研究论文_预防兽医学

  • BTV-16四结构蛋白的共表达与病毒样颗粒的制备

    黄超华;花群义;曹琛福;史卫军;阮周曦;林彦星;叶奕优;陶虹;王潇;陈金顶;

    目前疫苗免疫是预防蓝舌病的主要有效手段,蓝舌病病毒样颗粒(VLPs)疫苗是蓝舌病疫苗研究的热点之一。为了制备蓝舌病病毒血清16型(BTV-16)病毒样颗粒,研究对载体pFastBac-Dual进行了改造,使其具有4个独立启动子的多克隆位点。依次将BTV-16 VP2、VP5、VP3和VP7基因插入到改造后载体(pF4)的4个多克隆位点中,成功构建了四表达重组质粒pF4-VP2-VP5-VP3-VP7,经转座获得重组杆粒Bacmid-VP2-VP5-VP3-VP7。通过转染Sf9细胞,获得可表达4种蛋白的重组杆状病毒rBac-VP2-VP5-VP3-VP7。经重组杆状病毒感染Sf9细胞,可共表达蛋白VP2、VP5、VP3和VP7,并通过蔗糖梯度离心制备出具有典型特征的BTV-16病毒样颗粒。

    2021年01期 v.41;No.289 1-7页 [查看摘要][在线阅读][下载 786K]
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  • 非洲猪瘟病毒微芯片荧光PCR快速检测技术的建立及初步应用

    刘洋;王新杰;汪葆玥;李翔;高姗姗;马静;孙晓明;王传彬;倪建强;

    非洲猪瘟缺乏安全有效的疫苗,其防控有赖于及时、准确的诊断和消毒灭源。本研究在对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)B646L基因序列进行分析的基础上设计引物、探针,建立了基于微芯片的ASFV免提取荧光PCR检测技术。特异性试验结果显示,微芯片PCR可用于我国不同地区ASFV毒株的通用检测,对其他主要猪源病毒均为阴性;敏感性试验结果显示其检测下限为10拷贝/μL;对117份临床样品的检测结果显示,该方法可用于猪全血、淋巴结、脾脏、肌肉样本中ASFV核酸的检测,与世界动物卫生组织推荐的荧光PCR检测方法相符率达100%,且显著简化了检测操作步骤,检测用时缩短在30 min之内,获得农业农村部第一批非洲猪瘟现场快速检测试剂的推荐,应用于养殖场、屠宰场和流通环节中ASFV核酸的检测。

    2021年01期 v.41;No.289 8-12页 [查看摘要][在线阅读][下载 122K]
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  • 云南香猪PRRSV分离株ORF7基因遗传变异分析

    郑龙龙;朱玲云;刘萍丹;赵德育;刘佳;毕峻龙;杨贵树;舒相华;

    为了解2014年云南省香猪群体中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行特征,将疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病例肺脏和淋巴结研磨处理后接种Marc-145细胞进行盲传,传至第2代48 h时出现2株病毒致Marc-145细胞聚集融合、巨细胞等病毒致细胞病变(CPE)效应现象,将其命名为YN-2XZ1和YN-3XZ2。细胞冻融3次后,使用Reed-Muench法计算病毒的半数感染力(TCID_(50))分别为10~(6.75),10~(6.05)TCID_(50)/100μL。对ORF7基因进行序列测定、分析及N蛋白的免疫印迹(WB)检测,并与美洲经典毒株VR-2332、国内2001-2014年部分序列进行比对结果显示,本次获得的2株PRRSV之间核苷酸同源性为100%,与国内流行的变异毒株进化同步,说明目前云南香猪群中PRRSV以变异毒株为主,可能不具有高暴发性和高致病力,不会引起重大经济损失和社会恐慌,但仍需对此加以关注。通过磷酸化分析得出,暴发HP-PRRSV前N蛋白35位丝氨酸磷酸化概率67.4%~99.8%,暴发HP-PRRSV后N蛋白35位丝氨酸磷酸化概率低于50%,提示该位点氨基酸不易于磷酸化可能与NSP-2蛋白基因缺失从而引起HP-RRSV有关,需进一步研究验证。

    2021年01期 v.41;No.289 13-19页 [查看摘要][在线阅读][下载 394K]
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  • 3株鸽源新城疫病毒的分子特征及对鸽的致病性

    杨少华;崔宁;张琳;黄庆华;黄艳艳;许传田;

    2011―2013年在新城疫流行病学调查中分离到3株鸽源新城疫病毒(SDS,SD01和SD02),为了进一步了解其生物学特性和遗传进化规律,对3株病毒进行了测序和生物活性分析,并对分离株SDS对鸽的致病性进行了评价。结果表明,毒株SDS基因组全长为15 192 bp,基因排列方式为3′-NP-P-M-F-HN-L-5′,3个分离株F蛋白裂解位点氨基酸序列均为~(112)RRQKRF~(117),具有典型的新城疫强毒的分子特征。系统进化分析表明这3个毒株与基因Ⅵ型NDV毒株聚于一簇,属于ClassⅡ系Ⅵb基因型。3个分离株F蛋白的融合肽和七肽重复区,HN蛋白的抗原中和表位存在多处突变,与单克隆抗体1E5、2F10的反应性也发生改变,表明3个分离株与疫苗株LaSota有明显的抗原差异。SDS攻毒试验结果显示,试验鸽自攻毒后5 d出现明显的临床症状,滴鼻组和肌肉注射组的死亡率分别为60%和70%;病死鸽剖检可见脑膜充血出血,腺胃乳头、腺胃肌胃交界及肠道出血,肝脏肿大,脾有淤血斑。滴鼻组在攻毒后5~14 d于喉头和泄殖腔检出排毒,而肌肉注射组在攻毒后3~14 d于喉头和泄殖腔有排毒。

    2021年01期 v.41;No.289 20-25页 [查看摘要][在线阅读][下载 327K]
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  • 鸭坦布苏病毒E蛋白具有独特交叉反应性中和表位的鉴定

    林委卫;陈雪明;李晨曦;白小飞;刘明;张云;

    利用抗鸭坦布苏病毒(DTMUV)中和单抗1G2,结合E蛋白多肽扫描技术,鉴定了最小抗原表位~(227)GSSAGTWQN~(235)。Western blot显示,残基~(231)G或~(233)W的突变后,表位完全失去了与1G2抗体识别的功能,表明~(231)G或~(233)W是抗体1G2识别的关键氨基酸位点。通过免疫荧光分析(IFA)显示,MAb 1G2与JEV、WNV和ZIKV的E蛋白发生交叉反应,表明该表位是黄病毒的交叉反应性表位。蛋白质和病毒模型显示,表位定位于成熟病毒粒子可接近的表面,在E蛋白结构域Ⅱ的hi环中。本研究首次证明,中和抗体1G2靶向交叉反应表位定位在E蛋白结构域Ⅱ的hi环,该表位的鉴定有助于提高对黄病毒血清诊断中存在交叉反应问题的认识和理解。

    2021年01期 v.41;No.289 26-32页 [查看摘要][在线阅读][下载 742K]
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  • 1株重组型番鸭细小病毒的分子特征解析

    鲍芳;秘清灵;徐静雯;王昱;吴剑梅;王志仙;王建业;朱国强;

    为了对1株番鸭细小病毒(MDPV)分离株NY18株的分子特征予以准确揭示,通过设计重叠PCR引物,扩增NY18株的完整基因组并进行了测序。结果显示,NY18株基因组由5 071个碱基组成,5′和3′端末端倒置重复序列(inverted terminal repeats,ITR)均由424个碱基组成,其外侧385个碱基形成回文发夹结构。Simplot 3.5.1和RDP4软件分析表明,NY18株经历了2次重组事件,第1次重组产生在VP3基因的1.1 kb区域,第2次重组事件产生在P9启动子至Rep基因上游约100 bp区域内。2次重组均以经典型MDPV YY株作为主要亲本,而经典型鹅细小病毒(GPV)强毒株DY16和鹅胚化的弱毒疫苗株SYG61v作为次要亲本参与了重组。NY18株的ITR与经典型MDPV FM和YY株的同源性为97.9%和99.1%,而与GPV强毒株YZ99-6的同源性仅有86.0%,表明NY18株ITR仍来自于经典型MDPV。以VP1基因1.1 kb重组区片段构建遗传进化树,NY18株与经典型GPV处于同一分支,而以非重组区的Rep1基因1 774 bp和VP1基因氨基端694 bp、羧基端405 bp片段分别构建遗传进化树,NY18株则与经典型MDPV处于同一分支。结果表明,NY18株既不同于经典型MDPV也不同于GPV,其本质是1株重组型的MDPV。

    2021年01期 v.41;No.289 33-37页 [查看摘要][在线阅读][下载 286K]
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  • 新疆艾比湖野鸟H1N2亚型禽流感病毒的分离鉴定及全基因组序列分析

    李培东;刘庆庆;肖陈城;陈创夫;王丹;依再提古丽·热依木江;王一帆;朱雅;王勇;李亚玲;

    旨在调查野鸟中存在的禽流感病毒,并为禽流感的防制提供依据。采集新疆艾比湖自然保护区野鸟的粪便棉拭子进行禽流感病毒的分离与鉴定,将PCR产物进行纯化后用T载体连接并转化到DH5α细胞中;菌液PCR鉴定后将目的菌液送至上海生工测序并比对测序结果,在NCBI上进行基因序列分析。结果显示,从新疆艾比湖自然保护区野鸟的粪便棉拭子分离得到1株H1N2亚型禽流感病毒;经序列分析得知,该毒株为1株低致病性禽流感病毒,且存在与多种亚型病毒的重配现象。

    2021年01期 v.41;No.289 38-42+49页 [查看摘要][在线阅读][下载 1047K]
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  • 大熊猫源细小病毒病毒样颗粒的构建与免疫原性

    焦翠翠;金宏丽;冯娜;黄培;刘迪;李丽娜;赵健;王倩;丁秋雨;杨松涛;夏咸柱;石晶;王化磊;

    将大熊猫源细小病毒VP2基因优化后克隆至pFastBac Dual载体,重组获得穿梭质粒rBacmid-Panda-dVP2,转染Sf9细胞拯救获得表达大熊猫源细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒rpFBD-Panda-dVP2。rpFBD-Panda-dVP2感染Sf9细胞会形成明显的细胞病变,间接免疫荧光鉴定显示rpFBD-Panda-dVP2感染的Sf9细胞可见明显的绿色荧光。对感染细胞后收获的抗原进行Western blot鉴定,结果显示在约65 kDa处可见明显的目的蛋白条带;电镜下可见与天然细小病毒形态大小相似的粒子,表明rpFBD-Panda-dVP2感染昆虫细胞后可成功组装成病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),获得的VLPs血凝效价可达1∶2~(15)。将大熊猫源细小病毒VLPs免疫幼猫后可诱导机体产生血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)抗体,HI效价最高可达1∶2~(11),且保护性抗体水平可持续至少12个月。大熊猫源细小病毒VLPs的成功构建,为大熊猫细小病毒病新型基因工程疫苗的研制奠定基础,对防控大熊猫细小病毒病具有重要意义。

    2021年01期 v.41;No.289 43-49页 [查看摘要][在线阅读][下载 454K]
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  • 牛星状病毒EvaGreen实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

    师志海;王文佳;张彬;孟红丽;王亚州;金磊;兰亚莉;徐照学;

    牛星状病毒(BAstV)是我国新发的犊牛腹泻病原,本试验的目的是建立检测BAstV的Real-time PCR方法。根据BAstV流行株的ORF1a基因序列设计引物,通过优化反应条件和体系,成功建立基于EvaGreen检测BAstV的Real-time PCR方法。结果表明,该检测方法的Ct值与标准品模板在1.36×10~1~1.36×10~8拷贝/μL线性关系良好,相关系数R~2=0.999,扩增效率为93.79%;该方法可特异性检出BAstV,对犊牛腹泻其他相关病原呈阴性;最低检测下限为13.6拷贝/μL;批间和批内的变异系数均小于2%,重复性好。对2017年9月至2019年5月采自河南省的221份犊牛腹泻样本进行检测,BAstV的检出率为18.1%(40/221),采样场阳性率为100.0%(14/14)。本试验所建方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,为BAstV的检测和流行病学调查提供了有力手段。

    2021年01期 v.41;No.289 50-55页 [查看摘要][在线阅读][下载 485K]
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  • 水貂阿留申病毒诱导猫肾细胞(CrFK)凋亡

    栾美慧;葛桂阳;宫庆龙;徐宁;郜艳雪;时坤;李健明;刘艺;李东丽;孙志博;冷雪;杜锐;

    为研究水貂阿留申病毒(AMDV)在体外诱导猫肾细胞(CrFK)凋亡情况,用AMDV-G株感染CrFK细胞,采用CCK-8法检测CrFK细胞感染后的细胞存活率,用AO/EB染色法检测CrFK细胞核的形态变化,用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,并通过分光光度计法检测细胞凋亡执行分子Caspase-3活性。结果显示,AMDV-G株感染可导致CrFK细胞增殖率下降,产生明显的形态学凋亡特征;流式细胞术检测结果显示,AMDV-G株感染可引起CrFK细胞凋亡并随着感染时间的延长凋亡率增加,同时Caspase-3活性显著升高。上述结果表明,AMDV-G株在体外能够诱导CrFK细胞凋亡,为进一步研究AMDV致病机理奠定基础。

    2021年01期 v.41;No.289 56-61页 [查看摘要][在线阅读][下载 1090K]
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  • 马梨形虫病在新疆昭苏地区流行相关因素的调查与分析

    宋瑞其;呼尔查;樊新丽;翟雪洁;李敏;郝蕴伟;巴音查汗;

    为了解新疆昭苏县马匹体表蜱虫和周围游离蜱虫携带马梨形虫情况及其之间流行关系,于2016年4―7月份,分别采集马匹血液、相应马体表携带蜱虫和周围牧场的蜱虫,经PCR检测总携带梨形虫率分别为93.9%(31/33),15.8%(6/38),3.4%(6/175);对所采集的蜱虫进行形态学鉴定,结果分别为草原革蜱、森林革蜱和边缘革蜱;3种革蜱占马体表蜱虫总数的比率和带虫率分别为52.6%(7.9%),44.8%(7.9%),2.6%(0.0%),占牧场游离蜱虫总数的比率和带虫率分别为56.0%(2.3%),43.4%(1.1%),0.6%(0.0%);根据统计学分析,马匹年龄与携带梨形虫及其媒介蜱之间差异显著(P<0.05),马携带蜱虫数量与马源性、蜱源性泰勒虫的感染三者之间均存在显著性差异(P<0.01)。因此,新疆昭苏地区马梨形虫的流行与马匹年龄、带虫媒介蜱虫的数量、种类等因素有关联性。

    2021年01期 v.41;No.289 62-67页 [查看摘要][在线阅读][下载 981K]
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  • 健康与腹泻仔猪源A型产气荚膜梭菌的多位点序列分型

    王婧祺;戴益民;王娇;韩春生;曾秀;吴允正;王林康;张锦华;

    A型产气荚膜梭菌(CpA)存在于健康仔猪肠道,同时也是仔猪肠毒血症的关键病原。为研究两者的差异,本试验在江西省4个地区采集健康和腹泻仔猪粪便样本分离得到CpA,通过16S rRNA鉴定所有CpA分离株,并通过多重PCR确定分离株的毒素分型。采用MLST多位点序列分型技术对选取的24株CpA(腹泻或健康来源CpA各12株)进行聚类分析,根据菌株的ST型用UPGMA和NJ两种方法构建系统进化树。结果显示,8个管家基因中glpk基因相对保守,recA和plc基因变异程度较大,等位基因中存在可变位点的比例为1.8%(tpi)至6.1%(plc),腹泻源与健康源CpA遗传差异不明显;无论是否增添plc基因,对整体聚类分析结果无明显影响,但腹泻源CpA(75%)的plc等位基因比例明显高于健康源(33.3%)。根据24株CpA的ST型的聚类分析发现,75%的健康源CpA聚集在同一亚组CC1中,而CC2中聚类了2个地区的腹泻源CpA,有较高的遗传多态性。在12株腹泻源CpA的ST型聚类分析中,同一地区的CpA之间存在更近的亲缘关系,这表明其基因突变有一定的规律和方向性。因此推测,CpA的产毒致病性可能与地域环境密切相关。

    2021年01期 v.41;No.289 68-73页 [查看摘要][在线阅读][下载 379K]
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  • 西藏那曲牦牛源产气荚膜梭菌的分离鉴定及生物学特性

    罗润波;贡嘎;高家登;扎西次仁;白玛桑珠;索朗斯珠;

    利用细菌培养、生化鉴定、小鼠致病性试验、PCR技术等方法对西藏那曲市多起牦牛猝死病例进行诊断和分析。结果表明,从病死牦牛脏器中分离得到3株产气荚膜梭菌,命名为AD-01、AD-02和BG-01。其中AD-01和AD-02分离株属于A型,BG-01分离株属于C型。通过对分离株16S rRNA进行序列比对并制作进化树分析发现,AD-01和AD-02分离株为A型产气荚膜梭菌,与中国近年来报道的分离菌株遗传距离较远,属于完全独立的一个分支;同时药敏试验结果显示AD-01、AD-02分离株与BG-01分离株的药敏试验结果有一定差异,产生此现象的原因需进一步研究。本试验成功分离到3株牦牛源产气荚膜梭菌,为牦牛产气荚膜梭菌病的预防和控制提供了理论依据。

    2021年01期 v.41;No.289 74-80页 [查看摘要][在线阅读][下载 937K]
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  • 2016-2019年我国部分地区鸡滑液囊支原体分离株vlhA基因遗传进化分析

    谢迪;马爽;楚电峰;孙通行;陈梦瑶;何吉鑫;吴艳涛;杜元钊;范根成;张小荣;

    为了解我国鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)感染的最新流行情况,本研究于2016―2019年从江苏、安徽、山东、河南、河北、宁夏、黑龙江、湖北等8个省份疑似发生MS感染的鸡场采集样品,进行MS菌株的分离鉴定,结果共获得48株MS分离株。对这些分离株的vlhA基因片段测序和分析显示,其中46株均属于K基因型,另外2株分别属于A基因型和E基因型。研究结果表明,当前国内流行的MS优势基因型是K基因型,与其他国家和地区流行的基因型存在显著性差异。本研究结果为制定适合我国鸡群MS控制与净化的策略提供了必要的流行病学依据。

    2021年01期 v.41;No.289 81-85+90页 [查看摘要][在线阅读][下载 248K]
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简讯

  • 《中国兽医学报》第七届编辑委员会成立大会暨“一流学科与一流期刊融合发展”高峰论坛隆重召开

    周靓;杨举;

    <正>2020年11月6日,《中国兽医学报》第七届编辑委员会成立大会暨"一流学科与一流期刊融合发展"高峰论坛在吉林大学隆重召开。由于疫情原因,本次大会采用线上线下相结合的方式进行。中国工程院院士夏咸柱研究员、中国工程院院士金宁一研究员、原解放军军需大学校长吉林大学农学部学部长韩文瑜教授、《中国兽医学报》编辑部原主任张学东编审、学报编辑部总编郭建顺编审和吉林大学动物科学学院院长张嘉保教授等在长编委代表共计50多人参加了线下大会。大会由吉林大学动物医学学院院长刘明远教授主持。

    2021年01期 v.41;No.289 3-5页 [查看摘要][在线阅读][下载 12466K]
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  • 《中国兽医学报》第七届编辑委员会委员名单

    <正>主编:金宁一副主编:夏咸柱刘秀梵陈焕春张改平黄路生李德发沈建忠陈化兰张涌姚斌韩文瑜刘明远郭建顺(常务)委员:(以姓氏笔画为序)丁壮丁铲丁明星丁家波于录才学鹏马红霞马志永马鸣潇马宝华王旭王化磊王凤阳王玉炯王红宁王宏伟王春凤王俊东王洪斌王晓钧

    2021年01期 v.41;No.289 6页 [查看摘要][在线阅读][下载 26K]
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  • 《中国兽医学报》再次荣获“中国高校百佳科技期刊”奖

    沈晓峰;

    <正>2020年12月30日,从中国高校科技期刊研究会获知,《中国兽医学报》荣获"2020年度中国高校百佳科技期刊"奖,这也是继2018年之后学报又一次获得该奖项。据悉,中国高校科技期刊评选活动旨在促进并鼓励高校科技期刊高质量发展,不断提升高校科技期刊的创新力、影响力和贡献力,研究会组织相关专家对中文核心期刊、中国科学引文数据库、中国科技核心数据库、中国学术期刊影响因子年报和中国科技期刊引证报告等第三方的客观数据进行加权计算,最终从1 600多种中国高校科技期刊中遴选出100种"2020年度中国高校百佳科技期刊"进行表彰,该奖项每两年评选一次。

    2021年01期 v.41;No.289 123页 [查看摘要][在线阅读][下载 53K]
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  • 中国畜牧兽医核心期刊表

    <正>~~

    2021年01期 v.41;No.289 156页 [查看摘要][在线阅读][下载 47K]
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卷首语

  • 追求卓越 打造精品 争创世界一流学术期刊——热烈庆祝《中国兽医学报》创刊40周年

    金宁一;

    <正>"山川异域,风月同天"。新年尹始,万象更新。正值世界人民共同抗击新冠疫情即中国人民抗疫取得初步胜利的时刻,《中国兽医学报》筚路蓝缕、风雨兼程迎来了创刊40周年这一值得铭记的日子。《中国兽医学报》1981年创刊,原名《兽医大学学报》,是由教育部主管吉林大学主办的全国性专业性学术期刊,在国内畜牧兽医界有着崇高的威望,现已成为国内畜牧兽医专业最具影响力的权威性核心期刊,影响因子等指标多年来一直位居我国畜牧兽医期刊前列,许多高等农业院校及畜牧兽医科研单位已将在该学报上发表学术论文列为科技人员晋升职称或获得学位的必备条件之一。

    2021年01期 v.41;No.289 6页 [查看摘要][在线阅读][下载 28K]
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研究论文_人兽共患病

  • 源于奶牛蹄部感染的牛源污蝇解壳杆菌的分离鉴定与药敏试验

    王志浩;郭龙;刘康军;李俊;李建基;崔璐莹;孟霞;朱国强;钱晨;王亨;

    为确定导致江苏某奶牛场蹄部感染的病原,采集发病奶牛蹄部感染病灶的病料进行细菌分离培养,使用MALDI Biotyper微生物快速鉴定系统进行细菌鉴定,并对分离菌株进行药物敏感性试验。结果显示,病灶中的分离株为污蝇解壳杆菌(Wohlfahrtiimonas chitiniclastica),血平板上呈β型溶血。药敏试验结果显示,该菌株对阿莫西林钠-克拉维酸钾、多西环素、四环素、头孢氨苄、链霉素、青霉素和复方新诺明7种抗生素耐药,对多黏菌素、丁胺卡那、庆大霉素、环丙沙星、克林霉素5种抗生素敏感。污蝇解壳杆菌作为一种人畜共患的病原菌,其在奶牛蹄部的感染需要引起奶牛场的关注,同时其耐药性增加更具有公共卫生学意义。该病原的分离鉴定和药敏试验为指导奶牛养殖场合理用药和提高公共卫生管理具有重要意义。

    2021年01期 v.41;No.289 86-90页 [查看摘要][在线阅读][下载 804K]
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  • 利血平对化脓隐秘杆菌大环内酯类外排基因mefA表达的影响

    苏鸿雨;黄程程;刘耀川;陈梦涵;朱晓明;刘利鹏;张德显;刘明春;

    化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes,T.pyogenes)是一种能够引起动物和人化脓性感染的重要病原菌。随着抗生素的广泛使用,该菌已对临床常用的大环内酯类、四环素类等药物产生不同程度的耐药性。本试验拟探讨外排泵抑制剂利血平对T.pyogenes大环内酯类外排基因mefA mRNA及蛋白表达的影响,将为细菌外排泵抑制剂的研究奠定理论基础。以携带mefA基因的T.pyogenes分离株(17,20号)为试验菌株,采用荧光定量PCR及Western blot技术,检测利血平作用前后各菌株mefA基因mRNA及蛋白表达量。结果表明,1/2 MIC利血平作用2株耐药菌株36 h后,大环内酯类抗生素红霉素、罗红霉素、泰乐菌素、阿奇霉素和替米考星对携带mefA基因的T.pyogenes的MIC值均有不同程度的降低。17和20号分离株外排基因mefA mRNA表达水平较药物作用前均极显著降低(利血平作用前是作用后的5.18,17.54倍),外排蛋白MefA表达量较药物作用前也显著降低(利血平作用前是作用后的1.08,1.70倍),且基因水平和蛋白水平的变化与其耐药表型的变化趋势一致;提示利血平可能是通过抑制外排基因mefA的转录和翻译而消减T.pyogenes对大环内酯类抗生素的耐药性。

    2021年01期 v.41;No.289 91-95页 [查看摘要][在线阅读][下载 200K]
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  • 羊源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及毒力基因检测

    范培超;史量全;温树波;霍晓伟;薛江东;马德慧;

    为了调查内蒙古通辽市某羊场发病羊死亡的原因,对疑似致病菌进行分离、鉴定及部分生物学特性研究。对病死羊进行剖检,无菌条件下采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏等组织脏器进行细菌分离培养;对分离菌进行小鼠致病性试验、细菌生化检测、16S rDNA基因扩增及同源性比对分析和药物纸片扩散法敏感性试验。结果显示,分离菌株符合肺炎克雷伯菌生化特性;16S rDNA序列与GenBank中已登录的肺炎克雷伯杆菌序列同源性为99.59%;小鼠致病性试验结果表明分离株有较强的致死性;分离株携带多种毒力基因致病性较强。药敏试验结果表明分离株对诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、多西环素等药物高度敏感,对复方新诺明、卡那霉素等中度敏感,对庆大霉素、头孢哌酮、头孢氨苄等耐药。结果表明,分离株为肺炎克雷伯菌,是该羊场发病羊死亡的致病菌。

    2021年01期 v.41;No.289 96-101页 [查看摘要][在线阅读][下载 1019K]
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  • 西藏部分地区牦牛源肺炎克雷伯菌的分离、鉴定、毒力及耐药基因分析

    贡嘎;格桑卓玛;左伟;罗润波;索朗斯珠;

    利用细菌分离纯化、生化鉴定、分子生物学及WHO推荐的K-B纸片法等研究方法,对从西藏不同地区采集的103份牦牛鼻拭子样品进行肺炎克雷伯菌的分离鉴定,对分离鉴定的疑似菌株进一步进行16S rDNA测序及系统发育分析,荚膜血清学分型、毒力基因和耐药表型及耐药基因检测。结果显示,从西藏林芝市、那曲市分离鉴定出8株牦牛源克雷伯菌,分离率为7.76%;挑取其中2株进行测序,结果显示与重庆牛源KM096433和北京土壤源JQ003560聚为一簇,亲缘关系最近;8株西藏牦牛源克雷伯菌荚膜血清型均为K20型;此外,8株菌株均检测到3种毒力基因mrkD、fimH和wabG,检出率为100%;blaTEM、sul3、tetA和tetA耐药基因检出率分别为100%,100%,75%和75%,其余耐药基因均未检出;药敏试验结果显示,8株菌株对青霉素和氨苄西林耐药率达100%,其次是克拉霉素、四环素和多西环素耐药率达75%,而对喹诺酮类药物,如:环丙沙星、氧氟沙星和诺氟沙星强敏感;致病性试验中对照组全部存活,处理组小鼠病死率为80%(4/5),病变主要表现为脾脏肿大。本试验对西藏地区牦牛源肺炎克雷伯菌的流行情况、毒力基因和耐药性进行分析,对牦牛源肺炎克雷伯菌的防制具有重要的指导意义。

    2021年01期 v.41;No.289 102-109页 [查看摘要][在线阅读][下载 431K]
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研究论文_基础兽医学

  • 大肠杆菌CRISPR/Cas9基因编辑系统的建立及验证

    卞晓萍;刘青;孔庆科;罗洪艳;李沛;

    根据大肠杆菌W3110菌株的waaL基因序列设计CRISPR/Cas9的作用靶点,构建sgRNA表达质粒,然后设计同源修复供体DNA序列,通过电转化法导入宿主菌内,从而构建完整的大肠杆菌CRISPR/Cas9基因编辑系统。结果显示,应用该系统成功地构建了大肠杆菌waaL基因缺失株。将该系统继续用于大肠杆菌W3110菌株wecA基因的缺失,结果表明,该系统可快速高效地用于大肠杆菌基因缺失,这为构建大肠杆菌生物工程菌奠定基础。

    2021年01期 v.41;No.289 110-116页 [查看摘要][在线阅读][下载 891K]
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  • 慢性冷热应激对放牧西门塔尔牛抗氧化功能及HPA轴、SAM轴激素分泌的影响

    陈浩;敖日格乐;王纯洁;斯木吉德;超克;刘波;

    为研究慢性冷热应激对放牧条件下西门塔尔牛生理指标、抗氧化功能及下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴(HPA)、交感-肾上腺-髓质轴(SAM)激素分泌的影响,选取内蒙古锡林郭勒盟苏尼特左旗某家庭牧场体质量相近、体况健康的西门塔尔牛20头,试验期间测定试验牛生理指标,于试验期最后一天清晨进行颈静脉采血并制备血清,采用ELISA方法检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、糖皮质激素(GC)、肾上腺素(EPI)及去甲肾上腺素(NE)的含量。结果表明,冷热应激对西门塔尔牛产生了一定的应激:冷应激状态下(冬季)西门塔尔牛血清中ACTH、GC含量显著高于热应激状态(夏季)和非应激状态(春季)(P<0.05),夏季和冬季西门塔尔牛血清中NE、EPI含量均显著高于春季(P<0.05);夏季和冬季西门塔尔牛血清中MDA含量显著高于春季(P<0.05),春季和夏季T-AOC含量显著高于冬季(P<0.05),GSH-Px含量在3个季节之间差异不显著(P>0.05)。综上所述,冷热应激降低了西门塔尔牛的抗氧化能力,可能对西门塔尔牛机体造成了一定的损伤;冷热应激激活了西门塔尔牛的HPA轴和SAM轴,进而提高机体对冷热应激的适应能力。

    2021年01期 v.41;No.289 117-123页 [查看摘要][在线阅读][下载 160K]
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  • 奶牛维生素E缺乏症的血液病理学及其预警

    于泓漪;张翠羽;钱伟东;赵畅;张洪友;夏成;

    近年来高产奶牛围产期维生素E(VE)缺乏较为普遍,但这一问题在牛场最易被忽视。为此,本试验在某一大型集约化牛场,选取VE缺乏组奶牛40头,健康组奶牛40头,对试验奶牛的抗氧化、肝功、能量代谢、矿物元素和其他维生素指标进行显著性分析、Pearson相关性分析和回归分析及ROC分析。结果显示:与健康组相比,VE缺乏组血浆中总抗氧化能力(T-AOC)、高密度脂蛋白(HDL)、白蛋白(ALB)水平极显著降低,与VE水平呈正相关;而血浆中丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷草转氨酶(AST)、低密度脂蛋白(LDL)、游离脂肪酸(NEFA)、肌酐(CREA)水平极显著升高,与VE呈负相关;血浆中谷丙转氨酶(ALT)、β-羟丁酸(BHBA)水平显著升高,与VE呈负相关。并且,确立了血浆中HDL、T-AOC、ALB、LDL、AST、NEFA和MDA可作为VE缺乏症的预警指标,其预警值分别为HDL<1.495 mmol/L,T-AOC<0.305 mmol/L,LDL>4.09 mmol/L,ALB<51.7 g/L,MDA>11.19 mmol/L,AST>37.2 U/L和NEFA>713μmol/L。结论:VE缺乏与氧化应激、肝功、能量代谢有密切关系,7项生化指标可用于奶牛围产期VE缺乏症的预警,为今后更有效地监控和预防奠定理论基础。

    2021年01期 v.41;No.289 124-128页 [查看摘要][在线阅读][下载 204K]
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  • 小鼠髓过氧化物酶(MPO)基因克隆分析及真核表达载体的构建

    甘泽;王琪;王媛媛;赵彩英;李怡娜;张全伟;马友记;张勇;赵兴绪;

    髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)是一种血红素辅基蛋白酶,是血红素过氧化物酶超家族成员之一,参与多种疾病的发生和发展过程。本研究旨在克隆小鼠MPO基因CDS全长序列,检测该基因在小鼠神经细胞的表达谱。首先利用RT-PCR法与克隆载体克隆小鼠MPO基因CDS全长序列,对其进行生物信息学分析;然后构建真核表达载体pEGFP-C1-MPO,瞬时转染小鼠神经元细胞,通过qRT-PCR、Western blot和免疫荧光检测MPO在神经细胞的表达及分布规律。结果显示,小鼠MPO基因CDS全长2 171 bp,编码718个氨基酸,与章鱼、美洲灰熊、马、人、非洲爪蟾、扬子鳄等物种的氨基酸序列同源性均高于79.25%。转染细胞后,试验组MPO的mRNA和蛋白表达水平极显著高于阴性对照组(P<0.01),表明小鼠MPO基因的真核表达载体pEGFP-C1-MPO构建及转染成功;免疫荧光结果显示MPO蛋白主要分布于神经元细胞质中。过表达MPO后,nNOS的mRNA水平显著高于对照组(P<0.05),而NADPH表达水平显著低于对照组(P<0.05)。总之,在体外过表达MPO可促进nNOS表达,抑制NADPH的表达,这为今后深入研究MPO的功能奠定理论基础。

    2021年01期 v.41;No.289 129-136+142页 [查看摘要][在线阅读][下载 1301K]
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研究论文_临床兽医学

  • 一种用于腹腔手术机器人测试的巴马猪麻醉方案

    彭旭;刘学旭;何学令;徐海;鄢世兵;汪雪;刘建;李代兵;尹海林;

    为满足手术机器人腹腔手术效果和安全性的测试,建立相应的巴马猪麻醉方案。以低剂量舒泰和高剂量多咪静作诱导麻醉剂,异氟烷作维持麻醉剂,布托啡诺作术中镇痛剂,安定醒作苏醒剂。用手术机器人分别进行胆囊切除、左肾摘除、部分肝切除手术,于整个麻醉过程监测巴马猪心率、血氧饱和度、平均动脉压及体温的变化,以评估该方案的麻醉效果。结果显示, 18头试验猪均顺利完成1.5~2.5 h的腹腔手术,平均诱导麻醉时间为10.5 min,术中麻醉平稳,镇静镇痛效果优异,无不良反应。心率、血氧饱和度、平均动脉压、体温监测值稳定,且均在正常范围内波动,术后苏醒迅速。本麻醉方案具有平稳安全、镇静镇痛效果优异、麻醉时间较长、术后苏醒快的特点,完全能满足手术机器人腹腔手术各种术式测试的要求。

    2021年01期 v.41;No.289 137-142页 [查看摘要][在线阅读][下载 131K]
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  • 黄芪多糖在LPS诱导的DF-1细胞炎症反应中的抗炎作用及其调节机制

    刘丹华;张瑞莉;田旭;吕晓萍;高雪丽;郑世民;刘超男;

    为探讨黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)在LPS(lipopolysaccharide,LPS)诱导的鸡胚成纤维细胞系DF-1(chicken embryonic fibroblast cell line,DF-1)炎症模型中对IL-1β和TNF-α表达的影响,以及细胞因子信号转导抑制因子3(suppressers of cytokine signaling 3,SOCS3)对炎症信号通路NF-κBp65和p38MAPK的调节机制。将DF-1细胞分为对照组(C)、LPS组(L)、APS组(A)以及APS+LPS组(A+L),分别在LPS刺激后6,12,24,48,72 h检测各组细胞IL-1β、TNF-α、NF-κBp65、p38MAPK和SOCS3 mRNA和蛋白水平的变化。研究发现,当LPS终质量浓度为2 mg/L时可诱导DF-1细胞出现明显的炎症反应,而APS终质量浓度为100 mg/L时为本试验最佳抗炎浓度。与对照组相比,APS组炎性因子IL-1β和TNF-αmRNA表达及蛋白含量在6~72 h均显著升高(P<0.05);与LPS组相比,APS+LPS组SOCS3 mRNA表达在6~72 h均显著升高(P<0.05),NF-κBp65、IL-1β和TNF-αmRNA表达在6~72 h均显著降低(P<0.05),而p38MAPK变化不显著(P>0.05)。在DF-1细胞中,APS单独处理可以促进IL-1β和TNF-α等细胞因子释放而增强免疫;APS和LPS共处理时,APS通过抑制炎性因子IL-1β和TNF-α的释放发挥抗炎作用,这种抑制作用与高表达的SOCS3对NF-κBp65过度激活密切相关。

    2021年01期 v.41;No.289 143-149页 [查看摘要][在线阅读][下载 1088K]
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研究论文_动物科学

  • 饲料添加黄金虫虫粉对小鼠肠道炎症相关细胞因子表达的影响

    金鑫鑫;巩宇红;袁渤雨;刘明明;吴文湘;陈纯;苏铭信;王玮;

    为研究日粮中添加不同比例黄金虫虫粉对动物肠道健康及局部炎症的影响,选取昆明小鼠28只,随机分为4组,各组基础日粮分别添加0%,5%,10%,20%黄金虫虫粉,饲喂2周后,灌胃0.05 mL/g的1×10~8 CFU/mL的沙门菌菌液建立腹泻模型,荧光定量PCR检测小鼠肠道不同部位炎性因子及抗菌肽的表达量。结果显示,灌胃细菌后,饲喂不同比例黄金虫虫粉小鼠的空肠、回肠、结肠内的促炎因子TNF-α、IL-6表达量与对照组相比均明显下降,抗炎因子IL-4、IL-10和IL-13表达量明显升高,鼠源抗菌肽Ang-4、Cryptdin-1、Cryptdin-5、Lyz2、Crs1c和Reg3r表达量明显升高;这表明黄金虫虫粉作为饲料添加物,可以提高小鼠的免疫力,在沙门菌侵害肠道时,能增加肠道对病原菌的抵抗力以及提高机体抵御炎症反应的作用。

    2021年01期 v.41;No.289 150-156页 [查看摘要][在线阅读][下载 554K]
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  • 不同剂量烯丙孕素对后备母猪同期化发情、体质量及繁殖性能的影响

    王礼伟;刘颖;李鹏;周刚;

    为了探究不同剂量的烯丙孕素对后备母猪同期化发情、体质量及繁殖性能的影响,试验选取150头后备母猪,随机均分为5个试验组,每组饲喂0,10,15,20,25 mg/(d·头)的烯丙孕素口服液。结果显示,在口服烯丙孕素15 mg/(d·头)的剂量时,母猪的同期发情率最高为96.67%,受配率、受胎率及分娩率均为100.00%;口服烯丙孕素20 mg/(d·头)的饲喂剂量时,停药后6,7 d内发情的母猪比例最高为70.37%(19/27),母猪体质量增加量(11.67 kg)及仔猪健仔数(11.17头)、有效产仔数(11.67头)在试验组中最高,但所有体质量及繁殖指标均无显著性差异(P>0.05)。结果表明,限位栏定期口服15 mg/(d·头)烯丙孕素剂量下可以有效促使后备母猪发生同期化发情,而在20 mg/(d·头)剂量下可以有效提高母猪的产仔繁殖性能。

    2021年01期 v.41;No.289 157-161页 [查看摘要][在线阅读][下载 331K]
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  • 水牛卵泡颗粒细胞对卵母细胞体外成熟的影响

    张俊;石德顺;陆凤花;

    为了系统研究颗粒细胞对水牛卵母细胞体外成熟的影响,使用颗粒细胞条件液处理或单层颗粒细胞和卵母细胞共培养的方法,探讨颗粒细胞共培养对水牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响。结果显示,添加颗粒细胞传代接种第2天收集的20%颗粒细胞条件液到水牛卵母细胞成熟液中能显著提高水牛卵母细胞体外成熟率和囊胚发育率(P<0.05);然而单层颗粒细胞却显著抑制水牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育(P<0.05)。结果表明,与单层颗粒细胞共培养相比,与颗粒细胞条件液共培养更有利于水牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育。本研究为水牛卵母细胞体外成熟培养体系的完善提供一定理论依据。

    2021年01期 v.41;No.289 162-168页 [查看摘要][在线阅读][下载 5213K]
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综述

  • 边界病研究进展

    王莹;赵明;王淑娟;徐天刚;刘雨田;格日勒图;吴晓东;王志亮;

    边界病(border disease,BD)是由边界病毒(BDV)引起绵羊和山羊的一种病毒性疾病,临床症状表现为母羊不孕、流产和死胎,以及羔羊体型异常,多毛,震颤,因此又称"多毛震颤病","茸毛症"。该病的主要传播途径是垂直传播,持续性感染的羔羊是该疾病在绵羊中传播的潜在主要传染源。山羊相对绵羊感染症状相对较轻,主要表现为流产。目前尚无公认有效的BD疫苗,做好生物安全防控,严格饲养管理,及时对疑似染病动物特别是持续性病毒血症绵羊的检测和淘汰是防治本病的重要措施。现对该病的流行现状、病原学、流行病学、鉴别诊断和预防控制等方面的研究进展进行综述,旨在为研究人员及养殖户加强对BD的认识,做好疾病的相关预防工作,减少经济损失提供参考。

    2021年01期 v.41;No.289 169-174页 [查看摘要][在线阅读][下载 398K]
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  • 绵羊种布鲁菌致病机制与防控研究进展

    周志雄;顾国婧;李文杰;李博文;赵宇;罗艺晨;帅学宏;黄庆洲;焦寒伟;

    布鲁菌病(Brucellosis)是一种高度流行的人畜共患传染病,可造成巨大的经济损失,严重制约了当今畜牧业的发展并对人类健康构成了严重威胁。绵羊种布鲁菌病是由绵羊种布鲁菌(Brucella ovis,B.ovis)引起的一种以绵羊生殖系统功能障碍和怀孕绵羊流产为特征的慢性传染性疾病。目前,对于绵羊种布鲁菌的胞内寄生机制和感染机制尚不清楚,现将从病原学、流行病学、致病机制和疾病防控等方面对绵羊种布鲁菌病的研究进展进行概述,为后期挖掘绵羊种布鲁菌的致病机理和与其相关的研究奠定一定的理论基础。

    2021年01期 v.41;No.289 175-180+185页 [查看摘要][在线阅读][下载 165K]
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  • 瘤胃微生物在奶牛乳脂肪合成中的调节作用研究进展

    吴建民;王建发;武瑞;

    乳脂肪不仅是牛乳的主要成分之一,同时乳脂肪含量也是评价牛乳质量的重要指标。乳脂肪的合成涉及到日粮营养物质通过奶牛机体转化为乳营养成分的复杂生物学过程,受日粮配方、遗传背景、生理状态、瘤胃微生物等多方面的影响。瘤胃微生物可以通过自身合成的酶类对日粮进行降解,进而对乳脂肪合成前体物质的生成和利用起到一定的调节作用,乳脂肪前体物质合成不足可以引起牛乳中乳脂肪含量的降低。现主要阐述乳脂肪的合成机理以及瘤胃微生物对乳脂肪合成前体物质的影响,旨在为提高牛乳中乳脂肪含量提供思路和参考。

    2021年01期 v.41;No.289 181-185页 [查看摘要][在线阅读][下载 129K]
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  • 影响鸡坏死性肠炎病例复制的关键因素

    袁伟康;戚南山;廖申权;Mudassar Mohiuddin;李跃龙;吕敏娜;吴彩艳;李娟;林栩慧;蔡海明;胡俊菁;于林增;肖文婉;张健騑;曹正;孙芸芸;孙铭飞;顾有方;

    坏死性肠炎(necrotic enteritis,NE)是家禽中最重要的肠道疫病之一,呈世界性流行,严重危害养鸡业发展。人工复制鸡坏死性肠炎病例是研究该病发病机制及筛选有效药物的重要手段,然而在实际试验过程中,通常受实验动物、感染菌株、诱导病原等多方面因素影响而难以成功复制病例。鉴于此,现综述了影响鸡坏死性肠炎病例成功复制的关键因素,包括攻毒使用的实验动物、菌株毒素、菌株培养条件、诱导病因等,同时探讨了如何通过调整这些因素来改善人工复制鸡坏死性肠炎病例的严重程度,分析了鸡坏死性肠炎病例的病变评分系统,以期为鸡坏死性肠炎的实验室研究及综合防控提供理论基础。

    2021年01期 v.41;No.289 186-191页 [查看摘要][在线阅读][下载 138K]
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  • 免疫层析技术及应用的研究进展

    李雨芮;刘晓雅;张文劲;陈颖钰;郭爱珍;胡长敏;

    免疫层析技术是一类以纳米级标记物探针作为示踪和标记物的检测技术。此类技术除了具有操作简易、反应迅速和时耗较短等特点外,还兼具低成本和高特异性,尤其适用于临场检测。免疫层析技术的发展随着时代需求也在不断加速和更新,现以经典的胶体金免疫层析技术为基础,综述时间分辨与镧系元素荧光免疫层析、荧光微球免疫层析、量子点免疫层析、纳米模拟酶免疫层析及结合新技术的免疫层析的原理、研究进展和临床应用,并对免疫层析技术的未来发展做出展望。

    2021年01期 v.41;No.289 192-198页 [查看摘要][在线阅读][下载 193K]
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