- 赵晶;施开创;刘惠心;尹彦文;龙凤;陆文俊;屈素洁;司红彬;
针对当前我国流行的猪圆环病毒(porcine circovirus, PCV)1型(PCV1)、2型(PCV2)和3型(PCV3),设计3对特异性引物，通过对引物浓度、退火温度和循环次数的优化，建立了鉴别检测PCV1、PCV2和PCV3的三重PCR方法。结果显示，该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，只能检出PCV1、PCV2和PCV3,其他猪病毒均未能扩出；对PCV1、PCV2和PCV3质粒标准品的检测下限分别为3.63×10~3,3.63×10~1,3.63×10~(2 )拷贝/μL;相同条件下的扩增获得均匀一致的结果。利用所建立的三重PCR方法检测2018—2020年采自广西各地的1 308份猪组织病料，结果显示，PCV1、PCV2和PCV3的阳性率分别为2.14%,56.65%,5.58%,并存在混合感染现象；PCV1、PCV2阳性率逐年下降，PCV3阳性率稳定控制，不同地市之间阳性率有所差异。结果表明，本研究成功建立了一种快速、特异、灵敏、经济的三重PCR方法，可用于PCV1、PCV2和PCV3的鉴别检测和流行病学调查；当前广西猪群普遍感染PCV1、PCV2和PCV3,应加强防控。
2022年03期 v.42;No.303 413-420页 [查看摘要][在线阅读][下载 805K] [下载次数：749 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 吕志凯;张伟超;陈永林;孙秀秀;王庚;涂军;钱平;程国富;陈品;
为探究猪圆环病毒3型(PCV3)在感染猪组织器官中的分布规律及其对猪组织产生的病理损伤变化，对广西某地区PCV3感染猪进行临床症状和病理学观察，发现单独感染PCV3病猪呈现典型的断奶仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)症状，镜检发现病例呈现坏死性心肌炎、间质性肺炎、轻度的淋巴细胞性肝炎及免疫器官淋巴细胞消耗型炎症。免疫组化法检测结果发现淋巴组织中信号最强，PCV3阳性信号主要位于单核和巨噬细胞胞质中；PCV3可单独引发仔猪断奶衰竭综合征且23个组织中均有病毒分布。
2022年03期 v.42;No.303 421-425页 [查看摘要][在线阅读][下载 3096K] [下载次数：373 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 郭广君;韩强;吕素芳;王文秀;李峰;李振伟;谢金文;张翠花;沈志强;
为了评价不同佐剂猪伪狂犬病病毒(PRV)SA株gB蛋白主要抗原决定簇gBb亚单位疫苗免疫小鼠的安全性和免疫效力，以PRV SA强毒株基因组为模板扩增gB基因保守区域，连接pET-28a载体构建pET-28a/gB表达质粒，并经基因测序和Western blot鉴定；制备的抗原与不同佐剂配比分别制备亚单位疫苗，开展不同佐剂gB蛋白主要抗原决定簇gBb亚单位疫苗免疫昆明小鼠免疫效力评估，测定免疫后不同时间体液免疫抗体水平，进行免疫攻毒保护试验，测定免疫保护力。结果表明，不同佐剂gB蛋白主要抗原决定簇gBb亚单位疫苗免疫昆明小鼠后能够产生较高的抗体水平，模式动物昆明小鼠攻毒免疫保护率达到60%,为PRV新型亚单位疫苗的研制提供了依据。
2022年03期 v.42;No.303 426-431页 [查看摘要][在线阅读][下载 1128K] [下载次数：492 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 杨赛霞;赵亚茹;刘志杰;杨吉飞;张忠辉;樊洁;耿抒贤;吕欣倩;敬梦瑶;殷宏;牛庆丽;
为制备抗非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV) pH359L蛋白的多克隆抗体，本研究以GenBank登录的ASFV HLJ/18毒株基因序列设计H359L基因的特异性引物，扩增H359L基因并构建pET-28a-H359L原核表达质粒，将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，经IPTG诱导表达和镍柱亲和层析纯化蛋白后，免疫新西兰大白兔制备抗pH359L蛋白的多克隆抗体，通过Western blot和IFA试验对制备的抗体反应性进行测定。结果表明，构建的pET-28a-H359L重组质粒无点突变；重组蛋白pH359L在37℃以0.1 mmol/L的IPTG诱导表达量最高，其相对分子质量约为43.0 kDa,与预期大小一致；蛋白以包涵体形式表达；抗pH359L多克隆抗体效价达到1∶512 000;Western blot和IFA结果显示，制备的多克隆抗体能够特异性识别ASFV感染猪肺泡巨噬细胞表达的天然pH359L蛋白。本研究为揭示ASFV pH359L蛋白的功能及ASFV相关的转录机制奠定基础。
2022年03期 v.42;No.303 432-438页 [查看摘要][在线阅读][下载 1892K] [下载次数：888 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 芦静;尚超;葛晨晨;姚伟;金宁一;金鑫;李文杰;李霄;
为了探索双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-hTERTp-E1a(Ad-VT)对肺癌干细胞的抑制作用，本研究采用无血清悬浮方法培养肺癌干细胞，采用流式细胞术鉴定肺癌干细胞；通过CCK-8法检测肺癌干细胞对化疗药物敏感性及Ad-VT对肺癌干细胞的特异性杀伤能力；通过TMRM、Annexin V染色检测Ad-VT诱导肺癌干细胞凋亡能力；Western blot检测干细胞调控因子、耐药蛋白和迁移侵袭相关蛋白表达水平。结果显示，成功分离和培养了肺癌干细胞，肺癌干细胞对化疗药敏感性低，Ad-VT对肺癌干细胞有显著杀伤作用，可引起肺癌干细胞线粒体膜电位降低，诱导细胞凋亡，并抑制肺癌干细胞的迁移和侵袭。结果表明，双特异性溶瘤腺病毒Ad-VT对肺癌干细胞具有显著抑瘤作用，是现有治疗方案的有效补充。
2022年03期 v.42;No.303 439-444页 [查看摘要][在线阅读][下载 2654K] [下载次数：242 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 刘勃兴;刘畅;王利丽;付祥;吴同垒;刘洁;高荣菊;张志强;史秋梅;
为了解河北地区牛群牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)抗体阳性率，本研究利用E.coli原核表达系统表达了E~(rns)蛋白。以该蛋白为包被抗原，通过优化各反应条件，建立了检测BVDV抗体的间接ELISA方法，并利用该方法检测河北地区477份牛血清样品的BVDV抗体阳性率。特异性试验结果显示，本研究建立的BVDV抗体ELISA检测方法仅能检出BVDV抗体阳性血清，而检测牛传染性鼻气管炎病毒阳性血清、牛布鲁菌阳性血清、牛轮状病毒阳性血清、牛冠状病毒阳性血清、口蹄疫病毒阳性血清均为阴性。敏感性试验结果显示，建立的ELISA方法检测BVDV阳性血清具有较高的敏感性。重复性试验结果显示，ELISA检测方法的批内和批间变异系数均小于10%。应用本研究建立的抗体ELISA检测方法与IDEXX试剂盒检测某牛场90份血清样品，总符合率为93.33%。对河北地区18个牛场的477份血清样品进行检测，结果接种疫苗牛场的血清阳性率为30.43%～92.86%,未接种免疫牛场抗体阳性率为0%～100%。结果表明，本研究建立的BVDV抗体ELISA检测方法具有较高的特异性、敏感性和重复性，可应用于临床牛血清样品检测，为河北地区BVDV的监测和防控提供技术支持。
2022年03期 v.42;No.303 445-451+471页 [查看摘要][在线阅读][下载 2013K] [下载次数：598 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 杨少华;黄庆华;崔宁;孙守礼;许传田;
为了掌握野鸟新城疫病毒(NDV)的流行情况，2016年对山东东营黄河口湿地野鸟NDV进行了流行病学调查，共采集了352份健康野鸟的泄殖腔拭子，在鸡胚上进行病毒的分离鉴定，然后对分离株进行了生物学特性和遗传进化分析。结果显示，共分离到9株NDV,其中8个毒株MDT和ICPI分别为>96 h和≤0.5,为低毒力株；1个毒株MDT和ICPI分别为79 h和1.62,为中等毒力株。对F基因测序及序列分析显示9个分离株F蛋白裂解位点处氨基酸序列为~(112)E-R-QE-R-L~(117)或~(112)G-R-Q-G-R-L~(117),具有典型的弱毒株特征。F基因系统发育分析将9个分离株分为ClassⅠ和ClassⅡ两类，其中6个分离株属于ClassⅠ,3株属于ClassⅡ,进一步分析显示6株ClassⅠ毒株中2株属于基因1.2型，4株属于基因1.1.1型，3株ClassⅡ毒株中1株属于基因Ⅰ型，2株属于基因Ⅱ型。结果表明，野鸟携带NDV非常普遍且基因型较广泛，Ⅰ类NDV仍是野鸟中的优势基因型。分离到2株与疫苗株LaSota同源的毒株，其中虽然1个分离株F蛋白裂解位点氨基酸基序与疫苗株LaSota一致，但生物学特性显示为中等毒力株，该毒株可能是在疫苗的选择压力下进化而来，对环境及家禽存在潜在的威胁。本研究为进一步了解野鸟携带NDV与家禽NDV传播、暴发之间的联系提供了依据。
2022年03期 v.42;No.303 452-456页 [查看摘要][在线阅读][下载 1789K] [下载次数：222 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 李利杰;孙文杰;刘琳;王赛楠;赵振超;张世华;陶明月;高文明;李新生;
对28日龄的SPF鸡和SPF鸭通过肌肉注射10~(7.8 )TCID_(50)血清4型禽腺病毒(FAdV-4) WZ株，系统比较了SPF鸡和SPF鸭的临床症状、大体病变、存活率、体质量、组织病理学变化，并通过实时荧光定量PCR方法检测组织病毒载量和泄殖腔排毒情况。结果显示，FAdV-4强毒株可致SPF鸡发生严重的包涵体肝炎-心包积液综合征(HHS)且导致100%死亡，在多种组织中观察到组织病理学损伤，并检出FAdV-4,且在感染后1 d即可检测到排毒。相反，SPF鸭在攻毒后14 d的观察期内均未出现发病和死亡；与对照组SPF鸭相比体质量增加趋势一致，差异不显著(P>0.05);剖检未见病变和组织病理学损伤；在鸭内脏组织样品和泄殖腔拭子中均未检出FAdV-4。结果表明，FAdV-4强毒株对SPF鸡具有很强的致病性，而对SPF鸭并无致病性。本研究通过比较FAdV-4强毒对鸡和鸭易感性的差异，证实FAdV-4强毒只感染鸡不感染鸭。
2022年03期 v.42;No.303 457-463页 [查看摘要][在线阅读][下载 4890K] [下载次数：404 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 王国康;李丽;贾妙妙;冯贺龙;曾驰;罗青平;温国元;
为建立禽副黏病毒Ⅱ型(avian paramyxovirus 2,APMV-2)的反向遗传操作平台，对NCBI已经公布的12条APMV-2全基因组序列进行分析比对，选取较为保守的F8株为模板，将该毒株基因组中特有的10处核苷酸突变为其他毒株共有的一致序列，增加一段大部分毒株共有的非编码区序列，获得了1株新的APMV-2(命名为Y2株)的全基因组序列。通过人工合成和克隆的方法，构建并获得了Y2株全长cDNA克隆质粒和3个分别表达NP、P和L的辅助质粒。将4个重组质粒共转染至感染痘病毒的BHK-21细胞，成功拯救出APMV-2 Y2株。生物学特性测定结果显示，Y2株的鸡胚最低致死剂量的平均致死时间(MDT)大于168 h, 1日龄雏鸡的脑内致病指数(ICPI)为0.09,判定为弱毒株，鸡胚尿囊液的病毒含量为10~(8.83 )EID_(50)/mL,HA效价为9 log_2。病毒增殖曲线测定结果显示，Y2株感染BHK-21细胞后60 h滴度达到峰值。APMV-2 Y2株反向遗传操作系统的建立为该病原的致病机理研究及新型禽用疫苗研发提供了依据。
2022年03期 v.42;No.303 464-471页 [查看摘要][在线阅读][下载 2375K] [下载次数：250 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 吴克;冯航;白新栋;陈林千雨;王娟;杨增岐;
自陕西省华阴县1头猝死荷斯坦奶牛肝脏分离出1株革兰阳性杆菌，经鉴定为蜡样芽孢杆菌，后对其进行了全基因组测序、耐药性检测以及小鼠感染模型的建立。全基因组测序分析表明，该菌株MLST分型属于ST1150,基因组携带有磷霉素耐药基因fosB以及多种毒素基因，并且具备从国外传入我国的可能性；药敏试验显示该蜡样芽孢杆菌对氨苄西林、头孢他啶、乙酰甲喹、磷霉素和壮观霉素具有较强抵抗力；其在95%置信区间内对小鼠的半数致死量估算值为1.247×10~7 CFU,致死小鼠出现肝脏边缘变灰白、肺脏出血和肠壁出血水肿等病变。结果表明，我国奶牛养殖中存在携带有多种毒素基因的强毒力蜡样芽孢杆菌，与荷斯坦奶牛猝死密切相关。
2022年03期 v.42;No.303 472-476页 [查看摘要][在线阅读][下载 3240K] [下载次数：499 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 梁艳艳;李可;贾丽;侯铭源;田梦悦;张婷;马玉忠;
采集36头腹泻犊牛的新鲜粪样，进行细菌的分离培养、生化和PCR鉴定，并进行致病性试验、血清型鉴定、药敏试验、耐药基因检测和治疗试验。结果显示，初步分离到25株疑似大肠杆菌菌株，经16S rDNA鉴定全部为大肠杆菌。致病性试验显示，分离株有较强的致病性，取死亡小鼠实质器官进行病原鉴定，均分离到大肠杆菌。25株分离株共覆盖6种血清型，其中O157和O152为优势血清型。25株分离菌对强力霉素、复方新诺明耐药率最高，达88%;对氨苄西林、链霉素、环丙沙星的耐药率分别为76%,72%,56%。所有分离株均携带大环内酯类ermB基因和四环素类tetB基因，大部分携带blaTEM(72%)、aaC2(64%)、aaC4(68%)和qnrB(60%)基因。治疗试验表明，新霉素与白头翁散结合治疗大肠杆菌所致犊牛腹泻的效果最佳。结果表明，犊牛源腹泻大肠杆菌菌株对临床常见抗生素产生了不同程度的耐药，并携带多种耐药基因，建议采用中西药结合治疗该病。本研究为大肠杆菌所致犊牛腹泻的合理用药和有效防治提供了依据。
2022年03期 v.42;No.303 477-482+495页 [查看摘要][在线阅读][下载 1730K] [下载次数：1083 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：0 ] - 章婧;陈海欣;喻梦梦;高颖茵;刘文字;蒋红霞;
于2020年从惠州、肇庆、郑州、天津4个城市的超市采集零售鸡肉样品96份，进行粪肠球菌的分离鉴定；采用琼脂二倍稀释法测定肠球菌的最小抑菌浓度(MIC);PCR方法检测肠球菌的耐药基因和毒力基因。结果显示，共分离到41株粪肠球菌(郑州10株，肇庆14株，惠州10株，天津7株),没有分离到屎肠球菌；所有菌株对氨苄西林、万古霉素、利奈唑胺敏感，对四环素、多西环素的耐药率均达到75%以上，对利福平、氯霉素、氟苯尼考、HLSR的耐药率为20%～40%。天津分离株的耐药率最低，惠州地区分离株耐药率最高。在郑州的分离株中检测到1株替加环素耐药菌株。惠州的分离株所携带的耐药基因种类、检出率大多高于其他地区。耐药基因tetL最为流行，检出率高于50%。其次是ermB,检出率为48.78%。17株粪肠球菌检测出optrA基因，检出率为41.46%。已检测的毒力基因中efaA的携带率最高，为95.12%(39/41)。其他依次为gelE 73.17%(30/41)、agg 58.54%(24/41)、asal 36.59%(15/41)、ace 34.15%(14/41)、cylA 9.76%(4/41)。携带的毒力基因数与抗菌药物耐药性之间不存在统计学差异。结果表明，超市零售鸡肉粪肠球菌耐药严重，耐药基因和毒力基因流行且多样，且检测出人医临床重要抗生素耐药基因，应加强对食品动物肉源粪肠球菌耐药性监测。
2022年03期 v.42;No.303 483-489页 [查看摘要][在线阅读][下载 1791K] [下载次数：458 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 王锦祥;孙世坤;陈岩峰;陈冬金;桑雷;谢喜平;
为了建立检测兔源F型多杀性巴氏杆菌的快速检测方法，本试验根据F型多杀性巴氏杆菌fcbD基因的保守序列设计了2对特异性引物，经反应条件优化，建立了检测兔源F型多杀性巴氏杆菌的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。结果显示，该LAMP快速检测方法的最优反应条件为：外引物和内引物的浓度比为1∶7、反应温度为65℃、反应时间为60 min。该方法特异性强，对兔源A型和D型多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和阴性对照(灭菌ddH_2O)均无交叉反应。该方法敏感性高，最低检出限为1×10~2拷贝/μL的兔源F型多杀性巴氏杆菌基因组DNA,是普通PCR方法的10倍。此外，该方法重复性好，准确性高。该方法的建立为兔源F型多杀性巴氏杆菌的快速检测提供了有力的技术支撑。
2022年03期 v.42;No.303 490-495页 [查看摘要][在线阅读][下载 3133K] [下载次数：326 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 杨鹏;吴燕;岳筠;陈静;李梅;王慧;张双翔;文明;程振涛;
为探究绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)P113蛋白小鼠免疫应答情况。构建了Mo P113蛋白C末端基因pVAX1-P113表达质粒，转染至MDBK细胞，应用PCR技术及间接免疫荧光试验评价其体外表达效果；免疫实验动物BALB/c小鼠，通过间接ELISA方法分析重组质粒诱导小鼠特异性抗体和细胞因子(IL-2、IL-4和IFN-γ)分泌情况。结果显示，成功构建含Mo P113基因重组真核表达质粒pVAX1-P113,重组质粒转染MDBK细胞能有效转录并表达目的蛋白；小鼠免疫试验结果显示重组质粒pVAX1-P113免疫小鼠后血清特异性抗体水平显著升高，在免疫7周时血清特异性抗体仍为阳性；血清中IL-2、IL-4和IFN-γ的分泌水平显著升高，并在时间上呈先上升后下降的趋势；在不同试验组之间特异性抗体、IL-2、IL-4和IFN-γ的分泌量也存在显著性差异，pVAX1-P113(100μg)组分泌水平显著高于其他试验组。结果表明，重组质粒pVAX1-P113能诱导免疫小鼠产生免疫应答；为羊支原体肺炎(MPSG)核酸疫苗研究与应用提供了依据。
2022年03期 v.42;No.303 496-501+521页 [查看摘要][在线阅读][下载 3404K] [下载次数：408 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 冯笑笑;张佩豪;张悦;田思瑾;刘亚娟;姚大伟;
采用转录组学测序的方法筛选三氮脒药物处理后犬吉氏巴贝斯虫差异表达基因。采集感染犬吉氏巴贝斯虫病犬的血液，用终浓度为800 nmol/L的三氮脒处理24 h,提取RNA进行转录组测序，比较三氮脒处理后犬吉氏巴贝斯虫基因表达的差异。对测序结果进行无参转录组分析，经筛选共获得77个巴贝斯虫属的基因，将筛选后的基因进行GO和KEGG数据库分析，其注释富集基因最多的类别是细胞组分、分子功能和生物进程，在KEGG通路注释中，显示与翻译通路有关的基因较多。对三氮脒处理组与未处理组的样品进行组间差异基因表达分析，发现基因CL118转录水平显著性下调。采用real-time PCR方法进行验证，结果显示本实验室保存虫株以及临床野生虫株经三氮脒处理24 h后，CL118基因的转录水平均发生下调。结果表明，基因CL118可能是三氮脒药物作用于犬吉氏巴贝斯虫虫体的潜在作用靶点。
2022年03期 v.42;No.303 502-506页 [查看摘要][在线阅读][下载 1703K] [下载次数：332 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 吕静;刘文波;刘畅;任同伟;陈樱;欧阳康;黄伟坚;韦祖樟;
为了构建稳定表达猪CD163(pCD163)受体的MARC-145细胞系，从猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中提取总RNA,通过RT-PCR方法扩增pCD163基因，将pCD163基因克隆到慢病毒载体pLVX-IRES-mCherry中，获得重组质粒pLVX-pCD163-IRES-mCherry。将重组质粒pLVX-pCD163-IRES-mCherry与辅助质粒psPAX2、VSVG共转染293T细胞，获得具有感染能力的慢病毒粒子，使用慢病毒感染MARC-145细胞，用嘌呤霉素初步筛选阳性细胞，采用终点稀释法筛选出稳定表达pCD163受体的MARC-145细胞。通过RT-PCR扩增pCD163基因及测序分析表明细胞系基因组中存在pCD163受体编码序列，IFA和Western blot试验验证了pCD163受体蛋白在细胞系中稳定表达。用不同谱系的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GXNN1396(lineage 8)、GXNN202004a(lineage 1)、GXGG202007(lineage 3)分别感染稳定表达pCD163的MARC-145细胞系与MARC-145细胞，PRRSV毒株在表达pCD163的MARC-145细胞系中能够更快达到最高病毒滴度。结果表明，成功构建了稳定表达pCD163的MARC-145细胞系，为快速分离各种谱系PRRSV毒株和相关研究奠定了基础。
2022年03期 v.42;No.303 529-534页 [查看摘要][在线阅读][下载 1934K] [下载次数：605 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 秦雪;冯瑞;李琦;李晓宇;郑鹏;赵骞;
为了研究血氨对奶牛胚胎附植和妊娠的影响，本试验使用氯化氨处理奶牛子宫内膜上皮细胞，CCK8检测氨离子对细胞活力的影响，实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测凋亡相关基因(Bax、Bcl-2、p53、Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3)、容受性相关基因(VEGF、LIF、EGF)的mRNA和蛋白表达的变化。结果表明，5,10,15,25 mmol/L的氯化氨可显著降低细胞活力(P<0.05);经过5 mmol/L的氯化氨处理，显著增加了Bax、caspase-3、caspase-8和caspase-9的mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05),显著下调了LIF、VEGF和EGF的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。说明高浓度的血氨会诱导子宫内膜上皮细胞的凋亡和子宫容受性的降低，影响奶牛的繁殖力。
2022年03期 v.42;No.303 535-540页 [查看摘要][在线阅读][下载 3295K] [下载次数：217 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 赵怡凡;马增友;方俊博;孟碟方;彭辉;
为了探究YWHAZ蛋白在小鼠早期胚胎发育过程中的表达、定位和作用，本试验利用RT-PCR和Western blot方法检测Ywhaz基因及其编码蛋白在小鼠早期胚胎发育中的表达；利用免疫荧光技术检测YWHAZ蛋白在小鼠早期胚胎发育过程中的定位；使用特异性的siRNA沉默合子中的Ywhaz,在胚胎发育的1.5,2.5,3.0,3.5,4.5,5.0 dpc分别观察2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑葚胚和囊胚的发育率，阐明在合子中沉默Ywhaz基因对小鼠早期胚胎发育的影响。结果显示，Ywhaz mRNA及其编码蛋白在小鼠1-细胞、2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑葚胚和囊胚中均有表达，YWHAZ蛋白定位在小鼠早期胚胎的细胞质和细胞核中。Ywhaz沉默组的2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑葚胚和囊胚的发育率均极显著低于对照组(P<0.01),沉默组5.0 dpc囊胚率显著高于其4.5 dpc囊胚率(P<0.05)。结果表明，Ywhaz mRNA及其编码的蛋白在小鼠早期胚胎中有表达，其蛋白主要定位在早期胚胎的细胞核和细胞质中；在合子中沉默Ywhaz基因可导致小鼠早期胚胎发育率降低且存在明显的胚胎发育延迟现象。
2022年03期 v.42;No.303 541-546页 [查看摘要][在线阅读][下载 3066K] [下载次数：205 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 麻芯茹;郭寒;张伟;李铭;赵莹莹;王爽;吕鑫泉;李享;徐闯;杨威;张冰冰;
旨在研究不同时间与浓度的佛波肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)对奶牛中性粒细胞(PMN)形成中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)效果，筛选出PMA刺激时间与浓度，通过流式细胞术检测NETs状态下沉默中性粒细胞Orai1,检测钙离子与ROS水平。尾静脉肝素抗凝采集血液分离中性粒细胞，分别在不同时间与不同浓度PMA刺激下，根据激光共聚焦镜下观察NETs的形态状态。结果显示，在PMA在100 nm状态下刺激3 h时NETs形成状态效果最好。在沉默Orai1状态下，通过流式细胞检测结果显示，NETs内钙离子与ROS水平极显著降低。
2022年03期 v.42;No.303 547-550+581页 [查看摘要][在线阅读][下载 2624K] [下载次数：333 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 陈靖阳;徐小艾;王婉;黄山;沈红;
探究地鳖肽提取物(Eupofyphaga sinensis peptide extract, ESP)对过氧化氢(H_2O_2)刺激的C2C12细胞肌调节因子基因表达的影响。体外培养C2C12细胞其中培养基分别添加ESP和叔丁基对苯二酚(TBHQ)处理细胞诱导其分化融合9 d,除对照组外所有组细胞在试验结束前8 h培养基添加H_2O_2处理细胞；采用RT-qPCR和免疫荧光法检测肌调节因子基因和蛋白表达，细胞染色和显微镜观察细胞形态。对照组可见诱导分化融合9 d的C2C12细胞出现成熟多核肌管，随着细胞培养时间延长肌调节因子MyoG基因表达增加；与对照组比较，H_2O_2组C2C12细胞增殖调节因子(Pax7、Myf5、MyoD)基因表达显著降低，在细胞分化不同时间C2C12细胞分化调节因子(MyoD、MyoG、Myf6)mRNA表达显著下调，表达MyoG细胞阳性率和肌管融合率比对照组明显降低；与H_2O_2组比较，ESP组C2C12细胞增殖调节因子(Pax7、Myf5、MyoD)和细胞分化调节因子(MyoD、MyoG、Myf6)基因表达水平显著增加，表达MyoG细胞阳性率明显增加，其中细胞染色与镜下观察结果趋势一致。ESP能影响氧化应激C2C12细胞肌调节因子(Pax7、Myf5、MyoD、MyoG、Myf6)的基因表达，提高细胞增殖和分化融合能力，其机制可能与PGC-1α的激活有关。
2022年03期 v.42;No.303 551-557页 [查看摘要][在线阅读][下载 4221K] [下载次数：297 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ]
- 李庆豪;张曼;孙娟;彭雅婷;刘勇;金鑫;李奎;
以仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)为模型，探究猪β-防御素-2(porcineβ-defensin 2,pBD-2)在黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)致细胞炎症反应中的作用。使用CCK-8法确认不同质量浓度(20,40,60,80,100 mg/L)AFB1及不同质量浓度(2,4,6,8,10 mg/L)pBD-2的细胞毒性，筛选两者的可用质量浓度，再通过qPCR确认不同质量浓度(10,20,30,40,50 mg/L)的AFB1对IPEC-J2细胞TNF-αmRNA及IL-1βmRNA表达的影响，建立AFB1致细胞损伤模型。然后分别以2,4,6,8 mg/L pBD-2处理细胞损伤模型作为试验组，同时分别以单独使用AFB1和pBD-2处理的细胞作为阳性对照组和阴性对照组，未经任何处理的细胞作为空白对照组，所有细胞处理均进行12 h。处理结束后提取所有组细胞总RNA和总蛋白，使用qPCR及Western blot检测TNF-α及IL-1β的表达变化。细胞存活率检测结果显示，与空白对照组相比，60 mg/L及更高剂量AFB1组细胞存活率显著降低(P<0.05);pBD-2在10 mg/L出现细胞毒性，细胞存活率显著低于空白对照组(P<0.05)。细胞损伤模型建立结果显示，与空白对照组相比，AFB1在30 mg/L时显著上调了TNF-αmRNA和IL-1βmRNA的表达(P<0.05)。使用pBD-2处理细胞损伤模型，qPCR结果显示，4,6 mg/LpBD-2可显著下调AFB1所致TNF-αmRNA及IL-1βmRNA的过量表达至空白对照组水平(P<0.05);Western blot结果显示，AFB1显著上调TNF-α及IL-1β的表达后(P<0.05),8 mg/L pBD-2可下调TNF-α的表达至显著低于空白对照组水平(P<0.05),6,8 mg/L pBD-2可显著下调IL-1β的表达至空白对照组水平(P<0.05)。结果表明，pBD-2可通过调控细胞炎性因子的表达来缓解AFB1对小肠上皮细胞造成的炎症反应。
2022年03期 v.42;No.303 558-565页 [查看摘要][在线阅读][下载 2690K] [下载次数：714 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 刘丹丹;罗洁;朱怡萱;陈伊静;尼加提·麦力克;李昊;况玲;赛福丁·阿不拉;张伟;
为探索响应面法结合超声辅助提取雪白睡莲花总黄酮的最优工艺条件。本试验以雪白睡莲花为材料，在单因素试验的基础上，采用响应面法考察乙醇浓度、超声功率、提取时间对雪白睡莲花总黄酮得率的影响；采用牛津杯法结合倍比稀释法测定抑菌圈、最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC),研究雪白睡莲花总黄酮对金黄色葡萄球菌在体外的抑制效果；同时，构建金黄色葡萄球菌性小鼠乳腺炎模型，定期检测各试验组小鼠乳腺组织中金黄色葡萄球菌的数量、TNF-α及IL-6的含量，观察小鼠乳腺组织病理学变化，研究雪白睡莲花总黄酮对金黄色葡萄球菌性小鼠乳腺炎模型的体内治疗效果。结果显示，雪白睡莲花总黄酮最佳提取工艺条件为：乙醇浓度81%,超声功率60%,提取时间20 min,料液比1∶30 kg/L,提取温度60℃。在此条件下，雪白睡莲花总黄酮得率达到12.00%,与预测值11.99%相近。与小鼠乳腺炎模型组对比，雪白睡莲花总黄酮组小鼠乳腺组织中金黄色葡萄球菌的数量、TNF-α及IL-6的含量均显著降低(P<0.01),乳腺组织中的炎症细胞和红细胞明显减少。结果表明，采用响应面法对雪白睡莲花总黄酮提取条件进行优化合理可行，雪白睡莲花总黄酮具有较好的体内抑菌抗炎功效。
2022年03期 v.42;No.303 566-575页 [查看摘要][在线阅读][下载 4827K] [下载次数：832 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 郝浩扬;赵才军;何兆祺;张乃生;胡晓宇;付云贺;
乳腺炎是危害奶牛养殖业最为主要的疾病之一，严重制约着奶业的健康发展。抗生素作为乳腺炎的主要治疗药物，易造成细菌耐药性等问题。因此，寻找安全有效的方法或制剂替代抗生素对于乳腺炎的防治具有重要意义。胆酸(cholic acid, CA)作为机体的天然代谢产物，报道具有抑菌抗炎功能。本研究旨在探讨CA对脂多糖(LPS)诱导小鼠乳腺炎的保护作用及机制。将40只分娩后的BALB/c母鼠随机分为5组，包括空白对照组、LPS造模组、LPS+CA(10 mg/kg)组、LPS+CA(20 mg/kg)组和LPS+CA(30 mg/kg)组。通过对小鼠乳腺组织进行病理学观察、炎性细胞因子及相关信号通路检测等方法探究CA对LPS诱导小鼠乳腺炎的保护作用及机制。结果显示，CA呈剂量依赖性地改善LPS诱导小鼠乳腺组织病理损伤，显著降低髓过氧化物酶(MPO)活性和炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的表达。进一步研究表明，CA显著抑制了LPS诱导的NF-κB信号通路激活，增加了法尼醇X受体(FXR)的表达。结果表明，CA通过上调FXR受体表达，进而抑制LPS诱导的NF-κB信号通路及炎性细胞因子产生，发挥对乳腺炎的保护作用。
2022年03期 v.42;No.303 576-581页 [查看摘要][在线阅读][下载 3291K] [下载次数：564 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 鲍朝霞;魏泓毓;陈灰;曹金山;贺鹏飞;
子宫内膜上皮细胞可通过自我调控降低过度炎症反应以避免细胞损伤，但调控机制尚不清楚。本研究旨在探讨α7烟碱乙酰胆碱受体(α7-nAChR)是否介导调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路参与细胞避免炎症过度反应。通过体外培养兔子宫内膜上皮细胞，脂多糖(LPS)刺激细胞炎症反应、α7-nAChR抑制剂和激动剂处理细胞，比较α7-nAChR表达与MAPK信号通路的相关性，探讨α7-nAChR介导细胞炎症自我调控可能的机制。Western blot检测结果表明，兔子宫内膜上皮细胞在100μg/L LPS刺激12 h后，JNK1/2和P38MAPK磷酸化水平明显低于细胞空白对照组，α7-nAChR抑制剂MLA(5μmol/L)与α7-nAChR激动剂共同处理后ERK1/2、JNK1/2及P38MAPK磷酸化水平上升，而α7-nAChR激动剂PNU282987(5μmol/L)和尼古丁(10 mg/L)可明显逆转MLA效应，且MAPK信号通路关键因子磷酸化与α7-nAChR表达呈部分负相关。结果表明，α7-nAChR介导调控MAPK信号通路是细胞避免炎症过度反应自我调控的潜在机制。
2022年03期 v.42;No.303 582-586页 [查看摘要][在线阅读][下载 2425K] [下载次数：201 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]