简讯

  • 《中国兽医学报》征稿简则

    <正>《中国兽医学报》1981年创刊,原名《兽医大学学报》,是由教育部主管吉林大学主办的全国性专业性学术期刊,是国内畜牧兽医专业最具影响力的权威性核心期刊,自创刊以来一直被列为中文核心期刊和中国科技核心期刊。常设栏目:研究论文(预防兽医学、人兽共患病、基础兽医学、临床兽医学和动物科学),综述及简讯等。主要报道动物医学、动物科学及其相关学科的最新研究成果与动态等。本刊为月刊,A4开本,每月15日出版,国内外公开发行。

    2022年04期 v.42;No.304 616页 [查看摘要][在线阅读][下载 40K]
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研究论文_预防兽医学

  • 非洲猪瘟病毒野毒株与基因缺失株三重荧光定量PCR鉴别检测方法的建立及应用

    郭振华;邢广旭;翁茂洋;金前跃;乔松林;张改平;

    针对非洲猪瘟病毒B646L、MGF505-2R和CD2v基因分别设计了引物和探针,经过条件优化,建立了基于TaqMan探针技术的三重荧光定量PCR检测方法。结果显示,本研究建立的三重荧光定量PCR检测方法与猪场常见病毒的核酸不发生交叉反应,具有良好的特异性;敏感性分析显示,针对B646L、MGF505-2R和CD2v基因的最低检测下限分别为6.5,8.0和14.0 copies/μL;并且该方法在10~1~10~7 copies/μL模板范围内具有良好的线性关系,组间变异系数为0.05%~2.68%,组内变异系数为0.10%~1.17%,稳定性良好。进一步针对临床核酸样品的检测显示,本方法和OIE推荐的检测方法具有良好的一致性。本研究成功建立了非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失株的荧光定量PCR鉴别检测方法,为临床非洲猪瘟病毒的监测诊断提供了良好的技术支撑。

    2022年04期 v.42;No.304 619-625页 [查看摘要][在线阅读][下载 415K]
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  • 溶酶体酸性环境促进猪血凝性脑脊髓炎病毒的复制

    李彩丽;王改丽;柳雨竹;艾晓敏;王真真;李姿;关继羽;贺文琦;高丰;兰云刚;陆慧君;

    为解析猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus, PHEV)复制和溶酶体酸性环境的相关性,本研究以PHEV感染神经瘤母细胞(N2a细胞)为模型,利用Western blot和间接免疫荧光方法进行检测,发现PHEV感染神经细胞后溶酶体关联膜蛋白1(LAMP1)表达显著升高,病毒能与溶酶体共定位,并使溶酶体体积增大。其次,用溶酶体荧光探针Lyso Tracker Red DND-99标记活细胞溶酶体,结果发现病毒感染神经细胞后溶酶体的酸性增强。再者,用巴佛洛霉素A1(BafA1)阻止神经细胞溶酶体酸化后接种病毒,发现与未处理的细胞感染组相比,胞内病毒含量显著降低,表明抑制溶酶体酸化能够阻碍细胞内子代病毒的产生。本研究结果表明PHEV感染神经细胞后能定位于溶酶体,影响溶酶体的酸性环境,并且揭示了子代病毒的产生依赖溶酶体的酸性环境;研究结果为深入解析溶酶体与PHEV复制的相关性提供了依据。

    2022年04期 v.42;No.304 626-631+642页 [查看摘要][在线阅读][下载 292K]
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  • 2016—2019年山东省仔猪腹泻病原调查及PEDV分离株S基因遗传进化分析

    曹龙龙;孟凡亮;焦秋林;李焱;姜子昕;刘蒙达;刘思当;

    本研究于2016年6月至2019年3月从山东省部分地区收集了231例疑似猪流行性腹泻(PED)病猪样品,患病仔猪主要临床症状为发热、呕吐、水样腹泻、体质量减轻和脱水,并有较高的病死率。通过PCR/RT-PCR对样品进行相关腹泻病原检测。检测结果显示,猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性病料147份,阳性率为63.63%;猪圆环病毒2型(PCV2)检出率为16.88%(39/231);猪轮状病毒(PoRV)检出率为5.19%(12/231),猪传染性胃肠炎(TGEV)检出率为0.43%(1/231)。本研究分离到7株PEDV,对其S基因序列进行遗传进化分析,结果显示,分离株与PEDV参考株的核苷酸序列同源性为93.1%~98.9%,氨基酸序列同源性为91.5%~98.7%。分离株与疫苗株CV777有不同程度的核苷酸和氨基酸位点突变,部分突变氨基酸位点位于PEDV抗原表位区域(COE)和抗原表位S1D5、S1D6中。本研究结果表明vPEDV在山东省广泛流行,是引起仔猪腹泻的主要病原因素,研制新型PEDV疫苗已迫在眉睫。

    2022年04期 v.42;No.304 632-638页 [查看摘要][在线阅读][下载 15214K]
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  • 广西贵港地区部分规模化猪场猪瘟、高致病性蓝耳病净化效果评估

    陈永林;余腾;吕志凯;孙秀秀;胡薛英;谷长勤;刘晓丽;张万坡;钱平;程国富;

    为了研究广西贵港地区猪瘟、高致病性蓝耳病区域净化效果,2020年7-12月对广西贵港地区部分规模化猪场采集血液、车拭子、猪场环境拭子(含返场隔离人员手拭子)、组织病料、去势液、精液、空气样本、蚊子苍蝇等媒介昆虫、猪场内外野生老鼠的血液、皮毛拭子、组织病料等共计49 745份样品进行了病原学和血清学检测。结果显示,病原学检测均为阴性,猪瘟抗体阳性率91.65%,蓝耳病抗体阳性率为0.00%。结果表明,广西贵港地区猪瘟、高致病性蓝耳病区域净化效果显著。

    2022年04期 v.42;No.304 639-642页 [查看摘要][在线阅读][下载 142K]
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  • 广西新型鸭呼肠孤病毒流行毒株GX01-2020全基因组分子特征分析

    谢守玉;刘惠心;周媛;熊陈勇;施开创;屈素洁;苏文广;温新瑞;李媛;李春英;邓桂潮;尹彦文;

    为了解广西新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus, NDRV)流行毒株的分子遗传特征,采用RT-PCR分段进行全基因组序列扩增,经克隆、测序、拼接后,获得1株NDRV全基因组序列(命名为GX01-2020株)。结果显示,GX01-2020株基因组全长23 353 bp,分为10个片段,大小从1 194 bp(S4)至3 958 bp(L1)不等。同源性分析显示,GX01-2020株10个片段核苷酸同源性与NDRV代表毒株最高,为86.2%~99.4%,其中μB片段核苷酸同源性最低的毒株为番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus, MDRV),其他片段则为鸡源禽呼肠孤病毒(chicken-origin reovirus, CRV),说明不同片段来源祖先不完全相同。遗传进化分析显示,10个片段遗传进化树中,L2、L3片段中MDRV参考毒株及σA片段中NDRV参考毒株均形成两个进化分支,与其他片段不同,说明不同片段与参考毒株的遗传关系不尽相同。重组分析显示,GX01-2020株的L1片段存在重组信号,重组亲本毒株分别为北京MDRV_J18株和福建DRV_NP03株。本研究丰富了NDRV基因库相关信息,同时为广西地区NDRV的分子流行病学研究和有效防制措施制订提供了一定的参考。

    2022年04期 v.42;No.304 643-650+661页 [查看摘要][在线阅读][下载 2105K]
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  • 鸽新城疫病毒Ⅵ-HZ株的分离鉴定及其遗传进化分析

    钱晶;刘雪;王玮;周红波;王永山;

    对疑似鸽新城疫(Newcastle disease, ND)的病料进行病毒鉴定和分离培养,获得1株鸽新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)Ⅵ-HZ株,为进一步了解病毒生物学特性及其分子特征,对其进行致病性和遗传进化分析。结果表明,该毒株MDT为80 h, ICPI为1.2,EID_(50)为10~(7.0)/0.1 mL,HA效价为8 log_2,属于中等毒力型NDV;人工感染鸽第7天出现明显腹泻和神经症状,死亡率为60%,病死鸽剖检可见脑膜充血、水肿及肠道出血;病理切片结果显示病死鸽脑组织水肿、小肠绒毛上皮细胞脱落坏死、黏膜固有层有炎症。全基因组测序显示Ⅵ-HZ株全长为15 192 nt,基因排列方式为3′-NP-P/V/W-M-F-HN-L-5′,其中F蛋白裂解位点氨基酸序列为~(112)KRQKRF~(117),具有NDV强毒的分子特征;系统发育进化分析表明该Ⅵ-HZ株为ClassⅡ类基因Ⅵ型毒株,与Ⅵ.2.2.2毒株亲缘关系最近。本研究为近期鸽NDV的分子流行病学调查提供了科学依据。

    2022年04期 v.42;No.304 651-656页 [查看摘要][在线阅读][下载 637K]
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  • 荧光探针PCR检测牛嵴病毒的方法建立

    师志海;王文佳;孟红丽;王亚州;闫祥洲;邱祥琦;程燕;滑留帅;施巧婷;徐照学;

    牛嵴病毒(bovine kobuvirus, BKoV)是与犊牛腹泻密切相关的病原,试验针对BKoV 3D基因设计特异性引物和探针,建立快速检测BKoV的实验室方法。该方法仅能特异性扩增BKoV,对其他犊牛腹泻病原无扩增,特异性较强;对BKoV质粒标准品的最低检出限为11.0拷贝/μL,灵敏性较强;且组内与组间变异系数均小于2%,重复性较好。对采集自河南省的221份犊牛腹泻临床样本进行检测,BKoV的核酸检出率为9.05%(20/221)。本研究建立的检测方法为BKoV的临床快速检测和流行病学调查提供了有效手段。

    2022年04期 v.42;No.304 657-661页 [查看摘要][在线阅读][下载 234K]
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  • H3N8亚型马流感病毒样颗粒的免疫防治效果评价

    于海英;孙艺学;秦佳仪;王玮;张鹏举;丛彦龙;

    利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统构建了含有H3N8亚型马流感病毒HA、NA和M1蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)。VLPs的鉴定结果表明,3种蛋白正确组装出了类似于天然病毒粒子的形态结构,且具有血凝活性。将VLPs免疫马匹制备高免血清,分别设计小鼠先被动免疫再攻毒以及先攻毒再紧急注射免疫血清,结果证明马高免血清对H3N8亚型马流感病毒感染具有良好的预防和治疗效果,为研制H3N8亚型马流感VLP疫苗提供了理论依据。

    2022年04期 v.42;No.304 662-667+703页 [查看摘要][在线阅读][下载 2003K]
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  • 新型冠状病毒水貂变异株重组水泡性口炎病毒载体假病毒的拯救及鉴定

    王申;王玮琦;闫飞虎;冯娜;赵永坤;王铁成;高玉伟;杨松涛;夏咸柱;

    为拯救新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)水貂变异株重组水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus, VSV)载体假病毒,并对该假病毒进行鉴定。基于本实验室构建的VSV反向遗传系统,使用SARS-CoV-2的刺突蛋白(S)基因替换全长cDNA克隆P3.1-VSV-eGFP中的VSV糖蛋白(G)基因,得到重组cDNA克隆P3.1-VSV△G-S-eGFP。将P3.1-VSV△G-S-eGFP与分别能表达VSV核蛋白N、磷蛋白P、聚合酶L及G的4个辅助质粒共转染细胞以拯救携带绿色荧光标签的重组假病毒VSV△G-S-eGFP,并通过荧光显微镜观察;生长动力学曲线检测;RT-PCR鉴定;Western blot鉴定及透射电镜观察对重组假病毒进行鉴定。经鉴定重组假病毒VSV△G-S-eGFP拯救成功并可在细胞中有效增殖;VSV△G-S-eGFP的最高生长滴度可达10~(6.8)TCID_(50)/mL。本研究拯救的重组假病毒VSV△G-S-eGFP为SARS-CoV-2水貂变异株抗体筛选、疫苗评估提供了有力工具。

    2022年04期 v.42;No.304 668-674页 [查看摘要][在线阅读][下载 387K]
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  • 高通量测序同时检测样本中RNA病毒与DNA病毒混合感染

    于诗筠;崔鹤馨;文会淇;喻鑫婷;吕金晖;张雅倩;张湘莉兰;崔玉军;米志强;黄海龙;

    传统病原学检测方法对于兽医临床感染病原的鉴定具有一定的局限性,尽管高通量测序技术极大地提高了未知病原感染的检测水平,但是对于无DNA复制周期的RNA病毒的捕获,仍存在一定难度。基于此,本研究利用RNA建库技术对1例猫传染性腹膜炎的腹水与血清样本进行了高通量测序,并对所得数据进行分析以判断感染病原,结果提示病猫腹水样本中携带猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、猫星状病毒(FeAstV)与犬细小病毒(CPV),血清样本中携带猫传染性腹膜炎病毒(FIPV),其中,FIPV与FeAstV为正链RNA病毒,CPV为单链DNA病毒。总之,本研究不仅证实基于RNA建库的高通量测序技术能够同时检测到DNA与RNA病毒混合感染,而且能够为动物未知病原感染的检测提供新思路与参考。

    2022年04期 v.42;No.304 675-679页 [查看摘要][在线阅读][下载 1372K]
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  • 胞内劳森菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

    刘昌锦;魏黄思梧;胡换仪;肖童;林敏;刘小兰;边彦超;罗峰;邓舜洲;

    为建立用于检测临床粪便样品中胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,L.intracellularis)的TaqMan荧光定量PCR方法,本研究参考GenBank中发表的L.intracellularis PHE/MN1-00株基因组序列设计50对引物,通过SYBR GreenⅠ荧光染料法PCR验证引物的特异性,针对扩增效率最好的特异性上、下游引物合成相应的TaqMan探针,优化反应条件,对其线性范围、敏感性和重复性进行验证,系统的完成了该方法的建立。结果表明,所建立的TaqMan荧光定量PCR方法,特异性强;在靶标核酸为2.95×10~1~2.95×10~6拷贝/μL区间线性关系良好,相关系数R~2=0.998 1,扩增效率为96.51%;最低检测浓度为5拷贝/μL;批间和批内的CV均小于2%,重复性好。使用普通PCR方法与本方法对2020年10月至2021年2月采自江西地区猪场的373份粪便样品进行检测,L.intracellularis的总检出率分别为21.4%(80/373)和27.6%(103/373),显示本方法具有更高的敏感性,其检测场阳性率为88.9%(8/9),各阶段生产猪群阳性率分别为经产母猪28.7%、保育仔猪36.4%和育肥猪14.3%。该检测结果为江西地区的L.intracellularis的流行情况提供参考。

    2022年04期 v.42;No.304 680-685页 [查看摘要][在线阅读][下载 2132K]
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  • 2019—2020年河北部分地区鸡源致病性大肠杆菌的血清型及毒力基因分布

    张海龙;何云凤;党儒尧;陈玥;李佩国;李蕴玉;

    为确定河北部分地区鸡源致病性大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)的流行血清型及毒力基因变迁情况,本研究对2019—2020年来自河北部分地区的225份病死鸡组织样品,通过细菌分离纯化、PCR法共分离鉴定出181株致病性E.coli(2019年105株、2020年76株)。采用玻板凝集试验、PCR法对其进行血清型及毒力基因的研究,结果显示分离的菌株属于18种血清型,以O78(14.92%)、O1(14.36%)、O2(11.60%)、O18(10.50%)、O26(10.50%)为主要流行的血清型,其中2019年以O26、O1、O18、O78、O2血清型为主,检出率为7.62%~18.10%;2020年以O1、O2、O6、O9、O12血清型为主,检出率为7.89%~22.37%。分离菌株携带16种不同的毒力基因,未检测到Ler、eaeA、papC、sfa 4种毒力基因。其中2019年iutA毒力基因检出率最高,为96.19%(101/105);Vat、iutB、fyuA等9种毒力基因检出率为7.62%~76.19%;2020年的hlyF毒力基因检出率最高为100%;Vat、iutB毒力基因检出率较低,分别为2.63%和23.68%。分离菌株均携带多种毒力基因,其中2019年的菌株同时携带2~15种毒力基因;2020年的菌株同时携带4~15种毒力基因。优势血清型菌株的致病性试验结果发现,攻毒组的雏鸡发病率为100.00%,总病死率高达82.00%。本研究为河北部分地区鸡源E.coli的有效防控提供了科学依据。

    2022年04期 v.42;No.304 686-691+697页 [查看摘要][在线阅读][下载 359K]
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  • 河北省奶牛子宫内膜炎致病性大肠杆菌的耐药性及可移动遗传元件检测

    侯铭源;梁艳艳;李可;李亚宁;贾丽;马玉忠;

    从河北省各地采集患有子宫内膜炎奶牛的病料,对大肠杆菌进行分离鉴定,并对其致病性、血清型、耐药性及可移动遗传原件进行检测。结果显示,分离得到了29株致病性大肠杆菌。在这些菌株中,检测出4种血清型,其中O89与O128为优势血清型。分离菌对新霉素耐药率高达68.97%(20/29);17株为多重耐药菌,它们对β-内酰胺类和四环素类抗生素耐药率均高于58.82%(10/17);qnrB耐药基因的检出率高达86.21%(25/29);共检测出intI1、tnpU、tnp513、traA、ISEcp1和trbC 6种可移动遗传原件,携带可移动遗传原件越多的细菌,细菌的耐药基因数量越多,多重耐药性越强。本试验分析了河北地区奶牛子宫内膜炎大肠杆菌的耐药表型与耐药基因的传播情况,为奶牛子宫内膜炎的治疗提供了理论依据。

    2022年04期 v.42;No.304 692-697页 [查看摘要][在线阅读][下载 262K]
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  • 兔源多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌的分离鉴定与药敏试验

    王佳佳;刘玉梅;徐靖怡;朱欣妍;位兰;朱雪敏;张自强;

    为了确定引起兔呼吸困难、死亡的病原,本研究对河南省某兔场发病病例剖检,采集8份有呼吸道症状的病兔样品对病原进行分离培养,通过生化鉴定、16S rRNA PCR鉴定及小鼠致病性试验确定病原,并采用药敏试验分析其耐药性。结果显示,分离得到8株两端钝圆、卵圆形的革兰阴性球杆菌及8株短粗、卵圆形的革兰阴性菌;生化鉴定结果显示分离的细菌1和细菌2分别符合多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌的生化特性,分别命名为HN-W01和LY-W05株;扩增的分离菌16S rRNA基因序列片段大小分别为643和1 494 bp,与多杀性巴氏杆菌AY604234.1和肺炎克雷伯菌MK824895.1的同源性分别为99.32%和99.93%,表明该兔场患病兔为多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌混合感染。致病性试验显示,分离出的多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌对小鼠均有致病力,可使小鼠死亡。经药敏测定发现分离得到的多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌同时对多粘菌素B和氯霉素敏感,对其他药物有不同程度的耐药性。本研究为家兔养殖过程中多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌混合感染的分离鉴定以及临床科学用药提供了参考依据。

    2022年04期 v.42;No.304 698-703页 [查看摘要][在线阅读][下载 5053K]
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  • 一种秦岭羚牛肺线虫新种——羚牛变圆线虫的鉴定

    王俊伟;潘广林;郭庆彬;黄爽;陈金铭;杨新;宋军科;赵光辉;

    基于形态学和分子生物学方法对1头秦岭羚牛肺线虫样本进行了种属鉴定。首先利用蠕虫完全剖检法分离该秦岭羚牛肺脏及支气管的肺线虫,初步观察记录虫体基本形态,进一步利用乳酚透明液对虫体进行处理后利用显微镜观察这些线虫的特征性结构,最后对虫体的ITS-2 rRNA基因进行扩增、克隆、测序以及序列分析。结果发现,从该头秦岭羚牛肺脏及支气管获得214份虫体样本,采集的新鲜虫体样本均呈淡黄色,虫体的头部、食道和尾部结构与原圆科线虫典型结构特征一致;获得了总长度为409~431 bp的ITS-2 rRNA基因,序列分析发现本研究所得虫体序列的相似性为97.5%~100.0%,系统进化分析发现本研究所得虫体单独位于一支,且与原圆科变圆属线虫(KJ439597)位于姊妹支,但与原圆科变圆属线虫的序列差异为24.1%~25.4%。结果表明,该头秦岭羚牛肺部线虫可能为原圆科变圆属线虫的一个新种,命名为羚牛变圆线虫。研究结果为秦岭羚牛肺线虫病的流行病学调查和防控提供了基础数据。

    2022年04期 v.42;No.304 704-709页 [查看摘要][在线阅读][下载 937K]
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研究论文_人兽共患病

  • 蜱传脑炎病毒E蛋白D Ⅲ的表达与抗体间接ELISA检测方法的建立

    张梦瑶;焦翠翠;黄培;金宏丽;白玉洁;龚志远;宋雨濛;李媛媛;张海丽;王化磊;

    利用PCR技术扩增蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus, TBEV)E蛋白第三结构域(DomainⅢ,DⅢ)基因并将其插入原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-TBEV-E-DⅢ。将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导目的蛋白表达,利用镍离子金属螯合亲和层析介质(Ni-NTA)纯化目的蛋白。将纯化的重组蛋白作为包被抗原,建立TBEV抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组蛋白TBEV E-DⅢ在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,蛋白表达的最佳条件为30℃、0.6 mmol/L IPTG诱导6 h; TBEV抗体间接ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为1 mg/L,该方法可特异性检测TBEV阳性血清,与寨卡病毒(Zika virus, ZIKV)、日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)和西尼罗病毒(West Nile virus, WNV)阳性血清无交叉反应,批内和批间变异系数(CV)均小于10%。结果表明,成功表达并纯化了TBEV E-DⅢ重组蛋白,以其为包被抗原建立的TBEV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。

    2022年04期 v.42;No.304 710-717页 [查看摘要][在线阅读][下载 331K]
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  • 布鲁菌M5疫苗株感染对宿主细胞自噬溶酶体途径的影响

    杨宁宁;张倩;易继海;王震;陈创夫;

    通过慢病毒包装系统构建能稳定表达双荧光标记的微管相关蛋白轻链3(mCherry-GFP-LC3Ⅱ)的小鼠巨噬细胞系(RAW264.7),并探讨布鲁菌感染对自噬溶酶体途径的影响。设计并合成含mCherry-GFP-LC3Ⅱ基因的重组慢病毒表达质粒,将重组质粒与慢病毒包装质粒(pMD2.G和pspa×2.0)共同转染293T细胞,浓缩细胞上清中的病毒,用其感染RAW264.7小鼠巨噬细胞。经嘌呤霉素抗性筛选获得稳定表达mCherry-GFP-LC3Ⅱ的RAW246.7细胞株,用倒置荧光显微镜和流式细胞术分析感染效率。分别用Earle’s平衡盐缓冲液(Earle’s balanced salt solution, EBSS)和布鲁菌M5疫苗株菌株处理该细胞株,激光共聚焦显微镜下观察mCherry-GFP-LC3Ⅱ斑点。成功获得了稳定表达mCherry-GFP-LC3Ⅱ的RAW264.7细胞株,经嘌呤霉素筛选后荧光显微镜和流式细胞仪显示荧光阳性率达90%以上,EBSS和布鲁菌M5疫苗株菌株处理后自噬斑点显著增多。成功构建了能够稳定传代的mCherry-GFP-LC3Ⅱ-RAW264.7细胞株,为后续自噬相关研究建立了可靠的细胞平台。

    2022年04期 v.42;No.304 718-723+732页 [查看摘要][在线阅读][下载 470K]
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  • 鼠伤寒沙门菌CVCC541 rhs基因内部元件缺失株的构建及其功能

    王琬凝;董震;王志林;陈启伟;吴锦燕;尚佑军;刘永生;兰喜;

    利用Red同源重组系统构建5株rhs内部元件缺失株以及回补株,并通过HeLa细胞黏附和侵袭试验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬后存活试验、小鼠致病力试验鉴定rhs内部元件缺失后对菌株黏附能力、侵袭能力和小鼠致病力的影响。旨在通过敲除鼠伤寒沙门菌CVCC541的2个rhs基因的内部元件rhs-1N、rhs-1core、rhs-1C、rhs-2core和rhs-2C构建相应缺失株及回补株,研究其对该菌侵袭宿主细胞能力的影响。结果表明,鼠伤寒沙门菌rhs基因内部元件的缺失均增强了其黏附侵袭和抗吞噬能力,但极显著降低了该菌的致病力。回补株对生长速率没有影响,其黏附侵袭能力与亲本株相比没有显著差异,抗吞噬能力与亲本株相比均有显著差异,对小鼠致病力与亲本株相比显著降低。

    2022年04期 v.42;No.304 724-732页 [查看摘要][在线阅读][下载 1021K]
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研究论文_基础兽医学

  • NLRP3在介导小鼠皮肤伤口修复过程中的作用

    赵佳敏;李茜如;高飞菲;巩志国;顾柏臣;白云洁;刘博;

    本试验进行了小鼠肌成纤维细胞及骨髓源巨噬细胞的体外培养,随后使用野生型C57BL/6J小鼠或NLRP3基因敲除鼠耳皮肤肌成纤维细胞培养上清液(myofibroblast conditioned medium, MFbCM)处理M1和M2型巨噬细胞,分别检测巨噬细胞组织修复相关极化调节分子精氨酸酶(Arginase)的活性、NO的表达量、IL-10的分泌量以及几丁质酶3样分子(Ym1)的表达。同时,通过野生型C57BL/6J小鼠和NLRP3基因敲除小鼠背部创伤模型的建立,分析皮肤伤口愈合情况。通过免疫荧光检测小鼠皮肤创面组织中Ym1和Arginase表达量。结果显示,在MFbCM诱导的条件下,骨髓源巨噬细胞的精氨酸酶活性、NO的表达、IL-10的分泌和Ym1的表达均依赖于小鼠肌成纤维细胞NLRP3的表达;当肌成纤维细胞NLRP3表达缺失后,巨噬细胞上述组织修复相关极化调节因子均出现下调现象,进而可能对伤口愈合产生不利影响。此外,与之相一致的是,NLRP3基因敲除小鼠的伤口愈合速度相比于野生型C57BL/6J小鼠显著缓慢。在创面组织中,NLRP3缺失后Ym1和Arginase表达显著下调。结果表明,NLRP3对小鼠肌成纤维细胞培养上清液诱导的骨髓源巨噬细胞组织修复相关极化调节分子和伤口修复可能具有重要的影响。

    2022年04期 v.42;No.304 733-739页 [查看摘要][在线阅读][下载 523K]
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  • 犬骨骼血管肉瘤的影像学及病理形态学分析

    高蕊;张海涛;石俊超;张竞;马莹;徐荣艺;贺文琦;陆慧君;

    1只4岁龄雄性贵宾犬,因左后肢肿胀跛行入院就诊。影像学检查,发现左后肢膝关节间隙不对称、远端骨皮质不连续等异常,遂进行生检手术并送病理学检查。病理组织学观察可见大部分正常骨组织结构消失,骨髓腔内有大量异常增殖的肿瘤细胞向骨组织浸润,肿瘤细胞多排列成管腔结构,管腔内有红细胞存在,细胞异型性较高,有多核细胞出现,有丝分裂常见。免疫组织化学染色结果表明,肿瘤区域血管内皮细胞特异性标记物CD31及FactorⅧ染色均呈阳性,证明该肿瘤是血管内皮细胞来源。结合临床病例情况及病理学诊断结果,确诊为血管肉瘤。该研究结果不仅为临床病例治疗方案的制定及预后评估提供参考,而且对骨骼发生血管肉瘤病例的病理诊断提供重要依据。

    2022年04期 v.42;No.304 740-744页 [查看摘要][在线阅读][下载 428K]
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  • 镉对鸭破骨细胞焦亡的影响

    王怡;马勇刚;冉迪;刘宗平;

    为探讨镉暴露对鸭破骨细胞焦亡的影响,本试验用不同浓度的镉(0,5和10μmol/L)处理鸭破骨细胞12 h。通过显微镜观察破骨细胞形态变化,ELISA试剂盒检测IL-1β和IL-18的含量,流式细胞术检测破骨细胞焦亡,Hoechst和PI染色观察细胞核数量变化。结果显示,镉暴露后鸭破骨细胞表现出明显的形态改变,主要表现为细胞肿胀,细胞膜可见大量孔洞。与对照组相比,镉暴露明显增加了鸭破骨细胞内LDH的释放,细胞因子IL-1β和IL-18的产生也显著升高(P<0.01)。Caspase-1的活性较对照组显著增加(P<0.01),FITC和PI双染的阳性破骨细胞数也明显升高(P<0.01)。Hoechst和PI染色结果表明,镉暴露明显增加了红色和蓝色荧光强度。上述结果表明,镉暴露可诱导鸭破骨细胞发生焦亡。

    2022年04期 v.42;No.304 745-749页 [查看摘要][在线阅读][下载 386K]
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  • 牛奶中多西环素残留消除及最大残留限量

    孔伶俐;林翠萍;陆毅兴;姚雪军;劳华杰;曾东平;

    为制定牛奶中多西环素最大残留限量标准,首先开展盐酸多西环素子宫注入剂在牛奶中的残留消除试验,盐酸多西环素子宫注入剂经子宫给药1次,给药前及停药后6,12,24,48,72,96,120,144和168 h共10个时间点采集牛奶,采用液相色谱-串联质谱测定多西环素残留量。然后在查阅国际食品法典委员会、欧洲药品管理局和我国制定动物性食品中多西环素最大残留限量研究报道基础上,制定牛奶中多西环素最大残留限量标准。结果表明,停药后168 h,牛奶中多西环素的残留量均低于10μg/kg。多西环素每日允许摄入量为0~3μg/kg,建议参照欧盟动物性食品中多西环素最大残留限量制定方法,将每日允许摄入量按比例分配到全部组织+奶,推荐牛奶中多西环素的最大残留限量为10μg/kg,盐酸多西环素子宫注入剂在牛奶中弃奶期为9 d。

    2022年04期 v.42;No.304 750-755页 [查看摘要][在线阅读][下载 279K]
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研究论文_临床兽医学

  • 17β-雌二醇抑制LPS诱导Raw264.7细胞炎症反应及其作用机制

    余紫薇;王晓杜;罗通旺;姜胜;巴少波;王磊;宋泉江;周彬;宋厚辉;邵春艳;

    为探究雌二醇(17β-E2)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠Raw264.7细胞炎症反应的影响及作用机制,使用LPS刺激Raw264.7诱导细胞炎症为模型,试验分为Mock、LPS、E2和E2+LPS组,分别用qRT-PCR方法检测各组TLR4、IL-1β、IL-18和NLRP3 mRNA表达水平,用ELISA法检测各组细胞上清中IL-1β分泌量变化,用Western blot法检测各组细胞中IL-1β、NF-κB p65、p-IκBα和IκBα的蛋白表达水平,用免疫荧光法观察NF-κB p65在细胞内的表达和定位。结果显示,17β-E2可以不同程度的抑制LPS诱导的Raw264.7细胞TLR4、IL-1β、IL-18和NLRP3 mRNA的表达,差异显著(P<0.05),抑制细胞内IL-1β的蛋白表达量和细胞上清中IL-1β的分泌量,差异极显著(P<0.01);Western blot结果显示17β-E2可以降低LPS诱导的IκBα的磷酸化水平,差异极显著(P<0.01),抑制NF-κB p65进入细胞核;免疫荧光结果显示17β-E2主要通过ERβ抑制p65入核。综上所述,17β-E2主要通过ERβ抑制NF-κB p65入核,从而发挥抑制LPS诱导的Raw264.7细胞炎症反应的作用。

    2022年04期 v.42;No.304 756-762+769页 [查看摘要][在线阅读][下载 529K]
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  • 杜鹃素对LPS/GalN诱导雏鸡肝损伤的保护作用

    李双秋;吴迪;姜爱民;刘子仪;张勇;谢光洪;

    以麻黄雏鸡为研究对象,采用脂多糖(LPS)联合D-氨基半乳糖(GalN)诱导雏鸡肝损伤模型,评价杜鹃素对肝损伤的防治作用,为杜鹃素在兽医临床上的广泛应用提供理论基础和实验依据。将1日龄雏鸡随机分为5组(n=7):空白组、LPS/GalN模型组、LPS/GalN+杜鹃素(低、中、高剂量)组,适应环境3 d,在第4,6,8天灌胃给药杜鹃素,空白组和LPS/GalN组灌胃相同剂量生理盐水。第8,9,10天腹腔注射LPS(250μg/kg)和GalN(250 mg/kg)。24 h后收取血清和肝脏。每日称重,检测血清中ALT、AST的活性和肝脏中SOD、GSH-PX的水平,HE染色法检査肝脏组织病理学变化,qRT-PCR法检测肝脏中TNF-α、IL-1β、iNOS、COX2 mRNA的相对表达量。结果显示,与空白组相比,LPS/GalN组增重率显著降低,杜鹃素预处理组增重率高于模型组;给予LPS/GalN后,血清中ALT、AST活性极显著高于空白组,杜鹃素预处理组可以极显著降低血清中ALT、AST活性;肝组织病理学检查结果表明,与空白对照组相比,给予LPS/GalN后,肝细胞结构消失、肝细胞索紊乱并且有炎性细胞浸润,而中剂量和高剂量杜鹃素组发现,雏鸡肝脏中肝细胞结构趋于正常,炎性细胞减少;与空白组相比,LPS/GalN模型组肝脏中SOD、GSH-PX水平极显著降低,而TNF-α、IL-1β、iNOS、COX2 mRNA的表达量极显著升高;与LPS/GalN模型组相比,杜鹃素预处理组能显著提高SOD、GSH-PX的活性,并极显著降低TNF-α、IL-1β、iNOS、COX2 mRNA的表达量。综上,LPS/GalN成功建立了雏鸡肝损伤模型,杜鹃素可以通过促进雏鸡肝脏抗炎、抗氧化能力而发挥保护肝损伤作用,该研究同时为杜鹃素的兽医临床应用提供了试验依据和参考。

    2022年04期 v.42;No.304 763-769页 [查看摘要][在线阅读][下载 432K]
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  • 瘤胃微生物群对奶牛亚急性瘤胃酸中毒易感性的影响

    李爽;牟瑞营;吐尼牙孜·买买提;赵才军;张乃生;胡晓宇;付云贺;

    为探究奶牛瘤胃细菌和真菌群落组成与奶牛亚急性瘤胃酸中毒(SARA)易感性之间的关系,筛选瘤胃靶向微生物,揭示奶牛对SARA耐受的原因。本研究采用高精饲料喂养奶牛6周建立SARA模型,并通过16S rRNA或ITSI-IF测序分析SARA耐受奶牛和SARA易感奶牛的瘤胃细菌和真菌微生物群。16S rRNA序列分析表明,SARA耐受奶牛和SARA易感奶牛的瘤胃细菌群落存在差异,与SARA耐受奶牛相比,SARA易感奶牛瘤胃内未鉴定的螺旋体科(unidentified_Spirochaetaceae)和厌氧小体属(Anaeroplasma)的丰度相对更高。此外,ITS1-IF测序分析表明,与SARA耐受奶牛相比,SARA易感奶牛瘤胃内帚枝霉属(Sarocladium genus)和尖芽孢镰刀菌(Fusarium_oxysporum)的丰度增加,与此同时曲霉菌属(Aspergillus genus)和乳头状瘤菌(Papiliotrema_laurentii)的丰度减少。这些结果表明,奶牛瘤胃中的细菌和真菌群落,特别是unidentified_Spirochaetaceae、Anaeroplasma、Sarocladium、Aspergillus、Fusarium_oxysporum和Papiliotrema_laurentii的丰度可能与奶牛对SARA的易感性有关。综上所述,本研究提示或许可以通过操纵瘤胃微生物群的组成来预防奶牛SARA的发生。

    2022年04期 v.42;No.304 770-779页 [查看摘要][在线阅读][下载 9391K]
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  • 低钙血症奶牛血液代谢指标分析及诊断敏感指标筛选

    高昕星;余昊;史珍;房志愿;李心慰;杜希良;刘国文;

    为筛选除血钙浓度之外的能有效诊断和监测亚临床、临床低钙血症奶牛的潜在辅助指标,本试验选取健康奶牛、临床和亚临床低钙血症奶牛各20头,采血后分离收集血清,分别检测矿物元素(Ca、P、Mg、Na、K)、能量代谢(Glu、NEFA、BHBA、TG)、肝损伤(AST、ALT、ALP和GGT)和炎性反应(IL-1β、IL-6、IL-2、TNF-α、HP和SAA)等相关指标。结果显示,临床、亚临床低钙血症奶牛血液K、Mg、Na、Glu和IL-2的浓度与血钙浓度呈显著正相关,而P、NEFA、BHBA、IL-1β、IL-6、HP和SAA的浓度与血钙浓度呈显著负相关;临床、亚临床低钙血症奶牛血液TG与血钙浓度无显著相关性。结果表明,亚临床、临床低钙血症奶牛均存在不同程度的矿物元素失衡、能量代谢紊乱、肝损伤和系统性炎症,矿物元素(Mg、Na、K和P)浓度、能量代谢指标(Glu、NEFA和BHBA)状态和炎性因子(IL-1β、IL-2、IL-6、HP、SAA和TNF-α)可以作为联合敏感指标表征奶牛低钙血症,该研究为进一步寻找有效诊断和监测奶牛低钙血症的辅助指标提供数据支持。

    2022年04期 v.42;No.304 780-785页 [查看摘要][在线阅读][下载 174K]
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  • 磷酸铵镁对羊肾小管上皮细胞的损伤作用

    刘若楠;邹东敏;刘茂军;马玉忠;

    为了研究磷酸铵镁(MAP)对羊肾小管上皮细胞(RTECs)的损伤作用,取20份结石羊尿沉渣进行镜检,并观察肾脏组织病理变化;其中在14份尿沉渣中观察到磷酸铵镁晶体,肾组织结构严重受损,RTECs变性坏死。观察尿结石羊症状并采集样品进行实验室检测。胶原酶组织块消化法分离培养羊RTECs,角蛋白18进行鉴定。MAP分别处理羊RTECs 12,24和48 h, CCK-8法检测羊RTECs的活力,Western blot法检测羊RTECs NF-κB信号通路的表达及Caspase-3、Bcl-2和Bax的水平,ELISA法检测细胞上清中IL-6和TNF-α的水平及LDH表达量。结果显示,尿结石羊尿液pH值比健康羊高,血液和尿液镁离子和磷离子水平也明显升高。胶原酶消化能获得较多且完整的肾小管节段,12 d左右细胞融合达80%~90%,呈典型的铺路石状,纯化后95%以上细胞CK-18鉴定为阳性。MAP能显著降低羊RTECs的活力,使IL-6和TNF-α的表达增加,细胞LDH含量增多。MAP组羊RTECs p-IκBα和p-NF-κB p65蛋白相对表达量增加,凋亡蛋白Caspase-3的表达明显增加,Bcl-2/Bax比值降低。综上所述,MAP能导致羊RTECs炎症反应与损伤,激活NF-κB通路,诱导细胞的凋亡。

    2022年04期 v.42;No.304 786-792页 [查看摘要][在线阅读][下载 607K]
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研究论文_动物科学

  • 包被复合微量元素对黄羽肉鸡生长性能、屠宰性能及肉品质的影响

    陈传斌;瞿明仁;梁欢;龙凡;邹必成;陈发根;熊智辉;林德发;郑友昌;许兰娇;

    旨在探究包被复合微量元素对黄羽肉鸡生长性能、屠宰性能及肉品质的影响。选取1日龄体质量(32.61±0.6) g相近、健康状况良好的雄性黄羽肉鸡360只,随机分为6个处理组,每个处理6个重复,每个重复10只。对照组在饲粮中添加未包被的普通复合微量元素。处理组A、B、C、D、E组分别在饲粮中添加200,400,600,800和1 000 mg/kg包被复合微量元素。饲喂56 d后,每个重复随机选取2只鸡测定肉鸡生长性能、屠宰性能及肉品质。结果表明,1~28日龄,平均日采食量(ADFI)、平均日增质量(ADG)和料重比(F/G)各组之间差异不显著(P>0.05)。29~56日龄,与对照组相比,E组ADFI显著下降(P<0.05);与A组相比,C组、D组和E组ADFI显著下降(P<0.05)。各组之间ADG差异不显著(P>0.05)。与对照组相比,各处理组F/G差异不显著(P>0.05);与A组相比,C组和E组F/G显著下降(P<0.05)。1~56日龄,与对照组相比,E组ADFI显著下降(P<0.05);与A组相比,E组ADFI显著下降(P<0.05)。各组之间ADG差异不显著(P>0.05)。与对照组相比,各处理组F/G差异不显著(P>0.05);与A组相比,C组F/G显著下降(P<0.05)。与对照组相比,C组肉鸡全净膛率显著提高(P<0.05);各处理组肉鸡全净膛率差异不显著(P>0.05)。与对照组相比,B组和C组胸肌pH_(24h)值显著提高(P<0.05);各处理组胸肌pH_(24h)值差异不显著(P>0.05)。与对照组相比,B组胸肌剪切力显著下降(P<0.05);与E组相比,B组胸肌剪切力显著下降(P<0.05)。综合以上结果得出,包被复合微量元素在黄羽肉鸡饲粮中替代普通未包被的复合微量元素,可有效减少微量元素添加量,不影响黄羽肉鸡生长性能和屠宰性能,并且在一定程度上能够改善肉鸡胸肌肉品质。适宜添加剂量为400 mg/kg。

    2022年04期 v.42;No.304 793-799页 [查看摘要][在线阅读][下载 182K]
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  • 中药复合小肽对肉鸡抗氧化功能、消化酶活力、肉品质及表观代谢率的影响

    崔宇擎;张璐;刘维;窦萌萌;史万玉;张晓东;

    本试验旨在研究饲粮中添加中药复合小肽(compound small peptide of Chinese medicine, CSPCM)对肉鸡抗氧化功能、消化酶活力、肉品质和表观代谢率的影响。试验选用400只1日龄雄性爱拔益加肉仔鸡,随机分为4组,空白对照组(基础饲粮)、CSPCM组(饲料中添加250,500,750 g/t CSPCM),每组100只。饲养在三层笼网中(110 cm×60 cm×50 cm,每笼5只),在整个42 d试验中可自由取食和饮水。分别于21和42 d测定肝脏氧化指标。在42 d测定消化酶活力、肉品质和表观代谢率。结果显示,饲料中添加CSPCM可改善肝脏抗氧化酶活力,消除体内的脂质过氧化产物。饲料中添加500 g/t CSPCM改善机体抗氧化能力和胃蛋白酶活力效果最好,但也加速鸡胸肉变酸的速度。鸡胸肉的系水力与CSPCM在饲料中添加量成反比。饲粮中添加500 g/t CSPCM提高了粗蛋白、粗脂肪、钙和磷的表观代谢率,从而增加了肉鸡营养物质的沉积。结果表明,饲粮中添加CSPCM可提高肉鸡的表观代谢率、消化酶活力和抗氧化能力。而CSPCM的添加会降低鸡胸肉的系水力。CSPCM可以作为肉鸡饲料添加剂来提高肉鸡体内营养物质消化沉积和抗氧化能力,添加量以500 g/t最佳。

    2022年04期 v.42;No.304 800-806+812页 [查看摘要][在线阅读][下载 1516K]
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综述

  • 中药抗流感作用研究进展

    陈召亮;张诚;崔欢;张春茂;郭振东;刘聚祥;

    流感病毒一直威胁着我国的畜牧业发展和公共卫生安全,该病毒抗原变异性强,单凭免疫接种较难获得对流感的持久免疫,因此对抗流感药物的研发十分必要。中药在防治病毒性传染病上的应用已有上千年的历史,同时,随着我国减抗、替抗模式的推行,中药抗病毒的独特优势和功效再次突显。本文对近两年国内外中药抗流感作用的相关研究进行了综述,以期为今后抗流感药物研发提供理论支持和经验借鉴。

    2022年04期 v.42;No.304 807-812页 [查看摘要][在线阅读][下载 170K]
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  • 羊口疮病毒编码的NF-κB抑制基因研究进展

    庞峰;龙琴琴;程振涛;

    羊口疮又称为羊传染性脓疱,是由羊口疮病毒(orf virus, ORFV)引起的一种人兽共患病,给全球畜牧业造成了重大经济损失。核转录因子NF-κB (nuclear factor kappa B)是一种蛋白复合物,在宿主早期抗病毒反应、先天免疫,炎症和细胞凋亡过程中扮演着重要角色。ORFV编码多个基因抑制宿主细胞NF-κB信号通路,从而免疫逃逸。本文将对ORFV编码的多个NF-κB抑制基因(ORFV024,ORFV002,ORFV121,ORFV073,ORFV119和锚蛋白)的研究进展进行综述,使大家对ORFV抑制NF-κB信号通路的策略和机制有更全面的认识,为ORFV防控提供新的思路。

    2022年04期 v.42;No.304 813-817+823页 [查看摘要][在线阅读][下载 216K]
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  • 5-羟色胺对肠道疾病的影响

    和少英;郭太情;和世春;胡成龙;王荣蛟;吴东旺;毛华明;

    5-羟色胺是一种广泛分布于哺乳动物组织内且高度保守的神经信号传导物质。5-羟色胺在动物的健康中扮演着关键的角色,在多种生理功能的调节中发挥着重要作用,尤其是在肠道相关功能调节中。以往研究集中于5-羟色胺在中枢神经系统中的作用。5-羟色胺与肠道微生物菌群、肠道疾病和免疫也有着密切关系,然而却鲜有学者进行系统总结。本文将综述5-羟色胺与肠道疾病、肠道微生物菌群及免疫的相互作用。探讨这些复杂关系将有助于人们更好地理解相关宿主疾病的发病机制,为下一步的深入研究提供参考。

    2022年04期 v.42;No.304 818-823页 [查看摘要][在线阅读][下载 201K]
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  • 细菌对抗宿主细胞自噬策略

    赵维薇;王辰;肖鹏;高洪;

    自噬是细胞一种保守的维持内环境稳态和自我保护的机制,细胞可以将胞质内大分子物质、受损细胞器进行降解,以循环利用。异体自噬可以协助机体清除病原菌。但是在病原菌和宿主自噬系统的长期互作中,细菌进化出多种策略,表达多种细菌效应蛋白以对抗自噬。结合异体自噬的研究进展,现从异体自噬发生、发展的不同环节综述细菌对抗自噬的策略及其分子机制,以期对病原菌致病机制及防控方法的研究提供参考。

    2022年04期 v.42;No.304 824-830页 [查看摘要][在线阅读][下载 301K]
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  • 角鲨烯的生理功能及其在畜禽生产中的应用前景

    高阳;周业勋;

    角鲨烯是一种天然的三萜类不饱和烃,大量存在于鲨鱼肝脏和植物籽实中。角鲨烯具有调节免疫、抗癌、抗炎、抗氧化和保护心血管等功能。本研究总结了角鲨烯的生理功能及作用机制,并结合角鲨烯生物学特性阐述其在畜禽生产中的应用前景,以期为角鲨烯在畜禽生产中的应用提供理论依据。

    2022年04期 v.42;No.304 831-835页 [查看摘要][在线阅读][下载 160K]
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  • 肠道菌群与天然植物提取物相互作用的研究进展

    周巧仪;方炳虎;郜礼阳;钟永辉;凌彩金;

    肠道菌群数量巨大,种类多,具有参与调控宿主代谢、免疫、内分泌等多种生理功能,在维持健康以及控制疾病发生发挥着重要作用。植物提取物及其有效组分与肠道菌群之间存在复杂的作用关系,一方面肠道菌群对植物提取物具有代谢作用,可代谢成与其前体具有不同的生物利用度、生物活性或毒性的物质。另一方面,植物提取物能调控肠道菌群的结构组成,从而改善或抑制其功能障碍和病理状态。现就植物提取物与肠道菌群之间的相互作用关系进行综述,以期为植物提取物的作用机制及创新研究提供参考。

    2022年04期 v.42;No.304 836-840页 [查看摘要][在线阅读][下载 149K]
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