- 杨泓;韩笑;孔朋莉;曾若雪;宋厚辉;程昌勇;张晓峰;帅江冰;
为建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的猪痘病毒(swinepox virus, SWPV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)的定量检测方法，本研究采用SWPV的TK1基因作为本研究的靶基因，通过反应体系优化，确定ddPCR的退火温度、引物和探针浓度；并对ddPCR方法的敏感性、特异性、重复性进行了确定，同时对临床样本进行了检测。结果显示，建立的ddPCR方法的最佳退火温度为58℃,最佳的引物和探针浓度分别为700和300 nmol/L。敏感性试验结果显示，在动态范围内ddPCR方法的最低检测限为6.03拷贝/反应，显著高于行业标准中qPCR方法(131拷贝/反应);特异性结果显示，ddPCR方法与猪塞内卡病毒、猪伪狂犬病病毒等7种病毒核酸均无非特异性反应；重复性结果显示，批间与批内变异系数均小于10%,具有可重复性。以建立的ddPCR法和现有行标qPCR法平行对216份临床样品进行了SWPV核酸检测，ddPCR方法阳性检出率(10.18%)高于qPCR (6.01%)。本研究建立的SWPV ddPCR检测方法具有特异、敏感等优点，可用于SWPV的定量检测。
2025年12期 v.45;No.348 2579-2585+2597页 [查看摘要][在线阅读][下载 2042K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 张梦凡;刘武函;范仲鑫;尚玲;唐小明;王卫国;谢怡灵;张坤;彭志;鲁杏华;王贵平;胡巧云;
非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)引起的一种急性、烈性、接触性传染病，能够感染家猪和野猪，并对全球经济及养猪业的健康发展构成严重威胁。近几年，我国流行ASFV毒株基因组也发生着一系列的缺失/重组等变异，为了解临床ASFV流行情况，本研究通过Nanopore三代测序技术建立一种ASFV二型和重组型全基因组测序方法。以基因Ⅰ型(Pig/SD/DY-1/2021)、基因Ⅱ型(HLJPig/HLJ/18)及重组型毒株Pig/jiangsu/LG/2021为参考毒株，设计32对引物并分为8个引物池对样本进行多重PCR(multiplex polymerase chain reaction, mPCR),利用Nanopore测序技术对扩增产物进行测序，对得到的测序结果进行生物信息数据分析，建立了ASFV二型毒株和重组型毒株全基因组测序方法。应用该方法成功从淋巴结样本中获取2个毒株全基因组，ASFV重组型毒株China-HN-6和Ⅱ型毒株China-HN-5拼接后的基因组大小分别为185 094和189 107 bp,且China-HN-6和China-HN-5平均测序深度分别为574×和828×,China-HN-6与PIG/Jiangsu/LG/2021参考基因组相比，基因组变异为0.014 0%,其中缺失占0.006 5%、插入占0.001 6%、单核苷酸变异占0.005 9%;China-HN-5与Pig/HLJ/18参考基因组相比，基因组变异为0.013 0%,其中缺失占0.003 7%、插入占0.003 2%、单核苷酸变异占0.006 4%。经一代测序验证表明，在B646L、CD2V和CVR等关键基因及部分随机选取变异位点上，此方法结果与一代测序结果100%一致。此外，该研究中还发现了ASFV重组型毒株在B602L基因区间存在56 bp重复序列的插入(通过一代测序技术进行了验证)。研究成功建立了基于纳米孔测序平台的ASFV重组型毒株和Ⅱ型毒株全基因组测序方法，该方法具有良好的简便性和可靠性，为当前ASF的防控和分子流行病学研究提供了一个重要手段。
2025年12期 v.45;No.348 2586-2597页 [查看摘要][在线阅读][下载 1993K] [下载次数：1 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 董传荣;金海林;刘新鑫;闫巍文;李虹瑾;尹仁福;
新城疫(Newcastle disease, ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)引发的一种高度传染性烈性禽病，持续威胁全球家禽养殖业。尽管目前已广泛实施疫苗接种，但散发疫情依然频发，提示其致病机制尚未被完全阐明，需探索新的防控靶点。DNA损伤应答(DNA damage response, DDR)是宿主维持基因组稳定的重要机制，近年来被发现与病毒感染密切相关。然而，关于RNA病毒特别是NDV与DDR之间的相互作用研究仍较匮乏。本研究以鸡成纤维细胞(DF-1)为模型，系统探究NDV感染是否诱导宿主DNA损伤、激活DDR通路，并分析其对病毒复制的影响。结果表明，NDV感染可显著诱导宿主细胞DNA损伤，并激活以ATM-Chk2为核心的DDR信号通路，该激活依赖于病毒的复制活性。进一步试验发现，ATM激酶抑制剂KU55933或沉默Chk2基因均可显著抑制NDV复制，提示ATM-Chk2通路在病毒复制中发挥促进作用。综上所述，本研究揭示了NDV可通过激活ATM-Chk2信号通路调控宿主细胞环境，进而促进自身复制的分子机制，为深入理解NDV致病机制及开发靶向DDR的新型抗病毒策略提供了理论依据。
2025年12期 v.45;No.348 2598-2605+2629页 [查看摘要][在线阅读][下载 2284K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李小凤;罗思思;谢芝勋;谢丽基;韦悠;谢志勤;吴嫒琼;张艳芳;李孟;
旨在探究血清4型禽腺病毒(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)感染LMH细胞PI3K/Akt信号通路的激活情况及其对病毒复制的影响。首先测定FAdV-4的TCID_(50),以适宜感染复数(MOI)感染LMH细胞。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测感染后不同时间点PI3K、GSK-3β和FOXO基因的表达水平。为明确PI3K/Akt通路在病毒复制中的作用，用PI3K特异性抑制剂LY294002预处理后进行病毒感染，qPCR检测病毒复制水平的变化，Western blot分析Akt、磷酸化Akt(P-Akt)及磷酸化GSK-3β(P-GSK-3β)的蛋白表达水平。结果显示，FAdV-4的TCID_(50)是0.1 mL 10~(-4.36);与对照组相比，FAdV-4感染后显著上调了PI3K、GSK-3β和FOXO基因的表达水平，其表达峰值分别出现在感染后72、72和96 h,分别为对照组的9.67倍(P<0.01)、1.71倍(P<0.05)、5.38倍(P<0.01);Western blot分析表明，Akt、P-Akt、P-GSK-3β蛋白在6～96 h均检测到相应条带，且维持较高的表达水平。LY294002处理后显著抑制病毒复制，降低P-Akt和P-GSK-3β的磷酸化水平。结果表明，PI3K/Akt信号通路在FAdV-4感染过程中被激活，并可能通过调控下游效应分子参与病毒复制过程。
2025年12期 v.45;No.348 2606-2611页 [查看摘要][在线阅读][下载 1426K] [下载次数：1 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王鑫源;朱晓琛;刘婷婷;张东超;金天明;
为构建禽偏肺病毒(avian metapneumovirus, aMPV)G和F蛋白的抗原多表位DNA疫苗，并对其免疫反应进行分析，本研究采用免疫信息学方法对aMPV G及F蛋白进行优势抗原表位筛选，并设计了多表位基因W。通过ProtParam、VaxiJen、ExPASy、TMHMM和SOPMA等在线软件预测分析了其理化性质、亲水性、跨膜区、蛋白二级结构及三级结构等生物学信息，并将表位基因W、串行基因G-F(G)以及W-G-F(D)与真核表达载体pEGFP-N1进行了连接，获得的重组质粒pEGFP-W、pEGFP-G和pEGFP-D分别转染到HEK293T细胞中，并采用Western blot方法确定目标蛋白的表达情况。对7日龄的雏鸡进行重组质粒肌内注射，二免后检测免疫鸡血清中的特异性抗体IgG、细胞因子和T淋巴细胞的含量。结果显示，所构建的表位蛋白具有结构稳定、免疫原性良好，并且没有副作用等特点。重组质粒pEGFP-W、pEGFP-G和pEGFP-D目的基因序列与预期一致，能够在真核细胞中表达出目的蛋白，且没有显著的细胞毒性。相较于pEGFP-N1和PBS组，pEGFP-D组经过二次免疫后，免疫鸡的血清中抗aMPV IgG抗体的水平明显上升(P<0.01),与pEGFP-W组的水平相似；在pEGFP-D组鸡的血清中，细胞因子IFN-γ、IL-2的水平，以及CD4~+和CD8~+ T淋巴细胞的含量也都明显高于pEGFP-N1和PBS组(P<0.01)。综上，构建的pEGFP-D多表位DNA疫苗能够激发鸡的体液和细胞免疫反应，为开发预防aMPV的多表位疫苗提供了坚实的基础。
2025年12期 v.45;No.348 2612-2621页 [查看摘要][在线阅读][下载 2522K] [下载次数：1 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张佳雯;项钰;李旭阳;陈秋会;高萌萌;王一斌;周玉龙;张国华;
为建立牛冠状病毒(bovine coronavirus, BCoV)体外感染的牛小肠上皮细胞(bovine intestinal epithelial cell, BIEC)模型，本研究无菌分离未食初乳的健康新生犊牛十二指肠细胞，通过相差贴壁法纯化上皮细胞，并利用间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay, IFA)检测上皮细胞标志物角蛋白CK-18的表达以确认细胞纯度。同时，以1MOI的BCoV感染纯化后的BIEC,利用IFA、Western blot和RT-qPCR等方法分别检测BIEC对BCoV的易感性、病毒感染细胞不同时间点的BCoV N蛋白表达及病毒生长曲线。结果显示，分离出肠上皮细胞形态均一，呈鹅卵石样或砖块样；IFA检测结果显示，细胞表达上皮细胞分子标记物CK-18。BIEC感染BCoV后呈现可见的“拉网”状细胞病变，IFA检测到BCoV N蛋白的表达，Western blot试验结果显示，BIEC细胞感染BCoV后6～24 h的BCoV N蛋白表达量随感染时间延长显著上升(P<0.05);RT-qPCR显示病毒载量于感染后48 h达到峰值，随后下降并趋于平稳。结果表明，本研究成功建立了BCoV感染的BIEC体外模型，证实了BIEC对BCoV的易感性，为BCoV的致病机制研究和抗病毒药物开发提供了重要试验平台和技术基础。
2025年12期 v.45;No.348 2622-2629页 [查看摘要][在线阅读][下载 1761K] [下载次数：2 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 程悦宁;王振军;曹泽昭;王春霞;吴丹妮;李响;张海丽;闫曼平;张竞;关继羽;
为了建立一种快速、灵敏的牛疱疹病毒4型(bovine herpesvirus 4,BoHV-4)SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测技术，依据BoHV-4的基因组序列，设计与优化引物浓度和退火温度，并以此建立了检测BoHV-4的qPCR方法以及确定方法的灵敏度、特异性及重复性。结果显示，优化后qPCR体系的最佳引物浓度为400 nmol/L,最佳退火温度为60℃;标准曲线为y=-3.680x+39.323,R~2=0.999 1;该方法的最低检测下限为37.5 copies/μL,可在70 min内完成样本检测；组内重复变异系数(coefficient of variation,Cv)值小于2%;组间重复Cv值小于3%;特异性试验证实，该方法对牛疱疹病毒1型(bovine parainfluenza virus 1,BoHV-1)、牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)、牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus 3,BPIV-3)无交叉反应；采用建立的qPCR和PCR方法对118份牛眼鼻拭子、阴道分泌物拭子、粪拭子、血液等(其中BoHV-4阳性样品25份)样品进行检测，检测结果与临床检测结果相符。本研究建立的BoHV-4 SYBR GreenⅠqPCR检测方法具有高灵敏度、强特异性和良好重复性，为牛群健康监测和疾病防控提供了有力工具。
2025年12期 v.45;No.348 2630-2637页 [查看摘要][在线阅读][下载 2806K] [下载次数：2 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 徐可心;孟媛;王涵鑫;张园;杜涛峰;
采集疑似猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)感染猫的眼鼻口分泌物，接种CRFK细胞分离得到1株病毒，命名为FCV-HUA,通过PCR、病毒形态学观察、生长动力学试验、全基因组序列测定与同源性分析等对其进行了鉴定。结果显示，FCV-HUA可在CRFK细胞中增殖并产生明显的细胞病变效应(cytopathic effect, CPE);用FCV特异性引物对分离毒株进行PCR鉴定，可得到674 bp特异性条带；电镜观察到FCV-HUA的病毒粒子特征符合FCV形态结构，直径约为40 nm的球形病毒粒子；测序结果显示，FCV-HUA的VP1基因长度为2 007 bp,基因组全长7 785 bp;全基因组测序同源性分析结果显示，FCV-HUA与参考序列的核苷酸序列相似性在77.6%～85.0%之间，其中与FB-NJ-13毒株核苷酸序列同源性最高，为85.0%,属同一分支；生长动力学试验结果显示，FCV-HUA病毒滴度在24 h达到最高，TCID_(50)为10~(-9.9)/mL;致病性分析结果显示，用FCV-HUA攻毒后，可使猫出现明显的上呼吸道感染症状。本研究分离鉴定1株FCV,为西安地区猫杯状病毒病的防控提供了参考。
2025年12期 v.45;No.348 2638-2646页 [查看摘要][在线阅读][下载 2822K] [下载次数：1 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 于莹;林淦;王佳慧;谢铭;付玉和;陈国斌;吴培琰;孙静;宋厚辉;程昌勇;吴芹;
针对常见且危害极大的对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus, WSSV)建立荧光型重组酶介导核酸扩增技术(recombinase aided amplification, RAA)。针对WSSV高保守性基因vp28设计多对RAA引物，并筛选出核酸扩增效率最高的引物。在此基础上，优化荧光型RAA反应体系，根据反应体系的优化结果制备WSSV荧光RAA试剂盒，最后对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、稳定性和实际样本应用情况进行评估。结果显示，试剂盒具备良好的特异性，只对WSSV敏感，对其他造成混合感染的病原无反应。灵敏度高：最低检出限为2.744 copies/μL;精密度高：重复性结果的变异系数(Cv)小于5%;稳定性良好：试剂盒在-20℃可以稳定保存1年，在室温(25℃)和夏日高温(37℃)天气条件下也可以实现多日的稳定运输、使用和保藏。以OIE推荐的荧光定量PCR方法为参考，对60份对虾临床样品进行检测，结果显示，试剂盒的检测准确率为98.00%(59/60),灵敏度为100.00%(29/29),特异性为96.77%(30/31)。而且本试剂盒在37℃下21 min就可以实现检测，操作方便，适用于现场检测。综上所述，建立的WSSV荧光RAA试剂盒具备快速、灵敏度高、特异性强、精密度高、稳定性良好和操作简便等特点，在水产疫病精准快速检测中具有广泛的市场应用前景。
2025年12期 v.45;No.348 2647-2654+2675页 [查看摘要][在线阅读][下载 2258K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 梁泰宇;崔省委;李欢语;李仕辰;王奥云;赵清梅;马云;余永涛;
梭杆菌属是一类专性厌氧革兰阴性杆菌，其在新生犊牛肠道内丰度的显著变化与犊牛腹泻的发生发展紧密相关。准确评估犊牛肠道梭杆菌的丰度可为阐明该微生物与犊牛腹泻的互作机制奠定方法学基础。本研究旨在建立一种针对犊牛肠道梭杆菌的实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法，并探讨其与犊牛腹泻及相关病原感染的临床相关性。基于GenBank中梭杆菌16S rRNA基因序列，设计梭杆菌属特异性引物rob-F/R。构建重组质粒pMD~(TM)19-T-FUS作为标准品，优化反应体系，并系统验证方法的特异性、灵敏度及重复性。利用该方法检测330份犊牛临床粪便样本，结合粪便评分、日龄阶段及病原感染类型，分析犊牛肠道梭杆菌丰度的变化及其临床相关性。结果显示，本研究建立的方法特异性强，仅对梭杆菌属细菌产生扩增，对近缘物种和其他常见犊牛肠道细菌无特异性信号；灵敏度达2.74×10~2 copies/μL,批内和批间变异系数分别为0.14%～0.15%和0.11%～0.31%,梭杆菌检出率显著优于普通PCR(检出率82.7%比41.8%)。临床分析表明，腹泻组梭杆菌生物量极显著高于未腹泻组(P<0.01),且8～14日龄犊牛梭杆菌丰度达峰值，与腹泻高发期吻合；隐孢子虫单一感染组和牛轮状病毒单一感染组梭杆菌生物量显著高于健康组(P<0.05),且其丰度与腹泻严重程度呈正相关(评分3分组，与健康组相比，P<0.01)。本研究建立了犊牛梭杆菌属的高效RT-qPCR检测技术，证实梭杆菌丰度升高与犊牛腹泻及隐孢子虫感染密切相关，为犊牛肠道梭杆菌的检测及梭杆菌与宿主间的互作机制研究提供了可靠工具。
2025年12期 v.45;No.348 2655-2665页 [查看摘要][在线阅读][下载 2732K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 刘艺佳;刘伟;高闪电;卢海燕;宁小雨;黄海燕;周彤;杨丰利;邵军军;
为了提高重组口蹄疫(foot-and-mouth disease, FMD)多表位病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)抗原在大肠杆菌表达系统中的可溶性表达和VLP组装率，保证VLP结构及抗原的功能，本研究将实验室构建的pET-30a/OME4-VLP重组表达质粒与分子伴侣质粒pTf16共转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，通过LAB(Kan~+)筛选阳性重组菌，并优化诱导表达条件，实现口蹄疫O型VLP抗原在大肠杆菌的可溶性表达和正确组装，同时，通过蔗糖密度梯度纯化蛋白、透射电镜检测VLP粒径、Western blot和免疫小鼠试验评价其免疫活性。结果显示，pTf16显著提高了OME4-VLP的可溶性表达量，且在培养基中添加L-阿拉伯糖(1 g/L)与IPTG(80μmol/L)低温诱导(16℃)20 h后，可溶性蛋白的表达量达到峰值；透射电镜观察可见OME4-VLP呈典型的VLP结构，约为28 nm,与预期大小相符；Western blot结果显示，可溶性蛋白能与口蹄疫O型单克隆抗体发生特异性免疫反应；免疫小鼠结果显示，与包涵体组和对照组相比，可溶性OME4-VLP免疫组的血清抗体水平和细胞免疫反应均高于包涵体组和对照组(P<0.05)。综上，本研究结果显示，OME4-VLP抗原在pTf16分子伴侣的协同作用下，实现了在大肠杆菌表达系统中可溶性自组装，增强了重组蛋白的免疫原性，为利用大肠杆菌规模化生产的口蹄疫多表位VLP疫苗提供了基础资料。
2025年12期 v.45;No.348 2666-2675页 [查看摘要][在线阅读][下载 1831K] [下载次数：1 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 任培森;吕文静;刘学;刘海霞;黄金海;丁壮;
为建立并优化禽流感病毒H9亚型TJ-4株在LMH悬浮细胞中的培养工艺，本研究通过对禽流感病毒TJ-4株接种LMH悬浮细胞的细胞初始密度、培养温度、收获时间、病毒感染复数(MOI)等关键参数进行系统研究，并对LMH悬浮细胞培养的禽流感病毒TJ-4株细胞源疫苗和鸡胚源疫苗进行安全性评价和效力检验。结果表明，在细胞初始密度4.0×10~6 cells/mL、MOI为0.002 50、培养温度为35℃,培养72 h后，血凝效价最高。免疫SPF鸡后，0.5 mL剂量组在接种后28 d的HI抗体平均滴度达到log_2(12.8),攻毒后免疫组未检测到病毒，保护率为100%,且细胞源与鸡胚源疫苗的抗体水平和保护效果无显著性差异。试验期间免疫鸡只未出现异常反应，疫苗安全性符合标准。结果表明，优化后的工艺参数可稳定生产TJ-4株灭活疫苗，其免疫原性和保护效果可靠，适用于规模化生产。
2025年12期 v.45;No.348 2676-2683页 [查看摘要][在线阅读][下载 2568K] [下载次数：1 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李鹏程;李开宁;未安琪;岑晓玉;张万坡;程国富;谷长勤;
通过建立小鼠乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)感染模型，结合16S rRNA高通量测序、荧光定量PCR及免疫组化技术，分析感染后3、6、9 d的肠道菌群组成及脑、结肠组织中血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide, VIP)和P物质(substance P,SP)的动态表达。结果显示，JEV感染后小鼠肠道菌群结构显著改变：门水平上，厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria)丰度降低(P<0.05);属水平上，乳酸杆菌属(Lactobacillus)丰度下降，拟杆菌属(Bacteroides)和肠球菌属(Enterococcus)丰度升高(P<0.05)。脑组织中VIP与SP的mRNA表达均随感染时间延长显著下降(P<0.05),而结肠中两者表达呈先上升(6 d达峰值)后下降趋势。蛋白水平表达在脑组织中先上升后下降，SP在3 d表达最高，VIP在6 d表达量最高；而结肠中SP在6 d阳性信号最强，9 d减弱；VIP的表达量先降低，随后在9 d恢复正常水平。组织病理学显示，9 d小鼠脑组织出现神经元坏死及血管周围炎性浸润，结肠黏膜萎缩、肌层变薄。结果表明，JEV感染通过调控肠道菌群及脑肠肽(VIP、SP)的表达，可能介导肠脑轴功能紊乱，提示靶向菌群或脑肠肽或可为乙型脑炎防治提供新策略。
2025年12期 v.45;No.348 2684-2691+2707页 [查看摘要][在线阅读][下载 2773K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李佳欢;陆思远;黄志伟;郭晓艳;张万坡;胡薛英;程国富;谷长勤;
将构建的日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)非结构蛋白真核表达质粒pcDNA3.1(+)-NS-Flag转染至小鼠中脑多巴胺能神经元(mouse midbrain dopaminergic neuron cells, MN9D),构建各非结构蛋白过表达细胞模型，并通过观察各组细胞形态变化、利用ELISA技术检测细胞上清液中IL-1β含量、RT-qPCR和Western blot检测各组细胞的炎症小体、焦亡蛋白相关分子的转录和蛋白水平，确定JEV非结构蛋白在MN9D中引起细胞焦亡的功能与机制；同时，利用NLRP3抑制剂MCC950处理过表达NS4A细胞，确证非结构蛋白在MN9D中引起细胞焦亡(pyroptosis)的机制。结果显示，NLRP3的mRNA水平在各非结构蛋白过表达的细胞中均呈现不同程度地显著上升，但在蛋白水平上只有过表达JEV NS4A和NS4B组有显著性差异(P<0.01),且仅有NS4A组能够激活Caspase-1,切割焦亡蛋白GSDMD-N端。同时，MCC950药物干预后，细胞形态有所恢复，细胞病死率和IL-1β含量降低，NLRP3炎症小体的激活和GSDMD的剪切被抑制。上述结果揭示JEV编码的NS4A是引起MN9D细胞发生焦亡的关键蛋白，且该蛋白通过NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路实现诱导细胞焦亡反应。
2025年12期 v.45;No.348 2692-2698页 [查看摘要][在线阅读][下载 1970K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 赵家欣;徐春生;陈旭珂;黄俊程;魏琳颖;张玉霞;张艳艳;孙艳;薄新文;王正荣;
通过生物信息学分析、原核表达和rEgLAP对犬外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)的影响，探究细粒棘绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)亮氨酸氨基肽酶(leucine aminopeptidase, LAP)的生物学功能，为之后研究抗Eg疫苗提供基础数据。从NCBI GenBank数据库中获取细粒棘球绦虫亮氨酸氨基肽酶(EgLAP)的基因序列，采用生物信息学软件分析该基因的B细胞抗原表位等。先通过原核表达成功制备重组蛋白，随后采用Western blot技术对其抗原性进行分析；同时利用实时荧光定量PCR检测EgLAP基因在原头蚴与成虫中的相对转录水平，并从NCBI数据库下载EgLAP基因序列构建进化树；最后，结合细胞增殖试验与qPCR检测，评价LAP对犬PBMCs功能的影响。结果显示，成功克隆了EgLAP基因的ORF编码序列大小为1 608 bp。经SDS-PAGE验证，rEgLAP蛋白相对分子质量为66 kDa; Western blot分析显示重组蛋白成功被犬的阳性血清识别；实时荧光定量PCR检测该基因在成虫阶段表达量高于原头蚴阶段(P<0.000 1)。重组蛋白对犬PBMCs的增殖没有显著性影响(P>0.050 0),qPCR结果显示，重组蛋白对犬PBMCs细胞因子IL-17A和IFN-γ的分泌表达具有调控作用(P<0.000 1)。初步证实rEgLAP拥有良好的免疫原性，具有成为Eg终末宿主疫苗的潜力。
2025年12期 v.45;No.348 2699-2707页 [查看摘要][在线阅读][下载 1920K] [下载次数：1 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 康鸿艳;陈梦阁;李新;王晓岑;张旭;宫鹏涛;张楠;李建华;
对微小隐孢子虫肽基-脯氨酰顺反异构酶(Cryptosporidium parvum peptidyl-prolyl cis-trans isomerase, CpPPI)进行生物信息学分析、原核表达与鉴定，探究该蛋白分泌特性、转录规律、亚细胞定位等分子特性，并通过抗体阻断试验探究其作为药物靶点的潜力。通过原核表达获得具有GST标签的重组蛋白rCpPPI,进行SDS-PAGE、Western blot鉴定。纯化的rCpPPI经3次皮下注射免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，ELISA检测血清效价，Western blot验证血清对天然和重组CpPPI的识别。利用ELISA检测子孢子脱囊后不同时期排泄分泌产物中CpPPI蛋白含量，qPCR检测CpPPI在虫体发育不同时期的转录水平，IFA观察CpPPI在虫体中的亚细胞定位等分子特性。抗血清孵育子孢子并侵入HCT-8细胞，qPCR检测荷虫量和炎症因子水平，Western blot检测HCT-8细胞肠道屏障蛋白表达水平。结果显示，双酶切和测序证明重组质粒pGEX-4T-PPI构建成功。SDS-PAGE和Western blot验证带有GST标签的rCpPPI成功表达，相对分子质量约45 kDa。免疫小鼠制备的多抗能够识别天然CpPPI与rCpPPI。ELISA显示CpPPI存在于子孢子排泄分泌产物中，qPCR显示虫体入侵宿主细胞3 h左右CpPPI转录水平最高，IFA显示CpPPI在子孢子细胞质中、脱囊过程中及脱囊后的卵囊内壁上均有存在。抗血清孵育能够降低微小隐孢子虫在HCT-8细胞中的增殖和致病力，荷虫量降低约为对照组54%,炎症因子水平、肠道屏障相关蛋白表达量有所恢复。综上，CpPPI是一种亲环蛋白型肽基-脯氨酰顺反异构酶，主要位于子孢子细胞质但能够被分泌，抗体阻断试验表明CpPPI具有作为药物靶点的潜力，为该蛋白的功能研究奠定了基础。
2025年12期 v.45;No.348 2708-2716页 [查看摘要][在线阅读][下载 2348K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 党甜甜;李佳铭;赵志军;
提取对照组(ME49-EP)和过表达组(ME49-ROP16)细胞总RNA进行反转录合成cDNA,经过扩增、热变性、环化、滚环复制后通过使用BGISEQ平台对每个合格的文库进行高通量测序。将测序数据按照一定阈值筛选出对照组和过表达组总差异表达基因，并对总差异表达基因进行聚类分析、KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)分析、GO(gene ontology)分析及关键驱动基因(key driver gene analysis, KDA)分析，按照筛选条件，筛选出6个差异基因进行qRT-PCR和Western blot验证。数据分析结果显示，对照组和过表达组一共筛选出166个差异表达基因，其中有82个差异基因上调，84个差异基因下调，qRT-PCR和Western blot验证结果显示，与RNA-Seq结果数据一致，表明RNA-Seq结果可靠；GO分析结果显示，对照组和过表达组差异表达基因主要与细胞因子、免疫应答相关；KEGG富集结果显示，差异表达基因主要参与了与免疫应答、细胞因子相关的通路，包括IL-17 Signaling Pathway、TNF Signaling Pathway、Chemokine Signaling Pathway、Cytokine-Cytokine Receptor Interaction及Toll-like Receptor Signaling Pathway,并对这几条通路中显著富集的21个差异表达基因进行聚类及KDA分析，筛选出10个关键驱动基因，分别是CXCL2、Lcn2、IL-1β、IL-6、Mmp9、Csf3、TLR2、Nfkbia、Spp1、TLR3;qRT-PCR和Western blot验证结果表明，与对照组相比，IL-1β、IL-6、TLR2、CXCL1、TLR3、CXCL2 mRNA和蛋白表达量均显著增高(P<0.05)。刚地弓形虫ROP16_Ⅱ效应分子作用于大鼠肺泡巨噬细胞NR8383后，其关键驱动基因CXCL2、Lcn2、IL-1β、IL-6、Mmp9、Csf3、TLR2、Nfkbia、Spp1、TLR3可能发挥了一定的作用。
2025年12期 v.45;No.348 2717-2725+2784页 [查看摘要][在线阅读][下载 2437K] [下载次数：2 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 赵云环;张帅;王亚轩;左玉柱;范京惠;
猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)感染是当今养猪业面临的严峻挑战之一。PRRSV基因组复制时缺乏RNA聚合酶校对机制，容易导致基因组发生碱基缺失、插入、替换等突变现象，使得PRRSV呈现多样性、高变异的特点。PRRSV感染后，动物机体表现出持续的病毒血症、免疫抑制、免疫逃逸等复杂的免疫学特征。近年来，虽然在PRRSV的感染机制、病毒变异与演化、宿主免疫应答以及抗感染策略的探究方面取得了显著成果，但由于PRRSV持续的变异和新毒株的出现，对其认知仍存在诸多不足。现对PRRSV感染机制、致病机制、宿主对PRRSV的先天性免疫与适应性免疫反应研究进展进行阐述，以期为PRRSV免疫防治提供理论依据。
2025年12期 v.45;No.348 2768-2777页 [查看摘要][在线阅读][下载 2375K] [下载次数：2 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 朱和超;刘向东;刘祥祖;吴斌;
伪狂犬病(pseudorabies, PR)由伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)引起，家畜(猪、牛、羊)和野生动物感染发病后以发热、瘙痒和脑炎为主要特征。PR是危害养猪业健康发展的重要传染病，其病原体PRV在自然界中有广泛的宿主，猪是主要的天然宿主和储存宿主。PRV可以感染不同日龄的猪，引起不同的临床症状，尤以妊娠母猪和哺乳仔猪感染后引起的损害最严重。PRV导致妊娠母猪繁殖障碍，哺乳仔猪出现神经症状进而出现高病死率，15日龄仔猪感染后病死率高达100%;耐过感染后的成年猪成为潜伏感染猪，终身带毒并周期性排毒，成为PR流行的传染源，增加了本病根除的难度。现将从PR的病原学、PRV经典毒株及变异毒株的流行、基因编辑技术在构建PRV基因缺失毒株中的优劣及应用、PR基因缺失疫苗研究、PR的鉴别诊断及根除等方面进行系统性介绍。
2025年12期 v.45;No.348 2778-2784页 [查看摘要][在线阅读][下载 1526K] [下载次数：1 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张海琳;陈润秋;彭中友;吴兴萍;吴梦;刘雪芹;
伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)可突破胎盘屏障导致妊娠母猪繁殖障碍、公猪生殖机能异常及仔猪致死性神经症状，对我国生猪养殖业构成重大生物安全威胁。自2011年以来，PRV变异株在我国的广泛流行，显著降低了传统疫苗的免疫保护效力。此外，PRV的潜伏感染特性和混合感染风险进一步加剧了防控难度，因此建立精准监测体系已成为猪伪狂犬病(pseudorabies, PR)防控与净化的关键技术需求。现综述了国内外关于PRV病原学和血清学检测的研究进展，系统分析了病毒分离鉴定、PCR、环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)、重组聚合酶扩增(recombinant polymerase amplification, RPA)等分子生物学检测技术，以及ELISA、免疫层析试纸、蛋白芯片和生物传感器等免疫学方法在临床诊断、疫苗效价评估及流行病学调查中的适用性特征。通过对比这些技术的灵敏度、特异性和应用场景，明确了其技术优势与局限性，旨在为PRV变异株的快速鉴别诊断、免疫程序优化及猪场生物安全防控提供科学依据。
2025年12期 v.45;No.348 2785-2792+2801页 [查看摘要][在线阅读][下载 1348K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 彭长江;谢锐;朱占伟;武文清;杨豪;孙心如;宋晓容;黄婧文;宋文博;华琳;陈焕春;吴斌;彭忠;
猪增生性肠病(porcine proliferative enteropathy, PPE)是由胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,LI)感染所引起的一种肠道疾病，感染猪群表现为腹泻、生长速度减慢等症状，严重病例会因肠道出血而发生死亡。该病主要危害在于降低猪群生长速度，影响饲料报酬率，增加料肉比，进而对养猪业造成一定的经济损失。由于该菌体外分离培养困难，在一定程度上阻碍了疫苗的研究进展。目前，国内外对于PPE疫苗研发有弱毒疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗和载体疫苗。这些疫苗虽各具优势，但也仍存在不足之处。因此，现将对PPE疫苗优势及不足作简要综述，以期为PPE新疫苗的研发提供参考。
2025年12期 v.45;No.348 2793-2801页 [查看摘要][在线阅读][下载 1825K] [下载次数：1 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 黄泽华;晏意良;齐先峰;周东辉;牛志鹏;
猪戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)引起的人畜共患病，在全球多个地区广泛流行。猪戊型肝炎作为一个重要的公共卫生问题，受到世界卫生组织的高度重视。然而，对HEV的检测和防治方面仍存在诸多不足。目前常用检测方法包括聚合酶链式反应(PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)等，近年来，微滴数字PCR和RT-RPA检测方法也被引入HEV检测中。文章综述了猪戊型肝炎病原学和流行病学的研究进展，对现有检测及诊断方法进行了归纳评价，为猪戊型肝炎的检测和防控提供参考。
2025年12期 v.45;No.348 2802-2809页 [查看摘要][在线阅读][下载 1486K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 才菁菁;葛昆陇;郑拉第;张建斌;秦顺义;
黄曲霉毒素(aflatoxin, AF)是一类由曲霉属的特定菌株产生的真菌毒素，主要污染花生、玉米等农作物，具有肝毒性、肠毒性等多种强毒性作用。一旦家禽采食了被其污染的饲料，便会出现生长发育受阻、免疫力下降等症状，甚至引起癌症的发生。近年来，大量研究表明，通过营养调控解毒途径可有效减轻AF对家禽的毒害作用。现综述AF对家禽的危害，并对植物提取物等营养调控物质对AF毒性的缓解作用予以概括，旨在为防控AF危害家禽健康提供理论参考。
2025年12期 v.45;No.348 2810-2816页 [查看摘要][在线阅读][下载 1332K] [下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ]