- 刘佳晨;郭子强;陈金霞;曹云雷;童武;乔思娜;刘长龙;赵冉;郑海红;童光志;李丽薇;高飞;
为制备ASFV CP312R基因编码蛋白的多克隆抗体，利用PCR方法从非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的灭活样品中扩增出924 bp的CP312R基因全长序列，利用同源重组法构建出原核表达质粒pCold-Ⅰ-ASFV-CP312R,将其转化至原核表达感受态细胞BL21中，经1 mmol/L的IPTG低温条件下诱导表达CP312R编码蛋白并经过镍柱亲和层析纯化后，利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析，表达蛋白的相对分子质量约为34 kDa,通过Western blot分析，该蛋白能被ASFV抗体特异性识别。将所得的蛋白经处理纯化后免疫小鼠3次，得到含多克隆抗体的血清。利用该抗体检测实验室构建并拯救的表达ASFV CP312R基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV),结果显示该多抗具有良好的反应原性和特异性，并且证明了ASFV CP312R基因编码蛋白可在PRRSV活载体中稳定表达。
2024年01期 v.44;No.325 1-6页 [查看摘要][在线阅读][下载 3601K] [下载次数：378 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 林彦星;翁巧玉;吴江;黄超华;史卫军;金业;陈鹏;张彩虹;杨俊兴;阮周曦;曹琛福;陈兵;曾少灵;花群义;
利用非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白不同抗原表位的2株单克隆抗体，1株作为捕获抗体，另1株用辣根过氧化物酶(HRP)标记后作为检测抗体，采用方阵法对ELISA反应条件进行优化，建立了检测ASFV抗原的双抗体夹心ELISA方法。结果显示，该方法中捕获抗体包被质量浓度为1.25 mg/L,酶标单克隆抗体的最适稀释度为1∶4 000。通过试验确定该方法的临界值为0.299,当样品D_(450)值≥0.3,且P/N大于2时，判定为阳性。该双单抗夹心ELISA方法可特异性检测ASFV抗原，其他抗原检测结果均为阴性，特异性强；重复性好，批内和批间变异系数(CV)均小于8%。应用本研究建立的方法与荧光PCR方法同时对225份临床样品进行检测，总符合率为96.89%。结果表明，本研究建立的双抗体夹心ELISA方法可用于ASFV抗原的大量样品检测，为ASF防控提供了技术支持。
2024年01期 v.44;No.325 7-11页 [查看摘要][在线阅读][下载 686K] [下载次数：602 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：1 ] - 刘悦;魏天;张春雨;张建峰;王成宇;张芳毓;朱日宁;鞠安琪;王思月;曲磊;张守峰;扈荣良;梁静;王永志;
为建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)抗体间接ELISA检测方法，利用马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)介导的植物生物反应器在本氏烟草中表达ASFV p30蛋白，并以表达的蛋白作为包被抗原，对间接ELISA各反应条件进行优化。依据ASFV SY-18株的CP204L(p30)基因序列，按照本氏烟草密码子的偏好性，对p30基因(231～536 bp)的核苷酸序列进行优化、人工合成及克隆，通过In-Fusion连接技术将扩增的p30基因插入到PVY基因组的P1和HC-Pro基因之间，构建PVY-p30重组病毒质粒，以摩擦的方式将质粒接种本氏烟草叶片，14 d后，通过RT-PCR和Western blot分析目的基因的转录和重组蛋白的表达情况，并利用Ni-NTA-琼脂糖亲和层析柱纯化本氏烟草中表达的p30重组蛋白，Western blot分析p30重组蛋白的纯化效果和反应原性，将纯化后的p30重组蛋白作为包被抗原，建立ASFV抗体间接ELISA检测方法。结果显示，构建的PVY-p30重组病毒能够系统性侵染本氏烟草；p30重组蛋白能够在本氏烟草叶片中表达，且具有良好的反应原性；纯化的p30重组蛋白效果较好，能够被p30蛋白单克隆抗体识别。建立的ELISA检测方法最佳反应条件为抗原质量浓度0.5 mg/L,37℃包被1 h;待检血清1∶400倍稀释，37℃孵育0.5 h; HRP标记二抗37℃孵育0.5 h; TMB室温避光显色10 min;阴阳性临界值为0.461。当ASFV阳性血清稀释度为1∶2 560时，仍检测为阳性，具有较高的敏感性；该方法与其他常见病阳性血清不发生交叉反应，能够特异性地检测ASFV抗体；重复性试验显示批内变异系数小于5%,批间变异系数小于10%;该方法与ASFV商品化检测试剂盒相比，总体符合率为85.0%。结果表明，本研究构建的PVY-p30重组病毒载体能介导p30重组蛋白在本氏烟草中表达，以植物表达的p30重组蛋白为抗原建立的ASFV抗体间接ELISA检测方法可用于疾病的临床检测及疫情监测，同时为可饲疫苗的研发提供了基础材料。
2024年01期 v.44;No.325 12-19+28页 [查看摘要][在线阅读][下载 3290K] [下载次数：388 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ] - 余涛;胡婧宇;司维;颜焰;董伟仁;顾金燕;周继勇;
为探究在猪圆环病毒2型(PCV2)入核复制过程中发挥生物学功能的宿主核相关蛋白，本研究借助免疫沉淀技术联合蛋白质谱鉴定技术，从宿主细胞核膜提取物中筛选到了可与PCV2 Cap蛋白发生潜在互作的2个蛋白质：高迁移率族蛋白1(HMGB1)和精氨酸酶1(ARG1)。通过进一步的免疫共沉淀试验及激光共聚焦试验，证明了HMGB1、ARG1与PCV2 Cap蛋白的相互作用，且互作与Cap蛋白的核定位信号(NLS)无关。该研究为进一步探索PCV2入核复制的机制解析提供了重要信息。
2024年01期 v.44;No.325 20-28页 [查看摘要][在线阅读][下载 11000K] [下载次数：463 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 杨宛书;李娟;杜柳阳;陈文镜;周继勇;顾金燕;
为获得免疫原性好的猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)辅助蛋白ns7和ns7a,并制备特异性的多克隆抗体，以用于ns7和ns7a蛋白功能的初步研究，本试验构建原核表达载体pGEX-PDCoV-ns7和pGEX-PDCoV-ns7a,测序正确后转入E.coli BL21(DE3)中诱导表达。利用GST-Resin进行蛋白纯化，将获得的重组蛋白以皮下注射方式免疫BALB/c小鼠，成功制备4份PDCoV ns7和2份ns7a小鼠多克隆抗体，并用ELISA、Western blot和IFA对抗体效价、反应性及特异性进行鉴定。结果显示，本试验成功应用大肠杆菌表达了可溶性ns7和ns7a蛋白，制备的PDCoV ns7和ns7a多克隆抗体效价分别为1∶409 600和1∶12 800,并在Western blot和IFA试验中具有良好的反应性及特异性。结果表明，制备的PDCoV辅助蛋白ns7和ns7a多克隆抗体为深入研究ns7及ns7a蛋白的生物学功能提供了重要工具。
2024年01期 v.44;No.325 29-38页 [查看摘要][在线阅读][下载 13553K] [下载次数：304 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 鲍显伟;李昊;李小龙;石亚楠;王雪妍;许立华;
牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus, IBRV)和阿卡斑病毒(Akabane virus, AKAV)是引起牛发生繁殖障碍性传染病的主要病原。本研究根据BVDV的5′-UTR、IBRV的gB基因和AKAV的S基因设计了3对特异性引物，构建了检测BVDV、IBRV和AKAV的多重PCR方法，并优化反应体系和条件，验证了该方法的特异性和敏感性。结果显示，构建的多重PCR方法对其他牛源病毒无扩增，对BVDV、IBRV和AKAV的最低检测限分别为10~3、10~3和10~(4 )拷贝/μL。对采集的184份临床血清样品进行检测，BVDV、IBRV和AKAV的阳性率分别为18.48%、14.13%和1.63%,BVDV和IBRV 2种病原混合感染的阳性率为3.8%,BVDV和AKAV两种病原混合感染的阳性率为1.63%。该结果与我国出入境检疫行业标准符合率达92%以上，BVDV+IBRV和BVDV+AKAV混合感染的符合率为100%。表明本研究建立的多重PCR检测方法可用于临床样品的检测。BVDV、IBRV和AKAV多重PCR检测方法的建立，为我国牛群BVD、IBR和AKA的检测和流行病学调查提供了一种快捷简便的分子生物学检测方法。
2024年01期 v.44;No.325 39-43+87页 [查看摘要][在线阅读][下载 862K] [下载次数：518 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 张倩;王旭;韩猛立;张星星;吴桐忠;钟发钢;黄新;张乾义;
为探究新疆某集约化牛场1～6月龄犊牛群中牛副流感病毒3型(BPIV3)的感染情况，对采集的60份犊牛鼻拭子样品进行RT-PCR检测、病毒分离鉴定及全基因组测序和遗传进化分析。结果显示，样品中BPIV3核酸阳性率为11.67%。从核酸阳性样品中分离获得1株BPIV3,并命名为XJ21032-1(45),其基因组全长为15 512 bp;遗传进化分析表明，XJ21032-1(45)属于BPIV3 B基因型，该分离株与澳大利亚的BPIV3 B基因型参考株Q5592(EU277658)的同源性最高为93.4%。本研究成功分离得到了1株B基因型BPIV3,证实B型毒株在我国的存在和流行，为BPIV3疫苗研发提供了原材料，也有助于我国BPIV3分子进化规律及溯源的进一步研究。
2024年01期 v.44;No.325 44-51页 [查看摘要][在线阅读][下载 7135K] [下载次数：379 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 龚乐乐;刘盼;王乐乐;王芮;高美洁;赵旭阳;王新卫;杜永坤;庄国庆;孙爱军;
为了预防马立克氏病毒(Marek's disease virus, MDV)和新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)混合感染给养禽业造成的危害，本研究以细菌人工染色体(BAC)为基因编辑平台，利用Red同源重组技术，将NDV的F基因整合到MDV双基因缺失毒株Md5 BACΔmeqΔLorf9基因组中，诱导Ⅰ-SceⅠ酶表达，将筛选标记卡那霉素抗性基因敲除，构建重组活载体疫苗候选毒株Md5 BACΔmeqΔLorf9-F。PCR以及限制性片段多态性(RFLP)分析结果显示F基因成功整合到MDV基因组且重组质粒基因组完整；将鉴定正确的重组质粒转染鸡胚成纤维细胞，1周后出现明显的细胞病变，且噬斑大小与亲本毒无明显差异；体外生长曲线结果显示，F基因的插入不影响病毒的体外复制能力。结果表明，本研究正确构建了表达NDV保护性抗原F基因的重组MDV,为研制ND重组MDV活载体疫苗奠定了基础，对NDV和MDV混合感染的防控具有重要意义。
2024年01期 v.44;No.325 52-58页 [查看摘要][在线阅读][下载 3430K] [下载次数：202 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 吕志航;廉春杨;姚鑫炎;张玉倩;刘春红;黄淑坚;张雪莲;
旨在利用原核表达系统表达基因Ⅱ型鹅星状病毒(goose astrovirus, GoAstV)ORF2蛋白，制备兔源多克隆抗体，并对制备的多抗进行效价检测及鉴定。根据GoAstV-GDZJ37株ORF2基因序列设计特异性表达引物，利用RT-PCR方法进行目的基因扩增，将其连接至原核表达载体pET-32a(+);经酶切鉴定和测序正确后，转化至表达感受态细胞，并进行诱导表达及SDS-PAGE分析。以无His标签的ORF2蛋白作为免疫原免疫新西兰大白兔，制备兔源多克隆抗体。将含His标签的ORF2蛋白经Ni-NTA亲和层析法进行纯化，并以纯化后的蛋白作为检测原，通过I-ELISA方法检测兔源多克隆抗体的效价，并通过Western blot及IFA检测方法鉴定其特异性。结果显示，克隆获得GoAstV-GDZJ37株ORF2基因，并利用原核表达系统分别表达2种重组蛋白，大小分别为77、95 kDa,且均为不可溶性表达。I-ELISA结果显示，多克隆抗体的效价为1∶102 400,表明无His标签的ORF2蛋白具有良好的免疫原性；Western blot及IFA结果显示，多克隆抗体可与含His标签的ORF2蛋白及GoAstV毒株均能发生特异性反应，表明制备的多抗具有良好的反应性。本试验成功建立GoAstV ORF2蛋白原核表达系统，并制备高效价兔源多克隆抗体，为后续GoAstV血清学诊断及GoAstV致病机制的深入研究提供了依据。
2024年01期 v.44;No.325 59-65页 [查看摘要][在线阅读][下载 4209K] [下载次数：491 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 周珈羽;朱春华;陈珍;程龙飞;陈翠腾;傅光华;万春和;施少华;梁齐章;陈红梅;傅秋玲;刘荣昌;黄小红;黄瑜;
禽腺病毒属成员鸭腺病毒3型(duck adenovirus type 3,DAdV-3)和禽腺病毒4型(fowl adenovirus serotype-4,FAdV-4)是养殖场主要流行的病原，对养禽业造成巨大的经济损失。目前尚未见可同时快速检测这2种病原的双重荧光定量PCR检测方法，本研究基于DAdV-3 GDMM10毒株和FAdV-4 GDMZ毒株Fiber2基因序列比对及遗传进化分析，分别在Fiber2基因保守区设计特异性引物，建立了能同时鉴别临床上常见的DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR检测方法。结果表明，DAdV-3 GDMM10和FAdV-4 GDMZ Fiber2基因处于两个不同进化分支上，同源性为46.10%。建立的检测DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高，最低可检出45拷贝/μL的DAdV-3样品和17拷贝/μL的FAdV-4样品；且检测结果可直接通过Tm值差异进行判定，简化操作时间。利用该双重荧光定量PCR方法对2022年度临床上采集的34份肝炎-心包积液疑似样品进行检测，DAdV-3和FAdV-4检出率分别为17.65%和2.94%。为进一步开展禽源DAdV-3和FAdV-4的分子流行病学及共感染致病机制奠定了基础。
2024年01期 v.44;No.325 66-73页 [查看摘要][在线阅读][下载 2592K] [下载次数：305 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 杜文广;彭佳佳;曾悦;李佳康;史开拓;周登元;曹胜波;张燕;李秋燕;
猫白血病病毒(FeLV)是一种在家猫和野生猫科动物中水平传播的逆转录病毒，可引起淋巴肿瘤、免疫抑制、贫血等疾病，且国内缺乏针对FeLV的诊断试剂及预防或治疗用生物制剂。膜表面糖蛋白gp70是FeLV中和抗体的主要作用靶点，本研究通过构建gp70重组表达载体，表达纯化gp70重组蛋白，并以纯化的gp70蛋白免疫6周龄的BALB/c小鼠，进行单克隆抗体的制备。结果表明，成功构建了pET-32a-gp70重组表达质粒，并应用IPTG诱导表达、包涵体纯化获得了原核表达的gp70重组蛋白；成功制备出3株能稳定分泌针对gp70蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为2H5、3B1、5A8;Western blot检测表明仅有2H5单克隆抗体能与gp70蛋白特异性结合；IFA检测表明2H5单克隆抗体能与真核杆状病毒表达的gp70蛋白发生特异性反应，2H5单抗效价可达1∶2 048 000。本研究成功制备了针对FeLV gp70蛋白的单克隆抗体，为进一步建立准确快速的FeLV诊断方法及研究预防或治疗用生物制剂奠定基础。
2024年01期 v.44;No.325 74-79页 [查看摘要][在线阅读][下载 4207K] [下载次数：433 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ] - 朱杰;赵旭;东笑;骆建铧;席俊程;王贵平;贾爱卿;
牛呼吸道疾病(bovine respiratory disease, BRD)是牛场中重要的疾病之一，给我国养牛业造成了严重的经济损失。多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)和溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)是与BRD相关的主要细菌性病原。为分离纯化到目前Pm和Mh流行的优势毒株，建立合适的小动物攻毒模型，给BRD疫苗研制提供有效的疫苗候选株。本研究首先从患BRD牛的病料中进行Pm和Mh的检测、分离鉴定，确定基因型且评估分离株对小鼠的致病性，筛选合适的疫苗候选株。结果显示，本研究在2022年11-12月从我国3个省份的6个牛场采集到48份患有BRD的牛鼻拭子，PCR检测结果显示Pm的检出率为47.9%(95%CI:33.3～62.8),Mh的检出率为37.5%(95%CI:24.0～52.6),Pm/Mh共感染的检出率为18.8%(95%CI:8.9～32.6)。在阳性样本中分离纯化得到12株Pm,经血清型鉴定均为A型多杀性巴氏杆菌(PmA);分离到11株Mh,其中7株为A1型，4株为A6型，且在同一头牛的鼻拭子中同时分离到A1型和A6型的Mh。随后建立PmA和Mh的小鼠感染模型，筛选到PmA和Mh的强毒株分别是PmA GDP001株和Mh GDM019株，并且测定PmA GDP001株对小鼠的LD_(50)为10~(1.1) CFU,Mh GDM019株对小鼠的LD_(50)为10~(8.2) CFU。本研究揭示了我国部分地区牛场中BRD主要细菌性病原的流行病学，分离到了重要的病原(PmA和Mh),并且鉴定了分离株的血清型，且通过小鼠感染致病模型筛选到毒力强的PmA和Mh菌株，为BRD多联多价疫苗的研发提供了良好的疫苗候选株。
2024年01期 v.44;No.325 80-87页 [查看摘要][在线阅读][下载 4823K] [下载次数：823 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：1 ] - 徐彬;孙玉;王树;于岩飞;王晓丽;马孙婷;孙华伟;张敬峰;刘传敏;吕立新;冯志新;熊祺琰;邵国青;张小飞;欧阳伟;
滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)是一种重要的禽病病原，严重危害我国养禽业。本研究旨在分析MS烯醇化酶(enolase, Eno)参与病原致病和诱导感染宿主免疫相关的功能。对MS的Eno蛋白进行种内和种间同源性和进化树分析，并预测Eno的蛋白结合位点和B细胞表位。MS Eno在不同MS菌株间同源性较高，且有别于其他物种。B细胞表位广泛分布在Eno蛋白的各个部分，且大都与预测的蛋白结合位点有重合。进行Eno原核表达和纯化，制备兔抗Eno多克隆抗血清。利用Western blot分析Eno在MS感染鸡或灭活苗免疫鸡中的反应原性。结果显示，MS Eno与兔抗Eno多克隆抗血清、兔抗MS多克隆抗血清、灭活疫苗(HN01株或YBF-MS1株)高免鸡血清、HN01强毒攻毒后阳性鸡血清、3个不同地方来源的临床阳性鸡血清均能发生反应，说明其在疫苗免疫和病原感染鸡中均表现有反应原性。利用菌落印迹和双荧光检测分析并证实Eno为外膜蛋白。利用间接免疫荧光和ELISA板结合试验分析Eno对鸡滑膜鞘细胞(synovial sheath cells, SSCs)是否具有黏附素作用。试验证实Eno对SSCs具有黏附作用，且此黏附作用具有Eno浓度依赖性。以上证明MS Eno在病原感染和灭活苗免疫鸡中具有反应原性，并作为外膜锚定的细胞黏附素参与对关键宿主细胞SSCs的黏附，为后续深入研究Eno的致病和免疫相关功能提供了重要参考。
2024年01期 v.44;No.325 88-96页 [查看摘要][在线阅读][下载 5365K] [下载次数：142 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 陆瑶;鲁婷婷;郑克迪;秦鹏;郑梅竹;
帕金森病(Parkinson's disease, PD)是常见的神经退行性疾病，已严重影响老年人的身体健康。为探究芍药苷(peoniflorin)抗帕金森病作用的活性及作用机制，本试验首先建立了1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium, MPP~+)诱导PC12帕金森细胞模型。通过细胞形态学观察、检测细胞活性、乳酸脱氢酶(LDH)的释放量、细胞内Ca~(2+)浓度、活性氧(ROS)水平以及细胞凋亡检测，对芍药苷的神经保护作用进行初步的活性评价。再利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine, MPTP)致PD小鼠模型为研究对象，通过检测自主活动和滚轴能力表现，对芍药苷抗PD的作用进一步验证。在此基础上，通过Western blot检测相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达水平研究其作用机制。结果显示，与正常对照组比较，模型组细胞数量减少，细胞体积明显缩小；细胞活性显著降低(P<0.01);MPP~+显著增加PC12细胞LDH释放率(P<0.01)、ROS水平(P<0.01)和Ca~(2+)浓度(P<0.01),同时细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。与模型组比较，药物保护组细胞损伤减弱，活细胞数量增多，细胞活性增强；25、50μmol/L剂量芍药苷保护组显著降低MPP~+诱导的PC12细胞LDH释放率(P<0.01)、ROS水平(P<0.01)和Ca~(2+)浓度(P<0.01),显著缓解了MPP~+诱导的细胞凋亡(P<0.01);MPTP诱导可显著减少小鼠的自主活动次数(P<0.01)和滚轴时间(P<0.01),经芍药苷预处理后显著增加小鼠自发站立次数(P<0.05)和滚轴时间(P<0.01);25、50μmol/L芍药苷保护组显著增加了细胞内Bcl-2/Bax表达(P<0.01),同时降低了Caspase-3的表达(P<0.01)。结果表明，芍药苷对MPP~+和MPTP诱导帕金森病体内、外模型均具有神经保护作用，其作用机制是通过增加细胞内Bcl-2/Bax表达，降低了Caspase-3的表达实现的。
2024年01期 v.44;No.325 121-127页 [查看摘要][在线阅读][下载 706K] [下载次数：1147 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：2 ] - 林惠莹;杨黎宇;李家伟;林福;李健;
集约化养殖模式造成猪肠道炎症损伤日趋严重，致使小肠上皮屏障功能受损，影响猪群健康度。为研究白屈菜碱(chelidonine)对猪小肠上皮细胞炎症损伤的保护作用，本试验使用H_2O_2构建猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2 cells)炎症损伤模型，采用MTT法筛选适宜的白屈菜碱浓度，采用ELISA法检测炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β1)以及NO含量，采用qPCR法和Western blot检测上述炎症因子及iNOS的mRNA和蛋白表达水平。结果发现，在2.5～100.0 mg/L质量浓度范围内，白屈菜碱对IPEC-J2细胞无毒性；2.5、5.0、10.0 mg/L白屈菜碱可显著恢复H_2O_2诱导的IPEC-J2细胞存活率下降(P<0.05)。经H_2O_2造模后，NO含量极显著升高(P<0.01)、IL-10含量显著降低(P<0.05)、其余炎症因子含量显著升高(P<0.05),iNOS及上述炎症因子的mRNA和蛋白表达水平均与ELISA检测结果趋势一致；而3个试验浓度的白屈菜碱均可显著地逆转以上变化。结果表明，白屈菜碱对H_2O_2诱导的IPEC-J2细胞炎症损伤具有显著的预防作用，具备开发成为防治猪肠炎药物的潜力。
2024年01期 v.44;No.325 128-134页 [查看摘要][在线阅读][下载 2793K] [下载次数：292 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 行倩文;吴华;刘嘉华;刘波;张龙飞;陈鑫磊;马欣茹;
为探究紫锥菊提取物-菊苣酸在低氧环境下影响SD大鼠肝脏脂肪代谢的分子机制。选取60只健康雄性SD大鼠(6～8周龄，(192±7.35)g)(P>0.05),适应性喂养2周后，随机分为对照组、不同浓度CA组(10、20、40 mg/kg),每组15只，连续灌胃49 d。4组大鼠均自由采食和饮水，灌胃第50天对SD大鼠进行麻醉处理后，采集肝脏组织，并通过油红O染色法计算各组大鼠肝脏组织油滴面积占总面积的百分比以及测定PPAR信号通路关键因子PLIN2、PLIN5、PPARα、PPARγ、RXRα的表达情况。油红O染色结果显示：与对照组相比，添加紫锥菊提取物-菊苣酸组极显著降低油红O染色面积(P<0.01);PPAR信号通路关键因子表达结果显示：与对照组相比，添加紫锥菊提取物-菊苣酸组显著降低PLIN2、PLIN5、PPARα、PPARγ、RXRα的mRNA及蛋白表达量(P<0.05),其中以添加10 mg/kg紫锥菊提取物-菊苣酸组对PLIN2、PLIN5、PPARα、PPARγ、RXRα的mRNA及蛋白表达量效果最显著(P<0.05)。结果表明，紫锥菊提取物-菊苣酸降低脂肪合成相关因子的表达，调控脂肪的合成与储存，预防脂肪的过多累积导致机体脂质代谢紊乱，紫锥菊提取物-菊苣酸改善了低氧诱导的脂质代谢功能障碍，且10 mg/kg组作用效果最好。本研究为紫锥菊提取物-菊苣酸作为高海拔地区预防高原动物脂质代谢紊乱的饲料添加剂的开发利用提供了理论基础。
2024年01期 v.44;No.325 135-140页 [查看摘要][在线阅读][下载 3238K] [下载次数：749 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 刘波;吴华;刘嘉华;行倩文;陈鑫磊;王文胜;
为探究紫锥菊提取物对SD大鼠心肌组织氧化应激的保护作用及相关蛋白表达的影响。选择60只SD大鼠按照随机分组方法分成对照组、不同质量浓度组(10、20、40 mg/kg),每组15只，进行饲养试验。饲养结束后，麻醉并取出心脏，检测心肌组织各生化指标及免疫组织化学染色对心肌组织做病理检测。SD大鼠随着添加紫锥菊提取物浓度增加，SD大鼠氧化应激指标ROS含量和MDA含量呈现逐渐降低的趋势，添加10、20、40 mg/kg紫锥菊提取物组SD大鼠ROS和MDA显著低于对照组(P<0.05);SD大鼠抗氧化指标SOD、GSH-Px和CAT活性呈现逐渐升高的趋势，添加10、20、40 mg/kg紫锥菊提取物组SD大鼠SOD、GSH-Px和CAT显著高于对照组(P<0.05);SD大鼠呼吸链复合体Ⅰ和呼吸链复合体Ⅲ活性呈现逐渐升高的趋势，显著上调线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ活性(P<0.05);SD大鼠Ca~(2+)-ATP酶呈现逐渐升高的趋势，添加20、40 mg/kg紫锥菊提取物组SD大鼠Ca~(2+)-ATP酶显著高于对照组(P<0.05)。不同试验组间结果显示，SD大鼠添加40 mg/kg紫锥菊提取物效果最佳。低氧适应基因表达结果显示，与对照组相比，添加10、20和40 mg/kg紫锥菊提取物组SD大鼠HIF-1α、EPO和VEGF的mRNA和蛋白表达差异不显著(P>0.05),但有降低的趋势。结果表明，紫锥菊提取物可通过调控SD大鼠心肌组织代谢，增强其抗氧化能力、线粒体功能、能量代谢水平，提高SD大鼠适应能力，且以SD大鼠添加40 mg/kg紫锥菊提取物作用最佳。
2024年01期 v.44;No.325 141-149页 [查看摘要][在线阅读][下载 3477K] [下载次数：293 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 黄雅萍;阚兴池;徐平;刘忆瑶;李宇航;付守鹏;柳巨雄;
奶牛乳腺纤维化对畜牧业造成巨大的经济损失，上皮细胞间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)过程产生的细胞外基质(extracellular matrix, ECM)引发纤维化表型指标升高，是诱导乳腺纤维化病变的主要原因，因此有效缓解上皮细胞EMT过程是缓解乳腺纤维化的潜在防治手段。玉米黄素(zeaxanthin, ZEA)是一种天然类胡萝卜素，研究表明具有缓解EMT过程的生物学功能，并且具有成本相对低廉的优势，但是ZEA对乳腺纤维化的影响及其潜在作用机制尚缺乏研究。因此本试验的目的是探究ZEA对转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的小鼠乳腺上皮细胞(mice mammary epithelial cells, mMECs)EMT过程中纤维化表型指标的影响及其潜在机制。试验分为5组，空白对照组、ZEA组、TGF-β1模型组、TGF-β1+ZEA(5μmol/L)组、TGF-β1+ZEA(10μmol/L)组。通过CCK8、Western blot和分子动力学模拟等技术探究ZEA对TGF-β1诱导的mMECs纤维化相关指标的影响。结果显示，ZEA显著缓解了TGF-β1诱导的mMECs的纤维化表型指标的升高，具体表现为，E-cadherin蛋白表达显著升高，Collagen 2、α-SMA和Vimentin蛋白表达显著降低。进一步研究表明，ZEA显著抑制TGF-β1/Smad信号通路的激活。综上所述，ZEA通过抑制TGF-β1/Smad信号通路的激活，抑制纤维化表型指标的升高，从而缓解mMECs细胞的EMT过程。
2024年01期 v.44;No.325 150-155页 [查看摘要][在线阅读][下载 2765K] [下载次数：195 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 徐琨;袁婷婷;何西建;宋学雄;
旨在探讨过表达Fad24对猪去分化脂肪细胞(DFAT)在成脂诱导条件下对胞内地塞米松(Dex)受体GR及其高亲和性辅助分子Hsp90和FKBPs表达的影响。用过表达载体pcDNA-Fad24和空载体pcDNA瞬时转染猪DFAT细胞，并在高浓度Dex(1μmol/L)成脂诱导液中诱导成脂分化，然后根据形态学观察检测诱导分化情况，用Real-time PCR和Western blot技术检测对GR及Hsp90和FKBPs表达的影响。结果显示，pcDNA空载体组在诱导5 d时可诱导出成脂细胞，而pcDNA-Fad24过表达组完全抑制成脂分化，细胞积聚形成多个小结节，诱导7 d后形成典型的成骨样结节，茜素红染色证实结节表面有矿化物质沉积。Real-time PCR检测证实，过表达组GRα mRNA的表达量在成脂诱导48 h显著上调(P<0.01),而GRβ mRNA的表达量在成脂诱导12 h显著上调(P<0.01);GR的高亲和性辅助分子Hsp90 mRNA的表达量在成脂诱导48 h显著上调(P<0.01);FKBP 51 mRNA的表达量在成脂诱导24 h显著上调(P<0.01),而FKBP 52 mRNA的表达量在成脂诱导48 h显著上调(P<0.01)。Western blot检测证实，上述各因子的蛋白质表达谱与mRNA表达谱基本一致。过表达Fad24对猪DFAT细胞由成脂分化向成骨分化转化作用，与成脂诱导48 h时调控GRα及其Hsp90和FKBP 52表达的上调，以及GRβ和FKBP 51表达下调相关。
2024年01期 v.44;No.325 164-169页 [查看摘要][在线阅读][下载 1595K] [下载次数：64 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张洵铭;李常红;房嘉园;王兆国;郝林琳;
研究发现IGF-1同义突变影响骨形成及骨吸收，破骨细胞是介导骨吸收的关键细胞。为分析同义突变对破骨细胞增殖分化及相关通路的影响，本研究以IGF-1 c.258A>G小鼠为实验对象，分离培养破骨前体细胞并诱导分化，以检测不同基因型破骨细胞增殖和骨吸收功能，通过qRT-PCR检测相关基因及相关通路基因表达量。结果显示，OCL-G的IGF-1表达量显著高于OCL-A(P<0.01);NFATc1与LPAR基因表达量无显著性差异(P>0.05);而ephrinB2基因表达量OCL-G较高(P<0.01);Sema4D基因表达量同样OCL-G较高(P<0.001);At6v0d2则与之相反(P<0.001)。破骨细胞增殖与骨吸收功能变化不显著。结果表明，本试验证实了IGF-1同义突变影响了IGF-1基因与相关通路基因的表达，并解释了破骨细胞增殖与骨吸收没有显著变化的原因，为进一步研究IGF-1同义突变对破骨细胞的影响奠定了基础。
2024年01期 v.44;No.325 170-175页 [查看摘要][在线阅读][下载 3715K] [下载次数：193 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 宋佳纯;曹洪战;李尚;桂若虹;刘吉祥;刘松瓒;芦春莲;
旨在研究不同钙与有效磷水平对高产深县猪繁殖性能、血清标志物及OPG-RANKL-RANK信号系统的影响。试验选择以杜洛克公猪精液人工授精、总产仔数11头及以上的健康深县母猪45头，随机分为5组，每组设9个重复，每个重复1头猪。低水平组钙含量0.55%,有效磷含量0.27%;推荐组钙含量0.63%,有效磷含量0.31%;高水平组Ⅰ钙含量0.71%,有效磷含量0.35%;高水平组Ⅱ钙含量0.79%,有效磷含量0.39%;高水平组Ⅲ钙含量0.87%,有效磷含量0.43%。本试验共进行35 d。结果显示，与推荐组相比，高水平组Ⅲ的钙与有效磷水平显著降低了体质量损失和背膘损失(P<0.05),高水平组Ⅰ的仔猪哺乳期成活率显著升高(P<0.05)。与推荐组相比，高水平组Ⅲ的免疫球蛋白G含量显著下降(P<0.05);与低水平组相比，高水平组Ⅱ的IgM含量显著升高(P<0.05);与推荐组相比，高水平组Ⅱ的甲状旁腺素含量显著下降(P<0.05);低水平组的降钙素含量显著下降(P<0.05),高水平组Ⅱ和Ⅲ的成纤维细胞生长因子23含量显著上升(P<0.05);低水平组的雌激素含量显著上升(P<0.05)。与推荐组相比，高水平组Ⅲ的骨特异性碱性磷酸酶和碱性磷酸酶活性显著下降(P<0.05),低水平组的核因子κB配体受体激活剂含量显著上升(P<0.05)。由此可见，高钙磷水平可以提高哺乳母猪的繁殖性能、免疫球蛋白含量和骨形成水平，其中以钙含量为0.79%,有效磷含量为0.39%时最好。
2024年01期 v.44;No.325 176-183页 [查看摘要][在线阅读][下载 1863K] [下载次数：175 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 杨苑;张俊俊;孙勤强;刘润峰;黄良凤;郑威;付强;
旨在探究抑制水牛BET(bromodomain and extra terminal, BET)蛋白对支持细胞自噬调控的影响。以水牛支持细胞(sertoli cells, SCs)为研究对象，首先从睾丸中分离纯化得到高纯度的SCs,通过免疫荧光法及RT-PCR法检测出水牛SCs的标记基因均正常表达。结果显示，BET蛋白被抑制后，水牛SCs形态和数量发生显著变化，细胞的体积变大，数量减少，折光性减弱，免疫荧光分析和MDC分析也证实其生物学功能受到影响。超微结构分析发现，水牛SCs中产生大量自噬体、自噬溶酶体以及自噬空泡，且自噬相关标记基因的表达量显著提升。说明抑制BET蛋白可引起水牛SCs活性和自噬活性降低，并导致自噬体增多。结果表明，本试验为BET蛋白调控雄性生殖机制的研究提供了依据。
2024年01期 v.44;No.325 184-191页 [查看摘要][在线阅读][下载 7030K] [下载次数：122 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 胡卫东;杜林;张莉;李俊;马跃;刘娟;毕师诚;
为了探究赶黄草提取物对肉仔鸡免疫应激的影响，将60只1日龄红羽肉鸡分为对照(Control)组、脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)组和赶黄草提取物(Penthorum chinense Pursh,PCP)治疗组。LPS组和PCP组分别在12、14、33和35日龄腹腔注射250μg/kg的LPS诱导免疫应激，对照组注射等量的无菌生理盐水。PCP组在基础日粮中添加5 g/kg赶黄草提取物，试验周期为35 d。在第2、5周，每组随机选择5只鸡，经颈静脉采血，在最后1次LPS注射12 h后，每组随机选择10只鸡，以颈椎脱臼的方式处死，收集肝脏。结果显示，PCP显著降低了血清中促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CORT)的水平，提高了生长激素(GH)的水平；降低了血清中γ干扰素(IFN-γ)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及肿瘤坏死因子-β(TNF-β)的含量，提高了血清中白细胞介素-10(IL-10)的含量；有效缓解了LPS引起的肝脏损伤，降低了血清和肝脏中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平；提高了肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)及总超氧化物歧化酶(T-SOD)的含量。结果表明，基础日粮中添加PCP有效缓解了LPS诱导肝脏损伤和炎症反应，缓解了LPS诱导的免疫应激，该研究为肉鸡免疫应激提供有效的防治方案，并为PCP在肉鸡炎症相关性疾病中的应用提供依据。
2024年01期 v.44;No.325 192-198+216页 [查看摘要][在线阅读][下载 8478K] [下载次数：498 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ]