简讯

  • 《中国兽医学报》征稿简则

    <正>《中国兽医学报》1981年创刊,原名《兽医大学学报》,是由教育部主管吉林大学主办的全国性专业性学术期刊,是国内畜牧兽医专业最具影响力的权威性核心期刊,自创刊以来一直被列为中文核心期刊和中国科技核心期刊。常设栏目:研究论文(预防兽医学、人兽共患病、基础兽医学、临床兽医学和动物科学),综述及简讯等。主要报道动物医学、动物科学及其相关学科的最新研究成果与动态等。本刊为月刊,A4开本,每月15日出版,国内外公开发行。

    2023年10期 v.43;No.322 1996页 [查看摘要][在线阅读][下载 921K]
    [下载次数:3 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]

研究论文_预防兽医学

  • 猪细小病毒VP2蛋白的原核表达及其免疫原性评估

    王利霞;朱利塞;钟永亮;田欣;林福新;王贵平;白挨泉;贾爱卿;

    利用原核表达载体pET28a和pColdⅠ与猪细小病毒VP2基因分别构建重组表达质粒,并采用与伴侣蛋白共表达和低温诱导表达猪细小病毒VP2蛋白,并以电镜观察、血凝效价测定等进行鉴定。结果显示,2个表达载体均能对重组蛋白进行可溶性表达。冷休克载体组pColdⅠ-VP2蛋白在上清中表达效率更高且杂蛋白较少,诱导时不需要额外添加L-阿拉伯糖,表达过程工艺相对更简单。纯化后的pColdⅠ-VP2蛋白具有一定的免疫反应性,能在体外组装成病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs),且具有血凝活性,使用206佐剂混合乳化重组蛋白免疫豚鼠后,血清中能检测到高滴度血凝抑制抗体。上述结果为进一步研究新型安全高效的猪细小病毒疫苗提供了数据支持。

    2023年10期 v.43;No.322 1999-2004+2019页 [查看摘要][在线阅读][下载 1419K]
    [下载次数:350 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]
  • 2株GⅡb亚群猪流行性腹泻病毒分离、鉴定及变异分析

    郭子仪;孙亚威;许夕雅;丁晨梦;邓梦梦;韩紫薇;吕晨哲;齐江坤;于林洋;王新卫;陈陆;

    为了分离猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)变异毒株,了解其进化趋势及致病性,并为后续PEDV特性及疫苗研发提供候选毒株,本研究将PEDV阳性样品接种于Vero细胞传代,采用间接免疫荧光试验(IFA)对分离株进行鉴定,基于RT-PCR及第2代测序技术进行全基因组测序、同源性比对及遗传进化分析,通过动物致病性试验进行毒力测定。IFA表明2株分离株能与PEDV S蛋白抗体发生特异性反应,确定为PEDV。2株毒株与参考毒株核苷酸同源性为95.6%~98.7%,属于变异毒株GⅡb群。分离的2株毒株分别命名为CH-HNKF-03和CH-HNPDS-01株。CH-HNKF-03和CH-HNPDS-01对哺乳仔猪攻毒后18 h即可发病,于24~56 h均出现典型的水样腹泻、呕吐、消瘦、脱水等症状,96 h内全部死亡。综上所述,本研究获得2株GⅡb亚群PEDV变异强毒株,为新型PEDV疫苗研发提供了候选毒株。

    2023年10期 v.43;No.322 2005-2012页 [查看摘要][在线阅读][下载 1869K]
    [下载次数:421 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] |[阅读次数:0 ]
  • 稳定表达GM-CSF的重组塞内卡病毒A的构建与鉴定

    郭笑然;韩颖;刘帅峰;刘小娜;雷白时;张武超;赵款;袁万哲;

    塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)是近年来新发现的一种能够引起猪水疱性相关疾病的病毒,该病毒在我国流行范围越来越广,对养猪业造成了巨大经济损失。为提高灭活疫苗的免疫效果,本研究以SVA感染性克隆为基础,将猪源GM-CSF-T2A基因通过融合PCR方法插入到SVA的2A和2B之间,成功构建了重组质粒SVA-GM-CSF,将其转染BHK-21细胞进行病毒拯救及传代。结果显示,重组病毒感染BHK-21细胞可以引起明显的细胞病变;经RT-PCR扩增与基因测序结果表明目的基因正确插入;间接免疫荧光鉴定表明外源基因GM-CSF在该病毒中成功获得了表达。生物学特性分析表明,重组病毒与亲本病毒在BHK-21细胞中具有相似的生长特性,并且该重组病毒在传代过程中具有良好的遗传稳定性。本研究已成功构建了稳定表达GM-CSF的重组SVA,该重组病毒的构建为进一步明确SVA致病机制和研制新型疫苗提供了理论支持与技术指导。

    2023年10期 v.43;No.322 2013-2019页 [查看摘要][在线阅读][下载 1744K]
    [下载次数:174 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]
  • HP-PRRSV重组新城疫病毒载体疫苗构建及小鼠免疫评价

    何海强;陶一墨;南福龙;解长占;王鹏;张赫;金宁一;鲁会军;

    高致病性猪繁殖与呼吸综合征(highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome, HP-PRRS)在中国已流行多年,国内疫苗主要以减毒活疫苗为主,能有效保护猪不受病毒侵害,但易与野外毒株重组,导致新的变异株出现,而灭活苗安全性好但是疫苗效价低,因此本研究旨在研制一种不会重组且安全有效的疫苗。本研究利用反向遗传技术将HP-PRRSV具有抗原活性的GP5蛋白序列插入到新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)载体,拯救稳定表达GP5的重组病毒。通过PCR、酶切、Western blot、间接免疫荧光(IFA)和毒力检测试验对重组病毒进行鉴定,结果表明,重组NDV rL-GP5_((LQ))拯救成功,能够稳定表达GP5蛋白。小鼠的疫苗免疫效果评价结果表明,重组NDV rL-GP5_((LQ))二免后14 d特异性抗体酶标检测450 nm吸光度值为0.47 (P<0.01),中和抗体为1∶8 (P<0.01),在小鼠体内能诱导有效的抗体表达。脾淋巴细胞增殖试验中rL-GP5_((LQ))组显著升高(P<0.01),说明rL-GP5_((LQ))能在体内诱导免疫应答,为防控HP-PRRS提供了新的疫苗候选和思路。

    2023年10期 v.43;No.322 2020-2024页 [查看摘要][在线阅读][下载 1284K]
    [下载次数:260 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]
  • 应用适配体捕获建立H5N1亚型禽流感病毒拉曼光谱快速检测技术

    李想;崔焕忠;李乾学;

    基于表面增强拉曼散射(surface enhanced Raman scattering, SERS)和适配体捕获相结合技术,建立1种H5N1亚型禽流感病毒快速检测方法。本实验室筛选得到2条针对H5N1亚型禽流感病毒具有良好的特异性和灵敏度的适配体,与磁珠偶联建立针对H5N1亚型禽流感病毒捕获试剂,通过对捕获体系进行原位还原生成纳米银颗粒增强拉曼信号,建立了原位、快速、无损的H5N1亚型禽流感病毒拉曼光谱快速检测技术。结果表明:H5N1亚型禽流感病毒在1 058 cm~(-1)处有特异性拉曼峰谱,该方法具有良好的特异性、灵敏性和稳定性。该方法的最低检测限达到原病毒液稀释的10~(10)倍。利用本方法可在10 min内快速检测出待测样本中是否有H5N1亚型禽流感病毒的存在,能够在大体积、低浓度样品中快速检测出目标病原,满足H5N1亚型禽流感病毒临场快检的需求。

    2023年10期 v.43;No.322 2025-2029+2049页 [查看摘要][在线阅读][下载 1931K]
    [下载次数:153 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:1 ]
  • 小反刍兽疫病毒RT-RAA-CRISPR/Cas12a可视化快速检测方法的建立

    黄超华;阮周曦;路平;吴江;曹琛福;林彦星;花群义;

    为建立小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus, PPRV)可视化快速检测方法,本研究根据PPRV N基因的保守序列设计、合成和筛选出反转录重组聚合酶介导恒温扩增(RT-RAA)特异性引物和CRISPR/Cas12a特异性crRNA。结合侧向流试纸,本研究建立了一种PPRV RT-RAA-CRISPR/Cas12a可视化快速检测方法,并对该方法的性能进行了评估。结果显示,该方法特异性良好,与蓝舌病毒(BTV)、鹿流行性出血热病毒(EHDV)、口蹄疫病毒(FMDV)、羊痘病毒(CaPV)、猪水泡病病毒(SVDV)、伪狂犬病毒(PRV)等病毒核酸无交叉反应;敏感性高,最低可检出4.30×10~1拷贝/μL的PPRV核酸;应用该方法及国家标准推荐的RT-qPCR方法对60个模拟样品进行平行检测,结果显示Kappa值为0.918,表明两者具有高度一致性。综上表明,本研究建立的PPRV RT-RAA-CRISPR/Cas12a可视化快速检测方法特异性好、敏感性高,且操作简单、无需特殊仪器,可应用于野外或基层农场的PPRV快速筛查检测工作。

    2023年10期 v.43;No.322 2030-2034页 [查看摘要][在线阅读][下载 1408K]
    [下载次数:284 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]
  • D型流感病毒NP蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

    肖雨晴;程娇娇;孙锐瑶;陈妍希;谯薇美;尹鑫;远立国;李守军;卢刚;

    该研究旨在对D型流感病毒(influenza D virus, IDV)NP蛋白进行原核表达并制备多克隆抗体,为D型流感快速诊断技术奠定基础。采用PCR技术扩增D/bovine/Mississippi/c00046N/2014毒株的NP片段编码区,并对其序列进行跨膜区、信号肽、疏水键、抗原性及结构域分析,筛选出最优区段以制备多克隆抗体。该研究将IDV NP最优编码区序列插入原核表达载体pET-B2M,构建pET-B2M-NP重组阳性质粒,经PCR和测序鉴定后将重组阳性质粒转化至大肠杆菌Trelief~(TM) 5α中;IPTG诱导表达后采用镍柱亲和层析法纯化重组NP蛋白,并免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。序列分析结果显示,1~500氨基酸区段无跨膜区和信号肽序列,局部亲水性好且具备良好的免疫原性,为制备重组NP蛋白的最佳抗原区段。经测序验证构建了pET-B2M-NP重组阳性质粒,转化后经IPTG诱导,主要以包涵体的形式表达了相对分子质量大小约为72 kDa的蛋白,符合预期。间接ELISA结果显示,制备的多克隆抗体效价达1∶100000且免疫原性良好。Western blot和间接免疫荧光试验结果均表明,所制备的NP多克隆抗体能高效地与IDV发生特异性结合。该研究通过原核表达系统表达了IDV重组NP蛋白,制备了免疫原性和特异性良好的兔抗NP多克隆抗体,为研究NP蛋白的结构和功能提供了条件,为揭示IDV致病机制奠定了基础。

    2023年10期 v.43;No.322 2035-2041页 [查看摘要][在线阅读][下载 1660K]
    [下载次数:167 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:1 ]
  • 鸭源新型鹅细小病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

    马瑶;汪宏才;唐晟;姚伦;曾哲;罗青平;曾驰;商雨;温国元;

    新型鹅细小病毒(novel goose parvovirus, NGPV)是由鹅细小病毒(goose parvovirus, GPV)变异而来,可感染雏鸭,引起以鸭短喙侏儒综合征为主要特征的传染性疾病。2015年该病在我国鸭群中大暴发,严重影响鸭出栏率,给我国的养殖行业带来巨大的经济损失。为建立一种鸭源NGPV抗体的间接ELISA检测方法,用于鸭感染细小病毒的血清学检测和鸭免疫细小病毒疫苗后抗体水平监测,本研究利用生物信息学预测了NGPV YICH株的结构蛋白VP3的抗原表位,选择了抗原富集区域(aa250~525)进行原核表达,经蛋白纯化获得了可溶性的VP3截短蛋白VP3-tr。以VP3-tr为包被抗原,经过棋盘滴定方法优化各个反应条件,建立了NGPV抗体的间接ELISA检测方法。利用优化后的间接ELISA方法对30份GPV阴性鸭血清进行检测,确定阴阳性临界值为0.219。ELISA方法的灵敏性、特异性和重复性检测结果表明,该方法灵敏度较高,特异性良好,不与鸭坦布苏病毒、新城疫病毒、禽流感病毒、鸭疫里默杆菌、大肠杆菌病原阳性血清发生交叉反应;批内和批间重复试验的变异系数均小于6%,重复性良好。用该方法与Western blot检测方法分别对147份临床血清样品进行检测,结果表明ELISA检测阳性率为85.0%,Western blot检测率为69.4%,两者符合率为84.4%。综上所述,本研究成功建立了鸭源NGPV抗体的间接ELISA检测方法,为鸭感染NGPV后的感染情况监测以及疫苗免疫评估提供了更简便可靠的方法。

    2023年10期 v.43;No.322 2042-2049页 [查看摘要][在线阅读][下载 1502K]
    [下载次数:220 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:2 ]
  • 鸭疫里默杆菌LAMP-LFD快速检测方法的建立与初步应用

    龙宥茨;顾庆林;鲜思美;周飘;梁倩;郑维豪;吴琴;

    根据鸭疫里默杆菌(Riemerella anatipestfer,RA)ompA基因设计4条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物和1条带有异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)标记的DNA探针,利用横向流动试纸条(LFD)检测扩增产物。通过对反应条件包括温度、时间、内、外引物浓度比、Bst DNA 2.0聚合酶浓度、dNTPs浓度及Mg~(2+)浓度等优化后,建立了RA的LAMP-LFD检测方法。结果显示:在64℃下运用LAMP扩增核酸到结果判读只需33 min; LAMP-LFD可特异性检测鸭疫里默杆菌,巴氏杆菌核酸、大肠杆菌核酸、沙门菌核酸、葡萄球菌核酸、鸭瘟病毒均未检测出;LAMP-LFD对pMD19-T-ompA最低检测浓度为1.83×10~(0 )copies/μL,其敏感度是PCR的1 000倍。利用PCR和LAMP-LFD检测22份疑似RA临床样本,两者检出符合率为100%。研究建立的LAMP-LFD检测方法能快速、特异地检测RA,可作为早期诊断和检测RA的有效手段。

    2023年10期 v.43;No.322 2050-2055页 [查看摘要][在线阅读][下载 1569K]
    [下载次数:133 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]

研究论文_人兽共患病

  • 侧柏叶颗粒剂对产气荚膜梭菌Ⅳ型菌毛系统功能的抑制作用及其机制

    吴玉臣;朱先鹏;李有志;侯云峰;聂婧;尚小雷;邓旭明;高丰;吕强华;

    为研究侧柏叶颗粒剂(Platycladi cacumen granules, PCG)对产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,C.perfringens)Ⅳ型菌毛系统(typeⅣpili, TFP)功能的抑制作用及其机制,首先,在体外进行滑动运动和生物被膜测定2种表型试验,验证PCG对TFP功能的抑制作用;随后,通过细胞黏附试验测定PCG对产气荚膜梭菌黏附至人克隆结肠腺癌细胞(Caco-2)的影响;最后,通过qRT-PCR测定PCG对TFP基因转录的影响,并结合透射电镜(TEM)观察PCG对TFP形态的影响。结果显示,PCG在质量浓度为1.3 g/L时,显著抑制产气荚膜梭菌的滑动运动和生物被膜形成;显著抑制产气荚膜梭菌黏附至Caco-2细胞,在有效浓度范围内对Caco-2细胞无明显检测毒性;qRT-PCR和TEM结果表明,PCG通过降低产气荚膜梭菌的TFP相关基因virR、virS、pilA、pilD、pilT、pilC和pilM的转录水平,破坏TFP菌毛形态,抑制TFP介导的功能。

    2023年10期 v.43;No.322 2056-2061页 [查看摘要][在线阅读][下载 1410K]
    [下载次数:248 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] |[阅读次数:1 ]
  • qseC及luxS双基因缺失对多杀性巴氏杆菌毒力及其交叉免疫保护性的影响

    胡沛;彭旭;程丹;李甜;王媛媛;高丽旭;袁祥;彭远义;李能章;

    qseC和luxS是多杀性巴氏杆菌群体感应系统相关基因,为探讨其双缺失对多杀性巴氏杆菌致病性及交叉免疫保护的影响,本研究在前期构建的牛源A型多杀性巴氏杆菌CQ2株(PmCQ2)qseC基因缺失株(ΔqseC)的基础上进行了luxS基因缺失,构建了qseC及luxS双基因缺失株(ΔqseCΔluxS)。与野生型PmCQ2相比,该双基因缺失株在生物膜产生方面显著上升,而其荚膜生成量、血清敏感性及其毒力却显著下调,与qseC单基因缺失相比,双基因缺失在调节菌株部分生物学特性方面具有正向或负向叠加效应。疫苗交叉免疫保护性方面,与ΔqseC及野生型PmCQ2比较发现,双基因缺失株中luxS基因的缺失,减弱了部分qseC基因缺失所赋予菌株的交叉免疫保护效果,但却增强了菌株对牛源F型多杀性巴氏杆菌的交叉免疫保护作用,相比PmCQ2的无交叉免疫保护作用,qseC及luxS双基因缺失仍赋予了菌株很好的交叉免疫保护性。研究结果表明,群体感应基因qseC和luxS均可调控多杀性巴氏杆菌毒力及其交叉免疫保护性,该双基因缺失株可作为多杀性巴氏杆菌广谱型疫苗候选菌株。

    2023年10期 v.43;No.322 2062-2071页 [查看摘要][在线阅读][下载 2332K]
    [下载次数:155 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]

研究论文_基础兽医学

  • PGRN缺失对猪血凝性脑脊髓炎病毒脑内感染小鼠的影响

    柳雨竹;王炳量;陈雨竹;甄理;王真真;王改丽;李姿;石俊超;兰云刚;宋德光;

    已有研究表明溶酶体与β冠状病毒复制密切相关,为研究调控溶酶体功能的关键蛋白颗粒蛋白前体(progranulin, PGRN)对β冠状病毒猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus, PHEV)复制的影响,本研究以PGRN缺失及其对照小鼠为研究对象,探究PGRN在PHEV脑内感染小鼠过程中的作用。研究发现,与PHEV脑内感染野生型小鼠相比,PGRN缺失小鼠脑内感染病毒后其存活时间延长,同时脑内病毒含量显著降低,细胞因子IFN和TNF-a的含量升高;此外,神经退行性病变相关蛋白TDP-43表达显著升高,表明PGRN缺失能减缓病毒的复制,增强免疫反应,并影响病毒的致病性。研究结果为进一步揭示溶酶体蛋白PGRN在PHEV复制过程中的作用机制提供研究基础,并为β冠状病毒致病机制研究提供参考。

    2023年10期 v.43;No.322 2072-2077页 [查看摘要][在线阅读][下载 1534K]
    [下载次数:168 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]
  • 猪重组RBP4蛋白可溶性原核表达纯化及生物学活性鉴定

    赵鹤娇;韩庆兵;商营利;

    视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein, RBP4)是一种主要在肝脏细胞和脂肪细胞中合成和分泌的细胞因子。RBP4在机体的脂肪代谢、慢性炎症、胰岛素抵抗等疾病过程中发挥重要作用,最新的研究也发现其与病毒感染密切相关。为了获得可溶性猪重组RBP4蛋白,本研究克隆了猪rbp4(prbp4)基因,并成功构建了原核表达载体pET32a-pRBP4。将该原核表达载体转化至BL21(DE3)感受态细胞中,分别对诱导剂浓度、诱导时间、诱导温度及超声功率进行条件优化,结果显示重组pRBP4以0.5 mmol/L IPTG在16℃条件下诱导12 h能够获得最大量的可溶性蛋白。进一步研究发现,以60 mmol/L咪唑纯化重组蛋白可获得最高产量。利用纯化的重组pRBP4蛋白处理猪肺泡巨噬细胞,qPCR检测炎症因子表达情况,发现重组pRBP4可显著诱导IL-1β、TNFα及IL-6的表达,表明获得的重组蛋白具有良好的生物学活性。以上结果为深入研究pRBP4的生物学功能提供了有利的生物学候选工具。

    2023年10期 v.43;No.322 2078-2085+2100页 [查看摘要][在线阅读][下载 1570K]
    [下载次数:285 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]
  • 非靶向脂质组学探究花生四烯酸对奶牛乳腺上皮细胞的影响

    卢挺;董伟韬;陈艳;赵晓萱;刘佩雯;贺海健;张全伟;贺钰烜;赵兴绪;张勇;

    为探讨外源性花生四烯酸(arachidonic acid, AA)对奶牛乳腺上皮细胞脂质代谢的影响,本试验采用超高效液相色谱-四级杆静电轨道阱质谱(ultra high performance liquid chromatography Q-exactive orbitrap mass spectrometry, UHPLC-QE-MS)的非靶向脂质组学技术,识别和量化AA处理奶牛正常乳腺上皮细胞后改变的内源性脂质代谢产物。通过非靶向脂质组学分析,共检测到1 145种脂质代谢物,涉及6个脂质类别,根据正交偏最小二乘判别分析(orthogonal-partial least squares-discriminant analysis, OPLS-DA)显示有10种脂质代谢物含量存在显著性差异。其中,AA处理组中AcylGlcADG(14:1/14:1/14:1)、GlcADG(18:2/22:2)、MAG(18:1)、PC(22:5/22:5)、PC(4:0/27:0)、PC(7:0/26:1)、PEtOH(16:0/16:1)、PEtOH(16:1/18:1)和TG(16:0/18:0/20:4)的含量显著降低;SHexCer(d35:2)含量显著升高。综上,AA显著改变了奶牛乳腺上皮细胞的脂质代谢谱,这些差异表达的脂质分子可能成为奶牛乳房炎发展过程中的相关脂类干预靶点。

    2023年10期 v.43;No.322 2086-2092页 [查看摘要][在线阅读][下载 2084K]
    [下载次数:256 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]
  • 牦牛ATG5多克隆抗体的制备及应用

    高翔;潘阳阳;王萌;焦正兴;王靖雷;马文斌;王军乾;余四九;崔燕;王立斌;

    为了进一步研究自噬在牦牛生殖活动中发挥的作用,本研究通过合成牦牛自噬相关5(autophagy related 5,ATG5)基因,并将合成的基因插入pET-32a质粒,转化BL21(DE3)感受态细胞,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-Thiogalactoside, IPTG)诱导表达ATG5重组蛋白并纯化,免疫日本大耳白兔,制备牦牛ATG5多克隆抗体。采用间接ELISA法检测抗体的效价,蛋白质印迹(Western blot, WB)技术检测多克隆抗体的特异性。通过Western blot、免疫组织化学法(immunohistochemistry, IHC)和免疫荧光技术(immunofluorescence, IF)应用所制备的抗体检测ATG5蛋白在牦牛生殖器官中的表达。结果成功构建了pET-32a-ATG5原核表达质粒,转化大肠杆菌IPTG诱导获得了大小约为53 kDa(含His和Trx标签)的重组蛋白;制备的牦牛ATG5多克隆抗体效价为1∶1 280 000,特异性良好。应用显示,ATG5蛋白在牦牛睾丸和输卵管中均有表达。本研究成功制备了牦牛ATG5多克隆抗体,特异性良好,可用于检测牦牛ATG5蛋白的表达,为进一步研究自噬在牦牛生殖生理活动中发挥的作用积累了材料。

    2023年10期 v.43;No.322 2093-2100页 [查看摘要][在线阅读][下载 1681K]
    [下载次数:124 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]
  • GRP94通过PI3K/AKT/mTOR信号通路促进牛肌肉卫星细胞分化

    李爽;付玉莹;佟慧丽;李树峰;严云勤;

    葡萄糖调节蛋白94 (glucose-regulated protein 94,GRP94)对骨骼肌的发育至关重要,但其对牛肌肉卫星细胞(muscle derived satellite cells, MDSCs)分化的影响及作用机制尚未见报道。本试验检测GRP94在牛MDSCs分化过程中的表达情况;采用CRISPR基因编辑技术调控GRP94表达,检测GRP94对肌肉分化标志基因myogenin(MyoG)、myosin heavy chain(MHC)的表达及肌管融合率的影响;分别添加PI3K和mTOR的抑制剂明确PI3K信号通路对牛MDSCs分化的影响;检测GRP94对PI3K/AKT/mTOR信号通路活性的影响。GRP94随着牛MDSCs分化表达逐渐上调,GRP94正向调控牛MDSCs分化。PI3K信号通路抑制牛MDSCs分化,GRP94负调控PI3K/AKT/mTOR信号通路的活性。综上,本试验阐明了GRP94通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路促进牛MDSCs分化的分子机制,为肉牛育种以及肉质改善提供了重要的理论支持。

    2023年10期 v.43;No.322 2101-2108页 [查看摘要][在线阅读][下载 2724K]
    [下载次数:177 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:1 ]
  • 右美托咪定对腹腔镜气腹致大鼠肠损伤的影响

    张暖暖;宁夏青;艾丽平;孙晨;张士霞;

    旨在探讨右美托咪定对气腹所致肠损伤的保护作用。将18只SD大鼠分为3组(6只/组):假手术组(Sham)、CO_2气腹组(CO_2)、右美托咪定组(DEX)。CO_2组和DEX组在2 kPa(15 mmHg)气腹压力下维持90 min建立气腹模型;DEX组在气腹前30 min腹腔注射50μg/kg右美托咪定;Sham组不通气腹,其余操作同CO_2组。气腹结束6 h收集小肠样本。通过HE染色观察小肠组织病理形态学变化;采用ELISA法检测IL-6、IL-1β、TNF-α水平;化学发光法检测MDA、GSH含量和MPO活性;采用RT-qPCR检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-1的mRNA表达;Western blot检测HO-1、Nrf2、IKBα、NF-κB蛋白表达。结果显示:与Sham组相比,CO_2组IL-6、IL-1β、TNF-α、MDA含量和MPO活力均极显著升高(P<0.01),GSH含量极显著降低(P<0.01),ZO-1、Occludin、Claudin-1的mRNA相对表达量均极显著降低(P<0.01),HO-1、Nrf2、IKBα和NF-κB的蛋白表达极显著升高(P<0.01);与CO_2组相比,DEX组IL-6、IL-1β、TNF-α、MDA含量和MPO活力均极显著下降(P<0.01),GSH含量极显著升高(P<0.01),ZO-1、Occludin、Claudin-1的mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01),HO-1、Nrf2蛋白表达极显著升高(P<0.01),IKBα蛋白表达极显著下降(P<0.01),NF-κB蛋白表达显著下降(P<0.05)。上述结果表明,右美托咪定可以通过抗氧化、降低炎性反应等减轻腹腔镜气腹所致肠损伤。

    2023年10期 v.43;No.322 2109-2115页 [查看摘要][在线阅读][下载 1449K]
    [下载次数:39 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]
  • 线粒体活性氧在氟化钠诱导PC12细胞NF-κB/NLRP3信号通路活化中的作用

    陈德良;张磊;付长其;舒适;王国文;彭巍;

    旨在探究氟化钠(NaF)对PC12细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体的影响以及线粒体活性氧(mtROS)/核因子κB(NF-κB)信号在其中的调节作用。以PC12细胞为研究对象,分别转染NLRP3 siRNA、孵育NF-κB通路抑制剂PDTC(50μmol/L)或mtROS清除剂Mito-TEMPO(500μmol/L),并给予质量浓度为80 mg/L的NaF刺激24 h。通过CCK-8法检测细胞存活率,mitoSOX荧光探针检测mtROS水平,比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,ELISA法检测白细胞介素(IL)-18和IL-1β分泌,Western blot检测磷酸化NF-κB p65、磷酸化I-κB激酶β(iKKβ)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(Caspase-1) p20蛋白表达,免疫荧光测定NF-κB p65的入核。与NaF组比较,NLRP3 siRNA干预显著降低了NaF暴露引起的NLRP3和Caspase-1 p20蛋白表达水平升高(P<0.01),缓解了NaF诱导的细胞存活率降低(P<0.01)、减弱了培养液上清中LDH活性以及IL-1β和IL-18的分泌水平(P<0.01)。与NaF组比较,PDTC+NaF组细胞中p-NF-κB p65和p-iKKβ水平降低(P<0.01),NF-κB p65的入核被阻断。此外,Mito-TEMPO干预后,NaF处理细胞中的mtROS、p-NF-κB p65、p-iKKβ、NLRP3、IL-1β和IL-18水平均降低(P<0.01)。NaF引起的PC12细胞NF-κB/NLRP3信号通路活化与mtROS水平升高有关。

    2023年10期 v.43;No.322 2116-2122页 [查看摘要][在线阅读][下载 1669K]
    [下载次数:133 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]
  • 纳米二氧化硅对小鼠睾丸间质细胞的毒性作用

    方忞芊;孙翊傑;张倩茹;许显玉;陈风雷;

    为探讨纳米二氧化硅(silica nanoparticles, SNPs)对睾丸间质细胞的毒性作用及其调控机制,利用St9ber法制备SNPs并通过透射电镜技术(transmission electron microscopy, TEM)检测其物理化学性质;采用尾静脉注射SNPs进入小鼠体内,通过H&E染色检测SNPs对小鼠睾丸的急性毒性作用;体外培养小鼠睾丸间质细胞,通过透射电镜技术、乳酸盐脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)染色、吖啶橙(acridine orange, AO)染色、Lyso-Tracker Red染色、流式细胞术、免疫荧光技术和Western blot方法检测SNPs对小鼠睾丸间质细胞的毒性作用。结果显示,本研究成功制备分散性良好近球形直径为100 nm的SNPs;体内试验结果表明,SNPs能够引起睾丸的急性毒性,导致精曲小管结构异常和睾丸间质减少;体外试验结果表明,SNPs抑制睾丸间质细胞增殖和促进细胞凋亡,在睾丸间质细胞溶酶体内发现SNPs颗粒分布,SNPs通过增大溶酶体膜通透化和改变其酸碱性损伤溶酶体导致睾丸间质细胞的凋亡。SNPs通过诱导溶酶体损伤引起睾丸间质细胞毒性产生,本研究可为进一步揭示SNPs生殖毒性的研究提供理论基础。

    2023年10期 v.43;No.322 2123-2130页 [查看摘要][在线阅读][下载 2475K]
    [下载次数:117 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:1 ]

研究论文_临床兽医学

  • 锌、NAC对镉染毒巨噬细胞的保护作用

    陈建闪;刘童通;孙子龙;牛瑞燕;刘慈;王璟璐;马海利;张鼎;

    探讨镉(Cd)对家禽巨噬细胞的毒性损伤和免疫功能的影响,以及锌、N-乙酰半胱氨酸(NAC)对Cd染毒巨噬细胞的保护作用。试验建立Cd~(2+)(20,50μmol/L)染毒HD-11细胞模型,研究不同时间段(6,12 h)Cd对HD-11细胞毒性损伤,并通过向细胞培养基中补充Zn~(2+)(20μmol/L)、NAC(500μmol/L)的方式,探讨Zn~(2+)和NAC对Cd染毒巨噬细胞细胞骨架、细胞凋亡、ROS产生、线粒体膜电位(MMP)水平及免疫功能的影响。通过检测细胞金属元素结合原件(MTF-1)、金属硫蛋白(MT-1)基因转录水平,揭示Zn~(2+)和NAC对Cd染毒巨噬细胞的调控机理。结果显示,Cd染毒造成HD-11细胞骨架蛋白降解、ROS产生、MMP水平下降、细胞凋亡增加以及IL-1β、IL-8、IL-10基因表达量降低。Zn~(2+)、NAC添加能不同程度地降低Cd染毒巨噬细胞结构损伤,减少ROS产生和MMP去极化水平,增强细胞抗氧化能力和免疫功能,促进MTF-1和MT-1基因表达。结果表明,Cd染毒可以造成鸡巨噬细胞浓度—时间依赖性结构损伤和免疫功能紊乱,单独或联合添加Zn~(2+)、NAC可通过增强细胞抗氧化水平,有效抑制Cd染毒鸡巨噬细胞毒性损伤,改善细胞免疫功能。

    2023年10期 v.43;No.322 2131-2138+2156页 [查看摘要][在线阅读][下载 2039K]
    [下载次数:85 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]
  • 高剂量酒糟摄入对山羊肾脏组织氧化指标、炎性因子、转录谱的影响

    罗怡茜;李亚均;何凯锋;张芝金;郭灵君;张德志;李前勇;

    旨在探索高剂量酒糟摄入对山羊肾脏组织氧化指标、炎性因子、转录谱的影响,为揭示高剂量酒糟饲喂对山羊肾脏损伤的机制提供理论基础。选取6只30日龄荣昌本地山羊随机分为2组,每组3只,对照组按照《肉羊饲养标准》(NY/T816-2004)推荐的山羊饲养标准饲喂;试验组用酒糟代替日粮中75%蛋白质和能量成分,试验期为90 d。90 d后采集山羊肾脏组织,利用生化法测定山羊肾脏组织T-SOD、CAT、GSH-Px、XOD、T-AOC含量,用ELISA法测定山羊肾脏组织IL-6、IL-1β、TNF-α含量,用RNA-Seq技术进行转录组测序分析。结果显示,试验组XOD水平显著低于对照组(P<0.05),T-SOD和T-AOC水平极显著低于对照组(P<0.01)。试验组IL-1β水平极显著高于对照组(P<0.01),IL-6、TNF-α水平显著高于对照组(P<0.05)。与对照组比较,试验组共发现546个差异表达基因,其中有385个基因表达上调,161个基因表达下调,qRT-PCR显示挑选的基因与转录组测序结果的表达趋势具有一致性。GO富集分析显示试验组差异表达基因在生物过程中富集的主要类别是电子传递链、呼吸电子传递链;在分子功能中,主要类别是转运活性、跨膜转运蛋白活性;在细胞成分中,主要类别是膜的整体组成、膜的固有成分。KEGG分析显示试验组差异表达基因主要富集在生热作用、帕金森病、氧化磷酸化等通路中。转录组测序与ELISA、生化试验结果具有一致性,均表明75%酒糟饲喂山羊造成肾脏发生氧化应激和炎性损伤。

    2023年10期 v.43;No.322 2139-2148页 [查看摘要][在线阅读][下载 1908K]
    [下载次数:111 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]
  • 清热凉血复方防治大肠杆菌对紧密连接ZO-1蛋白造成的损伤

    邓倩;王奕凯;张思邈;尉啸涵;郭大伟;刘晓晔;董虹;

    为了探究清热凉血方对大肠杆菌体外抑菌效果以及对紧密连接ZO-1蛋白损伤的防治作用,采用倍比稀释法检测清热凉血方对大肠杆菌的直接抑菌作用;进一步使用清热凉血方预防或治疗处理猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术和免疫荧光染色法检测ZO-1的mRNA和蛋白的表达情况;最后使用硝酸铝显色法、硫氰化钾-三氯化铁法以及浓硫酸-苯酚法检测清热凉血方中有效活性成分的含量。抑菌结果显示,白头翁汤、牛角地黄汤、清瘟败毒饮抑菌作用最强,最小抑菌浓度(MIC)值为250 g/L;RT-qPCR结果显示,预防效果最好的是牛角地黄汤,治疗效果最好的是牛角地黄汤和清瘟败毒饮;而免疫荧光检测结果显示,预防效果最好的是白头翁汤、清营汤和清瘟败毒饮,治疗效果最好的是清瘟败毒饮;有效活性成分检测显示,白头翁汤的总黄酮和总酚酸含量最高,分别为120.75,58.11 mg/g;牛角地黄汤总多糖含量最高,为370.02 mg/g。综上,清热凉血方可以在体外直接抑制大肠杆菌,并对大肠杆菌造成的紧密连接ZO-1蛋白损伤有防治作用。除此之外,清热凉血方中含有多种有效活性成分。

    2023年10期 v.43;No.322 2149-2156页 [查看摘要][在线阅读][下载 2492K]
    [下载次数:191 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]

研究论文_动物科学

  • 不同来源多酚对奶牛瘤胃体外营养物质降解率和甲烷产量的影响

    滕战伟;陈秋楠;王笑笑;张黎杰;张宁宁;常美楠;夏小静;贺永惠;高腾云;

    通过体外培养法研究绿原酸、单宁酸、茶多酚和褐藻多酚对甲烷生成和饲料降解率的影响。采用单因素试验设计,多酚的添加水平分别为发酵底物干物质(DM)基础的0%,1%,2%,3%和4%。每个添加水平设置5个重复,同时设置5个空白用以校正产气量和甲烷(CH_4)产量。结果表明:与对照组相比,不同添加水平的茶多酚均显著降低CH_4产量(P<0.05),茶多酚添加水平为4%时,显著降低氨态氮(NH_3-N)含量(P<0.05);单宁酸添加水平为1%时,显著降低CH_4产量(P<0.05),而单宁酸添加水平为4%时,CH_4产量显著提高(P<0.05);褐藻多酚添加水平为4%时,显著降低NH_3-N的含量(P<0.05);绿原酸添加水平为3%和4%时,显著降低CH_4的浓度(P<0.05)。不同添加水平的茶多酚均显著提高饲料DM和中性洗涤纤维(NDF)的降解率(P<0.05)。单宁酸添加水平为4%时,显著降低DM降解率(P<0.05)。褐藻多酚和绿原酸对奶牛瘤胃体外发酵DM、NDF和酸性洗涤纤维(ADF)的降解率未产生显著影响(P>0.05)。综上所述,4种多酚对CH_4生成和饲料降解率的影响效果以茶多酚1%添加水平为最佳。

    2023年10期 v.43;No.322 2157-2161+2170页 [查看摘要][在线阅读][下载 1135K]
    [下载次数:254 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]
  • C57BL/6NcGAS基因敲除鼠的构建及对猪伪狂犬病病毒增殖的影响

    李丽蕴;梁东阁;于海深;郭江涛;曾磊;

    胞质DNA感受器环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic GMP-AMP synthase, cGAS)能够识别胞质中的双链DNA(double stranded DNA,dsDNA),从而激活Ⅰ型干扰素信号通路抵御外界病原微生物的感染。为研究cGAS基因对猪伪狂犬病病毒(PRV)增殖的影响,本试验首先利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建cGAS基因敲除小鼠,通过H&E染色检测C57BL/6N小鼠和C57BL/6N-cGAS~(-/-)小鼠肺脏和脑组织形态差异及感染PRV后肺脏组织中炎性浸润的影响;Q-PCR检测C57BL/6N小鼠和C57BL/6N-cGAS~(-/-)小鼠感染PRV后对PRV-gB、PRV-TK、IFN-β、ISG15和ISG20基因mRNA表达水平的差异;Western blot及免疫组化检测C57BL/6N小鼠和C57BL/6N-cGAS~(-/-)小鼠感染PRV后PRV-gB和PRV-gE蛋白表达水平;最后利用病毒PFU法检测cGAS敲除鼠对PRV子代病毒滴度的影响。Western blot检测结果显示在C57BL/6N小鼠肺脏和脑组织中cGAS基因敲除成功,同时H&E染色结果显示,cGAS基因敲除对其肺脏和脑组织形态无影响,但感染PRV后C57BL/6N-cGAS~(-/-)小鼠组织中的炎性浸润明显高于C57BL/6N;小鼠存活率试验结果显示,感染PRV后,C57BL/6N-cGAS~(-/-)与C57BL/6N小鼠相比,存活率显著降低。Q-PCR及Western blot检测显示C57BL/6N-cGAS~(-/-)小鼠可以促进PRV-gB和PRV-gE mRNA转录和蛋白表达;PFU测定结果显示,感染PRV后,C57BL/6N-cGAS~(-/-)小鼠体内的病毒滴度显著高于C57BL/6N小鼠。另外,Q-PCR结果显示该基因敲除小鼠可以抑制PRV感染引起的IFN-β、ISG15和ISG20基因mRNA表达上调。以上结果表明cGAS抑制PRV在小鼠体内的增殖。

    2023年10期 v.43;No.322 2162-2170页 [查看摘要][在线阅读][下载 1962K]
    [下载次数:187 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]
  • 斑蝥黄对热应激怀乡鸡抗氧化能力与肠道黏膜结构的影响

    刘元;谢婷婷;尹朗庭;刘斌;赵君文;孙卓;效梅;安立龙;

    旨在探究饲粮中添加斑蝥黄对高温环境中成年怀乡鸡抗氧化性能和小肠黏膜结构的影响。选取216只健康状况良好的26周龄雌性怀乡鸡,随机分为6个处理组,每个小组设置6个重复,每个重复6只鸡;设置常温对照组:温度为(25±1)℃,饲喂基础日粮;高温对照组:采用循环高温(32±1)℃,饲喂基础日粮;高温处理组HT1、HT2、HT3、HT4:采用循环高温,基础日粮中分别添加4,6,8,10 mg/kg斑蝥黄;试验期为4周。与常温对照组(NC)相比,高温环境下,怀乡鸡十二指肠、空肠和回肠组织GSH-Px、T-AOC、T-SOD酶活性显著降低,MDA含量显著升高;HSP90AA1在十二指肠中呈差异显著下调;小肠绒毛发生断裂、上皮细胞间隙变大、小肠绒毛高度降低,肠绒毛排列疏松,部分发生脱落,小肠组织的细胞发生凋亡。饲粮中添加不同浓度的(4,6,8,10 mg/kg)斑蝥黄后,与高温对照组(HC)相比,十二指肠、空肠和回肠组织GSH-Px、T-AOC、T-SOD酶活性显著升高;MDA含量显著降低;饲粮中添加10 mg/kg斑蝥黄后,SOSTM1在十二指肠和空肠中呈差异显著下调,在回肠中的表达呈下调趋势,但差异不显著。饲粮添加8~10 mg/kg斑蝥黄有效缓解肠绒毛断裂、脱落和萎缩现象,减少小肠组织的细胞凋亡。高温环境下,怀乡鸡小肠组织的抗氧化能力显著降低,肠绒结构遭到破坏;饲粮中添加8~10 mg/kg斑蝥黄可以有效改善高温对小肠结构造成的应激损伤。

    2023年10期 v.43;No.322 2171-2180页 [查看摘要][在线阅读][下载 1977K]
    [下载次数:306 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] |[阅读次数:0 ]

综述

  • PRV感染后对宿主先天免疫信号转导影响的研究进展

    廖正波;汤德元;曾智勇;王彬;黄涛;陈阊峥;罗柳;陈旭;袁盛林;

    伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)是伪狂犬病(pseudorabies, PR)的病原体,感染大多数哺乳动物,自发现以来,已在世界各地流行,并给养猪业造成了巨大的经济损失。近年来,为预防和治疗PR,对PRV的致病机制进行了深入研究,在PRV感染后引起宿主先天免疫信号转导的变化,以及对宿主免疫反应的影响等方面都取得了一定进展,但仍有很多信号通路与病毒的作用机制还有待揭示。因此,本文以PRV感染后结合不同受体引起下游信号通路的变化为出发点,将病毒与宿主间相互作用的研究进展进行综述,以期为PRV致病机制和抗病毒药物的后续研究提供参考。

    2023年10期 v.43;No.322 2181-2189页 [查看摘要][在线阅读][下载 1206K]
    [下载次数:185 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:0 ]
  • 禽传染性支气管炎病毒疫苗的研究进展

    李阳;李挚;邓钰蓱;马淑慧;徐刚;

    禽传染性支气管炎(infectious bronchitis, IB)是由禽传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)引起鸡的一种急性、高度接触性传染病,疫苗接种仍是国内控制和预防此病的主要手段。由于IBV血清型众多,变异程度高,传统疫苗已无法达到良好的防控效果,影响国内养禽业的发展。对现阶段IBV相关疫苗的种类及使用利弊进行综述,旨在为新型IBV疫苗的研发方向提供思路,为更好的预防和控制IB提供理论参考。

    2023年10期 v.43;No.322 2190-2196页 [查看摘要][在线阅读][下载 1146K]
    [下载次数:328 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:1 ]
  • 下载本期数据