添加高剂量栀子花组中的IL-1b、IL-6、IL-8、IL-12和IFN-γ在致炎后含量较炎症对照组显著降低(P<0.05)。结果表明,栀子通过调节炎症通路蛋白表达,抑制炎症产生,并刺激抗炎细胞因子增加和促炎细胞因子减少,起到对LPS诱导仔猪免疫应激的保护作用,为栀子作为抗炎药物或添加剂的应用打下理论基础。
2020年08期 v.40;No.284 1546-1552页 [查看摘要][在线阅读][下载 1468K] [下载次数：213 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 杨敏;姜兴粲;冯海鹏;王磊;张康;庞红红;张景艳;张凯;李建喜;王学智;
培养大鼠源H9C2心肌细胞进行试验,共分为6组,对照组(加入细胞培养液);模型组(10~(-6)mol/L去甲肾上腺干预48 h);卡托普利组与模型组同样处理后,加入卡托普利5 mg/L;五味子醇甲低、中、高剂量组与模型组同样处理后,分别加入五味子醇甲5,10,20 mg/L,作用48 h。通过观察HE染色细胞的形态变化,图像分析系统测定心肌细胞表面积,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33342染色法检测心肌细胞的凋亡率,JC-1法测定线粒体膜电位,Western blot检测CT-I、CT-T、ET-1蛋白表达。结果显示,五味子醇甲可降低心肌细胞凋亡率和提高心肌细胞存活率,对心肌细胞的形态具有改善作用,并下调了CT-1、CT-T、ET-1蛋白表达。结果表明,五味子醇甲对去甲肾上腺素诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,可能通过下调CT-I、CT-T、ET-1蛋白表达,降低炎性反应,减少对心肌细胞的损伤凋亡。
2020年08期 v.40;No.284 1553-1559页 [查看摘要][在线阅读][下载 3558K] [下载次数：286 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 牛春阳;薛琳琳;詹雪龙;徐晶;邵子益;郭景茹;甄莉;计红;李士泽;杨焕民;
试验分别以带有目的基因的重组慢病毒质粒(pSllV-CMV-zsGreen-puro-lncRNA77.2)和3条反义核苷酸质粒转染BRL细胞,根据绿色荧光蛋白(GFP)表达情况评估转染效率;优化过表达慢病毒的最佳感染复数,并通过嘌呤霉素筛选以得到高表达稳转株。应用荧光定量PCR方法检测lncRNA NONRATT021477.2的表达量,验证过表达效果及初步确定干扰效率最高的质粒,并进一步优化ASO质粒的转染浓度和时间曲线。结果显示,重组慢病毒以感染复数(MOI)=4转染BRL细胞48 h时,lncRNA NONRATT021477.2表达量比空病毒NC组极显著升高(P<0.01),过表达效果为17倍,成功获得高表达稳转株;并且确定了干扰质粒ASO-2以250 nmol/L浓度转染BRL细胞24 h时,对靶基因水平的干扰效率最高,为78%。本试验建立了lncRNA NONRATT021477.2过表达和干扰表达质粒转染BRL细胞的最佳条件,为后续深入研究lncRNA NONRATT021477.2的生物学功能奠定基础。
2020年08期 v.40;No.284 1560-1565页 [查看摘要][在线阅读][下载 2525K] [下载次数：148 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 顾晓晓;邬琴;陶乔孝慈;马雪;李劼;周霞;韩猛立;黄新;吴桐忠;张星星;钟发刚;
无菌采集绵羊粪便,采用细菌常规分离鉴定结合16S rRNA PCR扩增的方法分离鉴定大肠杆菌,应用K-B药敏纸片的方法研究分离的大肠杆菌耐药表型及PCR方法检测全部菌株氨基糖苷类耐药基因AadB、AadA1、Aac(3′)-Ⅱ、Aac(6′)-Ⅰb和Aph(3′)-Ⅰ的携带情况。结果显示,共分离100株羊肠道正常菌群大肠杆菌,分离株对链霉素的耐药率最高,为24%,其次是新霉素、丁胺卡那、庆大霉素和卡那霉素,分别为21%,14%,13%,7%;AadA1和Aph(3′)-Ⅰ耐药基因的检出率分别为98%和89%,未检测到AadB、Aac(3′)-Ⅱ和Aac(6′)-Ⅰb基因。结果表明,新疆石河子市羊肠道正常菌群大肠杆菌对氨基糖苷类抗生素具有较为广泛的耐药性,耐药基因主要以AadA1和Aph(3′)-Ⅰ为主,本试验为羊致病性大肠杆菌耐药机理的进一步研究提供有用数据。
2020年08期 v.40;No.284 1566-1570页 [查看摘要][在线阅读][下载 459K] [下载次数：454 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：0 ] - 田莉莉;王莉;李佳欣;王大成;高丰;王琳;
新型头孢类化合物NAC-3是一种甲氧头孢菌素类半合成抗生素,本研究通过测定最低抑菌浓度(MIC)来分析NAC-3的抗菌谱及评价其体外抗菌活性,并进一步通过建立小鼠感染动物模型来评价其对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染小鼠的保护活性。结果显示,NAC-3对临床分离的革兰阳性菌MRSA、甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)、耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)和甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(MSSE)的MIC值分别为32.000～64.000,1.000,1.000～4.000,0.125～1.000 mg/L,与对照药物相比具有较好的体外抗菌活性,但对革兰阴性菌的抑菌作用较弱。NAC-3对另外20株临床分离的金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性测定结果进一步验证其对MRSA和MSSA都具有较好的抗菌活性,且抑菌效果明显优于临床常用的头孢菌素类抗菌药物。同时,还证明NAC-3对MRSA菌株USA300引起的小鼠全身感染能起保护作用,并显著提高小鼠的存活率。结果表明,新型头孢类化合物NAC-3对MRSA菌株体外及体内均表现出良好的抗菌活性,为MRSA的有效防制提供了新的抗生素候选物,对于缓解革兰阳性菌的多重耐药问题提供了新思路。
2020年08期 v.40;No.284 1571-1578页 [查看摘要][在线阅读][下载 183K] [下载次数：120 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 常晓月;余文兰;廖建昭;杨帆;裴若男;杨艳阳;邓纪昌;黄坤玄;唐兆新;
24只大鼠随机分为对照组(Cu 15 mg/kg)、高铜Ⅰ组(Cu 30 mg/kg)和高铜Ⅱ组(Cu 60 mg/kg)并饲喂不同含量的碱式氯化铜日粮。饲喂24周后采集脾脏组织,制作组织切片观察其病理变化,实时荧光定量PCR方法检测NFκB及其相关炎性因子(TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-2和IL-10)mRNA转录水平,免疫印迹检测NFκB、phos-NFκB和IL-1β的蛋白表达水平。结果显示,与对照组相比,高铜Ⅱ组中NFκB、TNF-α、IL-6、IL-2、IL-1βmRNA相对表达量和NFκB、phos-NFκB、IL-1β蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),而IL-10 mRNA相对表达量则显著下降(P<0.05)。结果表明,高铜可诱导大鼠脾脏NFκB信号通路及其相关炎性因子的表达。
2020年08期 v.40;No.284 1579-1584页 [查看摘要][在线阅读][下载 2846K] [下载次数：209 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 陈大伟;马丽娜;刘茵茵;王倩倩;蒲俊华;陆俊贤;葛庆联;唐修君;高玉时;
通过饲料途径对360只42周龄京粉2号商品代蛋鸡进行砷(200 mg/kg)暴露和硫辛酸保护(在饲料中添加砷200 mg/kg和硫辛酸400 mg/kg)试验,为期8周。结果显示,砷暴露引起蛋鸡肾脏肾小球肾炎样病变,小血管扩张充血,肾小管腔内可见不同程度的管形。与对照组比较,肾脏抗氧化酶SOD、GSH-Px活性降低,GSH含量下降,MDA显著升高;砷组钙、硒、锰含量极显著降低,铁、砷含量极显著升高,锌含量显著降低。进一步通过超微结构观察发现,砷暴露引起了肾小管微绒毛断裂,间隙增大,胞浆中溶酶体积聚,部分线粒体嵴断裂、空泡化,染色质边集,基底膜增宽。单独添加硫辛酸仅铁、锌含量极显著降低,硒含量显著升高,其余指标无显著变化。与砷染毒组比较,砷加硫辛酸组肾小球病变减轻,抗氧化酶活性显著回升,GSH含量显著升高,MDA含量显著下降,钙、锌、硒、锰含量显著回升,且砷含量显著降低;超微结构观察发现微绒毛基本完好,染色质均匀,未见溶酶体积聚。砷暴露引起的脂质过氧化损伤及微量元素稳态失衡是砷造成蛋鸡肾毒性损伤的主要机制。硫辛酸通过保护肾脏抗氧化酶活性,减少砷在肾脏中的蓄积并减少微量元素钙、锌、硒、锰的流失,增加铁的排出来缓解砷的毒性损伤。结果表明,硫辛酸对砷暴露引起的蛋鸡肾脏毒性损伤具有一定的保护效应。
2020年08期 v.40;No.284 1585-1589+1664页 [查看摘要][在线阅读][下载 2406K] [下载次数：124 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 鲁文赓;曹立明;许美花;罗英花;原冬伟;徐郑美;刘庆;杜珍珍;司琳清;金吉东;付世新;李婧;申贵男;
采用液相串联质谱法(LC-MS/MS)对酒炙车前子治疗奶牛胎衣不下活性组分Ⅲ和Ⅵ的化学成分进行分析和鉴定。以Hyper gold C18(100.0 mm×2.1 mm,1.9μm)为色谱柱,水(含0.1%甲酸,5%乙腈)-乙腈(含0.1%甲酸)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为40℃;采用ESI离子源,正、负离子模式下采集活性组分Ⅲ和Ⅵ的一级和二级质谱数据。根据碎片离子与精确相对分子质量信息同Metlin、HMDB、MassBank、PubChem数据库比对,活性组分Ⅲ在正、负离子模式下共鉴定31个化合物,主要包括胺类、酰胺类、有机酸、生物碱、苯甲酸盐等化合物;而活性组分Ⅵ在正、负离子模式下鉴定34个化合物,主要包括有机酸、酰胺类、酚类、生物碱、苯甲酸盐等化合物。本试验结果为研制高效、安全和廉价的防治奶牛胎衣不下的中药制剂奠定基础。
2020年08期 v.40;No.284 1590-1597页 [查看摘要][在线阅读][下载 1401K] [下载次数：339 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ]
- 王秀娜;王春旭;高安崇;梁爽;白春艳;孙博兴;
在军牧1号白猪中挑选背膘厚差异极显著(P<0.01)的高背膘(HBF)组和低背膘(LBF)组公猪各5头,对粪便微生物进行16S rRNA高通量测序。结果显示,2组间微生物群落结构存在33.00%的差异;HBF组厚壁菌门和梭菌纲的相对丰度高于LBF组,拟杆菌门和拟杆菌纲的相对丰度低于LBF组,但差异均不显著(P>0.05);HBF组纤维杆菌门、消化球菌属、萨特菌属、考拉杆菌属、多尔菌属和纤维杆菌属序列量显著高于LBF组(P<0.05);HBF组优势属为布雷德菌属、梭菌属和考拉杆菌属。结果表明,高背膘猪的粪便厚壁菌门比例增加,而拟杆菌门比例下降,布雷德菌属、梭菌属和考拉杆菌属为高背膘猪的关键群属。
2020年08期 v.40;No.284 1598-1603页 [查看摘要][在线阅读][下载 1944K] [下载次数：279 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 张美琦;刘桃桃;温媛媛;李树静;高艳霞;李建国;曹玉凤;李秋凤;
本试验旨在研究日粮综合净能(NEmf)水平对体质量500 kg荷斯坦阉牛增重、养分消化率和血液生化指标的影响。选择健康、体况良好、平均体质量为(501.47±40.09) kg的13月龄荷斯坦阉牛60头,采用完全随机设计,试验分为3组,每组20个重复,每个重复1头牛。试验组为低能量组(LE组,5.89 MJ/kg NEmf)、中能量组(ME组,6.10 MJ/kg NEmf)和高能量组(HE组,6.30 MJ/kg NEmf)。各试验组粗蛋白质(CP)水平相同。预试期10 d,正试期87 d。结果显示,提高日粮能量水平对荷斯坦阉牛的平均日增体质量(ADG)无显著性影响(P>0.05),但显著降低料重比(P<0.05)和日粮中干物质、脂肪、中性洗涤纤维的表观消化率(P<0.01);随着日粮能量水平的增加,荷斯坦阉牛血液的GLU和UN无显著性变化(P>0.05),但显著提高了血液中LPL的活性(P<0.05),与LE组相比,ME组LDL含量显著提高(P<0.01),但与HE组无显著性差异(P>0.05);日粮能量水平的增加对瘤胃pH、NH_3-N、VFA无显著性影响(P>0.05);提高日粮能量水平增加了养殖收益,ME组最高,较LE组和HE组分别增加6.94%和3.10%。结果表明,在本试验条件下,500～600 kg荷斯坦阉牛日粮CP在11.5%时,适宜能量水平为6.10 MJ/kg。
2020年08期 v.40;No.284 1604-1609+1615页 [查看摘要][在线阅读][下载 175K] [下载次数：190 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 程光民;
选取体质量(22±2.5) kg健康状况良好的断奶杜泊绵羊48只,随机分为3组,每组16只平分4个重复,每组分别饲喂不添加青贮饲料的全混合日粮(对照组)、添加30%窖全株玉米的全混合日粮(窖贮组)和添加30%伸拉膜裹包青贮全株玉米全混合日粮(伸拉膜组)。预试期10 d,正试期90 d。结果显示,窖贮组和伸拉膜组干物质(DM)摄入量显著低于对照组,CP、NDF和ADF摄入量显著高于对照组(P<0.05),而窖贮组NDF摄入量显著高于伸拉膜组(P<0.05),其他成分2组之间相差不明显(P>0.05);伸拉膜组NAD显著高于对照组和窖贮组(P<0.05),而伸拉膜组NUR分别比对照组、窖贮组提高了8.28%和41.23%(P<0.05);伸拉膜组和窖贮组IE、UE显著低于对照组(P<0.05),但能量利用率显著高于对照组,分别提高了2.24%和1.83%(P<0.05);窖贮组和伸拉膜组GLU、TP、GLB和TG均显著低于对照组,ALT和AST显著高于对照组(P<0.05);窖贮和伸拉膜组试验羊瘤胃pH、丙酸、丁酸和氨态氮浓度无显著性差异(P>0.05),乙酸和总挥发性脂肪酸(T-VFA)浓度显著升高(P<0.05);窖贮组和伸拉膜2组之间能量、血清生化指标及瘤胃发酵相关指标差异均不明显(P>0.05)。结果表明,饲喂全株玉米青贮日粮有利于育肥期杜泊绵羊营养物质的消化、吸收和利用,伸拉膜裹包青贮与窖贮全株玉米均适用于饲喂育肥期杜泊绵羊。
2020年08期 v.40;No.284 1610-1615页 [查看摘要][在线阅读][下载 149K] [下载次数：159 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 魏方;赵霏霏;杨银凤;
建立绵羊瘤胃上皮细胞(ovine ruminal epithelial cells,ORECs)培养体系为体外试验模型,旨在探索酿酒酵母培养物和提取物对ORECs中绵羊β-防御素-1(sheepβ-defesin-1,SBD-1)表达效果的影响。首先,分别用200 mg/L酿酒酵母培养物和提取物诱导ORECs不同时间段(0,6,12,18,24,30 h)后,经qPCR扩增反应检测SBD-1 mRNA表达量,以分别确定酿酒酵母培养物和提取物诱导SBD-1 mRNA表达最高的刺激时间;然后用不同质量浓度梯度(0,100,200,300,400 mg/L)酿酒酵母培养物和提取物分别诱导ORECs最佳时间段后,同样地采用qPCR扩增技术检测SBD-1 mRNA表达量,从而筛选出诱导SBD-1 mRNA表达最高的酿酒酵母培养物浓度和酿酒酵母提取物浓度。结果显示,酿酒酵母培养物和提取物均可诱导SBD-1 mRNA表达。当酿酒酵母培养物质量浓度为400 mg/L、酿酒酵母提取物质量浓度为200 mg/L分别刺激ORECs 6 h时,ORECs SBD-1 mRNA表达量分别达到最高,且均极显著高于对照组(P<0.01)。最后在相同试验条件下,分别使用最佳诱导质量浓度的酿酒酵母培养物(即400 mg/L)和酿酒酵母提取物(即200 mg/L)诱导ORECs最佳时间(即6 h),比较两者诱导ORECs SBD-1 mRNA表达效果,qPCR结果显示酿酒酵母提取物诱导SBD-1 mRNA表达显著高于酿酒酵母培养物(P<0.05)。结果表明,酿酒酵母培养物和提取物均能够诱导ORECs SBD-1表达,400 mg/L酿酒酵母培养物和200 mg/L酿酒酵母提取物分别刺激ORECs 6 h后SBD-1表达量最高,且酿酒酵母提取物诱导效果优于酿酒酵母培养物。
2020年08期 v.40;No.284 1616-1623页 [查看摘要][在线阅读][下载 2439K] [下载次数：252 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 王鑫;杨在宾;周建群;李丹丹;李鹏飞;刘凯红;张银凤;杨维仁;姜淑贞;
选择600只健康的1日龄AA商品肉仔鸡,随机分成6个处理,每个处理5个重复。处理1为无机微量元素处理(IE-100),饲粮用无机微量元素预混剂(CuSO_4·5H_2O, ZnSO_4·H_2O,MnSO_4·H_2O,FeSO_4·H_2O,KIO_3,Na_2SeO_3)形式补充铜、锌、锰、铁、碘和硒,添加量分别为8.0,70.0,90.0,50.0,0.5,0.3 mg/kg;处理2、处理3、处理4和处理5为有机复合微量元素处理,饲粮用寡二糖螯合微量元素预混剂(寡二糖螯合铜、锌、锰和铁;KIO_3和Na_2SeO_3)形式补充,元素水平分别为处理1的100%(OE-100)、75%(OE-75)、50%(OE-50)和25%(OE-25);处理6为不添加微量元素(OE-0)。试验分2个阶段(1～21 d和22～42 d),21 d和42 d进行测体质量和屠宰试验,测定生产性能、微量元素含量和抗氧化性能。结果显示:(1)与IE-100相比,OE-100显著提高(P<0.05)肉鸡的ADG(1～42 d)、血液和肝脏铁(21 d)、血清和肝脏Cu-Zn SOD(42 d)活性,肝脏MDA(42 d)含量显著降低(P<0.05)。(2)与OE-0相比,OE-75肉鸡的ADG(22～42 d和1～42 d)显著提高(P<0.05),F/G(22～42 d和1～42 d)显著降低(P<0.05);IE-100、OE-100、OE-75、OE-50和OE-25显著提高(P<0.05)肉鸡血液和肝脏铁(21 d)、锌和铜(42 d);IE-100、OE-100、OE-75和OE-50血清和肝脏Cu-Zn SOD和GSH-Px(21 d和42 d)的活性显著升高(P<0.05),MDA(42 d)的含量显著降低(P<0.05)。(3)随着寡二糖鳌合微量元素预混剂水平的降低,肉鸡ADG(1～21,1～42,22～42 d)、血液微量元素[铁(21 d)、锌(21 d和42 d)、铜(21 d和42 d)和锰(42 d)]、肝脏微量元素[铁和锌(21 d和42 d)、铜和锰(42 d)]、血清和肝脏Cu-Zn SOD和GSH-Px的活性(21 d和42 d)均呈一次和二次线性降低(P<0.05),而F/G(22～42 d和1～42 d)、血清(21 d和42 d)和肝脏(42 d)MDA含量则呈一次和二次线性升高(P<0.05)。结果表明:寡二糖螯合微量元素能改善肉鸡生产性能、元素(铜、锌、锰和铁)在血清和肝脏中储备和抗氧化性能,且血清和肝脏抗氧化性能的最适宜水平分别为25%,50%,75%,与无机微量元素综合性能相当的水平为50%～75%。
2020年08期 v.40;No.284 1624-1631页 [查看摘要][在线阅读][下载 207K] [下载次数：264 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ] - 程雅婷;鲜凌瑾;武秋申;揭晓蝶;田旭;陈霈瑶;李开秀;钟航;章杰;
选取体况健康、体质量相近的1日龄四川白鹅120只,随机分为4组,每个处理3个重复,每个重复10只鹅,分别饲喂含苜蓿、黑麦、燕麦和花生秧的饲粮,试验持续时间为70 d,应用高通量测序法对鹅肠道微生物菌群进行测序并分析。结果显示,四川白鹅70日龄体质量和平均日增体质量在不同纤维源饲粮组间差异显著(P<0.05),其中苜蓿组显著高于黑麦组(P<0.05),与燕麦组和花生秧组无显著性差异(P>0.05),而黑麦组、燕麦组和花生秧组之间差异均不显著(P>0.05);样本测序共得到877个OTUs(苜蓿组:583;黑麦组:478;燕麦组:470;花生秧组:443);不同纤维源饲粮组间微生物菌群多样性无显著性差异(P>0.05),其中Chao和Ace指数为苜蓿组>花生秧组>黑麦组>燕麦组,Shannon指数为花生秧组>苜蓿组>黑麦组>燕麦组;细菌分类上来看,苜蓿组属于14门138个属,黑麦组属于15门127个属,燕麦组属于14门124个属,花生秧组属于12门126个属,其中12门108个属为共有细菌;PCA和PCoA分析均显示PC1+PC2>50%;共有优势菌(Lentisphaerae、Alistipes、Shuttleworthia、Slackia、Eubacterium coprostanoligenes、Bacteroides、Faecalibacterium、Megamonas和Subdoligranulum)在不同纤维源饲粮组间丰度差异显著(P<0.05)。结果提示,不同纤维源饲粮通过改变微生物菌群结构和部分菌群的丰度来影响四川白鹅的生长性能。
2020年08期 v.40;No.284 1632-1640页 [查看摘要][在线阅读][下载 1079K] [下载次数：324 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：0 ] - 娄安钢;季久秀;相思宇;金太花;陈莹莹;张睿;崔长艳;于龙政;关立增;
选择在延边黄牛和韩延牛中显著差异表达的miR-10b,利用实时定量PCR(qPCR)和Western blot技术,研究miR-10b对延边黄牛垂体细胞中GH分泌水平的影响及miR-10b与靶基因之间的调控机制。qPCR和Western blot结果显示,miR-10b水平的增加能显著提高延边黄牛垂体细胞中GH mRNA和蛋白的表达(P<0.01),降低miR-10b水平可抑制GH mRNA和蛋白的表达。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因系统结果显示,miR-10b靶向了SSTR2的3′UTR;miR-10b水平的增加能够显著抑制SSTR2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01),反之降低miR-10b水平能显著提高SSTR2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。结果表明,miR-10b可通过调节SSTR2基因的表达而调控垂体细胞中GH的分泌,这一结果为研究miRNA调控动物生长发育机制提供了理论依据。
2020年08期 v.40;No.284 1641-1646页 [查看摘要][在线阅读][下载 1114K] [下载次数：60 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张静;焦熙堯;高晓茜;张然;甘叶明;李俊杰;李相运;
采用孕酮阴道海绵栓与PMSG相结合的方法对湖羊和乌珠穆沁羊进行同期发情和定时输精,海绵栓埋置13 d后撤栓,同时肌肉注射PMSG 330 IU,在撤栓后36,48,58 h分别对试验羊进行单次阴道输精和腹腔镜子宫角输精,输精后40 d进行B超测孕并在分娩后统计产羔数。结果显示,在撤栓后58 h分别对湖羊和乌珠穆沁羊进行单次阴道输精可以得到较好的受胎率和产羔率(湖羊76.9%和266%,乌珠穆沁羊72.3%和124%)。所有试验羊在撤栓后48 h或58 h于腹腔镜子宫角输精的受胎率无显著性差异(湖羊94.8%和92.4%,乌珠穆沁羊89.2%和89.4%),但都显著高于撤栓后36 h的受胎率(湖羊55.6%,乌珠穆沁羊54.4%)。促黄体素释放激素A3(LRHA3)显著降低了湖羊阴道输精的妊娠率,但却提高了乌珠穆沁羊阴道输精的妊娠率,而对湖羊子宫角输精的妊娠率没有影响。结果表明,湖羊和乌珠穆沁羊在撤栓后58 h进行单次定时阴道输精,取得了较好的受胎率和产羔率,适宜在绵羊养殖场(户)大规模推广应用。
2020年08期 v.40;No.284 1647-1651+1659页 [查看摘要][在线阅读][下载 160K] [下载次数：226 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：0 ] - 李曼曼;于昊;薛洋;茆达干;
试验以山羊颗粒细胞为研究对象,采集卵泡(φ2～5 mm)颗粒细胞进行无血清培养2 d后,用FSH、LH(2.5 IU/mL或1.25 IU/mL)和E_2(1 mg/L)单独或联合处理0～96 h,分别收集细胞和培养液,用放射免疫分析法(RIA)检测培养液中孕酮(P_4)水平,用实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白免疫印迹(WB)技术检测颗粒细胞孕酮相关基因和蛋白的表达。结果显示,激素联合或单独处理24 h后,FSH/LH/E_2(2.5/2.5/1)组的孕酮水平与LH(2.5)组相当,均显著高于其他4组(P<0.01),然而,在处理48,72,96 h时间点,各组间均无显著性差异(P>0.05)。FSH/LH/E_2(2.5/2.5/1)组处理后72,96 h的孕酮水平极显著低于0,24 h(P<0.01);FSH/LH/E_2(1.25/1.25/1)组与FSH(2.5)组的孕酮水平24 h显著下降(P<0.05),但48 h又显著高于24 h(P<0.05);LH(2.5)组的孕酮水平96 h显著下降(P<0.05);E_2(1)组和对照组的孕酮水平均在24 h显著下降(P<0.05)。qPCR结果显示,FSH/LH/E_2(2.5/2.5/1)处理不同时间后PTGFR、HSD3B和StAR基因在24 h表达量极显著升高(P<0.01),随后表达量均逐渐下降,且处理后96 h的基因表达量均极显著低于0 h组(P<0.01)。WB结果显示,激素处理24 h后HSD3B在FSH/LH/E_2(2.5/2.5/1)组的蛋白表达量极显著高于其他组(P<0.01);P450scc在FSH/LH/E_2(2.5/2.5/1)组的蛋白表达量与对照组相比有升高趋势(P=0.060 4),其他各组间无趋势变化(P>0.1);而CYP19A1表达量在6个组中无显著性差异(P>0.05)。结果表明,FSH、LH和E_2联合处理更有利于体外无血清培养的山羊颗粒细胞合成孕酮,为进一步研究生殖激素在山羊卵巢卵泡-黄体转化中的作用奠定理论基础。
2020年08期 v.40;No.284 1652-1659页 [查看摘要][在线阅读][下载 1251K] [下载次数：305 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ]