简讯

  • 《中国兽医学报》征稿简则

    <正>《中国兽医学报》1981年创刊,原名《兽医大学学报》,是由教育部主管吉林大学主办的全国性专业性学术期刊,是国内畜牧兽医专业最具影响力的权威性核心期刊,自创刊以来一直被列为中文核心期刊和中国科技核心期刊。常设栏目:研究论文(预防兽医学、人兽共患病、基础兽医学、临床兽医学和动物科学),综述及简讯等。主要报道动物医学、动物科学及其相关学科的最新研究成果与动态等。本刊为月刊,A4开本,每月15日出版,国内外公开发行。1.研究论文应按学术论文的一般编写格式撰写,并须有中、英文摘要和关键词(中英文关键词一一对应,3~8个);题名要简洁明确,尽量不用"浅析、初步和研究(research,study on)"等没有实际意义的词,以及非公知公认的缩写词、符号及外来语等。作者姓名的汉语拼音按姓字母全大写,名首字母大写的形式,如:

    2021年10期 v.41;No.298 1883页 [查看摘要][在线阅读][下载 212K]
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研究论文_预防兽医学

  • 基因Ⅶ型新城疫病毒F基因DNA及亚单位疫苗细胞免疫效果评估

    李乐;孙军峰;陈林娜;师乾凯;邸涛;刘添仪;赵冉;张春玮;韩宗玺;刘胜旺;

    为探索新城疫病毒(NDV)F基因及其蛋白诱导细胞免疫的能力,本研究对基因Ⅶ型NDV CK/CH/LHLJ/1/06株F基因进行了密码子优化和修饰,将其克隆至真核表达载体,获得了重组质粒pCAF。将质粒pCAF转染至悬浮培养的细胞中,上清中表达的蛋白经纯化获得了重组蛋白proF。以构建的质粒pCAF及其重组蛋白proF作为DNA和亚单位疫苗,采用pCAF单独免疫、proF单独免疫、pCAF和proF联合免疫的方式分别免疫SPF鸡,免疫后分离外周血淋巴细胞,通过淋巴细胞增殖试验和细胞因子检测试验评估pCAF和proF诱导的细胞免疫反应。结果显示,proF可刺激分离自pCAF单独免疫组或proF单独免疫组的外周血淋巴细胞增殖和细胞因子IL-4和IFN-γ的分泌,并且proF刺激后,pCAF和proF联合免疫组的外周血淋巴细胞的增殖水平、细胞因子IL-4和IFN-γ的分泌水平显著高于pCAF单独免疫组或proF单独免疫组。上述结果表明,pCAF和proF均可诱导细胞免疫应答,且与pCAF或proF单独免疫相比,pCAF和proF联合免疫组诱导的免疫效果更好。本研究结果为研制新型NDV疫苗提供了思路和理论基础。

    2021年10期 v.41;No.298 1887-1893页 [查看摘要][在线阅读][下载 932K]
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  • 去泛素化酶抑制剂b-AP15抑制马立克氏病病毒的复制

    于翀;王文婧;谢知航;周正轩;王婷;范青松;王梦涵;吕岩;许家翠;艾永兴;

    为了探寻对马立克氏病病毒(MDV)增殖具有靶向抑制作用的药物,本研究以MDV编码的去泛素化酶UL36为靶点,利用去泛素化反应体系,对2 448个化合物进行筛选,应用泛素荧光底物分析抑制物对UL36的抑制动力学,并应用MDV致鸡胚成纤维细胞(CEF)病变模型(CPE)和MDV致鸡马立克氏病(MD)模型分析抑制物对MDV在鸡细胞中复制的影响。结果发现,化合物b-AP15在高于5μmol/L浓度时可显著地非竞争性抑制3 nmol/L UL36的酶活性(P<0.01)。b-AP15对CEF的安全浓度小于1μmol/L,0.25,0.50μmol/L的b-AP15可以显著抑制MDV在CEF上的CPE形成以及在CEF细胞内的复制(P<0.01)。以2,5 mg/(kg·d) b-AP15对MDV攻毒雏鸡通过腹腔给药治疗,可显著抑制MDV在鸡T细胞内的复制(P<0.01)。这些结果说明,去泛素化酶抑制剂b-AP15可抑制MDV在鸡细胞内的复制。

    2021年10期 v.41;No.298 1894-1901页 [查看摘要][在线阅读][下载 1261K]
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  • 一种可视化双重荧光RT-LAMP方法鉴别不同毒力新城疫病毒

    曾婷婷;谢丽基;谢芝勋;罗思思;李孟;黄娇玲;张民秀;张艳芳;范晴;邓显文;

    环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)检测技术具有快速、敏感、仪器简单的优势。为了达到多重鉴别检测的目的,将分子信标引入LAMP反应体系,建立一套鉴别不同毒力新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)的可视化双重荧光RT-LAMP方法。分别设计2套扩增不同毒力ClassⅡNDV F基因的LAMP引物,针对区分NDV毒力的分子标志F蛋白裂解位点的基序差异设计2条分子信标。中、强毒NDV分子信标5′端标记FAM荧光基团,3′端标记Dabcyl淬灭基团;弱毒NDV 5′端标记CY5荧光基团,3′端标记BHQ3淬灭基团。用经过条件优化的RT-LAMP体系对不同毒力NDV及其他病原进行鉴别检测,结果显示,LAMP引物能特异地扩增ClassⅡNDV,在荧光成像仪下,中、强毒NDV显示绿色荧光,弱毒显示红色荧光,混合感染显示黄色荧光,而其他家禽常见病原无荧光显示;以体外转录的NDV ssRNA片段为模板,建立的RT-LAMP反应体系最低检测限度为100 copies/μL;随机检测疑似NDV病料20份,鉴定结果与经分离、测序鉴定的结果一致。本研究建立的分子信标与LAMP结合的检测方法,可为NDV多重检测提供新的思路。

    2021年10期 v.41;No.298 1902-1908页 [查看摘要][在线阅读][下载 2045K]
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  • PRRS减毒活疫苗抗体消长规律及仔猪最佳首免日龄探究

    高胜;李洋;马志倩;李志伟;徐乐乐;焦点;冯英桐;杜兴乾;肖书奇;

    从山东省某规模化猪场随机选择5头健康母猪,在其分娩前35 d免疫1头份猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)减毒活疫苗。从5头母猪分娩的仔猪中随机选择30头,于0,4,7,10,16,21,28,35日龄时采集各仔猪前腔静脉血分离血清,测定PRRS抗体水平及抗体阳性率,以探究仔猪PRRS抗体消长情况。为探究仔猪接种PRRS疫苗的最佳首免日龄,选择175头健康仔猪,随机分为7组,每组25头,分别于0,7,14,21,28,35日龄时免疫PRRS减毒活疫苗,并于免疫后7,14,21,28,35 d时采集血清测定其PRRS抗体水平及抗体阳性率。结果显示,仔猪吮吸初乳后逐渐获得高水平的母源抗体,于4日龄时达到峰值且阳性率高达100%; 7日龄及10日龄时,仔猪体内PRRS抗体仍处在峰值附近,且阳性率为100%;此后,PRRS抗体及阳性率逐渐降低,在28日龄时接近阴性,在35日龄时大部分转为阴性。不同日龄进行首免的各组仔猪中,0日龄免疫组在免疫后7 d即可产生高水平PRRS抗体,且阳性率达75%,之后PRRS抗体逐渐增高,且阳性率逐渐增至96%;4日龄免疫组除在免疫后7 d处于临界值(S/P=3.9)外,其余时间点PRRS抗体均呈阳性,但阳性率为70%~83%;7日龄免疫组与4日龄免疫组相似,除免疫后7 d处于较低值(S/P=0.26)外,其余各时间点PRRSV抗体均呈阳性;而14,21,28,35日龄免疫组仔猪在免疫后14 d之前PRRS抗体均为阴性,血清转化出现在14 d或21 d后,但阳性率较高。综上,妊娠母猪产前35 d免疫PRRS减毒活疫苗所产仔猪体内PRRS母源抗体均值在4日龄时达峰值,28日龄时衰减至接近阴性,而35日龄时大部分转为阴性;仔猪分娩当天(吮吸初乳前)或分娩后4~7 d进行PRRS减毒活疫苗免疫均能使仔猪迅速产生较高水平阳性抗体,且具有较长的免疫持续时间和PRRS抗体阳性率,是较为合理的免疫方案。

    2021年10期 v.41;No.298 1909-1914页 [查看摘要][在线阅读][下载 1464K]
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  • PCV2/PCV3二价重组杆状病毒疫苗的构建与鉴定

    徐鹏;姜宇航;许汪;宋利娜;李乐天;陈竞;郝鹏飞;金宁一;任林柱;李昌;

    本试验旨在构建并获得共表达PCV2/PCV3 Cap蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)。扩增PCV2 Cap及PCV3 Cap基因,将其克隆至pEASY-Blunt载体,分别命名为pEPC2、pEPC3,验证正确后将目的基因分别连接至杆状病毒双启动子表达载体pFastBaC-Dual,获得含有PCV2、PCV3 Cap基因的重组杆状病毒质粒pFBD-PC2-PC3。将该重组质粒转化至大肠杆菌DH10-Bac~(TM)感受态细胞,进行蓝白斑筛选与PCR鉴定,获得重组杆粒Bacmid-PC2-PC3。利用脂质体将Bacmid-PC2-PC3转染至SF9细胞进行病毒拯救,转染后72 h收取上清病毒液,并盲传3代。用其感染Sf9细胞,通过间接免疫荧光及Western blot验证目的蛋白是否表达;同时收集感染后的Sf9细胞上清,在电镜下观察是否形成VLPs。结果显示,成功构建了共表达PCV2/PCV3 Cap蛋白的重组质粒,并获得重组杆粒,拯救出重组杆状病毒。病毒感染Sf9细胞后,目的蛋白获得表达且具有反应原性,能够形成VLPs。本研究成功制备了共表达PCV2/PCV3 Cap蛋白的VLPs,为深入开展猪圆环病毒二价新型疫苗研发奠定了坚实基础。

    2021年10期 v.41;No.298 1915-1921页 [查看摘要][在线阅读][下载 2005K]
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  • 牛病毒性腹泻病毒基因2型云南株的分离与鉴定

    普浩宇;亐开兴;杨贵伟;程美玲;黄必志;王蓉;任珂青;尹革芬;

    本研究利用MDBK细胞分离牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV),通过IFA、qRT-PCR和ELISA方法鉴定,从云南分离获得了1株基因2型BVDV,命名为YNJG。采用IFA,按Reed-Muench法计算出YNJG分离株的滴度为10~(-4.4 )TCID_(50)/100μL。根据其5′UTR序列进行基因分型,确定YNJG属于BVDV-2毒株。全基因序列测序结果显示,YNJG毒株全长为12 288个核苷酸,编码3 898个氨基酸,GenBank登录号为MW168422,与美国BVDV分离株9231核苷酸同源性最高,为95.4%,该毒株不能导致细胞病变,属于非致细胞病变型毒株。毒力分析显示,该毒株5′UTR第216位和275位核苷酸分别为C和T,且1 142位氨基酸处无氨基酸的插入,属于低毒力毒株。

    2021年10期 v.41;No.298 1922-1929页 [查看摘要][在线阅读][下载 4213K]
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  • 河北省致犊牛腹泻主要病原多重PCR检测方法的建立

    高亚桃;李妍;刘立元;王猛;郭姚蕊;刘胜丽;马亚宾;蒋桂娥;刘志勇;秦建华;赵月兰;

    为建立一种能同时检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛轮状病毒(BRV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的多重PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的BVDV的5′-UTR序列、BRV的VP6基因和IBRV的gB基因设计3对特异性引物,通过对反应条件的优化,建立了一种多重PCR检测方法。特异性试验结果表明,该方法对牛冠状病毒(BCoV)、牛细小病毒(BPV)、牛隐孢子虫没有交叉反应,特异性较好;灵敏性试验结果显示,该方法对BVDV、BRV和IBRV的最低检出限分别为1.44×10~5,1.38×10~5,1.2×10~5 copies/μL。利用该方法对从河北省部分地区采集的50份犊牛腹泻粪便样品进行检测,结果显示,BVDV和BRV混合感染检出率为18%(9/50),BVDV和IBRV混合感染检测率为14%(7/50),BRV和IBRV混合感染检测率为22%(11/50),3种病毒混合感染率为4%(2/50)。多重PCR检测和单一PCR检测方法均能检出被检样品中的病原,两种方法的总符合率分别为BVDV 90%、BRV 84%和IBRV 88%。该方法比单一PCR检测方法检测阳性率高,优于单一PCR检测方法,表明该方法可应用于临床检测。本研究建立的多重PCR检测方法,能快速、有效、准确地检测出BVDV、BRV和IBRV 3种病毒,对于流行病学调查及疾病的诊断等具有重要意义。

    2021年10期 v.41;No.298 1930-1936页 [查看摘要][在线阅读][下载 1839K]
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  • 河南省牛肠道病毒感染的流行病学调查与分析

    钱明珠;胡俊英;林倩;孙鹤文;王玮玉;李欣;王申锋;王新平;

    牛肠道病毒(BEV)感染为新发疫病,有关其流行病学研究在国内较少。为掌握河南省BEV感染的流行病学本底,本研究利用BEV双抗体夹心ELISA检测方法对采集于2016―2020年河南省不同地区牛群的粪便样品进行了BEV感染的检测与分析。结果表明,河南省不同地区的牛群存在不同程度的BEV感染,且绝大多数地区腹泻牛群BEV检出率明显高于非腹泻牛群;BEV可感染不同品种的奶牛和肉牛,舍饲牛群BEV感染率明显高于半舍饲和放牧牛群。此外,牛群BEV感染一年四季均可发生,且有逐年升高的趋势。上述结果揭示出河南省牛群BEV感染的流行病学本底,为今后该病的防控提供了流行病学理论依据。

    2021年10期 v.41;No.298 1937-1941页 [查看摘要][在线阅读][下载 1534K]
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  • 外泌体介导小反刍兽疫病毒疫苗株N75-1在细胞间的传播

    张乐言;万阳丽;王婉泽;许其华;马楠謌;王晶钰;齐雪峰;

    本研究旨在探究外泌体介导小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus, PPRV)在细胞间传播的作用。通过免疫荧光、Western blot和TCID_(50)测定等方法检测PPRV疫苗毒株N75-1感染Vero细胞源外泌体(PPRV-exosome)共培养对细胞(正常Vero细胞)PPRV感染和复制的影响。结果显示,分离纯化到典型的"杯托状"外泌体,且PPRV-exosome中含有完整的PPRV基因组。外泌体共培养结果显示,与PPRV-exosome共培养的细胞中出现明显细胞病变;与正常细胞源外泌体(Mock-exosome)共培养细胞相比,PPRV-exosome共培养组可见PPRV阳染细胞且病毒增殖水平显著增加(P<0.05)。进一步研究表明,外泌体抑制剂(GW4869)可导致外泌体介导的PPRV在细胞中的复制呈现剂量依赖性降低。以上结果表明,外泌体能够介导PPRV感染性RNA在细胞间传递并建立增殖性感染。

    2021年10期 v.41;No.298 1942-1948页 [查看摘要][在线阅读][下载 3006K]
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  • 检测羊肠道病毒RT-PCR方法的建立及初步应用

    董坤;胡俊英;李卓宸;蔡梦露;章凡;王玮玉;王浴光;王新平;

    羊肠道病毒(caprine enterovirus, CEV)感染为国内外新发疫病,其诊断方法尚缺乏研究。本研究依据CEV-JL14毒株的基因组序列,设计合成了1对特异性引物,建立了检测CEV的RT-PCR方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行测定,同时应用该方法对疑似CEV感染的临床样品进行检测。结果显示,建立的检测CEV感染的RT-PCR方法具有特异性好、敏感性高、快速和简便等特点,最低检出限为1.13×10~(3 )copies/μL。以建立的RT-PCR方法对通过ELISA方法确定的6份阳性样品和22份阴性样品进行检测,结果显示两者的符合率为100%。本研究建立的RT-PCR方法可用于CEV感染的诊断和流行病学调查。

    2021年10期 v.41;No.298 1949-1952页 [查看摘要][在线阅读][下载 1458K]
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  • 山羊源海藻糖比伯斯坦杆菌(Bibersteinia trehalosi)铁结合蛋白A的原核表达与结构预测分析

    张疏桐;田鑫;胡天豪;孙筱峰;张耕;程方俊;罗献梅;宋振辉;郭建华;

    海藻糖比伯斯坦菌(Bibersteinia trehalosi)为山羊重要致病菌,吸收宿主铁离子是其毒力发挥的重要途径,铁结合蛋白A(ferric binding protein A,FbpA)在铁吸收中起着重要作用。本研究对海藻糖比伯斯坦菌fbpA基因进行了分子进化分析,结合分析结果设计引物对其进行克隆、表达,并根据FbpA氨基酸序列进行结构预测。结果显示,山羊源海藻糖比伯斯坦杆菌fbpA基因大小为1 026 bp,编码341个氨基酸,蛋白相对分子质量约为37 kDa;分子进化分析显示,山羊海藻糖比伯斯坦杆菌fbpA与溶血性曼氏杆菌和副猪嗜血杆菌fbpA相似性最高,与猪胸膜肺炎放线杆菌fbpA相似性较低;结构预测分析显示,山羊海藻糖比伯斯坦杆菌FbpA蛋白的第164,221,222位酪氨酸,第32,84位精氨酸以及第33位谷氨酰胺为可能的Fe~(3+)结合位点。结果表明山羊源海藻糖比伯斯坦菌FbpA可能有铁离子结合位点,与预期相符,为后续结构测定提供了理论支持。

    2021年10期 v.41;No.298 1953-1957页 [查看摘要][在线阅读][下载 1852K]
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  • 4种家兔呼吸道致病菌多重PCR的建立及初步应用

    仇汝龙;范志宇;胡波;宋艳华;魏后军;陈萌萌;朱伟峰;薛家宾;王芳;

    为建立检测家兔铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)和支气管败血波氏杆菌(Brodetella bronchiseptica)的多重PCR检测方法,参考GenBank数据库中登录的铜绿假单胞菌gyrA基因、肺炎克雷伯氏菌rcsA基因、多杀性巴氏杆菌KMT1基因和支气管败血波氏杆菌flaA基因,设计4对特异性引物,建立能同时扩增4种家兔呼吸道致病菌核酸的多重PCR检测方法,并进一步对其特异性和敏感性进行检测。特异性检测结果显示,该方法能同时扩增出4种家兔呼吸道致病菌的核酸,而对兔出血症病毒、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、产气荚膜梭菌、奇异变形杆菌与肠炎沙门菌无特异性扩增条带,说明该方法特异性良好。敏感性检测结果显示,该方法对铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯氏菌、多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌检测的灵敏度分别为2.5×10~(-1),2.5×10~0,2.5×10~(-2),2.5×10~(-2)μg/L。用建立的多重PCR方法对临床样本进行检测,结果表明,该方法可以快速并且特异地鉴别4种细菌病原的单独或混合感染,与单一PCR检测方法相比无显著性差异(P>0.05)。该方法的建立为家兔呼吸道疾病临床鉴别诊断和4种细菌病原的分离鉴定提供重要的技术手段。

    2021年10期 v.41;No.298 1958-1962+1969页 [查看摘要][在线阅读][下载 1698K]
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研究论文_人兽共患病

  • 驼源肠道外致病性大肠杆菌分离鉴定及生物学特性分析

    樊嘉琦;马维武;周学章;

    从内蒙古死亡双峰驼病料中分离致病菌,对其进行生物学特性分析,为治疗和预防该类疾病提供依据。采集死亡双峰驼的肺脏、肝脏、肾脏、心脏和肠管等组织器官,进行病原微生物的分离,观察病原菌的培养特性和染色特性,分析病原菌生化特性。通过与5种肠道内致病性大肠杆菌的核酸比对进行分型鉴定,对该病原菌进行基因组测序,并对其致病性、药物敏感性和有关毒力基因进行分析。结果显示,从双峰驼病料中分离出1株革兰阴性杆菌。该菌在LB琼脂培养基中形成白色、椭圆、光滑的菌落,在伊红美蓝培养基中菌落呈现亮金属色光泽,在哥伦比亚血平板上有明显的溶血环。经全自动生化鉴定仪鉴定,该菌属于大肠杆菌属。PCR结果显示该菌株不属于5种常见的肠道内致病性大肠杆菌,测序分析确定该病原菌为肠道外致病性大肠杆菌。对其进行动物回归试验发现,该菌株有强致病性。药敏试验结果显示,该菌对β-内酰胺类、四环素类、氨基糖苷类、磺胺类、喹诺酮类、多肽类、氯霉素类药物呈现多重耐药,其携带的耐药基因有TEM、tet(B)、aph(3)-1、aac(3)-1、sul-1、sul-2、qnrB、cmlA、cat-1。毒力基因分析显示其携带的毒力基因有irp2、fyuA、iucA、FimA、FimC、iss、colBM、sheA。结果表明,引起双峰驼死亡的病原菌为肠道外致病性大肠杆菌,该菌株携带多种耐药基因和毒力基因,表现出多重耐药和强致病性特征。

    2021年10期 v.41;No.298 1963-1969页 [查看摘要][在线阅读][下载 2560K]
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  • 林麝源大肠埃希菌的分离、鉴定及耐药性与致病性分析

    赵学亮;李哲;王晨骁;王娟;王兴龙;党如意;杨增岐;

    为探究陕西省安康市林麝死亡原因,本试验无菌采集病死林麝肺脏进行细菌的分离、鉴定及耐药性与致病性分析。通过病理解剖、细菌分离纯化、革兰染色镜检、生化鉴定及16S rRNA基因测序等方法对分离株进行鉴定;通过药敏纸片法和毒力基因PCR扩增分析分离株的耐药性和致病性,并对其进行分子分群。结果显示,在死亡林麝肺脏分离出1株革兰阴性短杆菌,经鉴定为大肠埃希菌,命名为LS202010;进化树分析结果显示,分离株LS1与挪威分离株LR883965.1同源性最高;药敏试验结果显示,分离株对阿莫西林、复方阿莫西林、泰万菌素、氨苄西林、泰乐菌素、氨苄青霉素、头孢噻呋钠、金霉素、新霉素、复方磺胺氯达嗪钠、安普霉素等耐药;毒力基因PCR分析结果显示,该菌含有etrA毒力基因,表明该菌属于肠聚集性大肠埃希菌;分子分群结果显示,该菌属于B1群。本试验分离出1株林麝源大肠埃希菌LS202010,并证明其具有较高的致病性和耐药性,为致病性大肠埃希菌的防制奠定理论基础。

    2021年10期 v.41;No.298 1970-1975页 [查看摘要][在线阅读][下载 1854K]
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  • 西藏牦牛源沙门菌的分离鉴定及耐药分析

    李天娇;周赛赛;斑马泽郎;吴丹;卢姊豪;尹力鸿;吕家煌;赵晓慧;李霞;索朗斯珠;

    采集西藏拉萨、林芝、那曲3个地区共91份腹泻牦牛粪便,通过细菌的培养特性、生化鉴定、药敏试验以及分子生物学方法对样品进行沙门菌的分离鉴定,检测沙门菌特异性基因,并对分离菌株进行血清型分型、遗传进化分析、耐药表型及耐药基因型研究。结果表明:91份样品中共分离出11株沙门菌,分离率为12.08%,其中都柏林沙门菌和丙型副伤寒沙门菌为优势血清型;分离菌株的测序结果表明其与英国人源(CP054827.1)、美国牛源(CP025241.1)等多种动物源沙门菌invA基因的核苷酸序列同源性高达100%。药物敏感性试验结果表明,11株分离菌株对6类广谱抗生素药物均表现出不同程度耐药,对β-内酰胺类抗生素的耐药率达81.82%,对喹诺酮类药物则较为敏感,其耐药率仅为18.10%;分离菌株均存在多重耐药现象,对耐药基因检测发现,tetA基因的检出率最高为90.91%,其次是floR和bla_(TEM)耐药基因的检出率为81.82%,而喹诺酮类耐药基因gyrA、gyrB未检出。本研究通过对西藏牦牛源沙门菌的优势血清型、流行情况、遗传进化趋势及耐药情况进行分析,对牦牛源沙门菌的防治、后续研究及临床用药等方面具有重要的指导意义。

    2021年10期 v.41;No.298 1976-1982页 [查看摘要][在线阅读][下载 2276K]
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  • 口蹄疫病毒样颗粒诱导的肥大细胞活化对IgG应答的影响

    刘佳欢;崔川;张俊娟;韩伟建;张义明;李丽敏;王家鑫;

    为研究口蹄疫病毒样颗粒(foot-and-mouth disease virus-like particles, FMDV VLP)诱导的肥大细胞(mast cells, MCs)脱颗粒对IgG应答的影响,用FMDV VLP免疫小鼠(VLP组),同时设置PBS对照组,首次免疫后14 d进行加强免疫,分别在14 dpi(days post immunization)和28 dpi,取2组小鼠皮肤、颌下淋巴结、脾脏与颌下腺,用恒温冷冻切片机制备冰冻切片,经甲苯胺蓝染色观察MCs脱颗粒现象;采用ELISA检测小鼠血清中TNF-α和IL-10以及FMDV特异性IgG抗体的水平。结果显示,FMDV-VLP可在体内诱导小鼠MCs脱颗粒,14 dpi时VLP组主要是皮肤表皮内的MCs脱颗粒和淋巴结中被膜下窦的MCs脱颗粒;28 dpi时,VLP组主要是皮下组织中的MCs和淋巴结深层髓质的MCs脱颗粒。14 dpi VLP组小鼠皮肤(P<0.01)、淋巴结(P<0.01)和脾脏(P<0.05)中MCs活化数量分别显著高于14 dpi PBS组;而28 dpi VLP组小鼠皮肤(P<0.01)、淋巴结(P<0.01)、脾脏(P<0.01)与颌下腺(P<0.05)中MCs活化数量均显著高于28 dpi PBS组。VLP组小鼠血清中FMDV特异性IgG水平在14 dpi呈阴性,而在28 dpiIgG水平呈阳性。此外,在14 dpi和28 dpi, VLP组小鼠血清中TNF-α水平均显著高于PBS组(P<0.05),而血清中IL-10水平与PBS组相比均没有统计学差异。以上结果表明,FMDV VLP可以诱导小鼠皮肤、淋巴结、脾脏和颌下腺中的MCs活化,同时可以促进机体分泌TNF-α,提示MCs颗粒成分可能在VLP诱导小鼠产生IgG免疫应答过程中发挥了某种促进作用。本研究为FMDV疫苗新型佐剂的研发及免疫应答机制研究提供了理论基础。

    2021年10期 v.41;No.298 1983-1989页 [查看摘要][在线阅读][下载 3987K]
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研究论文_基础兽医学

  • 一种表达eGFP的rAAV-SaCas9系统的构建及应用

    赵忆甜;李秀青;王晓帆;高峰;张坤朋;翁少亭;

    目前,CRISPR/Cas基因编辑技术在培育转基因家畜中已经被广泛应用,但是转基因家畜还存在抗病力弱、组织易癌变及功能紊乱等缺点。因此,基因编辑成年家畜的特定组织成为提升家畜生产性能并且避免转基因动物缺点的一种有效方法。本研究构建了一个rAAV9-SaCas9-eGFP系统,包括由EF1α启动子控制的SaCas9和tRNA启动子控制的sgRNA,还包括绿色荧光蛋白eGFP表达盒,通过表达的eGFP能够明确rAAV9-SaCas9-eGFP在细胞中的存在时间以及在组织中的分布。将rAAV9-SaCas9-eGFP系统导入到C57BL/10小鼠大腿肌肉中对肌生成抑制素基因进行编辑,从而改善肌肉质量。结果表明,成功构建了能够表达eGFP荧光蛋白和进行基因编辑的rAAV9-SaCas9-eGFP系统,该系统只在注射的特定位点有eGFP荧光的表达,没有扩散到周围组织中,这对避免非靶向组织基因编辑以及突变有重要意义。rAAV9-SaCas9-eGFP系统在C57BL/10小鼠大腿肌肉中对肌生成抑制素基因有较高编辑效率,能够明显增加肌肉质量和肌细胞体积,在提高肉用家畜的生产性能方面具有潜在的应用价值。

    2021年10期 v.41;No.298 1990-1997页 [查看摘要][在线阅读][下载 3742K]
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  • 维甲酸对成肌细胞细胞周期进程及凋亡的影响

    李成绪;马莉;连帅;徐彬;逯静静;李鑫月;李倩茹;杨焕民;

    成肌细胞的周期进程及凋亡对骨骼肌的损伤修复至关重要。本研究旨在细胞水平探讨全反式维甲酸(ATRA)对C2C12细胞周期进程及凋亡的影响。试验组C2C12细胞用100 nmol/L ATRA处理48 h,对照组不予处理。用MTS、Ki67及EdU法检测ATRA对C2C12细胞增殖的影响,通过Western blot检测ATRA对C2C12细胞中增殖相关蛋白CDK2、CDK4、CDK6以及细胞周期蛋白D1 (Ccnd1)、Ccnd2、Ccnd3和Ccne1表达的影响,并检测ATRA对Bcl-2、Bax、Caspase-3等凋亡相关蛋白表达的影响,最后通过流式细胞术检测细胞周期进程以及凋亡率。结果显示,与对照组相比,100 nmol/L ATRA可促进C2C12细胞增殖,并且上调上述几种增殖相关蛋白的表达水平。ATRA促进C2C12细胞从G1期进入S期。此外,ATRA处理使C2C12细胞Bcl-2显著升高,而Bax及活化的Caspase-3显著降低,从而显著降低了细胞凋亡率。综上所述,100 nmol/L ATRA处理48 h会促进C2C12细胞的增殖并抑制细胞凋亡,对骨骼肌的损伤修复具有潜在作用。

    2021年10期 v.41;No.298 1998-2002页 [查看摘要][在线阅读][下载 3296K]
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  • 麦哲伦企鹅曲霉菌病的组织病理学观察和病原分离鉴定

    宋志琦;孙艳明;苏磊;屈亚锦;赵文杰;韩云林;秦川;

    对病死的麦哲伦企鹅进行剖检、大体病变检查、组织病理学检验以及病原的分离与鉴定,为企鹅的临床诊断和饲养管理提供数据支持。采集死亡麦哲伦企鹅的各脏器,应用石蜡切片及HE染色、六胺银染色和PAS染色,结合组织切片扫描系统,对各脏器进行组织病理学观察并进一步对病料进行病原分离和鉴定。通过大体病变观察,可见企鹅胸腔内部沿着气管两侧、肺脏和气囊周围散布大量浅黄色粟粒至杏核大小结节;肺脏呈现散在的大小不一的典型特异性肉芽肿结构,病变累及消化系统等其他脏器。肉芽肿结节中心为坏死区域,经六胺银染色和PAS染色,可在坏死区域分别观察到深褐色和紫红色的真菌菌丝样结构。从企鹅肺部病灶共分离12株真菌,对分离菌株的ITS序列进行测序并进行BLAST比对鉴定,基于ITS序列构建系统发育树,结合形态学特征,将这些菌株分别鉴定为6个种,其中烟曲霉菌分离频率最高,占分离菌株的33%;经高通量测序,获得270个操作分类单元,其中烟曲霉菌的相对丰度为91%,因此可进一步确定该病灶主要由曲霉菌引起。

    2021年10期 v.41;No.298 2003-2008+2014页 [查看摘要][在线阅读][下载 4736K]
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  • 绵羊乳腺上皮细胞的分离鉴定及炎性模型的建立

    宣超莹;段景龙;刘茂军;马玉忠;

    探索高效易行的绵羊乳腺上皮细胞原代培养方法并建立细胞炎性模型。分别采用组织块法、酶消化法和酶消化组织块法分离培养绵羊的乳腺上皮细胞,通过形态学观察、免疫荧光染色和RT-PCR等方法对细胞进行鉴定;用不同浓度的脂多糖(LPS)作用细胞后,通过CCK-8法检测细胞相对存活率;利用ELISA方法检测IL-8和TNF-α表达量;通过Western blot检测TLR-4蛋白表达量。结果显示,酶消化组织块法是最符合预期的方法,可在较短时间内获得活力旺盛的乳腺上皮细胞;细胞生长曲线呈"S"型,CK-18免疫荧光染色呈阳性,β-酪蛋白基因表达呈阳性。10 mg/L LPS处理12 h的细胞相对存活率明显升高(P<0.01),细胞上清液中IL-8和TNF-α表达量极显著上升(P<0.01),TLR-4蛋白表达量升高,表明细胞炎性模型建立成功。

    2021年10期 v.41;No.298 2009-2014页 [查看摘要][在线阅读][下载 2685K]
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  • 3例犬皮肤肥大细胞瘤病理学及c-kit免疫组织化学染色研究

    马莹;谢腾熠;张竞;石俊超;高蕊;徐荣艺;贺文琦;高丰;陆慧君;

    为了对临床送检的3例犬皮肤肿物进行确诊与预后评估,本研究对送检样品制作组织切片,HE染色后在显微镜下可见大量增生的细胞,呈现"煎蛋样"形态,胞浆内含有蓝灰色颗粒物质,符合肥大细胞的特征;进而采用甲苯胺蓝染色,观察到肿瘤细胞胞浆内颗粒物质呈蓝紫色的特异性着色,进一步证实其为肥大细胞起源;最后通过c-kit免疫组织化学染色判断免疫表型,可见肿瘤细胞KIT蛋白呈不同标记类型的阳性着色。通过病理学分析及c-kit染色,确定3个病例均为皮肤型肥大细胞瘤(cutaneous mast cell tumor, cMCT)。研究结果不仅可对临床病例的治疗方案设计与预后评估提供参考,而且可为犬肥大细胞瘤的确诊提供可靠的技术方法。

    2021年10期 v.41;No.298 2015-2020页 [查看摘要][在线阅读][下载 3389K]
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研究论文_临床兽医学

  • AEE在人工胃/肠液和肠道菌群及生物样品中的稳定性

    陶琦;秦哲;白莉霞;刘希望;李世宏;杨亚军;李剑勇;

    考察阿司匹林丁香酚酯(AEE)在人工胃/肠液和肠道菌群及生物样品中的稳定性,为开发AEE口服制剂提供理论基础。采用高效液相色谱法(HPLC)分别检测AEE在空白人工胃液(pH1.3,不含酶)、空白人工肠液(pH6.8,不含酶)、人工胃液(pH1.3,含胃蛋白酶)、人工肠液(pH6.8,含胰蛋白酶)中孵育0.0,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0 h的含量变化;分别检测AEE与SD大鼠(雄性)肠道菌群共孵育0.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0,12.0 h,在生物样品中孵育0.0,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0 h的含量变化。结果表明,AEE在空白人工胃液中孵育0~2 h剩余百分比基本没有发生变化,之后随着时间的增加,剩余百分比有明显地下降,孵育6.0 h后下降到71%;在人工胃液中的剩余百分比随着时间的增加而下降,从0 h的98%到6 h的65%;在空白人工肠液中孵育,剩余百分比随着时间延长,逐渐下降,从0 h的98%到6 h的75%;在人工肠液中孵育0~1 h,稍微下降,但孵育1~3 h,剩余百分比迅速从77%下降到22%,孵育到5 h时,剩余百分比降为0%;AEE在SD大鼠肠道菌群中孵育时发生了降解,随着时间的延长,AEE的剩余百分比逐渐下降,生成的两种主要代谢产物为水杨酸和丁香酚;而AEE在肝、胃、大肠、小肠等生物样品中发生明显降解,直接生成的两种主要代谢产物为水杨酸和丁香酚。综上所述,AEE在空白胃液、人工胃液、空白人工肠液有一定程度的降解,但在人工肠液、生物样品和SD大鼠肠道菌群中可以发生明显的降解。

    2021年10期 v.41;No.298 2021-2026页 [查看摘要][在线阅读][下载 2777K]
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  • 羟基红花黄色素A对LPS诱导的羊子宫内膜上皮细胞炎性反应的抑制作用

    段景龙;宣超莹;刘茂军;马玉忠;

    为了探讨羟基红花黄色素A(HYSA)对LPS诱导的羊子宫内膜上皮细胞炎性反应的抑制作用,用50 mg/L LPS作用细胞12 h,构建子宫内膜上皮细胞炎性反应模型。分别用60,80,100 mg/L HYSA作用子宫内膜上皮细胞炎性反应模型12 h,通过ELISA检测细胞上清中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,用Western blot检测p-p38、p-JNK蛋白的表达。结果表明,LPS处理后12 h, TNF-α、IL-1β和IL-6的含量与对照组相比显著增加(P<0.05),p-p38、p-JNK蛋白的相对表达量极显著增加(P<0.01)。HYSA作用后12 h, 80 mg/L HYSA处理组IL-1β和IL-6的含量显著降低(P<0.05);60,80,100 mg/L HYSA处理组TNF-α的含量极显著降低(P<0.01)。HYSA作用后12 h, 60,80,100 mg/L处理组p-JNK蛋白的相对表达量与对照组相比极显著降低(P<0.01);80,100 mg/L处理组p-p38蛋白的相对表达量与对照组相比极显著降低(P<0.01)。由上可知,HYSA可以降低TNF-α、IL-1β和IL-6的表达量及p-p38、p-JNK蛋白的相对表达量,对羊子宫内膜上皮细胞炎性反应有抑制作用,其最佳质量浓度为80 mg/L。

    2021年10期 v.41;No.298 2027-2031页 [查看摘要][在线阅读][下载 2321K]
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研究论文_动物科学

  • 双乾肉羊全基因组SNP/InDel分析及毛色相关候选基因鉴定

    刘正喜;武斌;胡明月;白春艳;赵中利;曹阳;马惠海;闫守庆;

    为获得双乾肉羊全基因组遗传变异信息,解析影响双乾肉羊毛色的相关候选基因及突变位点,本研究分别对6只红头和6只黑头双乾肉羊进行基因组重测序,系统分析了全基因组水平的单核苷酸多态性(SNP)和小片段插入/缺失(InDel)多态性,并通过群体分化指数(F_(ST))方法进行选择信号检测,将F_(ST)值排在前1%的染色体区段作为受选择候选区域,对受选择区域包含的基因进行注释,筛选毛色相关候选基因及其多态性位点。结果显示:通过重测序,在12个样本中共检测到27 877 089个SNP和4 461 716个InDel;选择信号分析共检测到1 124个候选区域,依据基因注释结果筛选MC1R作为红头和黑头双乾肉羊毛色相关候选基因;通过重测序数据分析在MC1R基因编码区中存在5个SNP,其中2个为错义突变(c.218T>A和c.361G>A),群体基因分型结果表明,黑头双乾肉羊在c.218 T>A位点基因型为AA或AT,在c.361 G>A位点基因型为AA或AG,而红头羊在2个位点的基因型分别为TT和GG合子,即2个错义突变与双乾肉羊黑毛色表型完全相关,且黑毛色对红毛色为显性。该研究为双乾肉羊种质特性的遗传基础研究以及分子标记辅助选择育种提供了科学依据。

    2021年10期 v.41;No.298 2032-2037+2043页 [查看摘要][在线阅读][下载 2825K]
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  • miRNA-370及其靶基因Wnt3a和KITLG在白色和棕色绒山羊皮肤中的表达与定位

    李建平;吴素芳;李健宇;香巴;

    哺乳动物毛纤维在人类生活中发挥着不可或缺的作用,已发现300多个基因与哺乳动物皮肤、眼睛和毛发颜色相关,而研究证实miRNA对基因有着重要的调控功能。本试验前期研究发现miR-370在白色和棕色绒山羊皮肤组织中差异表达,但其如何通过调控基因表达影响毛色仍未知。本试验通过生物信息学软件筛选出miR-370的靶基因Wnt3a和KITLG,利用qPCR和免疫组化技术分析Wnt3a和KITLG在白色、棕色绒山羊皮肤中的表达、分布情况及相互关系,同时测定不同毛色皮肤黑色素的含量。结果显示,棕色绒山羊皮肤黑色素含量显著高于白色绒山羊皮肤黑色素含量;Wnt3a和KITLG主要表达于绒山羊皮肤的基底膜和内、外根鞘,且在棕色绒山羊皮肤的表达显著高于白色绒山羊,与miR-370的表达趋势相同,表明miR-370通过调控Wnt3a和KITLG参与绒山羊毛色的形成。

    2021年10期 v.41;No.298 2038-2043页 [查看摘要][在线阅读][下载 2455K]
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  • 膨化艾草秸秆对湖羊生长性能、血清抗氧化及免疫的影响

    侯沛君;张立阳;韩露;杨亚博;高腾云;王林枫;朱河水;付彤;

    本试验旨在研究膨化艾草秸秆(艾草秸秆∶玉米=4∶6的膨化混合物)对湖羊生长性能、血清抗氧化及免疫指标的影响。选用日龄相近、体质量(25.27±0.57) kg的健康湖羊72只,随机分为3个处理组,每个处理6个重复,每个重复4只(公母各半):对照组(基础饲粮即精料+干花生秧)、艾草秸秆组(基础饲粮-16%干花生秧+16%艾草秸秆)、膨化艾草秸秆组(基础饲粮-16%干花生秧+16%膨化艾草秸秆)。预试期15 d,正试期56 d,于试验期第56天采集血液样品,测定血清抗氧化、免疫指标。结果显示,艾草秸秆组与膨化艾草秸秆组湖羊的干物质采食量和日增重均显著高于对照组(P<0.05),料重比与对照组相比差异不显著(P>0.05)。试验各组的血清生化指标差异不显著(P>0.05)。膨化艾草秸秆组湖羊血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量和总抗氧化能力(T-AOC)显著高于对照组(P<0.05),试验各组的过氧化氢酶(CAT)含量差异不显著(P>0.05)。艾草秸秆组的丙二醛(MDA)含量显著低于对照组(P<0.05),膨化艾草秸秆组与对照组的丙二醛含量差异不显著(P>0.05)。膨化艾草秸秆组湖羊血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)含量显著高于对照组(P<0.05),肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)含量显著低于对照组(P<0.05),T淋巴细胞亚群CD4和CD8含量显著高于对照组(P<0.05),干扰素-γ(INF-γ)和CD4/CD8含量3组间差异不显著(P>0.05)。艾草秸秆组湖羊血清中IgA、IgM、IgG含量与对照组差异不显著(P>0.05),TNF-α、IL-8含量显著低于对照组(P<0.05),CD4和CD8含量显著高于对照组(P<0.05),其余指标差异不显著(P>0.05)。综上所述,艾草秸秆膨化前后均能提高湖羊的生长性能,但膨化艾草秸秆可以改善湖羊血清的抗氧化能力和免疫功能。

    2021年10期 v.41;No.298 2044-2050页 [查看摘要][在线阅读][下载 1944K]
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综述

  • 异尖线虫检测技术研究进展

    陈秀琴;刘晓雷;林锋强;白雪;

    异尖线虫病是因误食含异尖线虫第三期幼虫的海鱼而感染的一种食源性寄生虫病,病理表现为轻度至重度的胃肠道和/或过敏症状,临床主要症状表现为鼻炎、荨麻疹和过敏性休克。随着生食海鱼饮食方式的盛行,人们感染异尖线虫病的可能性将增大。本研究总结了异尖线虫的生活史及其在海鱼中的感染情况,并重点综述了异尖线虫的检测技术。

    2021年10期 v.41;No.298 2051-2058页 [查看摘要][在线阅读][下载 2641K]
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  • 西尼罗河病毒感染与免疫机制研究进展

    孙静;何展;蔡畅;卫芳芳;程昌勇;宋厚辉;

    西尼罗河病毒(West Nile virus, WNV)是一种在世界范围内流行的嗜神经虫媒病毒,鸟类、马等多种动物和人均易感,蚊虫和鸟类是该病毒的主要传播媒介。WNV感染人引起以亚临床症状为主的西尼罗河热(West Nile fever, WNF),以典型的西尼罗河脑炎以及神经系统疾病为主要特征,严重可致死亡。研究显示,WNV感染在全球范围内呈逐步扩大趋势,对全世界人类公共卫生构成了重大威胁。WNV的持续蔓延以及缺乏有效防治感染的疗法和疫苗,迫切需要揭示WNV感染机制,从而为有效防控该疾病提供理论根据。现主要对近年来有关WNV感染以及宿主病毒互作免疫机制的研究进展进行综述。

    2021年10期 v.41;No.298 2059-2063页 [查看摘要][在线阅读][下载 2489K]
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  • 牛呼吸道疾病综合征防治研究进展

    陈平;王斐;何振富;郝怀志;

    牛呼吸道疾病综合征(BRDC)是由多种因素及病原体感染引起的系统性呼吸道疾病,在肉牛断奶、运输、混群等饲养过程中常见,是一种危害养牛业健康发展的重要疾病。该病发病情况复杂、治疗方案多样,在日常肉牛繁育生产过程中造成一定经济损失。现从牛呼吸系统疾病的病原学鉴定及分析、临床症状、诊断与检测方法、环境因素改变后的预防措施、中西医结合治疗方案等方面进行阐述,为牛呼吸道疾病的综合防治提供理论依据和技术指导。

    2021年10期 v.41;No.298 2064-2068页 [查看摘要][在线阅读][下载 727K]
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  • 金黄色葡萄球菌生物膜形成及调控机制研究进展

    李新圃;罗金印;武小虎;李宏胜;丁学智;

    金黄色葡萄球菌(金葡菌)具有极强的致病性和耐药性,这与它易于形成生物膜密切相关。金葡菌生物膜的形成,最初认为与多糖细胞间黏附素(PIA)有关,但进一步研究发现,即使没有PIA,金葡菌也可以利用细胞壁锚定蛋白(CWA)形成生物膜。根据研究数据,可以将生物膜形成过程分为4个阶段:初始附着、细胞聚集、生物膜成熟、生物膜分散。金葡菌生物膜的形成主要受群体感应(QS)系统调控,该系统涉及各种调控因子,研究较多的有辅助基因调节子(Agr)、葡萄球菌附属调节子(Sar)、转录因子Sigma B(SigB)和信号传导系统(LuxS/AI-2)。这些调控因子不仅具有各自的调控系统,而且相互协同和制约,共同调节金葡菌生物膜的形成和毒素的释放,与金葡菌的耐药性和致病性密切相关。通过对QS系统及其调控因子的靶向干预,有望找到防控金葡菌感染的新途径。本综述归纳总结了金葡菌生物膜的形成及调控机制研究进展,以期为进一步深入研究提供参考。

    2021年10期 v.41;No.298 2069-2075页 [查看摘要][在线阅读][下载 933K]
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  • 间充质干细胞治疗动物肾损伤研究进展

    何文来;李巴仑;张慧敏;刘蕴蝶;彭莎;

    肾损伤是一种临床中较为常见的疾病,具有高发病率和高病死率的特点,可由多种原因引起且发病率随动物年龄的增长而增长。近来年,随着干细胞治疗研究的深入,以间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)为代表的干细胞治疗肾损伤的报道不断增多。此外,各种有效策略及无细胞治疗技术的开发也进一步推进了MSCs治疗肾损伤的发展。现总结近年来关于MSCs治疗肾损伤的研究进展,以期为MSCs治疗肾损伤的进一步研究和临床应用提供一定的理论依据和技术指导。

    2021年10期 v.41;No.298 2076-2084页 [查看摘要][在线阅读][下载 1506K]
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