- 邓梦梦;郭子仪;丁晨梦;许夕雅;孙亚威;韩紫薇;石蒙蒙;陈陆;
为验证伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)US3基因缺失后作为疫苗的免疫效力，构建PRV△gE/TK/US3基因缺失株。利用PRV QYY2012变异株基因组扩增US3基因两侧序列作为同源重组的左右侧同源臂，以绿色荧光蛋白(EGFP)为标记基因，经酶切依次连接至pBluescript SK(-),构建重组转移载体pSK-US3-LR-EGFP。将pSK-US3-LR-EGFP和PRV△gE/TK株基因组共转染293 T细胞，以绿色荧光为标记经蚀斑纯化获得重组病毒PRV△gE/TK/US3/EGFP~+株。将pcGlobin2-Cre质粒和PRV△gE/TK/US3/EGFP~+株基因组共转染293 T细胞，利用Cre-Loxp系统去除EGFP基因，蚀斑纯化无荧光重组病毒，获得PRV△gE/TK/US3基因缺失株，并对该毒株遗传稳定性、生物学特性、安全性和免疫效力进行初步研究。PCR及测序鉴定证实PRV△gE/TK/US3株缺失US3基因925 bp,在Vero细胞可稳定传代；与PRV△gE/TK亲本株相比，PRV△gE/TK/US3株病毒滴度较低，但仍具有良好的增殖能力。该基因缺失毒株接种小鼠后具有安全性，能产生较PRV△gE/TK株更高水平的抗PRV中和抗体，且能维持较长时间；PRV△gE/TK/US3株免疫小鼠对PRV强毒株攻击可提供完全保护力。结果表明，成功构建的PRV△gE/TK/US3基因缺失株具有良好的免疫原性，可作为优秀的伪狂犬病基因缺失疫苗候选种毒株。
2022年10期 v.42;No.310 1927-1933+1941页 [查看摘要][在线阅读][下载 535K] [下载次数：334 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 曲哲会;张喜文;董建国;刘涛;赵云焕;郭晓秋;李颖;许琬雪;李盼盼;李卓燕;
为分析2018—2020年豫南地区猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的分子遗传变异情况，本研究利用RT-PCR方法从18个猪场PEDV感染仔猪组织中扩增S1基因部分片段、ORF3基因和N基因，进行核苷酸序列测定，并将PEDV流行株S1基因部分序列、ORF3基因和N基因推导氨基酸序列与参考毒株进行进化树构建与遗传变异分析。测序结果表明，18个猪场存在5株PEDV流行毒株。S1基因部分片段与N基因推导氨基酸进化树与相似性结果表明，5株PEDV流行株与已发表的2010年以后流行株组成G2群，与CV777株为代表的G1群毒株相似性分别为93.0%～96.7%和95.0%～96.8%。ORF3基因推导氨基酸进化树与相似性结果表明，5株PEDV流行株同其他非基因缺失毒株组成G2群，并分别属于G2a(HNXC和HNHC株)和G2c亚群(HNHB、HNNY和HNZY株),与缺失毒株组成G1群毒株的相似性为88.0%～92.4%,与CV777毒株所在G2b亚群毒株相似性分别为94.7%～96.4%和94.7%～96.9%。氨基酸遗传变异分析结果表明，与经典毒株CV777相比较，5株PEDV流行株的S1部分氨基酸、ORF3氨基酸和N氨基酸分别存在10,5,10个位置发生相同氨基酸置换，以及分别有16,10,14个位置氨基酸不同程度的突变，此外，5株PEDV流行株ORF3氨基酸不存在缺失，具有PEDV强毒株的分子遗传特征。综上所述，豫南地区PEDV流行具有PEDV变异毒株及强毒株的分子遗传特征，可为该地区PED的防控提供理论指导。
2022年10期 v.42;No.310 1934-1941页 [查看摘要][在线阅读][下载 475K] [下载次数：344 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 李兆龙;丰志华;张冰晨;方舟;梁旺旺;陈文志;
氨基肽酶(pAPN)是猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)侵染的主要受体，为了验证pAPN和唾液酸神经氨酸酶(NEU3)双基因对TGEV入侵机制的影响，应用CRISPR-Cas9基因编辑技术，敲除ST细胞的2个基因pAPN和NEU3。经过病毒感染试验，测定敲除2个目标基因pAPN和NEU3的ST细胞，对病毒的侵染变化以及病毒拷贝数的变化和细胞病变改善，同时监测病毒侵染后纤连蛋白的变化。结果表明，与对照组相比，敲除2个目标基因pAPN和NEU3的ST细胞，明显减轻TGEV侵染引起的细胞病变，TGEV的拷贝数也明显出现下降。此外，同样滴度的TGEV侵染pAPN和NEU3双基因敲除ST细胞后，诱导ST细胞的免疫应答物IFN-β的mRNA水平明显低于野生型ST细胞组。pAPN和NEU3双基因的敲除，明显降低了ST细胞中TGEV的拷贝数，同时也减轻病毒引起的细胞病变，结果证实细胞中的pAPN和NEU3双基因可作为将来养猪生产中抗病毒治疗及抗病品种选育的靶基因。
2022年10期 v.42;No.310 1942-1948+1981页 [查看摘要][在线阅读][下载 934K] [下载次数：246 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 王文婧;范青松;刘宇航;王婷;邓国辉;谢知航;王梦涵;吕岩;许家翠;艾永兴;
马立克氏病病毒(MDV)引起的鸡马立克氏病(MD)可用疫苗进行防御，但疫苗无法阻止MDV对鸡的感染以及MDV的传播和毒力的增强，MD仍为养禽业的重要威胁。而抑制细胞内MDV增殖是增强疫苗防御效果的重要策略，化学药物无疑是重要的选择之一。本研究在前期研究基础上，以MDV编码的去泛素化酶UL36为靶点，经高通量筛选，从蛋白酶抑制剂库中筛选出对UL36去泛素化酶的活性具有抑制作用的化合物LDN57444,应用酶抑制动力学方法揭示，LDN57444以非竞争性方式抑制UL36去泛素化酶活性，IC_(50)为3.10μmol/L。同源建模结合分子对接分析发现，LDN57444结合于UL36-480的C末端口袋中，通过氢键、Pi-Sigma作用、Pi-Pi堆积作用、Pi-Alkyl作用等方式与UL36-480互作，进而抑制UL36-480的活性。进一步在细胞水平，应用MDV致CEF的CPE模型分析LDN57444对MDV在CEF细胞中的增殖的抑制作用，结果发现，5,20μmol/L的LDN57444可显著抑制CPE的形成，并抑制MDV在CEF细胞内的增殖(P<0.01)。同时，应用MD鸡模型分析LDN57444是否可以抑制MDV在鸡体内的增殖，结果发现，每日高于0.5 mg/kg给药可显著抑制MDV在鸡体内的增殖(P<0.01)。本研究结果表明，化合物LDN57444可以抑制MDV在细胞及动物体内增殖，为进一步研制抗MD药物提供了可靠的依据。
2022年10期 v.42;No.310 1949-1957页 [查看摘要][在线阅读][下载 540K] [下载次数：264 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 崔真毓;韦祖樟;张亚文;张智慧;赵鹏;常爽;黄伟坚;
禽白血病病毒(ALV)在我国黄羽肉鸡群中的流行仍较普遍，前期已证实公鸡及其精液在ALV传播中具有重要作用，为了解广西地区部分黄羽肉鸡品系的种公鸡群中ALV流行情况，本研究分别采用血浆和精液实施病毒分离对广西地区12个黄羽肉鸡品系的种公鸡群开展了流行病学调查和ALV的分离鉴定。结果显示，12个品系种公鸡群经血浆病毒分离阳性率分别为0.74%(1/135),3.46%(8/231),1.37%(1/73),3.78%(9/238),8.12%(38/468),5.33%(73/1370),5.45%(9/165),2.13%(1/47),0.00%(0/29),2.50%(1/40),1.72%(3/174),2.50%(5/200);精液病毒分离阳性率分别为0.74%(1/135),1.73%(4/231),1.37%(1/73),1.26%(3/238),1.71%(8/468),6.64%(91/1370),4.24%(7/165),0.00%(0/47),0.00%(0/29),0.00%(0/40),5.17%(9/174),1.50%(3/200)。对比发现同一种公鸡群血浆病毒分离和精液病毒分离结果并不一致，其中7个鸡群血浆病毒分离阳性率高于精液病毒分离阳性率，2个鸡群精液病毒分离阳性率高于血浆病毒分离阳性率，对其中4个鸡场的6株ALV分离株gp85基因测序分析显示其均为J亚群ALV。本研究结果表明，在广西地区12个黄羽肉鸡品系种公鸡群中存在ALV的流行，需要实施进一步的净化措施加以控制。
2022年10期 v.42;No.310 1958-1962页 [查看摘要][在线阅读][下载 214K] [下载次数：325 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 邵亚男;冯嘉轩;李金斗;郭春红;丁佳欣;陈铭桦;丁伟;单春晖;张頔;丁壮;
将传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus, IBDV)强毒株的保护性蛋白VP2替换新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)蛋白胞外域部分，利用杆状病毒表达系统，构建了含有IBDV候选抗原表位VP2蛋白的重组杆状病毒rBV-VP2,并通过间接免疫荧光试验鉴定杆状病毒蛋白表达正确。rBV-VP2与NDV-HN、NDV-F、NDV-M组装成病毒样颗粒(cVLPs),形成含有IBDV候选抗原表位的IBD-ND二联病毒样颗粒(IBD-ND cVLPs),利用Western blot鉴定cVLPs各组分蛋白，证明IBD-ND cVLPs各组分组装正确。IBD-ND cVLPs的构建可为我国养禽业提供一种绿色、安全且可一针多防的IBD-ND二联病毒样颗粒疫苗候选株。
2022年10期 v.42;No.310 1963-1969页 [查看摘要][在线阅读][下载 527K] [下载次数：249 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 邓昕竹;余群;朱盈名;赵自亮;陆婧;赵光伟;张立武;程方俊;杨晓伟;
鹅源星状病毒(goose astrovirus, GoAstV)是国内新发雏鹅痛风病病原，为更好地应用于临床检测，本试验针对GoAstV分别建立了基于TaqMan探针和SYBR GreenⅠ染料的2种实时荧光定量PCR方法，并比较两者的优劣。首先根据GoAstV的ORF1b基因保守序列设计特异性引物和探针，通过优化反应条件和反应体系，分别建立TaqMan和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法，并对其进行特异性、敏感性、重复性测定和临床样品检验。结果显示，2种方法均能特异性检测GoAstV,Ct值在质粒标准品浓度2.5×10~2～2.5×10~8 copies/μL范围内线性关系良好，相关系数均为0.999;探针法和染料法的最低检测限分别为2.5×10~1,2.5×10~2 copies/μL;2种方法重复性试验组内与组间变异系数均小于2.50%。对近1年收集的71份临床疑似样本进行检测，探针法和染料法的阳性检出率分别为49.30%和42.25%,探针法的检出率较高。结果表明，本试验建立的TaqMan探针和SYBR GreenⅠ染料荧光定量PCR方法均具有特异性强、敏感性高、重复性好优点，可应用于临床GoAstV的检测，其中尤以TaqMan探针法的灵敏度较高。
2022年10期 v.42;No.310 1970-1976页 [查看摘要][在线阅读][下载 361K] [下载次数：890 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：21 ] |[阅读次数：0 ] - 章凡;古丽巴哈尔·图尔荪;常晓冉;王浴光;杨丽;曹利利;郭昌明;郭利;王新平;
本研究针对吉林省多地发生的一种新生犊牛先天性畸形和脑积水，临床上以四肢关节弯曲呈蜷缩状、无法伸直、不久发生死亡为特征的疾病进行了流行病学调查及病原分离与鉴定。结果应用MDBK细胞从发病与病死动物体内分离出3株病毒，命名为JL-AKA-CC21-1株、JL-AKA-CC21-2株和JL-AKA-YJ21。电镜负染观察显示，分离病毒粒子大小为70～130 nm,与病料中观察的病毒粒子相同。病毒接种MDBK细胞可引起典型的细胞病变，病变细胞聚集、变圆与脱落。分子生物学鉴定结果表明，上述分离毒株均为阿卡班病毒(Akabane virus, AKAV)。本研究从发生新生犊牛先天性畸形和脑积水的病死牛体内分离出AKAV,该研究结果将对今后吉林省本病的防控提供理论依据。
2022年10期 v.42;No.310 1977-1981页 [查看摘要][在线阅读][下载 406K] [下载次数：185 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：1 ] - 常晓冉;林倩;钱明珠;胡俊英;李欣;古丽巴哈尔·图尔荪;王新平;
为了解河南省不同地区牛肠道病毒(BEV)的遗传变异与病毒株间的分子差异，本研究应用PCR方法从河南省不同地区牛场确定为BEV的阳性样品或病毒分离株中扩增了病毒VP1基因并对其进行了序列测定和分析，结果显示检测出的11株BEV中，8株属于E种肠道病毒(EV-E),3株属于F种肠道病毒(EV-F)。VP1基因核苷酸序列的比对分析结果表明，8株不同EV-E毒株间的VP1同源性为70.4%～98.6%,它们与本实验室分离的国内首株EV-E HY12毒株的同源性为69.3%～80.3%; EV-F HeN-A12和HeN-YR91毒株与国内首株EV-F毒株BHM26的同源性为68.6%和70.8%,而与首株山羊EV-F毒株SD-S67的同源性为88.8%和73.7%。进一步分析显示，8株EV-E毒株可以进一步分类为2个基因型EV-E2和EV-E3;而3株EV-F毒株也可进一步分类为2个基因型EV-F1和EV-F4。结果表明，河南省不同地区牛群存在EV-E和EV-F感染和肠道病毒感染的多样性以及病毒株的分子差异，该研究为该病的防控提供流行病学理论依据。
2022年10期 v.42;No.310 1982-1987+2000页 [查看摘要][在线阅读][下载 642K] [下载次数：440 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 王振军;罗国良;程悦宁;冯二凯;刘利芳;郭利;于清平;朱先鹏;邓旭明;王建锋;
为了解我国河北省貉细小病毒(RDPV)生物学特性，通过细胞培养从河北省某貉养殖场发病貉组织样品中分离到1株病毒，经病料样品的PCR鉴定、病毒分离培养及形态学观察、猪红细胞凝集试验、基于VP2基因建立的系统发生树分析、同源性分析、动物回归试验等方法对分离株进行鉴定。结果显示，用特异性引物对病料样品进行PCR鉴定，可扩增得到573 bp特异性条带；分离病毒可在F81细胞中进行培养并产生明显的CPE;电镜下可见25 nm左右细小病毒样病毒粒子；猪红细胞凝集试验(HA)结果显示，分离株对猪红细胞血凝效价可达到1∶1 024;VP2基因序列比对及进化分析结果显示，RDPV-HeB16与RPDV-LN10-1处于同一进化分支；同源性分析结果显示，与参考序列VP2基因相似性在98.4%～99.5%之间；将病毒培养物感染健康貉，结果显示感染组的貉均出现典型RDPV临床症状，正常对照组未发病。综上所述，本研究结果表明从发病貉病料样品中分离到1株RDPV,命名为RPDV-HeB17。本研究所获数据将对我国RDPV的流行及该病毒的遗传进化分析、疫苗和诊断制品的研究提供参考。
2022年10期 v.42;No.310 1988-1993页 [查看摘要][在线阅读][下载 349K] [下载次数：171 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 方剑玉;白杰;席燕燕;黄慧敏;徐引弟;王改利;张青娴;徐彬;李绍钰;王克领;
干扰素(interferon, IFN)是一类具有抗病毒和免疫调节功能的细胞因子，目前已经应用于多种人和动物病毒病的预防和治疗。不同猪干扰素亚型的抗病毒活性差异较大，为了解猪IFN-α14的抗病毒活性，将猪IFN-α14基因序列进行分析，去除信号肽、优化密码子，并采用基因合成的方法合成了猪IFN-α14亚型基因，将其克隆入pCSMH原核表达载体，优化诱导条件，利用Ni琼脂糖凝胶纯化柱进行亲和层析，获得高纯度的重组猪IFN-α14蛋白，Western blot检测证明重组蛋白具有较好的特异性。用不同浓度的重组猪IFN-α14处理Vero细胞后，接种1 000 TCID_(50)猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV),24 h收集细胞和上清，通过荧光定量检测细胞内病毒的RNA水平，同时测定细胞上清中病毒的TCID_(50)。猪IFN-α14蛋白被成功表达并纯化，证明了10μg/L的重组猪IFN-α14干扰素能够显著抑制PEDV的复制。与本实验室前期表达纯化的猪IFN-α2、8相比，猪IFN-α14抑制PEDV复制的活性显著提高，为新型抗病毒药物开发提供了重要的依据和数据支持。
2022年10期 v.42;No.310 1994-2000页 [查看摘要][在线阅读][下载 452K] [下载次数：251 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 张丽娟;杨金先;陈强;李英英;葛均青;
为了明确一种牛蛙(Rana catesbiana Shaw)传染性疾病的致病病原，本研究利用收集的病料进行病毒分离培养、鉴定和致病性分析。结果显示，接种病料的鲤鱼表皮瘤细胞(epithelioma papulosum cyprini cell line, EPC)出现变圆、脱落等典型细胞病变效应(cytopathic effect, CPE),病毒粒子的电镜观察表明其可能为虹彩病毒，进一步的基因组PCR鉴定和序列的同源性分析证实分离的病毒为一株蛙虹彩病毒(Rana grylio virus, RGV),称之为RGV-FJ。攻毒试验表明，感染RGV-FJ的牛蛙出现腹部及大腿出血，肝脏变白肿大，脾脏、肾脏及肺部出血等症状。组织病理学观察发现，攻毒组牛蛙皮肤的黏液层细胞肿胀、排列紊乱，细胞间红细胞浸润，上皮细胞肿胀、坏死；肝细胞肿胀或萎缩、坏死、排列紊乱，门静脉与肝组织剥离，红细胞渗出且肿胀成不规则形态；肾脏的肾小管管腔狭窄，细胞界限模糊，大量红细胞和单核细胞浸润；肺部囊泡细胞排列紊乱，有大量红细胞浸润、淤积。同时利用透射电镜在蛙的肺部观察到病毒粒子。PCR检测显示，攻毒组牛蛙肝脏、脾脏、肾脏、肠道、肌肉、皮肤和肺中均可检测到RGV-FJ,这表明牛蛙发生了RGV-FJ的系统侵染；攻毒组牛蛙从攻毒第2天开始出现死亡，第4天的累计死亡率达到94.12%;并从病死牛蛙的主要内脏器官中重新分离出了RGV-FJ。上述结果表明，分离的RGV-FJ具有较强致病性，这为进一步开展分离病毒的致病机理研究奠定基础。
2022年10期 v.42;No.310 2001-2008页 [查看摘要][在线阅读][下载 992K] [下载次数：558 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 高瑞;谢玉杰;缪西鹏;姜兴佳;牛耀祖;许立华;
多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)和溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)是栖息于牛呼吸道的2种常见细菌，可引发牛的呼吸道疾病，对养殖业产生一定经济损失。为提高这2种细菌所导致疾病的临床诊断效率，本研究根据Pm的Kmt1基因、Mh的Lkt基因序列分别设计了特异性引物，建立了一种同时检测2种细菌的双重PCR检测方法。结果显示，建立的双重PCR方法对其他牛源细菌及病毒检测结果均为阴性，Pm、Mh病原基因组DNA的检测下限分别为1.57×10~5,1.98×10~6 copies/μL,表明该方法具有较好的特异性和敏感性。应用此双重PCR方法对宁夏地区118份临床样品进行了检测，结果显示Pm的检出率为57.63%(68/118),Mh的检出率为30.51%(36/118),混合感染检出率为24.58%(29/118),而且双重PCR检测结果与单一PCR检测结果一致，表明该方法可用于临床检测。Pm和Mh 2种病原双重PCR检测方法的建立，为牛呼吸道疾病的临床诊断提供了一种方便、快捷和准确的检测手段，具有一定的临床应用价值。
2022年10期 v.42;No.310 2009-2013+2030页 [查看摘要][在线阅读][下载 357K] [下载次数：491 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ]
- 翟祎梦;邱国强;雷蕾;胡依凡;白洪青;秦勇强;翟瑞东;周莹珊;王晓杜;杨永春;宋厚辉;
为确定浙江省德清县下渚湖国家湿地公园1只野外朱鹮的死因及病原特性，对从肺、肝脏和腹水中分离出的病原菌进行形态特征、生化特性、16S rDNA鉴定，进而采用麻鸭腹腔接种鉴定其致病性、K-B纸片法药敏试验检测其耐药情况，并采用全基因组测序分析其耐药与毒力基因携带情况及ST型和分子血清型。结果显示，从朱鹮腹水和肺脏等样本分离到1株多重耐药致病性拟肺炎克雷伯菌，并暂定名为ZH200912。该菌株ST分型为ST3244,血清型为K165:O12,对1日龄麻鸭的LD_(50 )为1×10~(6.5 )CFU;携带耐药相关基因24个，其中，bla_(OKP-B-1),fosA6耐药基因与氨苄西林、哌拉西林和磷霉素耐药表型一致；对头孢噻肟耐药可能为携带多重耐药外排泵基因acrBD和耐药基因转录调节因子marAR等所致，虽然鉴定到oqxAB耐药基因但对喹诺酮类药物均不耐药；携带毒力基因67个，其中包括Ⅰ型菌毛蛋白基因fimACD、Ⅲ型菌毛蛋白基因mrkD、铁摄取相关基因肠杆菌素操纵子entABCEFS和fepABC,以及铁运输操纵子iroEN等核心毒力基因18个，缺失高黏相关基因rmpA和rpmA2。本研究分离鉴定到1株多重耐药致病性朱鹮源拟肺炎克雷伯菌，首次提出了拟肺炎克雷伯菌为朱鹮潜在致病菌，为相关疾病防治提供了数据支持，提示应重视拟肺炎克雷伯菌对动物的潜在危害。
2022年10期 v.42;No.310 2014-2021页 [查看摘要][在线阅读][下载 541K] [下载次数：431 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 尚天甜;彭婕;鲁强生;刘旭明;曾巧英;
运用同源重组法构建马链球菌兽疫亚种(SEZ) ATCC35246株(SEZ WT)pepO基因缺失株(SEZ△pepO)及互补株(SEZ C△pepO),比较分析pepO基因对SEZ形态特征、生长性能、感染小鼠的能力、小鼠全血存活率及小鼠脑组织定殖能力的影响；观察感染后小鼠脑组织的病理变化；选取人脑微血管内皮细胞(hBMEC)为体外血脑屏障模型细胞，测定pepO基因对hBMEC细胞的黏附侵袭能力以及对体外血脑屏障模型的穿透能力的影响。结果显示，pepO基因缺失后不影响SEZ在培养基中的生长速率，也不影响SEZ在小鼠全血中的存活率，但缺失株感染小鼠的能力显著降低(P<0.05),在小鼠脑组织细菌载量显著降低(P<0.05);SEZ WT株和SEZ C△pepO株感染组小鼠脑组织出现明显充血、出血、水肿的脑膜炎症状，组织切片可见大量出血及炎性细胞浸润，SEZ△pepO株感染组小鼠脑组织未见明显病变；SEZ△pepO对hBMEC细胞的黏附侵袭率以及对体外血脑屏障模型的穿透率较SEZ WT和SEZ C△pepO均显著降低(P<0.001)。本研究初步证明内肽酶O与SEZ毒力密切相关，并可促进SEZ穿透血脑屏障，有助于进一步阐明SEZ致脑膜炎的机制。
2022年10期 v.42;No.310 2022-2030页 [查看摘要][在线阅读][下载 600K] [下载次数：205 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 程一丹;张西臣;张洪波;李建华;宫鹏涛;王晓岑;李新;张楠;
探讨苦参碱、蛇床子素和硝唑尼特对人五毛滴虫的作用效果，为人五毛滴虫病的防治提供新的参考。分别以4.00,2.00,1.00,0.50,0.25 g/L的苦参碱、蛇床子素和10.000,5.000,2.500,1.250,0.625 mg/L的硝唑尼特在不同作用时间0,2,4,8,12,18,24 h体外观察对人五毛滴虫的生长抑制作用。应用透射电镜观察3种药物在其作用10 h后的超微结构变化。同时观察以25,50,100 mg/kg剂量的苦参碱、蛇床子素和0.5,1.0,2.0 mg/kg剂量的硝唑尼特分别对小鼠人五毛滴虫感染的治疗效果。结果显示，在体外试验中，4 g/L苦参碱作用12 h、10 mg/L硝唑尼特作用18 h可完全杀灭虫体，而4 g/L蛇床子素作用24 h的杀虫率为97.88%。在透射电镜下，苦参碱和蛇床子素处理后的人五毛滴虫多聚核糖体解聚、粗面内质网脱颗粒，硝唑尼特处理组人五毛滴虫出现胞质空化的现象。体内试验发现，硝唑尼特、苦参碱、蛇床子素的作用剂量分别为1,25,50 mg/kg时，肠道和粪便镜检未见虫体，经巢式PCR扩增后未扩增到人五毛滴虫。因此，苦参碱(4 g/L、12 h)和硝唑尼特(10 mg/L、18 h)可完全杀灭人五毛滴虫，但蛇床子素(4 g/L、24 h)不能完全杀灭人五毛滴虫。小鼠体内试验中苦参碱(25 mg/kg)、蛇床子素(50 mg/kg)和硝唑尼特(1 mg/kg)均有良好的治疗效果。
2022年10期 v.42;No.310 2031-2035页 [查看摘要][在线阅读][下载 316K] [下载次数：330 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ]
- 郑梦琳;朱阳华;赵慧玲;王柏森;高艳梅;谢长清;
鸡坏死性肠炎(necrotic enteritis, NE)主要是由产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,CP)引起的雏鸡肠道的一种疾病。本试验旨在探讨微生态制剂对G型坏死性肠炎所致的回肠黏膜损伤的预防作用。将60只1日龄健康817雏鸡随机分成4组，分别为空白对照组(Control组),微生态制剂预防1组(MEA 1组),微生态制剂预防2组(MEA 2组),坏死性肠炎感染阳性对照组(NE组),14日龄时灌胃CP,连续攻菌后3 d剖检进行回肠的病理学检查。结果显示，MEA 1组、MEA 2组肉仔鸡回肠组织形态与Control组相比有所改善，绒毛长度/隐窝深度比、黏蛋白含量、抗氧化水平、sIgA水平均显著高于NE组(P<0.05)。同时应用qPCR检测了肠黏膜紧密连接蛋白claudin-1、ZO-1和ZO-2的mRNA表达量，发现MEA1组、MEA2组以及对照组比较差别不大，但均显著高于NE组(P<0.05),而添加微生态制剂组的ZO-2的表达量显著高于对照组和NE组(P<0.05)。结果证实，微生态制剂的添加可以在一定程度上缓解坏死性肠炎所致的回肠黏膜形态结构改变，减轻产气荚膜梭菌对回肠黏膜的刺激，提高机体抗氧化水平，缓解机体炎症反应。
2022年10期 v.42;No.310 2036-2041+2079页 [查看摘要][在线阅读][下载 371K] [下载次数：566 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 陈喜宏;余世田;马骁;路桂聪;王瑞宏;玉永雄;蒋曹德;
为揭示芹菜素对奶牛乳腺炎的抑制作用及其机制，本研究采用脂多糖(LPS)刺激MAC-T细胞，MTT方法检测芹菜素对奶牛乳腺上皮细胞MAC-T的毒性；real-time PCR和Western blot方法检测炎性因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及氧化应激因子诱生型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧酶2(COX-2)的表达水平；Western blot检测核因子κB(NF-κB)和促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路关键蛋白的表达水平和磷酸化水平；免疫荧光检测NF-κB的核转移情况。结果表明：芹菜素(1,7,15 mg/L)显著降低了MAC-T细胞和小鼠乳腺中LPS诱导的COX-2、iNOS、IL-1β、IL-6的mRNA与蛋白质的表达水平(P<0.01)。而且，芹菜素显著降低了MAC-T细胞以及小鼠乳腺中LPS诱导的NF-κB(p65和IκBα)(P<0.05)和MAPK(p38、JNK1/2和ERK1/2)(P<0.01)的磷酸化水平，抑制了NF-κB p65的核转移。这些结果说明芹菜素通过抑制NF-κB和MAPK信号通路活性抑制乳腺细胞的炎性反应，但是芹菜素在奶牛乳腺炎防治中的应用有待进一步研究。
2022年10期 v.42;No.310 2042-2050页 [查看摘要][在线阅读][下载 755K] [下载次数：554 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 卢春雨;张璐;刘维;窦萌萌;史万玉;包永占;
为了探讨氟苯尼考(florfenicol, FFC)对肉鸡肾损伤的机制，将60只1日龄AA肉鸡随机分成2组：空白组和氟苯尼考组。1日龄开始，氟苯尼考组给予0.15 g/L FFC饮水，连续给药5 d,建立肾损伤模型。在6日龄和42日龄，对肉鸡处死并取样，分析血清中肾功能指标和肾脏的病理形态、炎性因子水平和转录组学分析的基因改变。结果表明，与空白组相比，FFC升高了血清中尿酸、肌酐和尿素氮的表达(P<0.05或P<0.01),一直持续到出栏。HE病理切片结果表明：与空白组比较，添加FFC饮水的肉鸡肾脏出现肾小管上皮脱落，炎症因子浸润等病理学变化；ELISA检测结果表明：与空白组相比，FFC显著增加肉鸡肾脏白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量(P<0.05或P<0.01)。转录组测序RNA-seq结果发现，FFC诱发肉鸡肾脏损伤的关键基因：细胞色素P450 1B1(CYP1B1)、葡萄糖醛酸转移酶(UGT1A1)、Toll样受体1(TLR1)、Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)、半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)主要富集在细胞色素P450对外源性物质的代谢和Toll受体信号通路途径中。RT-PCR验证UGT1A1、CYP1B1、TLR1、TLR4与RNA-seq基因表达水平一致。结果表明，FFC可影响肉仔鸡肾脏的药物酶代谢和介导炎症反应，从而损害肾脏的正常功能。
2022年10期 v.42;No.310 2051-2058页 [查看摘要][在线阅读][下载 781K] [下载次数：196 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 杨庆稳;雍康;张怡;贺闪闪;杨钧杰;彭津津;聂青玉;吴有华;
为了探讨乙酰左旋肉碱(acetyl L-carnitine, ALC)对高锌(zinc, Zn)诱导PK-15细胞凋亡的影响，本研究首先通过CCK-8法检测不同浓度的Zn~(2+)和ALC对细胞活力的影响，并选择最佳的处理浓度进行24 h细胞干预。细胞试验分为对照组、Zn组、Zn+ALC组和ALC组。试验采用实时荧光定量PCR检测细胞凋亡相关基因bax、bak-1、bcl-2和Caspase-3的mRNA转录水平，免疫印迹检测Caspase-3和cleaved Caspase-3的蛋白表达。结果显示，100 mmol/L的ALC可以显著提高PK-15的细胞活力(P<0.05),Zn~(2+)在PK-15细胞活力中的半数抑制浓度为121.945μmol/L。Zn~(2+)处理细胞可显著上调凋亡相关基因bax、bak-1和Caspase-3的mRNA表达以及cleaved Caspase-3的蛋白表达(P<0.05)。与Zn处理组相比，Zn+ALC组中bax、bak-1和Caspase-3的mRNA表达以及cleaved Caspase-3的蛋白表达呈现显著降低(P<0.05)。此外，Zn组中bcl-2的mRNA表达和Caspase-3蛋白表达显著低于对照组(P<0.05),而ALC与Zn联合作用可逆转这一效应(P<0.05)。结果表明，ALC可有效缓解Zn诱导PK-15细胞的凋亡效应，对高Zn导致的毒性损伤具有一定的保护作用。
2022年10期 v.42;No.310 2059-2063页 [查看摘要][在线阅读][下载 350K] [下载次数：156 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 汪培嘉;严静;王银龙;苏柘僮;赵俊卿;许小琴;
为了观察白头翁皂苷注射液对奶牛隐性乳房炎的治疗效果，将103头患隐性乳房炎的奶牛随机分为白头翁皂苷注射液高剂量组0.08 mL/(kg·d)、中剂量组0.05 mL/(kg·d)、低剂量组0.01 mL/(kg·d)、阳性药物对照组0.10 mL/(kg·d)和阳性对照组0.05 mL/(kg·d)。各组均按体质量换算药量，通过肌肉注射给药，连续5 d。每头奶牛于给药前1 d、给药后3和5 d采用HMT检测判断各组奶牛患隐性乳房炎的程度；并于给药前1 d和给药后5 d进行乳汁体细胞数和乳汁理化指标测定，同时采血进行血常规、炎性因子和免疫因子的检测。结果显示，治疗后，白头翁皂苷注射液高、中、低剂量组的总有效率分别为90.91%,77.42%,77.27%,极显著高于阳性对照组的33.33%(P<0.01),其中白头翁皂苷注射液高、中剂量组的总有效率显著高于双丁注射液组的46.67%(P<0.05),白头翁皂苷注射液高、中、低剂量组隐性乳房炎炎症程度积分、乳汁体细胞数与治疗前及阳性对照组相比具有极显著性(P<0.01)和显著性(P<0.05)下降。治疗后，各组乳成分检测结果无明显差异。治疗前后血液学常规指标和血清中IL-1β、IgG等炎性因子及免疫指标的检测结果显示，白头翁皂苷注射液高剂量组奶牛血清中的IL-8含量极显著高于阳性对照组(P<0.01),其余指标未出现显著变化。结果表明，白头翁皂苷注射液对奶牛隐形乳房炎有较好的疗效，且优于双丁注射液，同时对患隐性乳房炎奶牛的基础生理代谢活动影响较小。
2022年10期 v.42;No.310 2064-2070页 [查看摘要][在线阅读][下载 430K] [下载次数：286 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 李晔;张玉珠;霍俊元;唐明瑞;蔡桦林;孙真真;刘祥雨;谢光洪;刘云;
本研究旨在分析患骨癌犬的癌组织的菌群特征及其与癌旁组织菌群的构成差异，进而探究癌内菌群对犬骨癌发生发展的影响。提取癌组织与癌旁组织菌群的基因组总DNA,进行高通量测序，结合数据分析两者的菌群特征，并利用Tax4Fun对其菌群进行功能预测。结果发现，2组菌群的丰富度指数(Ace、Chao1)和多样性指数(Shannon、Simpson)无显著性差异(P>0.05)。相对丰度方面，2组样本在门水平的菌群主要是变形菌门、拟杆菌门和厚壁菌门，其中癌组织的拟杆菌门(t=0.114,P=0.039)、广古菌门(t=0.067,P=0.017)、脱硫菌门(t=0.019,P=0.002)以及螺旋菌门(t=0.021,P=0.072)显著高于癌旁组织；在属水平上主要由绿脓杆菌属、乳杆菌和链球菌属等组成，其中癌组织的甲烷杆菌属(t=0.495,P=0.02)、互营杆菌属(t=0.495,P=0.004)以及Sarcina属(t=0.436,P=0.011)显著高于癌旁组织，且癌旁组织中不含有Sarcina属。PCoA图提示2组肠道菌群有显著性差异；LDA差异贡献分析发现2组之间共有27个物种存在显著性差异，其中影响较大的有硝化螺旋菌属(t=0.159,P=0.003)、反刍甲烷杆菌(t=0.495,P=0.029)、拟杆菌门(t=0.114,P=0.039)、Exilispira (t=0.495,P=0.022)、假单胞菌科(t=0.296,P=0.032)、假单胞菌目(t=0.284,P=0.032);功能预测结果表明，2组的代谢功能具有最高的相对丰度，在2组中相对丰度均超过45%,其中癌组织明显升高的代谢通路有氨基酸代谢、能量代谢、核苷酸代谢以及辅助因子和维生素的代谢等(P<0.05)。综上，犬骨癌的癌变部位与癌旁部位组织中均存在特异的微生物菌群。
2022年10期 v.42;No.310 2071-2079页 [查看摘要][在线阅读][下载 761K] [下载次数：238 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]