- 俞佳钰;姜宇航;张国庆;伊立超;张爽;李乐天;秦爱建;李昌;
根据猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea, PEDV)氨基酸序列(GenBank登录号：AKN45969.1)筛选针对受体结合结构域(receptor binding domain, RBD)的表位抗原，制备PEDV RBD多克隆抗体并进行鉴定。采用生物信息学分析软件对PEDV RBD潜在抗原表位进行预测，并与猪冠状病毒属毒株进行序列比对，筛选的优势抗原表位与血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)载体蛋白进行偶联后直接合成多肽抗原，然后免疫小鼠制备相应的特异性抗体，并应用Western blot技术和间接免疫荧光技术(IFA)鉴定抗体的特异性，间接ELISA方法测定抗体效价。结果显示，选择的PEDV RBD优势表位序列与其他18株PEDV毒株的序列相似性高达100%,与11株猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus, TGEV)病毒株(27.8%～29.3%)以及16株PDCoV病毒株(10.5%～13.4%)序列相似性低，说明该表位保守性良好。Western blot显示，制备的多肽抗体能特异性识别Expi293F细胞与杆状病毒系统过表达的PEDV RBD蛋白，同时抗体1∶2 000稀释后依然能够检测到PEDV感染Vero细胞表达的PEDV S蛋白，而与TGEV和PDCoV感染的ST细胞无反应，表明该多肽抗体特异性良好；ELISA检测小鼠血清中特异性抗体的效价最高可达1∶25 600。上述结果显示，利用生物信息学技术成功预测PEDV RBD蛋白抗原表位，制备了特异性的PEDV RBD多肽抗体。
2025年07期 v.45;No.343 1357-1365页 [查看摘要][在线阅读][下载 3225K] [下载次数：196 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 焦宇博;王真真;王沁愉;周晗哲;李思锐;贺文琦;高丰;兰云刚;
为了探究信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)在猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus, PHEV)复制过程中的作用，本研究通过Western blot、荧光定量PCR和间接免疫荧光试验检测PHEV感染小鼠海马神经元细胞后STAT3的磷酸化水平和亚细胞定位变化，并分别在干扰和过表达STAT3之后检测对PHEV复制的影响。结果显示，PHEV感染海马神经元细胞后，STAT3在705位点酪氨酸的磷酸化水平显著上调且其核转位显著增加；干扰STAT3能够显著抑制PHEV复制，表明PHEV感染海马神经元细胞后激活了STAT3,以及STAT3在PHEV复制过程中发挥促进病毒复制的作用。该研究结果不仅进一步揭示了PHEV的致病机制，而且为抗PHEV药物的研究提供了理论基础。
2025年07期 v.45;No.343 1366-1371+1393页 [查看摘要][在线阅读][下载 1550K] [下载次数：135 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 何书海;陶梦筱;王露遥;周德方;周静;成子强;黄立;
为了实现鸭星状病毒2型(duck astrovirus type 2,DAstV-2)的高效快速检测，根据DAstV-2的ORF2基因保守序列设计合成了RPA引物和crRNA,构建了集RPA核酸扩增、LwCas13a切割和胶体金试纸条可视化显色于一体的DAstV-2检测方法，并评估了该检测方法的灵敏性、特异性和符合性。结果显示，该方法对DAstV-2重组质粒标准品的检测限为1.2×10~1 copies/μL,优于常规RT-PCR方法；可特异性检测DAstV-2病原核酸，对DAstV-1、DAstV-3、DAstV-4、鸭瘟病毒(duck plague virus, DEV)和鸭坦布苏病毒(duck tembusu virus, DTMUV)无交叉反应；在对疑似DAstV-2感染病鸭肝脏组织样本进行检测时，本方法与实时荧光定量PCR的检测结果完全一致，符合率为100%,但操作更加简便快捷。研究结果表明，所建立的RPA-CRISPR/Cas13a-LFD检测体系灵敏度高、特异性强、准确性高，能够在37℃恒温条件下1 h内完成DAstV-2核酸的快速可视化检测，为DAstV-2的快速诊断提供了新的技术平台。
2025年07期 v.45;No.343 1372-1377页 [查看摘要][在线阅读][下载 1318K] [下载次数：247 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 许怡臻;袁秀芳;徐丽华;余斌;苏菲;叶十一;孙洪超;陈怡洁;陈巧丹;张晖;李军星;
采用形态学筛选和聚合酶链式反应(PCR)从2010-2024年浙江省猪场送检的鼻拭子和肺脏组织样品中分离鉴定出119个多杀性巴氏杆菌临床分离株。用PCR技术和纸片琼脂扩散法(K-B)对分离的多杀性巴氏杆菌进行荚膜血清型分型、脂多糖血清型分型、毒力因子检测及耐药性分析。结果显示，荚膜血清型中A型有64株(占53.7%)、D型有54株(占45.3%)、F型有1株(占0.9%);脂多糖血清型中L1型有10株(占8.4%)、L3型有20株(占16.8%)、L6型有86株(占72.2%)、未定型有3株(占2.6%)。对10种毒力基因的扩增结果显示，毒力基因hgbA、hgbB和fimA的检出率在86.0%以上，toxA的检出率为8.4%,而毒力基因tbpA并未检出；不同毒力基因在不同荚膜血清型的分布情况和检出率也存在差异，pfhA只在荚膜血清A和F型中检出，在D型中并未发现；黏附素tadD在A型的检出率(92.2%)明显高于D型的检出率(9.3%),相反，黏附素hsf-1在D型的检出率(90.7%)明显高于A型的检出率(20.3%)。耐药性分析发现，多杀性巴氏杆菌对阿莫西林、氨苄西林、头孢类、强力霉素、氟苯尼考和环丙沙星等抗菌药物表现出较高的敏感性；对林可霉素、复方新诺明、庆大霉素及阿米卡星等抗菌药物的耐药性较强，多重耐药菌株有54株(78.3%)。综上，荚膜血清型以A和D型为主，脂多糖血清型以L6型为主，部分毒力基因在不同血清型间的分布差异较大，多重耐药菌株比例较高，为本病的防控提供了参考。
2025年07期 v.45;No.343 1378-1387页 [查看摘要][在线阅读][下载 1645K] [下载次数：249 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 张月梅;王娜;戴伶俐;张帆;宋越;赵世华;石婧宇;郭文华;苏胜杰;白帆;
为验证分子伴侣是否可以促使溶血性曼氏杆菌脂蛋白E(Pasteurella lipoprotein E,PlpE)在大肠杆菌中以可溶性形式表达及表达的蛋白是否具有活性，应用原核表达和Western blot方法进行检测，结果表明，溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白原核表达载体pET-32a(+)-plpE以包涵体形式表达，改变诱导剂浓度、诱导时间以及温度均未改变其表达形式；将伴侣蛋白质粒pG-KJE8、pGro7、pKJE7和pG-Tf2分别与pET-32a(+)-plpE在大肠杆菌表达体系中共表达，当加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG以及0.5 g/L的L-阿拉伯糖或5.0μg/L的四环素作为诱导剂，37℃诱导8 h,结果显示，分子伴侣pGro7能使rp-PlpE以包涵体表达变为可溶性表达，pG-KJE8、pKJE7和pG-Tf2对rp-PlpE的表达形式没有影响；可溶性表达的rp-PlpE与溶血性曼氏杆菌阳性血清可发生特异性反应。因此，研究表明，与分子伴侣蛋白pGro7的共表达可以使rp-PlpE蛋白以可溶性形式表达，且纯化的蛋白具有反应原性，该研究结果可为建立溶血性曼氏杆菌亚单位疫苗及血清学诊断方法奠定基础。
2025年07期 v.45;No.343 1388-1393页 [查看摘要][在线阅读][下载 1281K] [下载次数：197 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 胡格吉勒;于富丽;梁建忠;刘雨馨;卡楚拉;伊拉格其;特日格勒;苏日娜;刘芳;格日勒图;
几丁质酶降解几丁质的生物学活性受到广泛关注，尤其在生物防治方面具有潜在的应用价值。本试验从内蒙古呼伦贝尔地区采集的草原革蜱体内分离的4种蜱源性芽孢杆菌为试验材料，采用传统细菌培养法进行芽孢杆菌分离培养与鉴定，获取的纯培养物进行16S rRNA序列测序鉴定和遗传进化分析。再通过胶体几丁质平板筛选水解几丁质的菌株和PCR方法检测几丁质酶特异性基因，在发酵培养基中37.0℃培养4 d,取上清DNS方法检测其酶活性。结果显示，从草原革蜱组织样本中成功分离出4种革兰阳性芽孢杆菌菌株：溶蛋白芽孢杆菌、副霉菌芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌，依次重新命名为IMH/B-1株、IMH/P-1株、IMH/T-1株和IMH/C-1株；通过PCR方法检测出苏云金芽孢杆菌和溶蛋白芽孢杆菌的几丁质酶基因，而在蜡样芽孢杆菌和副霉菌芽孢杆菌中则未检出对应基因，但其中3株菌显著(P<0.01)降解胶体几丁质，即溶蛋白芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌。相继DNS检测试验结果发现，该3株菌的几丁质酶活力范围均在1.292～2.032 U/mL之间，其中溶蛋白芽孢杆菌的几丁质酶活力最高，为2.032 U/mL,蜡样芽胞杆菌和苏云金芽孢杆菌酶活力则分别为1.496和1.324 U/mL。本试验为产几丁质酶芽孢杆菌株的进一步开发应用研究奠定了基础。
2025年07期 v.45;No.343 1394-1401页 [查看摘要][在线阅读][下载 1759K] [下载次数：305 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 马震原;闫若潜;柴茂;王淑娟;赵雪丽;杨海波;王东方;刘影;王翠;
为了建立了一种快速定量检测A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法(chemiluminescent enzymee-linked immunoassay, CLEIA),在聚苯乙烯板中包被灭活SVA抗原，以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗SVA VP2、VP3蛋白单克隆抗体作为血清样本中抗体的竞争酶标抗体，以阳性血清稀释制备的校准品绘制标准曲线实现定量检测，成功建立的SVA竞争CLEIA在45 min内即可完成检测，可检测到最大稀释倍数为1∶2 048的校准品溯源血清，与口蹄疫等其他5种病毒抗原的标准阳性血清无交叉反应；批内变异系数小于10%,批间变异系数小于15%,重复性和稳定性较好；与中和试验分别检测480份临床血清，阳、阴性符合率分别为95.30%、97.57%,总符合率为96.88%,具有高度的一致性。结果表明，建立的SVA竞争CLEIA检测方法可以用于SVA抗体的快速定量检测。
2025年07期 v.45;No.343 1402-1410页 [查看摘要][在线阅读][下载 1351K] [下载次数：76 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李雪彤;黄园园;郭祥龙;张韵;孙世琪;郭慧琛;吴金恩;
为构建携带荧光蛋白(UnaG)的口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)亚基因组复制子系统，本研究以FMDV全长cDNA质粒为模板，通过双酶切去除FMDV的部分结构蛋白和非结构蛋白，应用表达绿色荧光蛋白UnaG的报告基因序列替换FMDV的部分结构蛋白基因序列，成功构建FMDV-UnaG复制子。经PCR和测序验证后，将线性化的FMDV-UnaG复制子转染至表达T7 RNA聚合酶的BSR/T7细胞，并采用荧光显微镜和激光共聚焦技术观测荧光信号。结果表明，构建的FMDV-UnaG复制子能够有效表达UnaG蛋白且该蛋白与FMDV的3A蛋白存在共定位现象。此外，通过Western blot和RT-qPCR也分别检测到该复制子RNA可以表达病毒的非结构蛋白并且在BSR/T7细胞中能够进行自主复制。总之，FMDV-UnaG亚基因组复制子的成功构建为后续深入研究FMDV的复制和翻译机制及发展疫苗载体等提供了有利工具。
2025年07期 v.45;No.343 1411-1416+1436页 [查看摘要][在线阅读][下载 2241K] [下载次数：96 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 颜嘉薇;刘俊峰;刘锦涛;郝勇航;王文文;王青林;陈丽颖;
为了解某生猪屠宰场中不同环节间金黄色葡萄球菌的交叉感染风险和遗传演化规律，从基因组水平为生猪屠宰过程中金黄色葡萄球菌污染进行风险评估及防控提供参考，选择某屠宰场分离并保存的31株金黄色葡萄球菌进行全基因组测序，并进行了生物信息学分析，探究了该屠宰场金黄色葡萄球菌分离株基因组特征以及遗传进化关系。结果显示，不同屠宰环节存在交叉污染，主要以ST398-t1451为主，毒性最强的ST9-t899型和携带耐药基因较多的ST398-t11型金黄色葡萄球菌在屠宰场的不同环节均有检出；菌株携带毒力基因主要以hlgA、hlgB和hlgC为主，不同菌株携带耐药基因数量差异较大，此外还发现了2株携带optrA基因和3株携带cfr基因的金黄色葡萄球菌，尤其是optrA基因在金黄色葡萄球菌中是较为罕见的，这些基因能使其对新型的合成抗菌药物恶唑烷酮类和氟苯尼考类药物产生耐药性，且具备通过基因水平转移的能力，增加了在屠宰场内外传播的风险。尤为重要的是，在屠宰场水样中检出了1株可能传染给人的LA-MRSA-ST9型金黄色葡萄球菌。提示屠宰场的工人在日常操作中应采取更严格的防护措施，以减少职业暴露和感染风险。
2025年07期 v.45;No.343 1417-1425页 [查看摘要][在线阅读][下载 2006K] [下载次数：163 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 成文婧;牛甜;杨帅;刘婷婷;马弘财;曾江勇;张丽鸿;胡俊杰;
对西藏那曲市牦牛乳汁样本进行细菌分离鉴定、药敏试验、毒力基因检测及致病性试验，以评估分离菌株的生物学特性，同时通过全基因组学测序进行毒力因子和耐药基因等分子生物学信息分析，并通过PCR对毒力基因进行验证。结果显示，从牦牛乳汁中分离出1株停乳链球菌，其菌落形态为针尖大小、边缘光滑、呈乳白色。该菌株对多种抗生素(青霉素G、头孢类、环丙沙星、四环素、红霉素等)敏感。毒力基因检测结果显示，该菌株携带了6种关键毒力基因(cyl、eno、scpB、bca、bac和napr),这些基因可能与其致病性密切相关。致病性试验中，小鼠在感染后精神萎靡、活动减少，但在观察期内未发生死亡。剖检发现脾脏、肾脏、肝脏肿大及肺组织病理变化，提示该菌株具有一定的致病潜能但非高致死性。全基因组测序数据显示，该菌株基因组长为4 079 280 bp, GC含量为39.41%,3 964个编码基因被预测，其中604个被注释为毒力因子，另有28个基因突变可能增强了其病原致病能力。通过CARD数据库注释，发现存在2个PatA抗性基因和2个lmrp抗性基因，揭示了其潜在的耐药机制。本研究通过全基因组测序技术结合生物信息学分析方法，揭示了牦牛源停乳链球菌的基因组特征及其耐药性和致病性机制，为深入探索牦牛源停乳链球菌的致病机理、耐药机制以及分子进化规律提供重要的科学依据。
2025年07期 v.45;No.343 1426-1436页 [查看摘要][在线阅读][下载 4180K] [下载次数：268 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 崔雪梅;向秋菊;黄叶娥;季权安;石团员;胡子喆;鲍国连;刘燕;
探究含维生素E(vitamin E,VE)和人参皂苷(ginseng saponins, GS)的新型植物油佐剂(命名为E515)对兔外周血淋巴细胞和兔波氏杆菌灭活疫苗的免疫调节作用。将E515、波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)、脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)分别与兔外周血淋巴细胞体外共培养，通过CCK8法检测淋巴细胞转化率、ELISA法检测淋巴细胞上清细胞因子含量。试验兔免疫E515-Bb疫苗后，间接ELISA法检测抗体水平、ELISA法检测血清细胞因子含量、攻毒试验观察E515-Bb疫苗对试验兔的保护效力。体外细胞试验表明，E515能显著提高兔外周血淋巴细胞增殖和TH1/TH2型细胞因子分泌。体内动物试验表明，E515佐剂能显著增强波氏杆菌灭活疫苗诱导试验兔产生Bb特异性抗体水平；提高血清中TH1/TH2型细胞因子分泌水平，降低TNF-α分泌水平；有效保护试验兔抵抗Bb攻毒感染，保护率达91.67%。因此，E515作为新型植物油佐剂值得进一步深入研究。
2025年07期 v.45;No.343 1437-1442+1492页 [查看摘要][在线阅读][下载 1592K] [下载次数：40 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 郭昊彤;赵子涵;乔畅;范梦雨;马维超;穆祥;冯波;张倩;
探究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide, APS)是否通过调控VEGF/VEGFR影响大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(rat intestinal mucosal microvascular endothelial cells, RIMMVECs)的增殖活性。从新生大鼠中分离RIMMVECs并进行纯化鉴定，随后稳定传代并以0.1、1.0、10.0、100.0、1 000.0和10 000.0 mg/L的APS处理RIMMVECs,应用MTT法研究APS对RIMMVECs增殖的影响并筛选APS最佳作用的质量浓度；利用流式细胞术检测细胞周期变化，评估APS对RIMMVECs细胞周期的作用阶段；用ELISA试剂盒检测细胞上清中VEGFA含量变化，评价细胞增殖诱导血管生成的潜力；用荧光显微镜观察Fluo-8AM负载的细胞内荧光强度变化，评估细胞内Ca~(2+)水平；用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测RIMMVECs中PERK蛋白表达水平，分析APS可能的作用机制。结果显示，100 mg/L APS显著增强RIMMVECs增殖活性，增加细胞上清中VEGFA含量，增加细胞Ca~(2+)水平，升高细胞PERK蛋白表达量。表明APS具有促进RIMMVECs增殖的作用，该作用可能与促进细胞VEGFA表达以及激活ERK通路相关。
2025年07期 v.45;No.343 1443-1449页 [查看摘要][在线阅读][下载 1638K] [下载次数：153 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 汪锴;刘沛;齐可歆;王净怡;孙晨璐;史丹凝;陈红跃;何道领;朱燕;甘玲;
旨在探讨山楂叶总黄酮(total flavonoids of hawthorn leaves, TFHL)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的大鼠肠上皮细胞(intestinal epithelial cell 6,IEC-6)炎性损伤的抗炎、抗凋亡作用效果及机制。本研究首先采用LPS处理IEC-6细胞以构建体外炎症模型。然后用3种浓度的TFHL孵育IEC-6细胞24 h后，用LPS处理细胞24 h,并采用RT-qPCR技术检测炎症基因COX-2、iNOS的mRNA水平，Western blot检测凋亡蛋白Bax、Caspase-3、Bcl-2和JNK/p-JNK蛋白水平；进一步采用TFHL、SP600125预处理细胞24 h后加入LPS处理细胞24 h,考察TFHL与SP600125对LPS诱导下IEC-6细胞炎症因子及凋亡蛋白水平的影响。结果显示，与LPS组相比，2.5、5.0、10.0 mg/L TFHL组COX-2、iNOS的mRNA水平和Bax、Caspase-3蛋白水平均极显著下降(P<0.01),Bcl-2蛋白水平极显著上升(P<0.01),p-JNK蛋白水平和p-JNK/JNK比值均极显著下降(P<0.01);与LPS组相比，TFHL+LPS组的COX-2、iNOS mRNA水平均极显著下降(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白水平均极显著下降(P<0.01),Bcl-2蛋白水平显著上升(P<0.05);与LPS组相比，TFHL+SP600125组的COX-2、iNOS mRNA水平均极显著下降(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白水平均极显著下降(P<0.01),Bcl-2蛋白水平极显著上升(P<0.01)。结果表明，TFHL通过抑制JNK信号通路从而对LPS诱导的IEC-6细胞发挥抗炎、抗凋亡的作用。
2025年07期 v.45;No.343 1450-1457页 [查看摘要][在线阅读][下载 2064K] [下载次数：244 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 杨琨兆;周皓;王涛;张福贵;符章豪;苏利娟;何政科;曹立亭;杜红旭;
基于网络药理学，通过分子对接与试验验证，探讨田基黄-夏枯草药对在肝损伤治疗中的作用机制。将小鼠随机分为空白组(CON组)、模型组(CCl_4组)、药物高剂量组(TXD-H组)和低剂量组(TXD-L组),利用CCl_4诱导建立小鼠肝损伤模型，观察肝脏组织的病理形态，并测定血清中的谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平。通过TCMSP、PubChem、Swiss Target Prediction、Gene Cards、DisGeNET等数据库获取中药的活性成分及其靶点，取交集以获得药物的潜在作用靶点。进一步利用Cytoscape构建“药物-活性成分-交集靶点”网络图，使用STRING数据库对潜在靶点进行蛋白质相互作用(PPI)分析，并使用DAVID数据库对潜在靶点进行GO和KEGG分析。使用AutoDock Tools软件进行分子对接，以验证结果的可信性。最后，对分子对接结果进行验证，检测关键靶点基因、NLRP3炎症小体及焦亡相关基因的表达情况。动物试验结果显示，与CON组相比，CCl_4组小鼠血清AST和ALT活性均极显著提高(P<0.01);而与CCl_4组相比，TXD-L组小鼠血清AST和ALT活性显著降低(P<0.05),TXD-H组小鼠AST和ALT活性极显著降低(P<0.01)。通过网络药理学筛选出135个潜在靶点，根据degree值，筛选出排名靠前的主要成分为四甲基木犀草素、槲皮素、山奈酚、木犀草素和桑色素，关键靶点为TNF、SRC、AKT1、EGFR和ESR1。GO功能富集分析得到304个条目，KEGG富集分析得到91条生物通路。分子对接结果显示，田基黄-夏枯草药对的主要成分与关键靶点之间的结合能力较强。qPCR结果显示，与CON组相比，CCl_4组SRC、EGFR、TNF-α、AKT1、IL-18的mRNA相对表达量均呈上升趋势，MyD88、NF-κB、IL-1β、NLRP3、Caspase-1、ASC的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),TLR4与GSDMD的mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01)。而与CCl_4组相比，TXD-H组EGFR、AKT1、TLR4、IL-1β、GSDMD的mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01),TNF-α、MyD88、NF-κB、NLRP3、ASC的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),SRC、IL-18、Caspase-1的mRNA相对表达量呈下降趋势。结果表明，田基黄-夏枯草药对通过多成分、多途径发挥保肝脏作用，其中抑制NF-κB-NLRP3通路减少肝脏细胞焦亡，可能是其发挥保护作用的重要途径之一。
2025年07期 v.45;No.343 1458-1468页 [查看摘要][在线阅读][下载 3975K] [下载次数：238 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 赵天睿;薛琳琳;聂君书;张怀秀;李辰辰;郭景茹;
为了探明SIRT2对冷处理后小鼠肝脏组织紧密连接及内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)的影响，选取5周龄雄性C57BL/6型小鼠和SIRT2敲除型小鼠各10只，随机分为野生型室温对照组(WT Control)、野生型冷处理组(WT Cold)、SIRT2敲除+室温对照组(KO Control)和SIRT2敲除+冷处理组(KO Cold)。室温对照组小鼠在温度为(24±2)℃的环境中饲养，冷处理组置于(4±2)℃人工气候室中每天随机刺激3 h,连续刺激3周。采用H&E、Masson染色以及透射电镜观察小鼠肝脏组织显微及超微结构；通过生化分析仪检测小鼠血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)浓度；利用Western blot试验对肝脏组织中紧密连接相关(Claudin1、Occludin)、ERS相关蛋白(GRP78、CHOP、XBP1、p-eIF2α、eIF2α)和促炎细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的表达量进行检测。结果显示，与WT Control组相比，WT Cold组与KO Control组小鼠肝小叶结构不清，肝索排列紊乱，胞质松散，出现白色空泡，少量胶原沉积和纤维增生，肝脏细胞中线粒体轻度肿胀，内质网(endoplasmic reticulum, ER)分布不均，血清中AST及ALT的浓度升高(P<0.050、P<0.010),肝脏组织中Occludin、Claudin1的表达量降低(P<0.050、P<0.010、P<0.001),GRP78、CHOP、XBP1、p-eIF2α/eIF2α、TNF-α、IL-6和IL-1β的蛋白表达量升高(P<0.050、P<0.010、P<0.001);与KO Control组相比，KO Cold组小鼠肝脏组织出现大量白色空泡、少量气球样变、炎性细胞浸润以及明显的胶原沉积和纤维增生，肝脏细胞中线粒体肿胀，线粒体嵴减少，ER增粗，血清中AST及ALT浓度升高(P<0.010),肝脏组织中Occludin、Claudin1的蛋白表达量降低(P<0.010),GRP78、CHOP、XBP1、p-eIF2α/eIF2α、TNF-α、IL-6和IL-1β的蛋白表达量升高(P<0.050、P<0.010、P<0.001)。结果表明，SIRT2敲除会加重冷处理所导致的小鼠肝脏组织紧密连接受损，诱导ERS,并进一步促进炎症反应的发生。
2025年07期 v.45;No.343 1469-1477页 [查看摘要][在线阅读][下载 1990K] [下载次数：100 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 吴琴;吴帅斌;鲜思美;龙宥茨;郑维豪;余梦怡;李京;
为制备羊源eIF3i基因编码蛋白的多克隆抗体，本试验利用PCR技术从羔羊睾丸(lamb testicular, LT)细胞中扩增eIF3i基因，并将其克隆至pCold载体，构建pCold-eIF3i质粒，通过质粒PCR、双酶切和序列测定进行验证；将其转化至宿主表达菌BL21(DE3)中，在优化表达条件(IPTG浓度、温度、时间)下诱导eIF3i重组蛋白，利用SDS-PAGE及Western blot检测目的蛋白表达及反应原性；以纯化的eIF3i重组蛋白作为抗原，联合弗氏完全/不完全佐剂免疫新西兰大白兔，经3次免疫后采集血清，采用间接ELISA检测抗血清效价，Western blot分析抗体特异性，间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)检测抗体应用效果。结果显示，PCR扩增出LT细胞eIF3i基因大小为978 bp; eIF3i重组蛋白的最佳表达条件：IPTG浓度为0.2 mmol/L,温度为37℃,时间为8 h; eIF3i重组蛋白以包涵体形式表达，其大小约为36 kDa;制备的eIF3i蛋白多克隆抗体效价1∶51 200。Western blot和IFA结果显示，制备的eIF3i蛋白多克隆抗体具有良好的反应原性及特异性。综上所述，本研究成功制备了兔抗eIF3i蛋白多克隆抗体，并证实其能特异性识别内源性eIF3i蛋白，为进一步研究eIF3i蛋白的生物学功能奠定了基础。
2025年07期 v.45;No.343 1478-1484页 [查看摘要][在线阅读][下载 1569K] [下载次数：95 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 杨天娇;常雅奇;栾云飞;李霁航;张泽鑫;徐闯;张冰冰;杨威;
旨在探讨中链脂肪酸(medium-chain fatty acids, MCFAs)辛酸(caprylic acid, C8∶0)对犊牛肝脏细胞脂质代谢的影响。提取原代犊牛肝脏细胞进行培养，在肝脏细胞中添加1.2 mmol/L非酯化脂肪酸(nonestesterified fatty acids, NEFAs)构建原代犊牛肝脏细胞肝脂沉积模型，并分别添加了不同浓度的C8∶0。设置了5个处理组：对照组(Ctrl)、NEFA组(NEFA)、C8∶0 1.2 mmol/L处理组(C8∶0 1.2)、NEFA+C8∶0 0.2 mmol/L处理组(NEFA+C8∶0 0.2)、C8∶0 0.2 mmol/L处理组(C8∶0 0.2)。对犊牛肝脏细胞刺激12 h,利用生化试剂盒检测甘油三酯(triglyceride, TG)水平以及脂质氧化(MDA)、过氧化氢(H_2O_2)和超氧化物歧化酶(SOD)活性指标，利用Western blot检测脂合成相关蛋白FAS、ACC1、DGAT2、SREBP-1C和脂氧化相关蛋白CPT1A。结果显示，与对照组相比，NEFA组肝脏细胞TG、MDA和H_2O_2浓度极显著上升(P<0.01),SOD活性显著下降(P<0.05)。FAS、ACC1、DGAT2、SREBP-1C的蛋白表达水平极显著上调(P<0.01),CPT1A表达水平极显著下调(P<0.01)。与NEFA组相比，NEFA+C8∶0(浓度0.2 mmol/L)组SREBP-1C和DGAT2的蛋白表达水平显著降低(P<0.05),脂肪酸β-氧化相关分子CPT1A蛋白表达水平略高于NEFA组，但并没有统计学意义(P>0.05),肝脏细胞MDA水平显著下降(P<0.05)。总之，本研究结果表明，C8∶0具有抗氧化作用能够有效减轻氧化应激导致的肝脏损伤，调节肝脏脂肪基因的表达，进而保护肝脏损伤。
2025年07期 v.45;No.343 1485-1492页 [查看摘要][在线阅读][下载 1612K] [下载次数：64 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 程宛彤;迟杨;孙旭东;徐闯;
旨在探究β-羟丁酸(β-hydroxybutyric acid, BHB)是否通过活性氧(reactive oxygen species, ROS)-NLRP3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3)途径抑制奶牛CD14~+单核细胞的吞噬功能。提取产后健康奶牛血液中CD14~+单核细胞进行培养，转染沉默NLRP3小干扰RNA后加入3 mmol/L的BHB;用10 nmol/L NLRP3抑制剂MCC950(CP-456773)或10 mmol/L的ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine, NAC)预处理单核细胞后再添加3 mmol/L的BHB处理24 h。通过免疫印迹法检测NLRP3蛋白表达水平；采用流式细胞术和免疫荧光测定单核细胞的吞噬能力。结果显示，si-NLRP3+BHB处理组与si-Control+BHB组相比，单核细胞吞噬功能显著升高，而NLRP3蛋白表达量显著降低。与DMSO+BHB组相比，MCC950+BHB组的单核细胞吞噬功能明显升高。此外，与DMSO+BHB组相比，MCC950+BHB处理组单核细胞中的NLRP3蛋白表达显著降低。与PBS+BHB组相比，添加ROS清除剂NAC处理后，单核细胞吞噬能力明显升高，而NLRP3蛋白表达量显著降低。结果表明，BHB通过ROS-NLRP3途径抑制奶牛CD14~+单核细胞的吞噬功能。因此，调控NLRP3炎症小体的活化可能是改善围产期奶牛单核细胞吞噬功能障碍的有效方法。
2025年07期 v.45;No.343 1493-1501页 [查看摘要][在线阅读][下载 1810K] [下载次数：84 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王鸿宇;邢岩;田丰;白云龙;夏成;徐闯;
旨在明确规模化牛场奶牛酮病的发病情况及酮病对奶牛后续泌乳性能的影响。选择产前21、14、7 d、分娩当日、产后3、7、14、21 d共8个阶段的79头围产期奶牛，对其血中的β-羟丁酸(β-hydroxybutyric acid, BHB)、血糖(glucose, GLU)、游离脂肪酸(non-ester fatty acid, NEFA)、谷氨酸氨基转移酶(alanine transaminase, ALT)等血液生化指标进行测定，根据血液中BHB浓度将其分为健康组(CON组)、亚临床酮病组(SCK组)和临床酮病组(CK组)。试验牧场奶牛中存在矿物质元素指标紊乱的情况，且奶牛肝脏功能存在异常，同时存在着能量代谢紊乱的情况；调研牧场中奶牛酮病的发病率为26.14%,其中SCK组的发病率为19.32%,CK组的发病率为6.82%,与全球平均发病率相当，低于中国平均发病率；与CON组奶牛相比，SCK和CK组存在奶牛能量代谢紊乱与肝脏功能异常，CK组奶牛更为严重；患有酮病的奶牛产奶量显著下降，SCK组奶牛乳脂率高于CON组奶牛，而CK组奶牛的乳脂率则显著低于CON组奶牛，CK组奶牛的脂蛋比显著低于SCK和CON组，不同类型的酮病后6个月的泌乳性能变化不同，CON组奶牛泌乳性能最稳定。在牧场的生产中，及时有效地治疗和管理对于恢复奶牛的健康和产奶性能至关重要。酮病会导致奶牛能量代谢紊乱、肝脏功能异常，降低奶牛产奶量，对奶牛的泌乳性能有持续性的影响。维持奶牛健康是提高产奶量和保持泌乳性能稳定的关键，针对不同类型的酮病奶牛，应采取相应的管理和治疗措施，以减少经济损失。
2025年07期 v.45;No.343 1502-1507页 [查看摘要][在线阅读][下载 1152K] [下载次数：228 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 浩宇;姜雪洁;宋玉锡;白云龙;夏成;徐闯;
本研究通过调查87家规模化牧场奶牛肢蹄病的发病情况、防治措施、诊疗方法及其治疗成本，旨在为牧场肢蹄病的治疗与防控提供科学依据和新思路。结果显示，大部分牧场的肢蹄病发病率控制在3%～7%之间，治愈率在85%以上。肢蹄病的防控措施重要程度依次是：修蹄>平整地面>消毒>定期蹄药浴>粪便清理>运动(跛行)评分。肢蹄病的治疗措施重要程度依次是：修蹄>消毒收敛>抗炎>抗生素>封闭>中医疗法(火疗)。经济分析显示，肢蹄病的治疗成本与发病率密切相关，发病率较高的牧场治疗成本更高。单产水平较高的牧场通常具有更高效的疾病管理策略，从而治疗成本较低。规模化牧场应持续优化饲养管理以减少肢蹄病的发生，使用有效的治疗方案提高肢蹄病治愈率，提高牧场整体效益。
2025年07期 v.45;No.343 1508-1515页 [查看摘要][在线阅读][下载 1286K] [下载次数：327 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 刘梅;王龙龙;邵明清;庞胜美;张凯阳;戴鹏;丁国伟;段强德;
猪传染性胃肠炎(transmissible gastroenteritis, TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus, TGEV)引起猪的一种高度传染性消化道疾病，其主要特征是仔猪出现严重腹泻和高病死率。由于尚无特异性治疗方法，疫苗接种是当前防控TGE最经济和有效的措施之一。然而，TGEV强毒株和新毒株不断出现，造成了传统毒株制备的疫苗免疫保护效力不足，严重威胁着养猪业的健康发展。因此，开发更高效、广谱的新型疫苗成为迫在眉睫的任务。综述TGEV的病原结构特征和TGEV疫苗研发的最新进展，展望未来开发高效TGEV疫苗的策略，旨在为临床上TGE的有效防控提供重要参考。
2025年07期 v.45;No.343 1535-1542页 [查看摘要][在线阅读][下载 1276K] [下载次数：226 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 周敏;汤德元;曾智勇;王彬;胡雯雯;毛茵茗;周飘;何松;张力;高邡鑫;
猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)是猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)的病原，其感染后主要引起母猪流产、死胎和仔猪呼吸道感染等，在全球广泛流行，严重危害了世界畜牧业的发展。PRRSV感染宿主后能够引发显著的免疫抑制，近年来，PRRSV免疫抑制机制的研究已成为热门话题，而研究表明众多PRRSV蛋白参与宿主先天免疫的调节，并揭示了PRRSV蛋白调控宿主先天免疫的机制。现综述PRRSV蛋白与宿主先天免疫相互作用机制的研究进展，以期为全面了解PRRSV的发病机制和PRRSV的防控提供理论依据。
2025年07期 v.45;No.343 1543-1552+1586页 [查看摘要][在线阅读][下载 1281K] [下载次数：237 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 胡雯雯;汤德元;曾智勇;王彬;周敏;毛茵茗;周飘;何松;张力;高邡鑫;
乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)属于黄病毒科，黄病毒属，为单股正链RNA病毒，感染引起的日本乙型脑炎(Japanese encephalitis, JE)是一种病毒性人畜共患病，在世界范围内流行，是全球关注的重要公共卫生问题。JEV感染激活多种信号通路引起一系列变化是其致病的重要因素，Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)是最重要的一种信号通路之一，其种类繁多、信号转导情况复杂多样，给JEV的防控带来巨大挑战。目前，JEV尚无特效治疗方法，尽管一些疫苗已经应用到JE的治疗中，但由于其人畜共患周期和所用疫苗的有效性不完全，导致JE很难根除。对JEV感染引起宿主各种TLRs信号通路变化进行综述，旨在为全面深入了解JEV致病机制及找到新的抗病毒靶点提供参考。
2025年07期 v.45;No.343 1553-1562页 [查看摘要][在线阅读][下载 1403K] [下载次数：120 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 刘诗曼;程玉婷;阿比克哈莫;岳华;汤承;
爱知病毒又名kobuvirus (KoV),是小RNA病毒科1个新的属，国际病毒分类委员会2019年将爱知病毒分为A、B、C、D、E和F 6个型，其中C型爱知病毒可以感染山羊和猪。山羊感染爱知病毒已经在美国、韩国、意大利、中国等4个国家检出，地域分布广泛。2019年，本实验室首次在山羊腹泻粪便样本中分离得到C型爱知病毒，证实其为致羔羊腹泻的新发病原，已在我国部分省区流行。现对山羊C型爱知病毒的病原特性、病毒基因组特征、流行情况、临床症状与病理变化、检测方法等进行综述，以期为山羊C型爱知病毒的研究提供参考。
2025年07期 v.45;No.343 1563-1568页 [查看摘要][在线阅读][下载 1519K] [下载次数：111 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 赵玉丹;邹扬;马爱霞;杨瑞锋;朱伟宁;
芽囊原虫是一种人兽共患肠道寄生虫，能够感染包括人类在内的多种动物，可引起人和动物腹泻、腹痛和胃胀等症状。芽囊原虫病在世界范围内广泛流行，但尚未引起人们足够的重视，已被世界卫生组织列为被忽视的疾病之一。某些牛携带的芽囊原虫亚型属于人兽共患亚型，具备跨物种传播人类的潜在风险，给人类公共卫生安全带来潜在威胁。因此，明确牛芽囊原虫的流行情况及亚型分布特征对芽囊原虫病的防控尤为重要。基于此，本文从芽囊原虫的亚型分类、诊断方法、国内外流行情况以及公共卫生学意义几个方面对牛芽囊原虫病进行了综述，为芽囊原虫病的防控提供了重要的参考依据。
2025年07期 v.45;No.343 1569-1578页 [查看摘要][在线阅读][下载 1994K] [下载次数：207 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 阿依奴拉·托合塔里;阿得力江·吾斯曼;赛福丁·阿不拉;卡力比夏提·艾木拉江;
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(polylactic-co-glycolic acid, PLGA)是一种应用广泛、研究广泛的给药体系。PLGA的良好特性，如良好的生物利用度，可控释放，以及由于可生物降解聚合物骨架而具有优异的安全性，使PLGA获得监管部门批准，可作为人体药物输送平台。免疫预防将是控制寄生虫病流行的最具潜力和较为理想的防控措施之一。然而，疫苗往往存在免疫原性相对较弱、易降解、剂量和给药方式的挑战、稳定性和储存问题等诸多局限性。使用PLGA作为疫苗载体可以提高疫苗的稳定性，减少疫苗的储存和运输问题以及减少给药次数，提高治疗效果，降低副作用，这些特性使PLGA成为疫苗递送的理想平台。现综述PLGA在寄生虫免疫预防领域中的最新进展、可行性及其面临的挑战，旨在为开发和研制更有效的寄生虫病预防和治疗策略提供新思路。
2025年07期 v.45;No.343 1579-1586页 [查看摘要][在线阅读][下载 1446K] [下载次数：94 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] 下载本期数据