研究论文_预防兽医学

  • NADC30-like PRRSV和PCV2d共感染与继发感染PCV2抗体阳性断奶仔猪的致病性

    王鹏;张金勇;哈卓;解长占;张赫;韩继成;谢宇飚;李卓昕;高岩;陶一墨;何海强;鲁会军;金宁一;

    为了确定近年来国内主要流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NADC30-like谱系与猪2型圆环病毒(PCV2d亚型)共感染与继发感染后对猪的致病作用,使用本实验室分离的NADC30-like谱系PRRSV与PCV2d毒株感染PCV2抗体阳性断奶仔猪。选取30只5周龄PCV2抗体阳性断奶仔猪,随机均分为6组,分别为PBS、PCV2、PRRSV、PCV2-PRRSV、PRRSV-PCV2和Co-PRRSV-PCV2感染组。记录各组临床指征(体温、体质量、临床症状和存活率);检测特异性抗体及TNF-α、IFN-γ、IL-4和IL-10共4种细胞因子的变化;并对主要组织脏器的病理变化进行分析。结果显示,各感染组在感染PRRSV后均出现体温升高、体质量减轻、咳喘、腹泻、精神沉郁等临床症状;Co-PRRSV-PCV2、PRRSV-PCV2和PRRSV组表现出更为严重的肉样变和淋巴细胞浸润;先感染PCV2可以延迟PRRSV特异性抗体的产生;PRRSV组表现出高水平的TNF-α和IL-10;NADC30-like PRRSV与PCV2d共感染与继发感染PCV2抗体阳性仔猪会出现严重的临床症状和病理变化,PRRSV单感染同样表现出严重的临床症状但病理变化相对较轻。

    2023年03期 v.43;No.315 429-434页 [查看摘要][在线阅读][下载 7730K]
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  • PRRSV感染仔猪腹股沟淋巴结组织病理学观察及转录组分析

    苏娜瑛;林正丹;詹存林;金鑫鑫;胡薛英;张万坡;谷长勤;刘晓丽;程国富;

    为探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)感染仔猪导致的腹股沟淋巴结的组织病理学变化及致病机制,对PRRSV感染仔猪腹股沟淋巴结进行组织病理学观察及转录组分析。结果显示,PRRSV感染仔猪腹股沟淋巴结肿胀出血,镜检观察可见淋巴组织结构模糊,淋巴细胞减少,出血;淋巴小结数量减少,界限不清,生发中心大量淋巴细胞坏死。基于Illumina测序平台,运用RNA-seq技术进行建库测序和生物信息分析,发现TLR8、CCL5、CCL8、IFNG、IRF5、TNFSF13B等炎性因子差异性表达,Toll样受体通路、NF-κB信号通路、TNF信号通路等通路被激活,提示这些细胞因子及信号通路参与PRRSV感染引起的淋巴结炎的病理变化过程。

    2023年03期 v.43;No.315 435-441页 [查看摘要][在线阅读][下载 939K]
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  • 猪圆环病毒4型实时荧光RAA检测方法的建立

    陈伟月;吕荞;李玉莹;于子萍;黄海鑫;汪伟;刘宇梦;孙文超;郑敏;

    为快速检测猪圆环病毒4型(PCV4),本研究根据PCV4的Cap基因片段保守区设计引物和探针,建立了PCV4重组酶介导核酸等温扩增荧光法(RAA),并应用该方法对40份猪组织样品进行检测。结果表明,该方法可在20 min内,42℃恒温条件下特异性检测出PCV4,以猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等病毒核酸为模板进行反应的扩增结果均为阴性;最低检出限至7.42×10~1拷贝/μL,灵敏度较高。利用建立的RAA检测方法和常规PCR法分别对猪组织样本进行检测,均未检出,表明当前猪场流行率较低。综上所述,本研究建立的PCV4实时荧光RAA检测方法快速简便、特异性强、灵敏度较高,可应用于PCV4的临床筛查与流行病学研究。

    2023年03期 v.43;No.315 442-447页 [查看摘要][在线阅读][下载 18582K]
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  • 同时检测PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的四重实时荧光RT-PCR方法的建立及应用

    高艺祥;王金凤;张倩;孙晓霞;刘立兵;顾文源;马宏伟;韩庆安;马增军;王建昌;

    为实现对猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)、猪传染性胃肠炎(porcine transmissible gastroenteritis virus, TGEV)、猪轮状病毒(porcine rotavirus, PoRV)和猪流性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的同时鉴别检测,根据PDCoV M基因、TGEV S基因、PoRV VP6基因和TGEV N基因保守区域序列合成特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,成功建立了一种可同时检测PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的实时荧光RT-PCR方法。结果显示,所建立的四重实时荧光RT-PCR方法仅对PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV出现阳性扩增,与PRV、PPV、PRRSV、CSFV、PCV2等猪常见病原无交叉反应;对PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的最低检出限分别为1.17×10~3,1.13×10~3,1.31×10~2和1.18×10~2拷贝;重复性好,组内和组间试验变异系数均小于4.5%。进一步应用所建立的同时检测PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的实时荧光RT-PCR方法对199份采集自河北省不同地区腹泻猪的临床样品进行检测,结果检出23份PoRV阳性(11.56%)、12份PEDV阳性(6.03%)和1份TGEV阳性(0.50%),均为单一感染;未检出PDCoV阳性。本研究所建立的四重实时荧光RT-PCR检测方法可实现对PDCoV、TGEV、PoRV和PEDV的同时鉴别检测,为实验室快速鉴别诊断猪病毒性腹泻提供了有效的技术支持。

    2023年03期 v.43;No.315 448-454+461页 [查看摘要][在线阅读][下载 378K]
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  • 猪流行性腹泻病毒特异性SIgA 间接ELISA检测方法的建立及初步应用

    柏家果;杜琛;王若木;刘思雨;陆颖;黄诗婷;余科辰;何贵府;陈樱;韦祖樟;黄伟坚;欧阳康;

    以乳汁中SIgA特有的成分SC蛋白为研究对象,运用基因克隆、原核表达等方法,制备兔抗猪SC多克隆抗体,使用猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV) S截短蛋白进行包被后,初步建立了一种可以检测母猪初乳中PEDV特异性SIgA抗体的ELISA方法。结果显示,PEDV特异性SIgA检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等特点。结果表明,该方法适用于检测临床中SIgA。该方法的成功建立为生产中评估仔猪从乳汁中获得SIgA的效率及制定更为完善的母猪免疫程序提供了有效的技术支持。

    2023年03期 v.43;No.315 455-461页 [查看摘要][在线阅读][下载 269K]
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  • 血凝素的糖基化模式对G57基因型H9N2亚型禽流感病毒的稳定性和受体亲和性影响

    韩金宏;孙艺学;朱艳婷;丛彦龙;

    G57基因型H9N2亚型禽流感病毒自2007年以来逐渐成为我国禽群中的优势基因型。序列分析显示,G57基因型病毒的血凝素主要存在5种糖基化模式。本研究利用反向遗传技术拯救了5株具有不同HA糖基化模式的病毒,分别命名为reHA7、reHA6、reHA5、reHA4、reHA3。稳定性试验结果显示,reHA6的热稳定性与酸稳定性最好,reHA7、reHA5次之,而reHA4、reHA3最弱。红细胞洗脱试验和红细胞凝集试验结果显示,reHA7的受体亲和性最强,reHA6、reHA5次之,而reHA4、reHA3最弱。固相结合试验结果显示,5株病毒均可与人型和禽型受体结合,并且reHA7与2种类型受体的亲和性最强,reHA6、reHA5次之,而reHA4、reHA3最弱。结果表明,血凝素糖基化模式影响H9N2亚型禽流感病毒的稳定性和受体亲和性,并以210位和305位糖基化位点的效应最为显著。本研究结果为深入理解H9N2亚型禽流感病毒的适应性进化提供了新的理论基础。

    2023年03期 v.43;No.315 462-468+475页 [查看摘要][在线阅读][下载 623K]
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  • 基于gB基因的IBRV微滴式数字PCR检测方法的建立及初步应用

    高雅欣;刘立兵;刘岳林;王金凤;王建昌;李睿文;

    为实现牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus, IBRV)精准的定量检测,以IBRV gB基因为靶基因,建立IBRV微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法,进行了ddPCR退火温度、引物和探针浓度的优化、特异性和灵敏性试验。结果显示,建立的ddPCR方法最佳退火温度为56.5℃;反应体系中最佳引物、探针浓度分别为900和250 nmol/L;能够实现IBRV的特异性检测,与其他常见的牛呼吸系统疫病病原无交叉反应;以重组质粒pMD19-T-gB为模板,ddPCR方法的检出限为1.8 copies/μL,是实时荧光PCR方法敏感性的10倍。对119份具有呼吸道症状的牛鼻拭子样本分别进行ddPCR方法和实时荧光PCR方法进行检测,结果显示,ddPCR方法和实时荧光PCR方法的检出率分别为(15.13%,18/119)和(12.60%,15/119)。本研究建立的ddPCR方法特异性强、灵敏度高,可作为牛呼吸道临床样品中IBRV精准定量检测的有效手段。

    2023年03期 v.43;No.315 469-475页 [查看摘要][在线阅读][下载 6384K]
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  • 干扰素诱导跨膜蛋白3基因敲除Caco2细胞株的构建及其对水泡性口炎病毒复制的影响

    庞照霞;郝鹏飞;屈巧巧;李乐天;李昌;金宁一;

    通过CRISPR/Cas9系统,旨在构建干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)基因敲除的人结直肠腺癌细胞Caco2,并探究IFITM3基因敲除对水泡性口炎病毒(VSV)复制的影响。针对人IFITM3基因靶向设计sgRNA,合成后连接至pLentiv2载体中获得重组质粒,经测序后将正确连接sgRNA的重组质粒及辅助质粒psPAX2、pMD2.G共转染293T细胞进行慢病毒包装并感染Caco2细胞,然后进行嘌呤霉素加压筛选,利用有限稀释法获取IFITM3基因敲除单克隆细胞。利用DNA测序和Western blot对所获得单细胞克隆进行鉴定,鉴定正确的细胞命名为Caco2-△IFITM3。用表达绿色荧光蛋白的VSV(VSV-EGFP)感染Caco2-△IFITM3细胞,通过荧光显微镜观察IFITM3敲除对VSV复制的影响。基因组DNA测序结果表明,在IFITM3基因开放阅读框产生了碱基缺失,细胞中IFITM3蛋白表达消失,但细胞活性未受明显影响。病毒感染试验可观察到Caco2-△IFITM3细胞感染比例显著高于Caco2细胞,表明敲除IFITM3使其抗病毒功能减弱。本研究通过CRISPR/Cas9技术成功构建了基于肠道细胞敲除IFITM3基因的Caco2单细胞克隆,验证了IFITM3敲除对细胞抗VSV感染的影响,为进一步深入研究IFITM3与肠道病毒的互作及其功能奠定基础。

    2023年03期 v.43;No.315 476-482页 [查看摘要][在线阅读][下载 9392K]
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  • 猫杯状病毒抗原检测胶体金试纸条的研制

    李华斌;田崇瑜;李欣昱;李春和;张然;杨峰清;刘媛;贺威;谭凌云;赵忠鹏;闫芳;

    以浓缩纯化的猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,用间接ELISA试验检测细胞培养上清,获得5株阳性杂交瘤细胞克隆株,命名为1E2、4C3、5F11、6G9和7D2,分别制备腹水后进行纯化。以多克隆抗体为金标抗体,腹水ELISA和中和效价较高的单抗(4C3)作为检测线抗体,羊抗兔二抗为质检抗体,制备检测FCV病毒抗原的免疫胶体金快速诊断试纸条。在pH为7.4的条件下,金标抗体的最适质量浓度为0.1 g/L,检测线最佳包被质量浓度为1.0 g/L,质控线最终质量浓度为0.5 g/L。经检测该试纸条具有敏感性高,特异性强,稳定性好的特点,用制备的胶体金试纸条与RT-PCR方法同时对76份猫鼻咽拭子进行检测,比较两者的符合率,符合率在90%以上。结果表明,本试验研制的胶体金试纸条可以用于FCV的临床检测。

    2023年03期 v.43;No.315 483-487+503页 [查看摘要][在线阅读][下载 1824K]
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  • 3-磷酸甘油醛脱氢酶在鸭疫里默氏杆菌感染过程中的致病作用

    高继业;李金蓉;黄伟;李继祥;李德龙;陈思怀;

    为深入探讨3-磷酸甘油醛脱氢酶(RaGAPDH)在鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,R.anatipestifer)致病过程中的作用,研究采用等位基因交换技术将RaGAPDH的编码基因gap从血清Ⅰ型R.anatipestifer菌株CZ2中敲除,产生gap基因缺失突株CZ2△gap,比较研究该突变菌株与野生型菌株生物学特征的异同及抗RaGAPDH多克隆抗体对雏鸭的被动免疫保护效率。结果显示,突变菌株CZ2△gap在生长曲线、生化特性、细菌菌落形态等方面与野生菌株非常相似,但是对14日龄樱桃谷鸭的LD_(50)由野生株的4.2×10~7 CFU下降到10~9CFU,突变株对鸭胚成纤维细胞的黏附、入侵能力明显下降(P<0.01)。此外,动物试验研究表明,抗RaGAPDH多克隆抗体可保护14日龄樱桃谷鸭抗R.anatipestifer感染,0.5,1.0,1.5 mL剂量组的保护率分别为19.5%,50.0%,52.8%,其中1.0,1.5 mL剂量组的差异不显著(P<0.01)。结果表明,RaGAPDH是R.anatipestifer的一个致病因子,并可能作为黏附素发挥作用。

    2023年03期 v.43;No.315 488-496页 [查看摘要][在线阅读][下载 379K]
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  • 貉源多杀性巴氏杆菌分离、鉴定及特征分析

    张召兴;高桂生;史秋梅;

    为了鉴定引起貉呼吸道疾病的病菌并分析其生物学特征,2018—2020年采集河北地区养殖场中患呼吸道疾病貉的咽拭子、病死貉肺脏心血等病料组织291份,采用分离培养、形态学观察、生化鉴定及PCR等方法对多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,PM)进行鉴定,采用人工感染小鼠试验、PCR方法和K-B药敏纸片法分别检测PM的致病性、荚膜血清型、毒力基因及耐药性,根据致病性、荚膜血清型和毒力基因携带情况选择代表株,并检测其半数致死量(LD_(50))。结果显示,分离得到了163株PM,其中94株能引起小鼠的死亡,其死亡率在40.0%~100.0%之间;94株致病性PM属于4种血清型,以荚膜血清A型(31.9%),荚膜B型(25.5%),荚膜D型(37.2%)为优势流行血清型;94株PM毒力基因psl、exbD、exbB、fimA、oma87、tonB、sodA、fur、sodC、plpB、hgbA、hgbB、ompA、ompH、oxA、pfhA检出率在50.0%~100.0%之间,其他毒力检出率在34.0%~48.9%之间,致病性菌株与携带的毒力基因具有一定相关性,致病性菌株至少携带5种毒力基因;94株PM对阿莫西林、氨苄西林、新霉素等12种药物的耐药率在41.5%以上,对其他药物的耐药率在6.4%~38.3%之间,以耐11(13.8%)、 10(14.9%)、9(17.0%)种药物菌株为主;优势荚膜血清型代表株PM-1(A型),PM-2 (B型),PM-2 (D型)的LD_(50)分别为3.16×10~6,3.22×10~6和3.16×10~4 CFU/mL。本研究为该地区貉源多杀性巴氏杆菌病流行病学调查及的防控提供了参考依据。

    2023年03期 v.43;No.315 497-503页 [查看摘要][在线阅读][下载 674K]
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  • 环形泰勒虫与牛无浆体双重PCR方法的建立

    葛晓敏;缪荣浩;李才善;陈宋琴;温丽翠;刘凯强;刘燕;郑会珍;巴音查汗;郭庆勇;

    旨在建立快速检测环形泰勒虫和牛无浆体的双重PCR方法,调查吐鲁番地区这2种病原感染情况。根据NCBI库中上传的环形泰勒虫Spm2、Tams1基因和牛无浆体16S rRNA基因保守序列设计、合成3对特异性引物,使用PCR扩增并测序。根据Spm2和16S rRNA基因设计双重PCR并对反应体系及条件进行优化,对该方法进行特异性、灵敏性和重复性检测,建立一种双重PCR方法。结果显示,双重PCR方法特异性扩增出环形泰勒虫和牛无浆体相应目的片段,片段大小分别为853,351 bp,而驽巴贝斯虫、马泰勒虫、绵羊无浆体和伊氏锥虫均未扩增出条带。对环形泰勒虫Spm2、Tams1和牛无浆体16S rRNA基因序列进行系统发育分析,环形泰勒虫Spm2基因序列与印度株同源关系最近(MH844677)、Tams1基因序列与突尼斯株同源关系近(AF214899),牛无浆体16S rRNA基因序列与突尼斯株同源关系近(KY655808)。此方法能检测环形泰勒虫与牛无浆体最低浓度分别为2.9×10~(-16),1.8×10~(-19) g/μL。用该方法对临床60份牛血DNA进行双重PCR扩增,其中环形泰勒虫阳性率为66.7%(40/60),牛无浆体阳性率为53.3%(32/60),混合感染阳性率为43.3%(26/60)。双重PCR方法与已建立的环形泰勒虫和牛无浆体单一PCR方法检测结果的符合率为93.3%。成功建立了一种能同时检测2种病原的双重PCR方法。

    2023年03期 v.43;No.315 504-511页 [查看摘要][在线阅读][下载 370K]
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研究论文_人兽共患病

  • 乙型脑炎病毒NS1蛋白亚单位疫苗制备及其免疫效果评价

    钮俊俊;魏宁;朱硕;陈涛;杜冰洁;周登元;李秋燕;张路平;叶静;司有辉;曹胜波;

    为制备乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)NS1蛋白亚单位疫苗并评价其免疫效果,将JEV NS1基因克隆至杆状病毒表达载体,构建重组杆状病毒。将重组杆状病毒感染High5细胞,收集培养基上清,并用镍柱亲和方法纯化NS1蛋白。将纯化的NS1蛋白与弗式佐剂制成亚单位疫苗,并通过小鼠免疫接种和攻毒模型评价该疫苗的免疫效果。结果表明,50,100,200μg/只剂量的亚单位疫苗免疫组的保护率分别为70%,80%,90%;同时,较非疫苗免疫组,NS1亚单位疫苗免疫可以显著降低小鼠脑组织中的病毒载量和炎症因子的表达,减轻小鼠的神经症状和脑部病理损伤。以上结果表明NS1蛋白作为亚单位疫苗具有较好的免疫保护效果,具有开发为JEV新型疫苗的潜力。

    2023年03期 v.43;No.315 512-518+525页 [查看摘要][在线阅读][下载 9550K]
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  • 脂酰辅酶A合成酶抑制剂Triacsin C对弓形虫速殖子体内增殖抑制效果的观察

    杨晓伟;吴迪;朱盈名;赵自亮;朱桓奕;冯旭东;王迎平;赵光伟;

    为明确脂酰辅酶A合成酶抑制剂Triacsin C对弓形虫速殖子是否具有体内抑制效果,本试验将不同质量浓度的Triacsin C灌服小鼠,并以磺胺嘧啶和阿奇霉素作为参考,后将弓形虫RH株速殖子(2×10~5个)腹腔感染给药组小鼠,以小鼠的存活时间、腹腔中速殖子数量、肝脏中弓形虫核酸的拷贝数和主要脏器的病理损伤作为指标,观察Triacsin C对弓形虫的体内抑制效果;同时对不同药物质量浓度下不感染弓形虫的小鼠进行组织病理学观察。结果显示,8×10~(-2) g/L Triacsin C能够显著抑制速殖子的增殖,小鼠的存活时间也相应延长,低剂量下(1×10~(-2),2×10~(-2) g/L)抑制效果不显著,感染组小鼠肝、脾、肺、肾均出现明显的病理损伤,并在192 h内死亡;给药未感染弓形虫的小鼠脏器未见有明显病理变化。结果表明,高剂量的Triacsin C具有体内抑制弓形虫速殖子增殖的能力,且对宿主主要脏器不产生病理损伤。

    2023年03期 v.43;No.315 519-525页 [查看摘要][在线阅读][下载 8589K]
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  • 微小隐孢子虫微线蛋白GP900与MDBK细胞互作蛋白的筛选

    李明英;陈梦阁;李新;王晓岑;张西臣;宫鹏涛;张旭;李建华;

    通过筛选与微小隐孢子虫微线蛋白GP900相互作用的MDBK细胞蛋白,为进一步揭示微小隐孢子虫入侵宿主细胞的分子机制提供依据。首先构建重组原核表达质粒pGEX-4T-GP900,表达并纯化重组GP900蛋白;然后将重组GP900蛋白与MDBK细胞裂解液孵育,免疫共沉淀获得结合蛋白,质谱法分析与GP900互作的蛋白;最后用酵母双杂交进行验证。结果表明,成功构建pGEX-4T-GP900表达质粒,并纯化获得大小为43 kDa的重组GP900蛋白;免疫沉淀-质谱法筛选到2种与GP900相互作用的MDBK细胞蛋白,分别为膜联蛋白A2和热休克蛋白5;酵母双杂交技术验证了GP900与以上2种蛋白均有相互作用。为进一步阐明微小隐孢子虫入侵宿主细胞的分子机制奠定了基础。

    2023年03期 v.43;No.315 526-531页 [查看摘要][在线阅读][下载 2362K]
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研究论文_基础兽医学

  • 纳米氧化锌抑制柔嫩艾美耳球虫感染的作用研究

    郑淑媚;田启明;许书雅;彭伟龙;Hosameldeen;刘明江;伯若楠;李金贵;

    为探究纳米氧化锌(ZNP)对鸡球虫病的疗效。将180只13日龄的雏鸡随机分为对照组(Con),模型组(Mod),ZNP低剂量组(ZNP-10,10 mg/kg)、ZNP高剂量组(ZNP-20,20 mg/kg),地克珠利组(Dic, 1 mg/kg),ZNP药物对照组(Dcp, 20 mg/kg)。试验以6×10~4个/mL柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)孢子化卵囊经口感染15日龄雏鸡(1 mL/只)建立鸡柔嫩艾美耳球虫感染动物模型,并在13日龄开始灌胃给药,每日1次,连续8 d。试验结束时,采集盲肠组织,进行病变评分;采用RT-qPCR及ELISA的方法检测盲肠扁桃体中炎性因子的表达量。结果显示,Mod组出现大量血便,剖检可见盲肠芯,盲肠组织切片中可见虫体,出血明显;ZNP-20组改善了球虫感染的特征病变,抗球虫指数(Anticoccidial index, ACI)达到159;相较于Mod组,ZNP能够降低IL-1β和TNF-α mRNA水平,提高GM-CSF、TGF-β、sIgA、IgM和IgG的蛋白表达(P<0.01)。结果表明,20 mg/kg ZNP具有一定的抗球虫作用,可能与其调节肠道黏膜免疫和炎症反应有关。

    2023年03期 v.43;No.315 532-538页 [查看摘要][在线阅读][下载 495K]
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  • lncRNA NONRATT021477.2对氧化应激条件下BRL细胞增殖和凋亡的影响

    刘春伟;薛琳琳;牛春阳;郭景茹;徐彬;甄莉;计红;

    以H_2O_2诱导BRL细胞建立氧化应激型模,通过ROS和MDA试剂盒检测氧化应激的发生状态。过表达和干扰表达lncRNA 77.2后,通过流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞增殖情况。结果显示,过表达lncRNA77.2后,BRL细胞内ROS和MDA含量均极显著下降(P<0.01),细胞增殖能力增强(P<0.01),细胞凋亡率下降(P<0.01);而干扰表达lncRNA77.2后,细胞内ROS显著升高(P<0.05),MDA含量极显著升高(P<0.01),细胞增殖能力下降(P<0.01),细胞凋亡率上升(P<0.01)。结果表明,lncRNA 77.2可作为抗氧化调控因子通过抑制凋亡和氧化损伤对大鼠肝细胞起到一定的保护作用。

    2023年03期 v.43;No.315 539-545页 [查看摘要][在线阅读][下载 7168K]
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  • 去甲肾上腺素对犬腹主动脉瘤的影响

    王瑶;徐在品;孙安强;李胤霆;明东东;李思南;洪晗;李欣妤;

    探讨不同剂量去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)对犬腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm, AAA)的影响。选取健康成年比格犬12只,雌性,体质量(11±1.5) kg,随机分为4组,每组3只,分别设NE低剂量组(0.2μg·kg~(-1)·min~(-1))、中剂量组(0.4μg·kg~(-1)·min~(-1))和高剂量组(0.8μg·kg~(-1)·min~(-1)),对照组每次只给予5%葡萄糖氯化钠注射液60 mL。手术分离腹主动脉并做血管插管,将弹力蛋白酶注射到腹主动脉插管段中膜,使注射部位形成AAA。在AAA形成后,静脉滴注不同剂量NE和5%葡萄糖氯化钠注射液,速度为60 mL/h,每天1 h,连续用药14 d。BL-420 N生物信号采集器监测AAA内血压变化,B超监测AAA直径及血流速度变化,计算机数值模拟血管壁面剪切应力(wall shear stress, WSS)变化;停药21 d后,牺牲试验犬,做HE和EVG切片染色观察AAA形态结构和细胞组成变化。结果显示,使用NE的各组收缩压、舒张压、平均动脉压与用药前相比极显著升高(P<0.01),血流速度与用药前相比显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01);中剂量组和高剂量组AAA处的WSS极显著高于对照组和低剂量组(P<0.01);对照组腔内血栓沉积量、炎性细胞浸润程度、弹性纤维和弹力板层损害程度比使用NE的各组更严重。结果表明,NE可有效增加AAA内血压和血流速度,加大WSS,减少腔内血栓形成,在一定剂量范围内不会导致AAA破裂。

    2023年03期 v.43;No.315 546-552页 [查看摘要][在线阅读][下载 9926K]
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  • 丹参多糖对氟苯尼考处理的雏鸡肝脏中PPAR信号通路的调节作用

    刘维;吕兰;房思远;刘莹;王霄;史万玉;包永占;

    将120只雏鸡随机平均分为空白对照组、氟苯尼考(florfenicol, FFC)组和FFC+丹参多糖(Salvia miltiorrhiza polysaccharides, SMPs)组。从1日龄起,连续给药5 d。于第6天采取肝脏样品,进行转录组和蛋白组测序;采集和制备血清样品,保存剩余肝组织,用于检测其他相关的试验指标。采用qPCR和PRM的方法验证测序结果。测序和验证结果显示,暴露于FFC之后,雏鸡肝脏中1 989个基因和917个蛋白质发生了显著变化。这些显著改变了的基因和蛋白与对刺激的反应、异生物质的代谢与氧化解毒等生物功能有关。FFC显著改变了PPAR信号通路中的13个基因和18个蛋白,SMPs的干预则调整了其中的7个显著差异基因和8个显著差异蛋白的表达水平。此外,FFC还显著地提高了雏鸡血清中AST和ALT的含量,降低了肝脏中TG、TC和ANDP的含量。SMPs则有效逆转了以上因子的变化趋势。结果表明,FFC改变了PPAR信号通路关键因子的表达水平,进而造成了雏鸡肝脏的脂质代谢紊乱。SMPs则通过进一步调控该通路,在一定程度上改善了雏鸡肝脏的脂质代谢紊乱,进而维护了肝脏的正常功能。

    2023年03期 v.43;No.315 553-561页 [查看摘要][在线阅读][下载 15004K]
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  • 功能化氧化石墨烯GCF的制备及其增强OVA的免疫原性评价

    宣德春;尹文竹;王海燕;周明旭;邓碧华;马芳;卢宇;张金秋;

    为制备高效负载、递送和缓释抗原的新型功能化氧化石墨烯衍生材料(GCF)作为佐剂,探索该纳米佐剂对OVA免疫原性影响。以氧化石墨烯(graphene oxide, GO)为母体,采用EDC/NHS共价嫁接壳聚糖(chitosan, CS),并静电吸附泊洛沙姆407(poloxamer, F127)制备出亲水性的氧化石墨烯衍生材料GO-CS-F127(简称GCF)。利用XRD、UV-vis、FI-IR、Zeta电位等多种方法对GCF进行理化特性表征,确定材料的形貌、成分及电荷分布。通过BCA法检测GCF对OVA的最大吸附量及释放率,CCK-8法鉴定GCF新材料在体外安全性评价,ELSIA方法评价小鼠血清中特异性抗体水平,并采集小鼠重要组织制备切片以观察病理变化。结果显示,GCF呈片层结构,常温放置30 d仍能稳定存放,带有17.9 mV的正电荷,能快速吸附抗原,其最大吸附量能达到1.9 g/g,且对抗原具有显著的缓释作用。GCF质量浓度在100 mg/L以下,细胞存活率达85%以上,且对心、脾、肾等组织无损伤,具有良好的生物相容性。与单独OVA组及PBS组相比,发现GCF能显著提高小鼠OVA特异性IgG抗体水平。结果表明,以功能化氧化石墨烯GCF作为佐剂,可有效提高抗原的免疫原性。

    2023年03期 v.43;No.315 562-570页 [查看摘要][在线阅读][下载 8475K]
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  • 葛根芩连汤对溃疡性结肠炎小鼠肠道屏障的保护作用机制

    郑晨曦;冯嘉轩;陈昭彤;郭兴华;成宁宁;代鑫;胡洋;孙聪;

    探讨葛根芩连汤(GQD)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道黏膜屏障的保护作用及可能作用机制。自由饮用4%DSS 6d,灌胃美沙拉嗪(Mes)及不同剂量GQD治疗14 d,通过比较疾病活动指数(disease activity index, DAI)、结肠长度及HE染色观察GQD对UC小鼠病变程度影响,免疫组化检测结肠咬合蛋白(occludin)和闭合蛋白(claudin 1)分布及水平变化,Western blot检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子激活的B细胞的κ-轻链增强(NF-κB)和白细胞介素10(IL-10)表达评价炎症。结果表明:GQD干预后小鼠DAI评分降低,结肠长度增加,对结肠损伤有保护作用。免疫组化结果表明GQD升高了紧密连接蛋白Occludin和Claudin 1水平,Western blot结果显示GQD降低促炎因子IL-6、TNF-α和NFκB水平,升高抑炎因子IL-10水平。综上,GQD可有效保护UC的肠道黏膜屏障损伤,其可能作用机制是调节肠道紧密连接蛋白及炎症因子的水平,维持紧密连接(TJ)完整性及肠道稳态进而保护肠道屏障。

    2023年03期 v.43;No.315 571-576页 [查看摘要][在线阅读][下载 1241K]
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  • 姜黄素通过抑制内质网应激介导的凋亡和炎症减轻氟化钠引起的大鼠脾脏损伤

    宋超;张爱国;胡佩佩;杨昆;刘玲玲;米俊宪;王艳君;王俊东;石冬梅;

    为探究姜黄素对氟化钠(NaF)致大鼠脾脏损伤的保护作用及其可能作用机制,通过饮水方式构建染氟模型,NaF添加量为150 mg/L。将60只雄性健康SD大鼠随机分为对照组和3个处理组(NaF组,Ⅰ组;NaF+50 mg/kg姜黄素组,Ⅱ组;NaF+100 mg/kg姜黄素组,Ⅲ组)。处理3个月后,收集脾脏,通过苏木素伊红染色观察脾脏病理学变化,原位末端转移酶标记(TUNEL)和免疫组化检测细胞凋亡,荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验检测炎症因子表达,免疫印迹检测内质网应激相关蛋白表达。结果显示,姜黄素减弱了NaF引起的脾脏损伤;与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅲ组TUNEL阳性细胞数和活化的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)水平均明显降低(P<0.05或P<0.01);此外,姜黄素显著降低NaF引起的脾脏白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平升高,与Ⅰ组相比有显著差异(P<0.05或P<0.01);与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅲ组大鼠组脾脏中葡萄糖调控蛋白78(GRP78)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、磷酸化真核生物起始因子2α(p-eIF2α)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、激活型胱天蛋白酶12(cleaved caspase-12)和核因子κB(NF-κB)水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结果表明,姜黄素能降低NaF引起的大鼠脾脏损伤,其保护机制可能与抑制内质网应激诱导的凋亡和炎症反应有关。

    2023年03期 v.43;No.315 577-583页 [查看摘要][在线阅读][下载 607K]
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  • 黄梁木提取物对断奶仔猪肠道健康的影响

    张世杰;陈婷;罗君谊;习欠云;孙加节;张永亮;

    旨在研究黄梁木提取物对断奶仔猪生长性能、腹泻状况、免疫功能及肠道健康的影响。试验选用24日龄体质量相近(6.57±0.05) kg的杜长大三元杂交断奶仔猪96只,采用完全随机化法分为2个处理组,每个处理组4个重复,每个重复12只仔猪。2组处理分别为空白对照组(BAS组,基础日粮)和黄梁木提取物组(EXT组,基础日粮+200 mg/kg黄梁木提取物)。试验期28 d。结果显示,相较BAS组,EXT组仔猪腹泻率显著下降(P<0.05),平均日增体质量显著提高(P<0.05)。BAS组和EXT组仔猪血清生化相关指标差异不显著(P>0.05)。EXT组仔猪血清中免疫球蛋白G(IgG)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)的含量显著高于BAS组(P<0.05),且空肠及回肠中IL-10的表达也显著提高(P<0.05)。与BAS组相比,EXT组仔猪空肠的绒毛高度及绒毛高度与隐窝深度的比值显著提高(P<0.05),同时回肠的隐窝深度显著降低(P<0.05)。与BAS组相比,ACP仔猪结肠中ACE指数和不动杆菌属(Agathobacter)相对丰度显著提高(P<0.05),变形菌门(Proteobacteria)相对丰度有下降趋势(P=0.09)。结果表明,日粮中添加200 mg/kg黄梁木提取物能够缓解断奶仔猪腹泻,增强其免疫机能,改善肠道结构完整性,缓解肠道炎症反应,调节肠道微生物菌群种类和丰度,从而改善其生长性能。

    2023年03期 v.43;No.315 584-591页 [查看摘要][在线阅读][下载 247K]
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研究论文_临床兽医学

  • 非瑟酮对LTA诱导小鼠子宫内膜炎症反应的影响

    沈菩秀;李刚;于井成;闫琛博;杨德新;王新庄;

    为探究非瑟酮(Fisetin)对金黄色葡萄球菌脂磷壁酸(lipid teichoic acid, LTA)诱导的子宫内膜炎症反应的影响,试验选取20只8~10周龄的健康雌性昆明小鼠,随机分为4组,每组5只,包括对照组、LTA模型组、LTA+Fisetin(25 mg/kg)组、LTA+Fisetin(50 mg/kg)组。H&E染色法检测子宫组织病理变化,RT-qPCR和Western blot方法检测相关炎症细胞因子及TLR2介导的NF-κB信号通路的表达情况。结果表明,与对照组相比,LTA造模组的子宫明显肿胀;TNF-α、IL-1β mRNA表达量和蛋白表达量极显著升高;NF-κB p65和IκBα蛋白的磷酸化极显著增加。与LTA模型组相比,LTA+Fisetin(25 mg/kg)组和LTA+Fisetin(50 mg/kg)的子宫损伤得到缓解;TNF-α、IL-1β蛋白表达极显著降低,mRNA表达在Fisetin剂量为50 mg/kg时显著降低;TLR2介导的NF-κB信号通路中p65、IκBα蛋白的磷酸化水平极显著降低。综上所述,Fisetin通过抑制TLR2介导的NF-κB信号通路的激活减少炎症细胞因子的表达,从而对子宫内膜炎起到一定的治疗作用。

    2023年03期 v.43;No.315 592-597页 [查看摘要][在线阅读][下载 389K]
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研究论文_动物科学

  • 小鼠生精上皮发育中支持细胞和精原干细胞的数量变化

    张博洋;车冠宇;杨蕊;朱春玲;陈斓歆;赵彦森;张洪毅;潘英树;唐博;张学明;

    睾丸支持细胞(Sertoli cells, SCs)和精原干细胞(spermatogonial stem cells, SSCs)发生相应变化才能维持正常精子发生。因此,探讨生精上皮发育中两者的关系对深入了解精子发生有重要意义。基于前期基础,分别取青春期前(出生后5,10 d)、青春期(15,20 d)、近性成熟(25,30 d)及性成熟后(35,40,50,70 d)的昆明雄性小鼠,采用本室已建立的曲细精管漂浮免疫荧光染色全铺片法,测量了小鼠各阶段曲细精索/管的直径;以GATA4为SCs标记、胶质细胞源神经营养因子家族受体α-1(GFRα-1)为SSCs分子标记,显示生精上皮中的SCs和SSCs并分析其数量变化。结果显示,随日龄增加其曲细精索/管直径显著增大,特别是在性成熟前;5 d小鼠的GATA4~+ SCs数量最少,随后快速上升,15 d时达到最高且显著高于其他各阶段(P<0.05),之后呈波动下降趋势且趋于相对稳定;GFRα-1~+ SSCs数量也随日龄增大而增多,15 d时达到最高且显著高于其他各阶段(P<0.01),随后在20~30 d有所下降,35 d后急剧下降且处于相对稳定状态。提示小鼠SCs与SSCs数量之间基本呈正相关,SCs在维持SSCs的增殖、分化及正常精子发生方面有重要作用。本研究对探讨其他动物和人的精子发生机理有一定借鉴意义。

    2023年03期 v.43;No.315 598-602+609页 [查看摘要][在线阅读][下载 2878K]
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  • 雷州黑鸭TGF-β1基因遗传多态性及其与产蛋性能的相关性分析

    李靖;陆惠娴;于海滨;柯锦锋;苏瑛;赵志辉;姜平;

    转化生长因子β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1)基因是本课题组前期在高产和低产雷州黑鸭群体中通过转录组学测序分析筛选出的可能对雷州黑鸭繁殖性能有重要调控作用的候选基因。为进一步探究TGF-β1基因的遗传多态性,分析其产蛋性能的相关的遗传分子标记,本试验采用PCR扩增技术和直接测序法,检测100只雷州黑鸭群体中的TGF-β1基因的SNP位点,使用SPSS 26.0软件分析TGF-β1基因的遗传多态性位点基因型与雷州黑鸭产蛋性能的相关性。结果显示,在TGF-β1基因的第6个内含子中发现3个SNPs位点与雷州黑鸭的开产蛋重显著相关,分别为I6-2188 C>T、I6-2220 T>C和I6-2235 A>C;I6-2188 C>T位点与开产日龄显著相关;使用Haploview软件对SNPs位点进行连锁分析发现,H1H1单倍型的开产蛋重显著高于H2H2单倍型。综上所述,TGF-β1基因的3个SNPs位点可作为雷州黑鸭繁殖性能的遗传标记。

    2023年03期 v.43;No.315 603-609页 [查看摘要][在线阅读][下载 5471K]
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  • C型钠肽和生长分化因子9预处理对绵羊体外成熟卵母细胞质量和发育能力的影响

    崔健;唐雅雯;王兆琛;张家新;仇春娟;包梅荣;安磊;田见晖;

    为探讨生长分化因子9(growth differentiation factor 9,GDF9)和骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP15)在协同C型钠肽(C-type natriuretic peptide, CNP)调节卵母细胞减数分裂进程中的作用,提高卵母细胞体外成熟的质量,试验基于CNP预处理的“两步法”体外成熟(in vitro maturation, IVM)体系,研究了预处理阶段添加GDF9和BMP15在调节绵羊卵母细胞减数分裂进程和胞质成熟事件中的作用,并探讨CNP和GDF9联合预处理后对卵母细胞体外成熟质量及发育能力的影响。结果显示,GDF9可显著提高卵丘细胞中CNP受体NPR2基因的表达,从而增加CNP阻滞绵羊卵母细胞减数分裂的效率,而BMP15无此作用。预处理阶段联合添加CNP和GDF9能改善卵丘细胞功能,并且在CNP的作用基础上进一步增加卵母细胞线粒体的活性和数量、GSH含量,并降低ROS水平,从而提高卵母细胞体外成熟后的质量以及体外受精后的发育效率,卵裂率和囊胚率得到显著增加。研究结果不仅表明GDF9能强化CNP在卵母细胞的细胞核与细胞质同步成熟中的作用,也为优化绵羊的体外胚胎生产体系提供了新的方法。

    2023年03期 v.43;No.315 610-621+629页 [查看摘要][在线阅读][下载 12785K]
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综述

  • 饲料中糙米替代玉米的研究进展

    田乐;王大力;郑可心;王汝琦;齐慧宇;陈娟;张晶;

    我国猪禽配合饲料及草食家畜精料补充料以玉米-豆粕型为主,玉米是主要的能量饲料。我国2021年玉米进口量2 835万t,将近80%用于发展养殖业饲料。开发利用现有饲料原料减量替代玉米是缓解其依赖于进口的有效措施,因此,我国急需构建适合国情的新型饲粮配方,调整优化饲料配方结构,促进玉米减量替代,以达到增效降本的理念。2021年我国稻谷产量21 284万t,南方主要种植早籼稻,北方主要种植粳稻。为了稳定稻谷价格和粮食安全,近年来我国一直进行稻谷收储工作。从2021年开始进行收储时间较长的陈稻谷脱壳生产陈糙米,主要用于饲料业和养殖业。糙米营养丰富,粗蛋白质含量与玉米接近,在氨基酸组成和平衡方面优于玉米,糙米对畜禽生产性能无不良影响。本研究主要对糙米的营养特点、畜禽饲料中应用、饲料中添加糙米存在的问题等方面进行总结归纳,为饲料中糙米替代玉米提供理论依据。

    2023年03期 v.43;No.315 622-629页 [查看摘要][在线阅读][下载 221K]
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  • 胆固醇稳态调节与肝损伤的研究进展

    田艳;杨明茂;王爽;高畅鸿;范文文;吕鑫泉;邹存志;李铭;张冰冰;徐闯;杨威;

    胆固醇稳态对正常的细胞和系统功能至关重要,机体内胆固醇含量过多和缺乏都会导致疾病。胆固醇代谢紊乱不仅是心血管疾病的基础,而且是越来越多的其他疾病的重要诱发因素,如高胆固醇血症、2型糖尿病、畜禽及宠物代谢性疾病。胆固醇水平反映了生物合成、摄取、输出和酯化之间的动态平衡,在这个过程中胆固醇转化为中性胆固醇酯或储存在脂滴中,或作为脂蛋白的成分分泌。本研究从胆固醇的合成、代谢、稳态调节等方面综述了胆固醇的研究进展,并讨论了胆固醇稳态调节与肝损伤的相互作用。

    2023年03期 v.43;No.315 630-636页 [查看摘要][在线阅读][下载 159K]
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  • 犬瘟热病毒跨物种传播的研究进展

    张乐;于小航;苏宁;赵丽丽;关振宏;段铭;

    犬瘟热病毒(canine distemper virus, CDV)是具有高度传染性的病原。最初被描述为感染家犬的病原,现已被认为是一种可感染多种食肉动物的病毒,可导致被感染宿主发病,甚至大量死亡,并且容易在易感宿主之间跨种属传播。已有的研究表明,CDV暴发对野生生物种群的影响越来越大,并已经威胁到某些濒危野生物种的生存。另有研究表明,CDV甚至有成为人畜共患病原的可能。本研究拟对CDV在易感宿主范围扩大、自身基因突变和进入新宿主动态途径等方面展开综述,旨在为研究CDV跨物种传播的研究提供参考。

    2023年03期 v.43;No.315 637-642页 [查看摘要][在线阅读][下载 145K]
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