- 夏学妹;陈弟诗;王一丹;向华;植玉鹏;田珺劼;任玉鹏;
为了解四川地区流行的猪腹泻病毒类型及其分子流行病学特征，本研究用荧光定量PCR对2021—2023年四川省多个地区来源的猪腹泻样本进行检测；用RT-PCR对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪A群轮状病毒(PoRVA)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪捷申病毒(PTV)进行分型鉴定，并分析其基因变异性、遗传进化特征和重组事件。结果显示，PEDV、PoRVA、PDCoV和PTV在四川地区仍呈现流行趋势，其总体阳性率分别为：14.2%(40/281)、13.2%(37/281)、15.6%(44/281)和12.5%(35/281),以PEDV与其他病原混合感染最为常见。本次检测共获得6株G2b型PEDV、3株G3型PDCoV、3株G9P[13]型PoRVA、1株G3P[13]型PoRVA、3株5型PTV、1株9型PTV。6株PEDV毒株与CV777、DR13、KPEDV-9、Chinju99、KNU-0801、AJ1102和LW/L等7个疫苗毒株相比在COE区和S1D中和表位区存在多个氨基酸突变位点；其中PSCLZ01和PSCMY04株在进化树中单独形成一个小支。3株PDCoV与四川往年流行毒株的遗传进化距离较近，但与其相比存在6～48个氨基酸的突变。4株PoRVA与早期疫苗株LLR相比，VP4基因有104～108个氨基酸变异，VP7基因有25个共同的氨基酸变异；从进化树上看，RSCMY01/G3P[13]的VP7基因与黑龙江毒株LNCY同属一个分支，但其VP4基因又与四川SCYA-C7聚为一支，表明该株PoRVA可能是在不同基因型毒株跨省际间传播过程中发生了基因重配。值得注意的是，本次检出PTV-5型和PTV-9型样本中，其他腹泻病毒均为阴性，表明上述两种基因型PTV可能是猪腹泻的重要病原。此外，PEDV PSCLZ01株和PDCoV PCSCMY02株的S基因都发生了重组事件，且亲本毒株来自国内外不同地区。上述结果揭示了近年四川地区流行的主要猪腹泻病毒类型及其基因多样性和遗传变异规律，丰富了四川地区猪腹泻病原的分子流行病学资料，为本地区猪腹泻病的防控和净化提供了重要的理论依据。
2024年06期 v.44;No.330 1087-1098页 [查看摘要][在线阅读][下载 2922K] [下载次数：305 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：39 ] - 金帅帅;孙亚娟;刘喜东;金辉;赵红日;尹锐;李影;
为满足对非洲猪瘟病毒(ASFV)的早期、超快速、精准基因检测的市场需求，本研究根据ASFV的p72基因保守区和猪内源性内标(endogenous internal standard, EIS)cytb基因序列设计双重qPCR的引物和探针，并在反应体系中加入UNG酶防污染系统，建立了用于检测ASFV的快速、高灵敏EIS-qPCR方法。结果显示，该方法时间短，可在30 min内完成ASFV的qPCR检测；灵敏度高，最低检测限为4.12拷贝/μL;特异性强，对ASFV p72基因呈现特异性扩增，对猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)均无扩增；重复性好，变异系数(C_v)小于2%;防污染能力强，可有效消除低剂量气溶胶污染产生的假阳性扩增。146例临床样本的检测结果与商业化ASFV检测试剂盒检测结果比较，符合率为100%。本研究建立的EIS-qPCR技术与现有同类技术相比，具有检测更快速、灵敏度更高等特点，适合ASFV感染早期的快速诊断，可为非洲猪瘟的监测和疫情的精准防控提供可靠的技术支撑。
2024年06期 v.44;No.330 1099-1106页 [查看摘要][在线阅读][下载 1576K] [下载次数：202 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：23 ] - 索小易;范国强;李彬;杨晓静;
为了探究猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)感染后宿主的脂质代谢变化，将PEDV感染仔猪及Vero细胞后，收集血液、肠道及细胞样本，并通过血液生化分析、流式细胞术和免疫荧光法检测宿主甘油三酯(triglyceride, TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)含量，通过qPCR检测宿主脂代谢相关酶的基因转录水平变化情况。结果显示：PEDV感染显著提升了宿主总脂质水平，且显著促进了仔猪肠道及Vero细胞脂肪酸和胆固醇代谢相关酶的表达。综上，PEDV感染导致宿主总脂质水平上升，仔猪肠道及Vero细胞脂质代谢重塑，脂代谢基因变化，该研究结果表明，脂代谢相关基因可作为影响PEDV复制的关键靶点，为后续其防控和治疗提供新的理论依据。
2024年06期 v.44;No.330 1107-1112页 [查看摘要][在线阅读][下载 1633K] [下载次数：324 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：9 ] - 李小凤;谢芝勋;阮志华;李孟;李丹;张民秀;谢志勤;罗思思;韦悠;谢丽基;曾婷婷;张艳芳;黄娇玲;王盛;
旨在探讨H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)NP蛋白对小鼠的免疫效果，为研制AIV疫苗奠定基础。试验将H9N2亚型病毒NP基因的扩增产物连接到pET-32a表达载体中，构建重组质粒pET-32a-NP,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)细胞，IPTG诱导后，通过SDS-PAGE和Western blot验证蛋白表达，用NP重组蛋白免疫小鼠，测定小鼠血清中IgG抗体和脾细胞培养上清多细胞因子分泌情况评价其免疫效果。结果显示：NP基因编码区序列全长1 497 bp, NP重组蛋白以可溶性和不可溶性蛋白两种形式存在，Western blot结果可见特异性条带。免疫小鼠后血清产生IgG结合抗体，抗体效价为1∶40 000,与对照组相比，IL-2、IL-5、IL-13分泌量极显著提高(P<0.001),IL-6分泌量显著提高。IL-4和IL-12 p70分泌量与对照组相比升高，却没有显著性差异。而免疫组与对照组相比IL-1β、IL-18、GM-CMF、TNF-α、IFN-γ分泌量被抑制，但差异不显著(P>0.05)。结果表明，NP重组蛋白是一种良好的免疫原，为流感疫苗的深入研究奠定了基础。
2024年06期 v.44;No.330 1113-1119页 [查看摘要][在线阅读][下载 1449K] [下载次数：287 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：14 ] - 鲍君铎;仇相书;高岩;张佳奇;李霄;金鑫;鲁会军;金宁一;
将Ⅱ型登革病毒E蛋白呈递在幽门螺旋杆菌铁蛋白上，构建一种新型登革纳米颗粒候选疫苗，评价疫苗的免疫学指标，旨在为登革疫苗研发提供新思路。经优化合成E-Ferritin-pcDNA3.1重组质粒后转染HEK-293F细胞，对重组蛋白进行表达、鉴定、纯化和构型分析后使用E-Ferritin纳米颗粒疫苗于0、14、28 d后肢肌肉注射免疫小鼠。使用ELISA、中和试验、流式细胞术和淋巴细胞增殖试验检测免疫小鼠的特异性抗体水平、中和抗体水平、脾细胞中CD3~+、CD4~+和CD8~+ T淋巴细胞含量和特异性刺激后脾淋巴细胞的增殖情况。结果显示，胞内表达出大小约69 kDa的目的蛋白，条带单一，纯化质量浓度0.407 g/L,纯度达到82.32%。透射电镜观察到E-Ferritin蛋白可重组成粒径约50 nm的颗粒结构。小鼠免疫试验结果表明，E-Ferritin蛋白具有良好的免疫原性，一免后42 d血清中特异性抗体效价平均值为1∶92 160,主要表达的抗体亚类为IgG1,倾向于Th2型免疫应答，中和抗体效价达到1∶130。流式细胞术结果表明，重组蛋白E-Ferritin作为免疫原可以诱导机体产生更高水平的CD4~+、CD8~+T淋巴细胞免疫应答。淋巴细胞增殖试验中疫苗组特异性刺激水平显著高于非特异性刺激组。综上得出结论，本研究构建的登革病毒包膜蛋白铁蛋白纳米颗粒疫苗具有良好的免疫原性，可为新型登革候选疫苗研究提供参考。
2024年06期 v.44;No.330 1120-1126页 [查看摘要][在线阅读][下载 1578K] [下载次数：368 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：17 ] - 陶禹;冯旭东;樊彦丽;王艳;赵自亮;杨晓伟;张立武;陈翔;赵光伟;
为实现鸭星状病毒1型(Duck astrovirus type 1,DAstV-1)的快速检测，本试验针对DAstV-1(WF1202株)保守区域设计特异性引物，建立了基于染料SYBR GreenⅠ的实时荧光定量PCR(qPCR)方法，利用所建方法对临床样本进行检测，并将其应用于阳性样本病毒的分离和鉴定。结果表明所建qPCR检测方法的检测下限为4.64×10~3拷贝/μL,高于普通RT-PCR方法10倍；对禽类其他常见病原均为阴性，特异性良好；批内、批间变异系数(C_v)分别为0.85%～2.85%和0.21%～2.94%,均低于3.00%,表明其重复性良好。利用该方法对2020-2022年间10省份不同鸭场的35份组织病料进行检测，阳性率为25.71%(9/35),与普通RT-PCR检测结果的符合率为94.29%。任取1份阳性病料接种健康鸭胚进行病毒的分离，收集尿囊液利用所建qPCR方法进行检测，确定为阳性后接种1日龄健康雏鸭进行动物回归试验，感染雏鸭呈现一过性发病但未出现死亡，qPCR检测DAstV-1均为阳性，剖检可见肝脏有轻微出血，病理组织学观察发现肝细胞空泡变性，说明所分离的DAstV-1毒株致病性较弱。综上，本试验成功建立了DAstV-1的荧光定量PCR检测方法，可为DAstV-1的临床诊断、分离鉴定及分子流行病学监测等提供技术支撑。
2024年06期 v.44;No.330 1127-1132+1139页 [查看摘要][在线阅读][下载 1790K] [下载次数：301 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：10 ] - 范泽昌;冯生;梁明征;马杉姗;金宁一;哈卓;鲁会军;
根据CHO细胞密码子偏好性进行SARS-CoV-2 Beta变异株S1基因的优化与合成，并将其克隆至pSN载体，构建重组表达质粒pSN-Beta-S1,转染CHO细胞，获得重组蛋白Beta-S1,通过SDS-PAGE和Western blot方法鉴定重组蛋白Beta-S1的表达，对培养液上清进行亲和层析纯化。将纯化后的重组蛋白Beta-S1联合氢氧化铝佐剂免疫BALB/c小鼠，检测血清中特异性IgG抗体及其亚型，评价针对SARS-CoV-2不同变异株的交叉中和抗体活性。结果显示，成功构建pSN-Beta-S1重组质粒，经CHO细胞表达系统表达了重组蛋白Beta-S1,重组蛋白条带单一，大小约为120 kDa,纯度可达85%以上，可与SARS-CoV-2 RBD蛋白多克隆抗体和Strep标签单克隆抗体特异性结合。S1重组蛋白对BALB/c小鼠具有良好的免疫原性，第3次免疫后14 d,针对RBD和S1蛋白的特异性IgG抗体效价平均可达1∶66 260和1∶133 120,抗体亚型偏向于IgG1,针对SARS-CoV-2野生株，Beta、Delta、Omicron BA1和Omicron BA2变异株的中和抗体分别为1∶629、1∶1 720、1∶374、1∶77和1∶101。本研究利用CHO细胞表达系统成功制备了SARS-CoV-2 Beta变异株S1重组蛋白，免疫BALB/c小鼠后获得了良好的免疫原性和针对不同变异株的交叉中和抗体活性，为广谱SARS-CoV-2疫苗的研究提供了一定的借鉴意义。
2024年06期 v.44;No.330 1133-1139页 [查看摘要][在线阅读][下载 1519K] [下载次数：192 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：12 ] - 蔡旭航;李文良;李基棕;李思远;毛立;许信刚;李彬;
羊肠道病毒(caprine enterovirus, CEV)是新发现的感染山羊的重要腹泻病病原之一。为了解CEV在江苏省部分地区羊群中的流行情况，从江苏省8县市采集了410份羊粪便样品，包括腹泻样品212份、非腹泻样品198份。通过RT-PCR方法检出CEV阳性127份，各地阳性率差异较大，分布在12.50%～62.50%,总阳性率则高达30.98%,分析腹泻和非腹泻样品阳性率，发现CEV是导致山羊腹泻的重要病原之一。对获得的CEV毒株VP1序列同源性和遗传进化分析表明，江苏省流行的CEV亚型包括EV-G5、G7、G21、G22和G23,其中G21～G23均为新的亚型。同源性分析表明，检测毒株的5′-UTR、VP1和2AB序列与CEV-JL14等国内参考毒株的同源性分别为71.8%～95.8%、56.9%～95.0%和77.9%～98.4%,其中HaiMen-SJH株的5′-UTR和2AB序列与其他参考序列差异较大，在遗传进化关系中形成独立分支。根据流调结果，CEV感染在江苏省各地区广泛存在，是造成山羊腹泻的重要病因之一，不同地区流行毒株及流行情况均存在差异。本研究丰富了我国CEV的流行病学资料，为针对性地防控羊新发肠道病毒感染提供了理论依据。
2024年06期 v.44;No.330 1140-1147页 [查看摘要][在线阅读][下载 3519K] [下载次数：143 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：16 ] - 马弘财;曾江勇;元振杰;旺加;王冬经;
为研究马链球菌的生物学特性及全基因组序列，对本实验室保存的1株羊源马链球菌进行复苏、生化试验、药敏试验及动物试验，随后通过全基因组测序并利用生物基因数据库对基因组的基因功能进行注释。生化鉴定结果显示，该菌株能发酵糖类，但硝酸盐、过氧化氢酶、V-P试验、M-R试验结果为阴性；药敏试验结果显示，该菌株对绝大部分抗生素呈高度敏感，对卡那霉素、丁胺卡那呈耐药；动物试验显示，该菌株对小鼠的致死率为100%,并测得该菌株的半数致死量为4.86×10~6 CFU/kg;小鼠的病理切片结果显示：肺脏、肝脏、肾脏、脾脏均有不同程度的病变；全基因组测序结果显示，该菌株基因组总长为2 272 497 bp, G+C的含量为41.1%,预测含有2 124个CDS区；RNA预测结果显示：rRNA的数量为15个，tRNA数量为57个含有4个前噬菌体和基因岛，VFDB数据库中有362个与致病性相关的基因，不含CRISPR序列。本研究解析了羊源马链球菌的全基因组，同时也为该病的治疗与防控提供了理论依据。
2024年06期 v.44;No.330 1148-1155页 [查看摘要][在线阅读][下载 2588K] [下载次数：306 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：7 ] - 王媛媛;杨乐真;袁祥;彭旭;刘心语;彭远义;李能章;
化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes,TP)是一种重要的畜禽病原，可致动物化脓性肺炎、关节炎、乳腺炎等多种疾病。重庆云阳某牛场新进犊牛发生呼吸道疾病并伴随死亡，剖检发现肺部出现化脓结节，组织触片染色观察，发现大量单一短小杆菌，分离培养及16S rRNA序列测定分析，确诊其感染病原为化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes),命名为TpCQ-yy1。TpCQ-yy1在兔血平板上可致双层溶血环，发酵葡萄糖、赖氨酸等，其耐药特性可随培养基质改变而发生部分变化；胸腔和腹腔途径感染，TpCQ-yy1可致小鼠肺部及腹部的化脓性病变并伴随死亡，皮下和肌肉途径感染仅注射部位有化脓灶，并与感染剂量有关，无致死性；TpCQ-yy1基因组大小为2.335 Mb,编码2 107个蛋白，进化分析与牛源化脓隐秘杆菌TP1株相近，与其他动物源菌株差异较大；感染巨噬细胞可促进其细胞炎症因子分泌，制备TpCQ-yy1灭活菌苗及重组溶血素(rPLO)亚单位疫苗，分别通过皮下和肌肉途径免疫小鼠，均产生较高水平抗体，但对TpCQ-yy1腹腔途径攻毒的免疫保护率为33.3%～66.7%。该研究为深入了解化脓隐秘杆菌生物学特性、致病性及其防控提供了基础依据。
2024年06期 v.44;No.330 1156-1164页 [查看摘要][在线阅读][下载 2143K] [下载次数：240 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：12 ] - 武绍碧;令狐远凤;潘永;杨婉;陈世雄;叶景芬;杨琦;
为探究孔蛋白基因ompW、ompS、ompD对鼠伤寒沙门菌的生物学特性及毒力的影响，本研究利用λ-Red同源重组系统构建相应突变株，通过检测生长曲线、泳动性、生化特性、体外遗传稳定性、生物被膜形成能力、耐药性、以及半数致死量(LD_(50))来比较鼠伤寒沙门菌标准菌株与各突变株之间的区别。结果显示，相比标准株，ompD和ompW基因突变株对细菌生长速率和运动能力影响较小，而ompS基因突变株的生长速率和运动能力则明显降低；3个突变株均不影响鼠伤寒沙门菌的生化特性，也不影响遗传稳定性，但能不同程度影响其对多种常用抗生素的敏感性，且均导致成膜能力极显著下降(P<0.01);LD_(50)毒力测定中，3个突变株毒力均导致鼠伤寒沙门菌的毒力下降，其中ompS基因突变株毒力下降最明显，LD_(50)为标准菌株的25倍。综上所述，孔蛋白ompW、ompS、ompD基因突变能影响鼠伤寒沙门菌的部分生物学特性。本研究结果为进一步研究孔蛋白ompW、ompS、ompD基因的生物学功能及沙门菌致病性奠定了试验基础。
2024年06期 v.44;No.330 1165-1174页 [查看摘要][在线阅读][下载 1806K] [下载次数：185 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：5 ] - 张雨薇;汪丽;吕芬芬;苏艳;
为了解新疆地区马腺疫链球菌(Streptococcus equi subsp.equi,S.equi)分离株XJ 5012的基因组特征，探究其毒力及进化、耐药表型及耐药基因型的相关性，为马腺疫的有效防控提供理论依据。本研究对S.equi XJ 5012进行了全基因组测序，对获得的测序序列进行16S rRNA进化、SeM基因分型、耐药基因及毒力基因的比较与分析，并对其进行了抗菌药物敏感性试验。药敏试验结果表明，该菌对阿莫西林、氨苄西林、头孢呋辛、头孢噻呋、头孢西丁、链霉素、红霉素、土霉素、左氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、利福平、克林霉素、磺胺嘧啶钠共14种抗菌药物敏感，对青霉素、庆大霉素、克拉霉素、多西环素、四环素、恩诺沙星共6种抗菌药物耐药。全基因组测序结果表明，S.equi XJ 5012基因组大小为2.21 Mb, GC含量为41.31%,含有2 264个编码基因。耐药基因数据库注释分析的结果显示，该菌株携带有135个耐药相关基因，且耐药基因主要分为大环内脂类、喹诺酮类、氨基糖苷类、多肽类、四环素和β-内酰胺类抗生素耐药基因，耐药基因的携带情况与药敏试验验结果具有明显的一致性。毒力基因数据库注释显示该菌株携带197个毒力相关基因，主要包括黏附、抗吞噬、胞外酶、分泌、铁摄取等毒力基因。基于16S rRNA基因构建系统发育树显示菌株XJ 5012与S.equi 4047亲缘关系最近；基于SeM基因分型分析结果显示S.equi XJ 5012为SeM-217,该基因型与新疆地区分离株的SeM-209、SeM-215及国外分离株的SeM-195和SeM-196亲缘关系较近。本研究利用第3代测序技术对XJ 5012基因组进行深度测序分析，为更全面深入地认识该菌的基因组、分子流行特征及耐药性提供了参考，并为今后S.equi感染的防控及致病机制研究奠定试验基础。
2024年06期 v.44;No.330 1175-1183+1193页 [查看摘要][在线阅读][下载 2414K] [下载次数：119 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：4 ] - 刘伟;吴飞;陈学秋;杜振东;马光旭;杜爱芳;
胰岛素样肽(insulin-like peptides, ILPs)在线虫新陈代谢、信号转导、发育进程等生物学过程中发挥重要作用，是控制动物寄生线虫感染的潜在靶标。为探究ILPs在寄生线虫发育与感染中的具体作用，对捻转血矛线虫(Haemonchus contortus,H.contortus)ILPs编码基因进行全基因组鉴定、序列和进化分析；通过实时荧光定量PCR方法检测H.contortus不同发育时期ILPs编码基因的转录水平；经原核表达ILPs重组蛋白用于多克隆抗体制备及Western blot分析；采用间接免疫荧光定位试验明确ILPs在H.contortus虫体不同发育阶段的组织分布情况。结果显示，与秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)相比，H.contortus ILPs编码基因发生显著缩减，仅有3个具备拮抗性分子特性的ILPs编码基因；ILPs编码基因在H.contortus感染性三期幼虫阶段的转录水平最高；ILPs蛋白主要分布于感染性幼虫的肠道与皮下组织。本研究鉴定3个可能参与调控H.contortus幼虫发育进程及感染过程的拮抗性ILPs编码基因，为寄生线虫在宿主体内的滞育现象研究以及潜在干预靶标的筛选奠定了基础。
2024年06期 v.44;No.330 1184-1193页 [查看摘要][在线阅读][下载 2262K] [下载次数：99 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 吉克日洪;向阳;陈虹汐;袁东波;尹念春;郝力力;
旨在了解四川省雷波县山羊和绵羊源寄生蜱种类及其携带斑点热群立克次体(spotted fever group Rickettsia,SFGR)和无形体(Anaplasmataceae)的流行情况。采集山羊和绵羊源寄生蜱，先进行形态学初步鉴定，然后提取蜱总DNA,分别扩增蜱ITS-2、立克次体gltA和ompA与无形体16S rRNA和rpoB的部分基因片段，并对所有PCR阳性产物测序、比对并构建遗传进化树，以确定蜱种类及其感染SFGR和无形体的情况。共采集到353只山羊和绵羊体表寄生蜱，经鉴定均为长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)。SFGR总感染率为22.66%(80/353),仅检出1个种类R.raoultii,与西藏报道的银盾革蜱上分离的R.raoultii(JQ792163)亲缘关系最近。无形体总感染率为87.82%(310/353),共检出6种无形体和2种埃立克体，分别为A.bovis、A.capra、A.marginale、Anaplasma cf.marginale、Candidatus A.mediterraneum、Anaplasma sp.、Ehrichia chaffeensis和Ehrichia sp。部分长角血蜱存在混合感染，混合感染率为7.37%(26/353)。结果表明长角血蜱可能是当地的优势蜱种，SFGR和无形体的感染率较高，今后应加强上述蜱传病原的监测。
2024年06期 v.44;No.330 1194-1203页 [查看摘要][在线阅读][下载 1801K] [下载次数：335 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：6 ] - 刘峰;伍思敏;张耀;廖树森;方六荣;胡敏;王春群;
为制备捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)天然H11蛋白的单克隆抗体，以伴刀豆球蛋白(Concanavalin A,Con A)凝集素提取的天然H11蛋白为免疫原，免疫4～6周龄雌性BALB/c小鼠，3次免疫后分离小鼠脾细胞并将其与SP2/0细胞进行融合，通过间接ELISA方法筛选，获得2株能稳定分泌抗H11蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为A1E3和A10E1。通过亚型鉴定和免疫学分析显示，2株单克隆抗体的重链均属于IgG1,轻链均为κ型，并且这2株单抗均能识别虫体天然抗原H11。免疫组化定位和体外幼虫发育抑制试验表明，mAb A1E3可以定位到成虫的肠道微绒毛部位，该抗体能够抑制四期幼虫的生长发育。单抗的成功制备不仅为研究H11蛋白保护性抗原表位以及开发表位疫苗奠定基础，也为单抗治疗动物捻转血矛线虫病提供了潜在的应用前景。
2024年06期 v.44;No.330 1204-1212页 [查看摘要][在线阅读][下载 1897K] [下载次数：147 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：4 ] - 王泽祥;罗永禄;薛萍;车亮;王由森;苟惠天;孙晓林;
豆状囊尾蚴病是由豆状带绦虫(Taenia pisiformis)的幼虫——豆状囊尾蚴(Cysticercus pisiformis)寄生于家兔等啮齿类动物所引起的一种寄生虫病，该病威胁养兔业发展和兔肉食品安全。为了鉴定TPO18抗原在豆状囊尾蚴和豆状带绦虫的分布，并建立兔豆状囊尾蚴病抗体间接ELISA检测方法，本研究原核表达兔豆状囊尾蚴18 kDa抗原，经蛋白纯化获得了可溶性的TPO18蛋白。TPO18蛋白免疫家兔制备了效价达1∶51 200多克隆抗体。蛋白免疫印迹鉴定多克隆抗体与兔豆状囊尾蚴总蛋白、豆状带绦虫总蛋白及重组蛋白TPO18的反应原性，免疫组织化学法鉴定兔豆状囊尾蚴和豆状带绦虫虫体TPO18抗原分布，多克隆抗体与兔豆状囊尾蚴总蛋白、豆状带绦虫总蛋白及重组蛋白TPO18具有良好的反应原性，兔豆状囊尾蚴TPO18抗原主要分布于生发层和绒毛层，豆状带绦虫TPO18抗原主要分布在吸盘及吸盘周围和集合管上层细胞及绒毛层。以TPO18重组抗原包被酶标板，优化确定间接ELISA各项技术参数，建立基于TPO18抗原的间接ELISA抗体检测方法。经优化后的ELISA检测方法的检测条件为血清稀释度1∶100,抗原包被质量浓度为5 mg/L,抗原包被条件37℃1 h+4℃过夜，封闭条件1%BSA 37℃封闭60 min,血清反应时间60 min,酶标二抗稀释度1∶1 000,酶标二抗作用时间60 min,底物反应时间15 min,临界值0.295。ELISA方法的灵敏性、特异性和重复性检测结果表明，该方法灵敏度较高，特异性较好，不与兔瘟、兔肝片吸虫、兔球虫、兔弓形虫等的阳性血清发生交叉反应；批内和批间重复性试验的变异系数均小于7%,重复性良好。运用该ELISA方法与剖检检测试验分别对86份临床血清样品检测，两种方法检测结果符合率为97.7%。综上所述，本研究成功建立了兔感染豆状囊尾蚴抗体的间接ELISA方法，为兔感染豆状囊尾蚴后感染情况监测提供了新的监测方法。
2024年06期 v.44;No.330 1213-1222页 [查看摘要][在线阅读][下载 1418K] [下载次数：166 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ]