预防兽医学

  • 猪圆环病毒-Ⅱ型、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒三重RT-qPCR检测方法的建立及初步应用

    刘斌;赵翠青;刘立明;沙万里;董文龙;刘嘉琳;李国江;

    针对猪圆环病毒-Ⅱ型(porcine circovirus typeⅡ,PCV-Ⅱ)、猪瘟病毒(swine fever virus, CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)的保守区域设计用于构建荧光定量PCR体系的引物和探针。以构建的重组质粒标准品为模板建立三重荧光定量PCR体系,并对三重荧光定量PCR体系进行优化和特异性检测、灵敏性检测、重复性试验、标准曲线制作。最后利用构建的三重荧光定量PCR体系和普通PCR体系同时进行临床检测,并对两者的检测结果进行对比。结果显示,3种病毒在单重和三重荧光定量PCR体系中均无非特异性扩增;3种病毒在单重和三重荧光定量PCR体系中的灵敏度均可达到10拷贝/μL;单重和三重荧光定量PCR体系组内和组间重复性变异系数均在5%以内;单重和三重荧光定量PCR在稀释度范围内呈现良好的线性关系。应用本研究构建的三重荧光定量PCR体系对106份临床组织样品进行检测,其中PCV-Ⅱ阳性检出率为74.5%,CSFV阳性检出率为34.9%,PRRSV阳性检出率为18.9%,普通PCR检测中PCV-Ⅱ阳性检出率为37.7%,CSFV阳性检出率为16.9%,PRRSV阳性检出率为7.5%。

    2022年07期 v.42;No.307 1309-1314页 [查看摘要][在线阅读][下载 2981K]
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  • 猪圆环病毒3型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立

    王星;李杰峰;张宁;王华健;孙艳玲;杨旭光;马玉忠;杨威;翟向和;

    为建立针对猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,使用DNAStar软件对GenBank中PCV3的ORF1基因进行保守区域分析,并使用Primer Premier 5软件对PCV3 ORF1基因的高度保守区域设计引物,经PCR扩增后构建了PCV3 ORF1基因的标准品质粒,以构建的标准品质粒为模板,分别从退火温度优化、标准曲线和熔解曲线的建立、特异性、灵敏性、重复性等方面对所建立的检测方法进行探究。特异性试验结果显示,建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR特异性良好,仅对PCV3存在特异性扩增,而对其他8种病毒均无扩增;灵敏度试验表明该方法最低检测量为6.55拷贝/μL,是常规PCR的100倍;以浓度为6.55×10~2~6.55×10~8拷贝/μL的标准品质粒构建的标准曲线相关系数为0.996,扩增效率可达99.7%;重复性试验结果显示,组内变异系数和组间变异系数均在2%以内。临床试验对100份猪血清进行PCV3检测,结果显示建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的阳性率为16%(16/100),高于常规PCR的阳性率10%(10/100)。结果表明,建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR可为PCV3的快速诊断、流行病学调查及防控提供技术支持。

    2022年07期 v.42;No.307 1315-1319+1334页 [查看摘要][在线阅读][下载 1955K]
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  • 基于非洲猪瘟病毒p30蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立

    张文燕;陈立功;腾召剑;林依丹;逯继成;孙泰然;张芳;宋勤叶;

    p30是非洲猪瘟病毒(Africa swine fever virus, ASFV)感染早期表达的结构蛋白,为非洲猪瘟(ASF)早期诊断和抗体监测的重要靶标。为了建立ASFV ELISA抗体检测方法,本试验以重组p30作为检测抗原,通过方阵滴定法优化抗原包被质量浓度、封闭液以及待检血清和酶标抗体的稀释倍数;确立阴、阳性临界值,检测方法的特异性、敏感性和重复性;比较ELISA方法与商品试剂盒检测结果的符合率,并用Western blot对ELISA结果进行了验证。结果显示,ELISA方法的最佳抗原包被质量浓度为1 mg/L,封闭液为5%的脱脂奶粉,待检血清与酶标抗体的稀释倍数分别为1∶100和1∶5 000倍,阴、阳性临界值为0.294。该方法与伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒等抗血清无交叉反应,敏感性高于商品试剂盒,批内和批间重复性试验的平均变异系数分别为4.723%和4.923%。初步应用显示,建立的ELISA方法的血清抗体阳性检出率高于商品试剂盒,两者的总符合率为62.1%。进一步验证表明,建立的ELISA方法与Western blot的结果一致。上述结果表明,建立的ELISA方法具有良好特异性、重复性及更高的敏感性,可以为ASF的早期诊断、感染猪筛查及其有效防控提供重要技术支持。

    2022年07期 v.42;No.307 1320-1326页 [查看摘要][在线阅读][下载 308K]
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  • 浙江省猪伪狂犬病病毒分离及其gD和gE基因遗传变异分析

    谢荣辉;袁秀芳;王雅婷;安慧婷;董建斐;黄靖;张璐;徐辉;赵灵燕;

    对2018-2019年采自浙江省部分地区的30份猪伪狂犬病病毒阳性病料开展病毒分离鉴定,并进行分离毒株gD和gE基因克隆、测序和变异分析。结果显示,从30份样品中分离到11株猪伪狂犬病病毒;11个分离株之间的gD基因核苷酸及其推导氨基酸的同源性分别为99.3%~99.9%和98.0%~100.0%,gE基因核苷酸及其推导氨基酸的同源性分别为99.5%~99.9%和99.0%~99.8%;遗传进化分析显示,11株猪伪狂犬病病毒与我国2011年以后流行的毒株亲缘关系较近,与2011年前分离的国内毒株亲缘关系较远,与欧美毒株的亲缘关系更远;与疫苗株Bartha相比,11个分离株的gD和gE基因均存在碱基插入和点突变现象;gE基因推导氨基酸序列第48位均存在天冬氨酸的插入。本试验结果对于了解浙江省猪伪狂犬病病毒流行毒株的分子生物学特征和变异状况具有重要的意义。

    2022年07期 v.42;No.307 1327-1334页 [查看摘要][在线阅读][下载 833K]
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  • 2020-2021年河南省猪流行性腹泻病毒流行株遗传进化及S蛋白变异分析

    郭子仪;许夕雅;邓梦梦;丁晨梦;高冬生;王永生;陈陆;阴文奇;

    2020-2021年在河南省18个地区共收集499份发生腹泻的仔猪临床样品,采用RT-PCR进行猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)筛查。结果显示,共检测出162份阳性样品,阳性率为35.2%。对其中21株PEDV流行毒株S基因进行了测序、同源性比对和遗传进化分析,结果显示21株PEDV流行毒株之间核苷酸同源性为96.9%~100%,氨基酸同源性为95.2%~100%。与52株2011-2019年国内流行毒株之间的核苷酸同源性为95.1%~99.5%,氨基酸同源性为91%~99.8%。遗传进化结果显示,21株PEDV毒株均属于GⅡb群。氨基酸序列比对显示,流行毒株S蛋白存在7处新的且规律的氨基酸突变。本试验对现阶段我国所流行的PEDV S基因进行测序分析,为了解PEDV流行毒株遗传变异趋势和研发新的有效疫苗提供参考。

    2022年07期 v.42;No.307 1335-1342页 [查看摘要][在线阅读][下载 3384K]
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  • GS-441524体外对猪繁殖与呼吸综合征病毒的抑制效果

    梁杏玲;马俊;王志远;王秋梅;郭彦辰;张桂红;王衡;

    利用CCK8方法测定GS-441524作用Marc-145细胞的安全浓度,并通过检测该化合物在病毒吸附、内化、核酸复制环节对病毒的感染能力、mRNA与蛋白合成能力的影响,评价了GS-441524体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)的活性,确定其在体外抑制PRRSV的作用阶段。结果显示,在Marc-145细胞中,GS-441524具有良好的抗PRRSV活性,其EC_(50)为2.65μmol/L;该化合物在体外显示出良好的安全性,其CC_(50)为2 706.41μmol/L;对PRRSV复制周期的影响是GS-441524主要抑制PRRSV的复制早期阶段,而对病毒吸附、内化环节无阻断作用。结果表明,GS-441524具有抗PRRSV复制的潜在能力,该结果为抗PRRSV药物的选择和开发提供了新思路。

    2022年07期 v.42;No.307 1343-1349页 [查看摘要][在线阅读][下载 6571K]
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  • 猪传染性胃肠炎病毒诱导PK-15细胞自噬及其机理

    刘莹;袁广富;张增贤;张毅;王晶;郭禹;赵云环;范京惠;左玉柱;

    首先利用间接免疫荧光方法、Western blot及Image J灰度值分析,研究猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus, TGEV)感染细胞后及通过紫外线灭活后的病毒对自噬相关蛋白LC3的蛋白表达及转化水平的影响;其次利用自噬促进剂雷帕霉素及自噬抑制剂3-MA对PK-15细胞进行处理,通过qRT-PCR及病毒滴度测定研究细胞自噬在其病毒增殖过程中所产生的影响;最后通过qRT-PCR对自噬关键基因在病毒感染细胞时的动态变化及影响进行分析。结果显示,随着病毒感染时间的增加,细胞内的LC3-Ⅰ逐渐向LC3-Ⅱ转化,其LC3-Ⅱ/β-actin的比值明显增加;结合雷帕霉素作用后,细胞自噬极显著上调了TGEV mRNA转录水平及病毒滴度(P<0.01);与自噬抑制剂3-MA结合后,随病毒感染时间的不同,极显著下调了其病毒的mRNA转录量及病毒滴度(P<0.01)。而TGEV在感染细胞后极显著诱导了自噬关键基因(ATG-5及Beclin-1)mRNA转录水平的提升(P<0.01),并结合病毒增殖情况印证了细胞在受到TGEV感染后,其病毒增殖与自噬程度呈正向作用,说明病毒感染可诱导细胞自噬,促进细胞自噬会增加分离株的病毒滴度。结果表明,TGEV感染PK-15细胞后可诱导细胞自噬,并确定了自噬在TGEV感染中的重要作用。

    2022年07期 v.42;No.307 1350-1355+1456页 [查看摘要][在线阅读][下载 379K]
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  • 牛星状病毒神经型与肠道型ORF2蛋白原核表达及间接ELISA的建立与初步应用

    刘海峰;罗宇航;李明洋;刘腾;董覃婷;吴翠兰;彭昊;钟舒红;韦祖樟;李军;黄伟坚;苏接瑜;

    通过GenBank中登录号(神经型BufAstV-GX-NN-ORF2-14、肠道型BufAstV-GX-NN-ORF2-12)合成神经型ORF2-14-1与肠道型ORF2-12-1基因序列,运用PCR技术扩增神经型ORF2-14与肠道型ORF2-12目的片段的基因并克隆到pET-32a(+)载体,成功构建了重组质粒神经型pET-32a-ORF2-14与肠道型pET-32a-ORF2-12,经鉴定正确后转化BL21(DE3)感受态细胞中成功诱导表达,纯化后的重组蛋白利用SDS-PAGE、Western blot进行鉴定。以纯化的神经型pET-32a-ORF2-14与肠道型pET-32a-ORF2-12重组蛋白为诊断抗原,成功建立牛星状病毒(bovine astrovirus, BoAstV)神经型与肠道型的间接ELISA抗体检测方法。运用建立的间接ELISA对2019-2020年广西省部分地区采集的712份牛血清进行BoAstV抗体的检测,结果显示肠道型共检出170份抗体阳性血清,BoAstV抗体阳性率为23%;神经型共检出124份抗体阳性血清,BoAstV抗体阳性率为17%;其中,2种型共同感染阳性率占总份数10%。结果表明,本试验成功建立了对BoAstV的神经型与肠道型分型检测方法,为临床上对BoAstV分型检测提供良好的检测方法打下基础。

    2022年07期 v.42;No.307 1356-1362页 [查看摘要][在线阅读][下载 242K]
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  • 鸭星状病毒3型TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立与应用

    傅秋玲;傅光华;程龙飞;施少华;陈红梅;万春和;刘荣昌;黄瑜;

    根据已报道的鸭星状病毒3型(duck astrovirus-3,DAstV-3)毒株的nsp1a基因序列设计并合成特异性引物和探针,经优化反应条件建立一种以nsp1a基因为靶标的检测DAstV-3的TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果显示,该方法的Ct与标准品模板浓度在2.13×10~1~2.13×10~(7 )拷贝/μL之间线性关系良好,相关系数R~2和扩增效率分别为0.997和1.09;该方法仅特异性检出DAstV-3核酸,而对其他鸭常见病毒核酸无扩增反应;最低检测下限为21.30拷贝/μL;组内和组间重复试验变异系数分别为0.58%~2.19%和0.68%~2.53%,均低于5.00%;利用所建方法对临床采集的231份疑似DAstV-3感染病料进行检测,发现DAstV-3的阳性率为57.10%(132/231)。结果表明,本试验所建方法操作简便、特异、敏感、重复性好,为DAstV-3的临床检测和流行病学调查提供技术支持。

    2022年07期 v.42;No.307 1363-1368页 [查看摘要][在线阅读][下载 3326K]
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  • 秦皇岛地区蛋鸡致病性大肠杆菌的血清型、毒力基因及耐药性检测分析

    张海龙;刘优优;何云凤;党儒尧;陈玥;刘梦雪;李佩国;李蕴玉;

    采用玻板凝集试验、PCR方法及K-B药敏纸片法分别对2021年秦皇岛地区分离鉴定的36株蛋鸡致病性大肠杆菌进行血清型、毒力基因、耐药基因及耐药性检测。结果显示,36株致病性大肠杆菌属于10种不同的血清型,以O78、O2、O1为主要流行的血清型,分别占比25.00%(9/36),19.44%(7/36),16.67%(6/36)。分离菌株携带14种不同的毒力基因,未检测到Ler、eaeA 2种毒力基因,其中iutB、tsh等5种毒力基因的检出率为66.67%~88.89%,而Vat、colv毒力基因检出率较低,分别为11.11%和16.67%。分离菌株对磺胺间甲氧嘧啶、阿莫西林等7种抗生素的耐药率在77.78%以上,对林可霉素、卡那霉素等4种抗生素的耐药率在27.78%以下。分离菌株均携带多重耐药基因,以Sul-1、dhpS等8种耐药基因为主,检出率为72.22%~94.44%,而SHV等4种耐药基因的检出率较低,为2.78%~25.00%,KPC、qnrA、qnrB基因未检出。本试验结果为河北省秦皇岛地区蛋鸡大肠杆菌的防制提供了用药指导。

    2022年07期 v.42;No.307 1369-1375页 [查看摘要][在线阅读][下载 224K]
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  • 猪肺炎支原体融合蛋白MHP-P46-P36的表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

    李书光;张娣;赵家磊;杨立芳;李峰;沈志强;李同斌;

    利用生物学软件分析猪肺炎支原体P46蛋白和P36蛋白的抗原决定簇,将抗原表位富集区进行串联,表达融合蛋白MHP-P46-P36。以融合蛋白MHP-P46-P36作为包被抗原,优化反应条件建立肺炎支原体间接ELISA抗体检测方法。结果显示:融合蛋白MHP-P46-P36以可溶性形式高效表达;ELISA检测方法的最适抗原包被质量浓度10 mg/L, 1%BSA封闭60 min,一抗最佳稀释度1∶40且37℃60 min,二抗最佳稀释度1∶4 000且37℃60 min,最适显色时长15 min, cut-off值为D_(450 nm)=0.385;与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪鼻支原体、猪絮状支原体、猪蓝耳病病毒和猪圆环病毒阳性血清无交叉反应,具有良好的特异性;阴阳性血清的组内和组间变异系数均小于7%,具有较好重复性;52个样品临床样本检测结果显示,建立的ELISA方法与IDEXX猪肺炎支原体抗体检测试剂盒相比,阳性样本的符合率为83.09%。

    2022年07期 v.42;No.307 1376-1381页 [查看摘要][在线阅读][下载 237K]
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人兽共患病

  • 不同来源β-葡聚糖对旋毛虫感染C57BL/6J小鼠的影响

    董子健;金雪敏;庞建达;唐斌;马晓晓;刘明远;杨丽;刘晓雷;

    将48只雌性C57BL/6J小鼠随机分为4组:燕麦β-葡聚糖(oatβ-glucan, OBG)处理组、香菇多糖(lentinan, LNT)处理组、感染组和空白对照组,每组各12只。OBG处理组和LNT处理组分别连续14 d口服OBG和LNT后,经灌胃感染旋毛虫,再连续7 d口服OBG和LNT,感染组灌服等量旋毛虫,空白对照组不做任何处理。检测感染后第7天OBG处理组、LNT处理组和感染组小鼠成虫荷虫量及第35天肌幼虫荷虫量。取各组感染后第7天小鼠小肠组织,qPCR法检测肠道黏蛋白2(Muc2)基因表达量,免疫组化法检测Muc2蛋白表达量。结果显示,与感染组相比,OBG处理组和LNT处理组成虫及肌幼虫荷虫量极显著降低(P<0.001);OBG处理组和LNT处理组与感染组和空白对照组相比,Muc2基因表达量都极显著升高(P<0.001),但OBG处理组和LNT处理组之间并无显著性差异(P>0.05);免疫组化结果显示,与感染组和空白对照组相比,OBG处理组和LNT处理组Muc2蛋白表达量升高,但OBG处理组和LNT处理组之间并无显著性差异。结果表明,小鼠口服OBG和LNT均能显著增加MUC2蛋白表达水平,OBG和LNT对旋毛虫感染起到一定保护作用。

    2022年07期 v.42;No.307 1382-1386页 [查看摘要][在线阅读][下载 1323K]
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  • 宿主通过激活NLRP3信号通路抑制HY12肠道病毒的复制

    王浴光;胡俊英;章凡;常晓冉;古丽巴哈尔·图尔荪;张群;胡卉琪;王新平;

    采用Q-PCR、Western blot和ELISA的方法检测巨噬细胞感染HY12病毒后NLRP3、IL-1β和Caspase-1等蛋白的表达水平及细胞上清中IL-1β的表达量,以确定巨噬细胞感染病毒后NLRP3通路的变化情况。同时应用IL-1β预处理小鼠原代巨噬细胞与NLRP3敲除小鼠原代巨噬细胞系,检测HY12病毒感染后细胞中病毒结构蛋白的表达水平,探究了NLRP3通路激活刺激IL-1β分泌对病毒复制的影响,并以小鼠模型进行了验证。结果显示,巨噬细胞感染HY12病毒后激活了NLRP3炎性小体信号通路,上调NLRP3、IL-1β和Caspase-1等蛋白的表达,且表达水平呈现病毒剂量与时间依赖性。同时发现IL-1β预处理的巨噬细胞感染HY12病毒后,病毒结构蛋白表达显著下降;而NLRP3敲除的小鼠巨噬细胞感染HY12病毒后,相比正常巨噬细胞感染病毒后病毒的结构蛋白表达更高。此外,与野生型小鼠感染HY12病毒相比,NLRP3敲除小鼠感染后病毒的复制明显增强。结果表明,宿主在HY12病毒感染后通过激活NLRP3信号通路及刺激IL-1β的分泌,进而抑制病毒的复制。

    2022年07期 v.42;No.307 1387-1392+1410页 [查看摘要][在线阅读][下载 911K]
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  • 重组猪链球菌2型溶血素的表达及其溶血活性和致炎作用

    王俊捷;王洋;柳增善;

    PCR扩增溶血素(suilysin, SLY)基因,克隆后测序,利用原核表达载体pET-28a及表达宿主菌E.coli BL21(DE3)构建SLY原核表达系统,采用SDS-PAGE检测蛋白表达情况,借助Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,获得具有序列保守且可溶性的SLY蛋白。显微镜形态学观察显示,质量浓度为0.4 mg/L的SLY在37℃条件下作用2 h可使贴壁hCMEC/D3(人脑微血管内皮细胞)全部死亡。通过分光光度法测定SLY对人红细胞的溶血活性,结果显示1μg SLY可使2.25×10~(10)个人红细胞完全溶解。Real-time RT-PCR结果显示,SLY处理所致破碎的红细胞上清可使hCMEC/D3细胞炎性因子IL-6和IL-8转录水平分别升高80倍和100倍以上,且该作用效果显著高于超声破碎红细胞的方式。结果表明,SLY具有显著的细胞毒性,其导致红细胞溶血可能是猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)引起机体炎症反应的原动力。

    2022年07期 v.42;No.307 1393-1398页 [查看摘要][在线阅读][下载 2592K]
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  • 巴泰病毒诱导小鼠神经母细胞瘤细胞凋亡

    唐甜;李丽霞;梁晓彤;员晓庆;黄良宗;廖洁丹;赵秀宇;金宁一;刘昊;

    为探究巴泰病毒(Batai virus, BATV)在体外能否引起小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a)凋亡,本试验利用BATV(NM/12)株感染N2a细胞,主要通过WST-8法检测细胞感染后的活性,IFA确定细胞内的BATV。再利用Annexin V-FITC/PI双染法分析细胞感染BATV不同时间和剂量后诱导细胞凋亡的情况。而且进一步通过Caspase-3活性检测分析BATV对细胞凋亡通路中主要调控分子的影响。WST-8试验结果显示,BATV感染可引起N2a细胞活性明显下降,IFA检测发现绿色荧光主要存在于细胞胞浆中,证明BATV可在N2a细胞中复制。流式细胞仪检测发现,BATV可诱导N2a细胞发生早期和晚期凋亡,并且凋亡程度随着病毒含量和感染时间的增加而加大。另外,Caspase-3活性检测结果显示,BATV在感染细胞过程中可活化凋亡相关因子Caspase-3,进一步证明BATV可以诱导N2a细胞凋亡。结果表明,BATV可诱导N2a细胞发生凋亡,并且能够促进细胞凋亡蛋白Caspase-3表达水平上升,为深入探究BATV调控神经细胞凋亡的分子机制及抗病毒药物的研制奠定了基础。

    2022年07期 v.42;No.307 1399-1404页 [查看摘要][在线阅读][下载 922K]
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  • 广东省某猪场链球菌的分离鉴定及耐药性分析

    韩宁;李杰;陈佳文;李桂花;黎智;李梓楠;熊文广;曾振灵;

    为了解猪源链球菌的流行情况及耐药特征,从广东省某猪场共采集150份猪鼻拭子,利用保守基因EF-Tu进行猪源链球菌的分离鉴定;采用琼脂扩散法测定链球菌分离株对13种抗菌药物的敏感性;PCR检测四环素类耐药基因tet(O)、tet(M)、tet(L)、tet(K),噁唑烷酮类耐药基因optrA、cfr、poxtA,大环内酯类耐药基因erm(A)、erm(B)、erm(C)、mef(A),磺胺类耐药基因Sul1、Sul2、Sul3,氨基糖苷类耐药基因ApH3′,酰胺醇类耐药基因cat1、cat2,β-内酰胺类耐药基因pbp2b。结果显示,150份猪鼻拭子样品中共分离出40株链球菌,分离率为26.67%。药敏结果显示,40株链球菌对克林霉素、四环素、红霉素、氟苯尼考的耐药率较高,分别为92.50%,90.00%,85.00%和80.00%,且呈现多重耐药表型,多重耐药率高达87.50%;对阿莫西林、头孢噻呋、美罗培南等药物仍较为敏感。耐药基因检测显示,四环素类耐药基因中tet(M)检出率最高,为60.00%,其次为tet(O)(35.00%)、tet(K)(2.50%);大环内酯类耐药基因中erm(B)较为流行(50.00%);磺胺类耐药基因中Sul1检出率较高(62.50%),其次为Sul2(27.50%)和Sul3(22.50%);氨基糖苷类耐药基因ApH3′检出率为72.50%,酰胺醇类耐药基因cat1、cat2和β-内酰胺类耐药基因pbp2b均未检出。

    2022年07期 v.42;No.307 1405-1410页 [查看摘要][在线阅读][下载 261K]
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  • 致犊牛脑炎大肠杆菌分离鉴定、耐药性及毒力基因检测

    操义恒;马雪;张丽媛;李劼;周霞;黄新;韩猛立;吴桐忠;张星星;钟发刚;

    为了确定新疆石河子地区某规模化牛场表现为神经症状的病死犊牛的细菌性病原及其生物学特性,为后期新疆地区犊牛大肠杆菌病的防制及研究提供基础,研究采用常规细菌分离鉴定方法以及16S rRNA基因测序分析从病变组织中分离鉴定细菌,并对分离株进行药物敏感性试验、致病性试验以及特异基因PCR检测,对分离株进行耐药基因和毒力基因的分析。结果显示,从病死犊牛的肺脏和脑组织共分离鉴定出3株致病性较强的大肠杆菌;3株菌对青霉素、阿莫西林、头孢他啶、头孢唑啉、头孢拉定、链霉素、庆大霉素、多西环素、麦迪霉素、氟苯尼考、诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、复方新诺明、替考拉宁、克林霉素表现出100%耐药,对多黏菌素B、阿奇霉素表现出高度敏感;从3株分离菌中均检测到blaCTX-M、sul1、sul2、gyrA、aadA1、aacC2、aph(3’)-Ia、tetB等8种耐药基因以及crl、hlyE、iucD、papC、malX、ompA、opmC、ompF、irp2等9种毒力基因。结果表明,新疆石河子地区某规模化牛场表现为神经症状的病死犊牛的细菌性病原是大肠杆菌,且表现较强的多重耐药现象,分离株携带丰富的耐药基因以及毒力基因。

    2022年07期 v.42;No.307 1411-1417+1423页 [查看摘要][在线阅读][下载 434K]
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基础兽医学

  • 牛至油对断奶仔猪小肠形态、细胞因子含量及紧密连接蛋白mRNA表达的影响

    曾丽;蔡旭滨;闵思明;王小辉;陈凌峰;黄一帆;马玉芳;

    将120头25日龄断奶的“大白×长白”二元杂交仔猪按公母各半、体质量相近的原则随机分为4组,每组3个重复,每个重复10头猪,分别饲喂添加0,300,500,800 mg/kg牛至油的基础日粮,试验期为30 d,测定小肠形态、小肠组织细胞因子和SIgA含量及肠道紧密连接相关基因mRNA表达。结果显示,不同质量浓度的牛至油对小肠各段绒毛高度与隐窝深度的比值均有一定提高,并且在空肠与回肠结果中500 mg/kg牛至油组与对照组相比有显著性差异(P<0.05)和极显著性差异(P<0.01);各小肠段细胞因子、SIgA都有所提高,只是显著性不同;肠道紧密连接基因相对表达量都有增加,特别是500 mg/kg牛至油组在各段小肠中与对照组存在显著性差异(P<0.05)。结果表明,日粮中添加牛至油可以改善断奶仔猪小肠形态结构及其功能,促进仔猪肠道健康。

    2022年07期 v.42;No.307 1418-1423页 [查看摘要][在线阅读][下载 441K]
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  • 中国家鹅血管紧张素转化酶2(ACE2)基因的克隆、表达及序列解析

    张崇昊;李志强;谢娜娜;曹西月;张源淑;

    通过对中国家鹅血管紧张素转化酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)基因进行克隆、表达、序列信息分析以及对中国家鹅SARS-CoV-2易感性进行分析,旨在为鹅ACE2方面的研究提供基础资料。以中国家鹅为研究对象,检测其不同组织的ACE2基因表达,并扩增出肾组织的ACE2全基因编码区序列。将ACE2目的基因与pMD-19T重组后导入DH5α感受态细胞,随机挑取单菌落进行菌液PCR和酶切验证,并对验证为阳性的单菌落进行测序。对测序所得序列进行生物信息学分析,同时对鹅与人及其他动物ACE2结合SARS-CoV-2的氨基酸序列进行了差异性比较。结果显示,鹅体内有ACE2表达,并在肾脏中有较高的表达水平;扩增出该鹅的ACE2基因ORF序列长度为2 473 bp,编码808个氨基酸,氨基酸序列与中国麻鸭的同源性最高,且处在同一进化分支中;进一步对ACE2编码蛋白质分析显示,该中国家鹅ACE2蛋白有较高亲水性,为Ⅰ型跨膜蛋白,信号肽位于第1~17氨基酸之间;此外,对鹅与人及其他动物ACE2的SARS-CoV-2结合关键氨基酸序列的比较显示,鹅与人等对SARS-CoV-2易感性较高动物的该序列差异较大,而与鸡、鸭等禽类较接近,提示鹅对SARS-CoV-2无易感性。研究获得了鹅ACE2基因与蛋白的相关资料,为鹅ACE2相关研究提供了基础理论依据和资料。

    2022年07期 v.42;No.307 1424-1431页 [查看摘要][在线阅读][下载 6826K]
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  • 无血清分离培养兔脂肪间充质干细胞及其生物学特性

    蔺春恒;赵文亮;李珊珊;白士斌;张俊鹏;段爽;郑树贵;张树义;

    为了研究无血清分离培养的兔脂肪间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cells, AD-MSCs)的生物学特性,建立无血清分离培养AD-MSCs体系,本试验通过采集兔腹股沟处脂肪组织,使用酶消化法分离得到兔AD-MSCs。将兔AD-MSCs进行无血清培养,观察细胞形态和增殖能力,绘制出P3、P6代细胞的生长曲线,通过生长曲线计算细胞群体倍增时间。通过PCR验证MSCs表面标记基因表达情况,以及通过体外诱导分化鉴定兔AD-MSCs的分化能力。结果显示,无血清分离培养的兔AD-MSCs原代细胞形态呈多边形,P3代细胞形态呈长梭型,增殖能力随传代次数增加而下降,在P3、P6代的细胞群体倍增时间分别为18.22, 21.76 h;经过PCR验证发现,细胞表达CD90、CD105和CD73特异性目的片段,但不表达CD34和CD45;在体外诱导条件下,兔AD-MSCs能够分化为脂肪细胞和软骨细胞。结果表明,使用无血清完全培养基分离培养MSCs可为动物细胞治疗提供稳定的细胞来源。

    2022年07期 v.42;No.307 1432-1437页 [查看摘要][在线阅读][下载 396K]
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  • 4-萜稀醇对金黄色葡萄球菌的抑菌机制

    连凯琪;孟祥凤;牛维东;林正丹;周玲玲;王双山;张坤朋;张明亮;

    为研究4-萜稀醇对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)的抑菌效果和机制,本试验首先通过倍比稀释法测定4-萜稀醇对S.aureus的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC),利用酶标仪测定抑菌曲线;然后通过核酸凝胶电泳检测4-萜稀醇与S.aureus DNA的结合作用,通过检测β-半乳糖苷酶的泄露情况评价4-萜稀醇对S.aureus细胞膜的影响,通过检测胞内ATP的浓度评价4-萜稀醇对S.aureus能量代谢的影响;最后利用扫描电子显微镜观察4-萜稀醇处理后的S.aureus菌体和菌落。结果显示,4-萜稀醇对S.aureus的MIC为0.063 5 mol/L,并且对S.aureus的抑菌作用呈剂量依赖性;4-萜稀醇与S.aureus DNA没有相互结合;4-萜稀醇导致S.aureus胞内β-半乳糖苷酶发生泄露和ATP浓度下降,且都呈现剂量依赖性;1 MIC的4-萜稀醇导致S.aureus菌体皱缩、表面粗糙、菌体间距增大等。结果表明,4-萜稀醇主要是通过改变S.aureus细胞膜的通透性、导致胞内容物外流、影响菌体能量代谢等方式发挥对S.aureus良好的抑菌作用,这将为深入研究4-萜稀醇对S.aureus的抗菌机制奠定基础。

    2022年07期 v.42;No.307 1438-1442+1449页 [查看摘要][在线阅读][下载 743K]
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  • 10种治疗结肠炎的中药单体筛选及疗效评估

    董雪;刘久茜;蔡佳培;张文龙;张乃生;曹永国;

    通过饮用含2.5%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium, DSS)建立小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)动物模型。建模成功后,通过每天灌服苍术素(14 mg/kg)、荷叶碱(20 mg/kg)、龙脑(25 mg/kg)、葛根素(30 mg/kg)、鱼腥草素钠(50 mg/kg)、山奈酚(50 mg/kg)、芝麻素(50 mg/kg)、王浆酸(100 mg/kg)、广藿香酮(20 mg/kg)和甘草苷(20 mg/kg),观察不同中药单体对UC的防治效果。经过7 d处理,通过检测体质量、评定疾病活动指数(disease activity index, DAI)、测量结肠长度、组织病理学观察及评分探究不同中药单体对UC小鼠模型的保护作用。结果显示,苍术素和荷叶碱能够改善UC小鼠的结肠缩短、体质量下降以及DAI评分升高等指标,通过HE染色检测结肠组织病理学变化,并且检测结肠组织中的细胞因子水平。结果表明,苍术素和荷叶碱处理使结肠损坏程度减轻,苍术素和荷叶碱对DSS诱导的溃疡性结肠炎具有一定防治效果。

    2022年07期 v.42;No.307 1443-1449页 [查看摘要][在线阅读][下载 15273K]
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  • 兔脑炎原虫性脑肉芽肿形成与PI3K/AKT信号通路的关系

    潘耀谦;李瑞珍;郭东光;李雪华;李鹏;岳峰;张艳芳;刘金宵;王选年;刘兴友;

    为了研究兔脑炎原虫性脑肉芽肿形成与PI3K/AKT信号通路的关系,对患脑炎原虫病兔和正常对照兔的脑组织进行了组织切片和特异性蛋白提取,并用普通染色、特殊染色、免疫组织化学技术和Western blot技术分别对脑炎原虫性脑肉芽肿病变进行了观察;对病兔和对照兔脑组织内与PI3K/AKT信号通路中血管内皮生长因子(VEGF)、磷脂酰肌醇3激酶的调节亚单位P85(P85)、催化亚单位P110(P110)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)等关键性蛋白的表达丰度进行了检测。结果显示,病兔的脑组织中均有不同形态的脑肉芽肿形成和非化脓性脑炎变化;免疫组化染色显示,VEGF、P85、P110、AKT和p-AKT的表达在组成肉芽肿中的巨噬细胞、上皮样细胞、星形胶质细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞中明显增高,呈强阳性反应;Western blot检测结果显示,病兔脑组织中的VEGF、P85、P110、AKT和p-AKT等信号通路关键蛋白表达丰度明显高于健康兔,差异极显著。结果表明,PI3K/AKT信号通路在兔脑炎原虫性脑肉芽肿形成的形成过程起到重要作用;正是由于PI3K/AKT信号通路的激活才有效地促进了脑肉芽肿中各种细胞的增殖。

    2022年07期 v.42;No.307 1450-1456页 [查看摘要][在线阅读][下载 8059K]
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临床兽医学

  • 植物甾醇、大豆异黄酮、杨梅素混合保健颗粒对围产期奶牛能量代谢病防控效果的评价

    杨明茂;田艳;高畅鸿;王爽;麻芯茹;范文文;吕鑫泉;张冰冰;徐闯;杨威;

    于规模化牧场随机选取围产期健康奶牛18头,对照组和试验组各9头,试验组在饲喂基础日粮的同时添加制备的保健颗粒(每头牛40 g/d),于分娩当天连续饲喂7 d,采集并检测血液、乳汁和尿液中的相关代谢指标。结果显示:(1)与对照组相比,饲喂保健颗粒组奶牛酮病的发病率降低33%,患脂肪肝的风险降低22%。(2)试验组与对照组产前血液生化指标均无显著差异;在产后3 d,试验组AST、AST/ALT、TBIL和NEFA水平显著低于对照组,GLU水平显著升高(P<0.05);产后7,14,21 d,试验组AST、AST/ALT、TBIL、GGT、LDH、GLO、NEFA、BHBA极显著降低(P<0.01),而A/G和GLU水平有显著的升高(P<0.05)。(3)试验组的日产奶量在产后0~9 d低于对照组,但在产后10~21 d均有所升高;乳脂率均低于对照组,产后21 d显著降低(P<0.05);试验组Lactose在产后21,32 d显著升高。(4)试验组KET水平在产后7~21 d均显著降低;WBC、VC水平在产后3,7 d显著低于对照组;pH水平在产后14 d显著升高(P<0.05)。(5)试验组MDA在产后均显著低于对照组(P<0.05);而SOD和GSH水平在产后均有不同程度的升高(P<0.05)。结果表明,本试验制备的保健颗粒可明显的缓解肝损伤,提高泌乳性能和抗氧化水平,有效降低围产期奶牛产后能量代谢病的发生。

    2022年07期 v.42;No.307 1457-1463+1516页 [查看摘要][在线阅读][下载 754K]
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  • 1株动物双歧杆菌的分离鉴定及其对小鼠溃疡性结肠炎的调理作用

    陈甜甜;谢全喜;张海霞;孙尹双;白冬红;

    为了探讨双歧杆菌对小鼠溃疡性结肠炎的作用,本试验从新鲜的婴儿粪便中分离筛选出具有典型双歧杆菌形态的菌株,用16S RNA通用引物和细菌生化试验进行菌种鉴定,并对该菌株进行了生产性能测定。通过建立硫酸葡聚糖钠盐(dextransulfatesodium, DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型,评估该菌株对小鼠溃疡性结肠炎的作用。结果显示,新鲜婴儿粪便中分离的菌株经16S RNA保守序列和细菌生化试验鉴定为动物双歧杆菌(被命名为NFTY9),该菌株能够显著降低由DSS引起的小鼠腹泻和便血现象,改善肠道肠黏膜损伤,降低肠道炎性因子TNF-α和IL-6含量。结果表明,动物双歧杆菌NFTY9具有显著改善小鼠溃疡性结肠炎的作用,为进一步开发应用提供了理论依据。

    2022年07期 v.42;No.307 1464-1470页 [查看摘要][在线阅读][下载 3591K]
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  • 对比剂质量浓度对犬腰椎穿刺CT脊髓造影效果的影响

    司路;李小兵;

    为探究不同质量浓度对比剂对犬CT脊髓造影效果的影响,本试验将9只健康成年小型宠物犬分为3组,分别以80,150,250 g/L质量浓度碘海醇溶液(以碘计)进行腰椎穿刺CT脊髓造影,并于5,15 min后进行多排螺旋CT扫描,观察各组造影效果。结果显示:150 g/L质量浓度组第5胸椎头侧CT值优于其他2组;第5胸椎尾侧,250 g/L质量浓度组造影效果更好。结果表明,对比剂在蛛网膜下腔的分布受其质量浓度的影响。因此,建议在进行CT脊髓造影前,预先大致定位病变部位,而后针对性地选择CT脊髓造影方案。对位于第5胸椎头侧的病变,使用150 g/L碘海醇溶解进行CT脊髓造影可获得更好的造影效果。

    2022年07期 v.42;No.307 1471-1475页 [查看摘要][在线阅读][下载 1998K]
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  • 番茄红素缓解酮病奶牛氧化应激的作用

    罗胜缤;姜春晖;唐燕;徐闯;孙旭东;付世新;

    利用血酮仪选取40头临床型酮病奶牛作为试验组,一共分成4组。Ⅰ组为酮病对照组,Ⅱ组为饲喂番茄红素低剂量组(0.6 g/d),Ⅲ组为饲喂番茄红素中剂量组(1.2 g/d),Ⅳ组为饲喂番茄红素高剂量组(2.4 g/d),每组10头奶牛灌服7 d,另选取10头饲养条件相同的奶牛作为健康对照组。用试剂盒对各组奶牛血清中的氧化应激、肝功能以及能量代谢指标进行检测。结果显示,与酮病对照组相比,番茄红素低、中、高剂量组中,T-AOC、GSH-Px、CAT和SOD活性显著增长,MDA含量显著减少;GLU含量显著升高,而BHBA、BUN、ALP、ALT、AST、DBil含量显著降低。结果表明,番茄红素可以缓解酮病奶牛的氧化应激、能量负平衡以及肝脏损伤,为缓解奶牛酮病提供一条新的思路。

    2022年07期 v.42;No.307 1476-1480页 [查看摘要][在线阅读][下载 284K]
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动物科学

  • P_4及FSH处理对育成母羊卵泡发育和生殖激素分泌的影响

    宋志攀;段春辉;李宇;岳思聪;郭云霞;刘月琴;张英杰;

    旨在研究孕激素(P_4)与促卵泡素(FSH)联合或单独使用对湖羊育成母羊卵泡发育及生殖激素分泌的影响。选择体况良好、发情周期正常的湖羊育成母羊80只,体质量(35.16±1.66)kg,利用P_4阴道栓+孕马血清促性腺激素+氯前列醇钠(P_4阴道栓+PMSG+PG)方法进行发情周期同步处理,选择撤栓后24~48 h发情的72只羊进入正式试验,撤栓后5 d记为试验第0天。将72只试验羊随机分为9组,每组8只,其中1,2,3组在第0天埋植P_4阴道栓,埋植持续时间分别为5,8,11 d; 4,5,6组用FSH处理,分别在试验的第4,7,10天肌肉注射FSH 2次(早上8:00注射70 IU和下午6:00注射30 IU);7,8,9组P_4+FSH联合处理,在第0天埋植P_4阴道栓,埋植持续时间分别为5,8,11 d,并在第4,7,10天肌肉注射FSH 2次(时间、剂量同4,5,6组)。9组试验羊分别在第0,5,8,11天静脉采血,并手术观察记录卵泡数。结果显示,试验9组卵泡数显著高于1,2,3,4,5,7,8组(P<0.05),试验6组卵泡数显著高于1,4,5组(P<0.05)。P_4、FSH和P_4+FSH等3个处理组间卵泡数量无显著差异(P>0.05),但P_4+FSH处理组的卵泡数量比FSH组和P_4组有增加趋势,分别高38.02%和47.12%。处理时间极显著影响了卵泡数量(P<0.01),随着处理时间的延长卵泡数量明显升高,第11天极显著高于第5,8天(P<0.01);处理及时间交互对卵泡数量无影响(P>0.05)。各处理组间血清FSH浓度无差异(P>0.05),不同处理组对血清催乳素(PRL)和P_4浓度影响极显著(P<0.01),对促黄体素(LH)和雌激素(E_2)浓度影响显著(P<0.05);处理时间对FSH、LH、PRL、P_4、E_2及褪黑素(MT)浓度无影响(P>0.05);处理×时间极显著影响了P_4浓度(P<0.01),对FSH、LH、PRL、E_2、MT无影响(P>0.05)。结果表明,母羊黄体末期使用FSH单独处理促卵泡发育效果较好,P_4埋栓和FSH联合处理促卵泡发育效果更佳。

    2022年07期 v.42;No.307 1481-1488页 [查看摘要][在线阅读][下载 275K]
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  • 发酵中药对夏季育肥羔羊生长性能和免疫性能的影响

    赵寿培;刘泽;程素彩;王新芳;刘爱瑜;李晓宇;高玉红;孙新胜;

    选择160只育肥羔羊,随机分为对照组和中药组,对照组饲喂基础日粮,中药组添加日粮干物质基础1.0%的发酵中药,试验周期90 d,试验前期(1~45 d)温湿指数(THI)为79.04,羊处于中度热应激状态,试验后期(46~90 d)羊处于非热应激状态。结果显示:(1)发酵中药显著提高了育肥羔羊的日增重(P<0.05),降低了料重比(P<0.01),尤其试验前期,显著提高了日采食量(P<0.01),中药组相比对照组提高了11.5%。(2)发酵中药显著降低了15 d(P<0.05)和45 d(P<0.01)的呼吸频率,并提高了采食完成率,其中15 d的呼吸频率较对照组降低了25次/min。(3)发酵中药对试验前期羊的表观消化率并无显著性影响(P>0.05),但显著提高了试验后期干物质、粗蛋白、粗脂肪、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、粗灰分和钙的表观消化率(P<0.05)。(4)发酵中药显著降低了血液白细胞数量、中性粒细胞数量及中性粒细胞百分比(P<0.01),且显著提高了淋巴细胞百分比(P<0.05)。(5)发酵中药显著降低血清中白细胞介素-1β(IL-1β)及和白细胞介素-6(IL-6)的含量(P≤0.01),并提高闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、跨膜蛋白-1(claudin-1)和闭锁蛋白(occludin)的含量(P<0.05)。同时,发酵中药还可以提高瘤胃及空肠上皮黏膜中分泌型免疫球蛋白A的含量(P<0.05),并降低了瘤胃黏膜中IL-1β及IL-6的含量,提高了瘤胃黏膜claudin-1的含量(P<0.05)。对于空肠黏膜,发酵中药显著降低了IL-6含量(P<0.05),并提高ZO-1和claudin-1的含量(P<0.01)。结果表明,日粮中添加发酵中药可缓解热应激对育肥羔生长性能的影响,并改善机体免疫性能。

    2022年07期 v.42;No.307 1489-1498页 [查看摘要][在线阅读][下载 566K]
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  • 孕期砷暴露对子代雄性小鼠精子质量的影响

    李雪华;崔金忠;焦鹏娜;章金刚;刘兴友;

    为探讨孕期砷(arsenic, As)暴露对子代雄性小鼠精子质量的影响,本试验检测分析了不同发育阶段子代雄性小鼠的精子活率、畸形率及促卵泡生成素(follicle stimulating hormone, FSH)和促黄体生成素(luteinizing hormone, LH)水平。结果显示,砷暴露组的5周龄和8周龄子代雄性小鼠精子活率与对照组相比显著下降,8周龄的头部畸形率显著升高;5周龄和16周龄的FSH水平均显著低于对照组,8周龄的略下降但无显著性差异;3个发育阶段的LH水平与对照组相比均无显著变化。结果表明,母鼠孕期砷暴露可通过降低子代雄性小鼠的FSH水平、导致精子畸形率升高、精子活率下降,影响精子质量。

    2022年07期 v.42;No.307 1499-1503页 [查看摘要][在线阅读][下载 358K]
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  • 牛球虫病的研究进展

    叶莉莎;陈俭;胡敏;

    牛球虫病(coccidiosis in cattle)是由艾美耳属的几种球虫寄生于牛肠道引起的以急性肠炎、血痢等为特征的寄生虫病。它虽然不像一些烈性传染病和重要寄生虫病的危害那么严重,但是给养殖业造成的损失也不容忽视。目前,由于药物的大量使用以及养殖模式的改变,牛球虫病的防制面临新的挑战。通过对牛球虫的生活史、牛球虫病的流行病学、防控及牛球虫分子生物学等方面研究进展的综述,以期为未来牛球虫病的综合防控提供参考。

    2022年07期 v.42;No.307 1504-1509页 [查看摘要][在线阅读][下载 325K]
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  • 铬对动物生产性能和肉品质影响的研究进展

    余涵婧;瞿明仁;陈传斌;王隆;毛康;许兰娇;

    铬是动物体内必需微量矿物元素之一,与其他矿物元素共同对人和动物体内碳水化合物、脂类和蛋白质等代谢起着重要的作用。因其在生产和肉质改善上有显著的效果,关于铬制剂对动物生长性能和肉品质影响的研究日益增多,其在动物生产上的应用也越来越广泛。但是,与其他微量无素相比,人们对铬的了解还较少。因此,对铬元素的生物学功能及铬制剂对动物生产性能和肉品质影响的研究进展进行综述,旨在为铬在动物生产中科学的应用提供借鉴和参考。

    2022年07期 v.42;No.307 1510-1516页 [查看摘要][在线阅读][下载 217K]
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  • 白藜芦醇的功能、应用及存在的问题

    孔涛;张淑慧;马彦博;杨自军;张才;

    白藜芦醇是由植物在遭受“逆境”时产生的一种植物抗毒素,属于非黄酮类的多酚化合物,广泛存在于自然界,近年来引起了广大学者们的关注。通过对白藜芦醇在提高动物生产性能、抗氧化、抗炎、抗菌抗病毒、调节代谢、抗应激、提高免疫力、改善肠道健康等方面的作用以及存在的问题的综述,为对其进行深入的研究和广泛的应用提供参考。

    2022年07期 v.42;No.307 1517-1522页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K]
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